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Immunology and Infection

स्वाइन से इन्फ्लुएंजा ए वायरस का पता लगाने और अलगाव के लिए नाक पोंछे

Published: December 4, 2015 doi: 10.3791/53313
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Department of Veterinary Preventive Medicine, The Ohio State University

Abstract

इन्फ्लूएंजा ए वायरस तेजी से स्वाइन आबादी में विकसित और नए उपभेदों लगातार उभर रहे हैं, क्योंकि स्वाइन में इन्फ्लूएंजा वायरस के लिए निगरानी मानव और पशुओं के स्वास्थ्य के लिए महत्वपूर्ण है। स्वाइन उन्हें उद्भव और उपन्यास इन्फ्लूएंजा के रखरखाव के लिए एक वायरस उपभेदों के लिए महत्वपूर्ण मेजबान टीम बनाने इन्फ्लूएंजा ए वायरस के विविध प्रजातियों से संक्रमित हो पा रहे हैं। ऐसे वाणिज्यिक स्वाइन खेतों, कृषि मेलों, और जीना पशु बाजार के रूप में विविध सेटिंग में सूअरों नमूना वर्तमान IAV उपभेदों घूम के लिए एक व्यापक दृष्टिकोण प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण है। यह सूअरों के शारीरिक संयम की आवश्यकता है क्योंकि वर्तमान सोने का मानक पूर्व-मार्टम नमूना तकनीक (नाक swabs यानी संग्रह) श्रम गहन है। नाक पोंछे जानवर की कोई संयम करने के लिए कम से कम के साथ सुअर का थूथन भर में कपड़े का एक टुकड़ा मलाई शामिल है। नाक की प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए सरल है और पेशेवर पशु चिकित्सा या जानवर से निपटने के प्रशिक्षण के साथ कर्मियों की आवश्यकता नहीं है पोंछे। डब्ल्यूनाक swabs की तुलना में थोड़ा कम संवेदनशील Hile, वायरस का पता लगाने और अलगाव दरों नाक कम तनाव नमूना तरीकों की आवश्यकता होती है जब व्यक्ति सूअरों नमूना लेने के लिए एक व्यवहार्य विकल्प पोंछे बनाने के लिए पर्याप्त हैं। कार्यवाही प्रोटोकॉल एक व्यवहार्य नाक इकट्ठा करने के लिए आवश्यक कदम एक व्यक्ति सुअर से पोंछ रूपरेखा।

Introduction

इन्फ्लुएंजा ए वायरस (IAV) घरेलू पक्षी, सूअर, और मानव सहित कई प्रजातियों में सांस की बीमारी के कारण। कारण हो सकता है खंडों IAV जीनोम तेजी से वायरल विकास के reassortment और नए IAV उपभेदों के लिए बार-बार उभरने। स्वाइन सामान्यतः उत्तर अमेरिकी स्वाइन (H1N1, H1N2, H3N2) के बीच घूम IAV के तीन प्रमुख उपप्रकार वर्तमान में कर रहे हैं। एक कई मेजबान प्रजातियों से IAVS की reassortment के लिए एक मिश्रण पोत के रूप में सेवा कर सकते हैं कि एक प्रजातियां हैं, लेकिन मनुष्यों से कई IAV परिचय है उन उपप्रकार के भीतर व्यापक IAV विविधता के लिए नेतृत्व किया। स्वाइन को संक्रमित IAVS के 2 तेजी से विकास मानव, एवियन और स्वाइन वायरस से जीन खंडों से युक्त एक ट्रिपल reassortant IAV 3 संयुक्त राज्य अमेरिका में सूअरों के बीच व्यापक हो गया जब 1998 के बाद से स्पष्ट किया गया है। 4 आंतरिक जीन कि ट्रिपल reassortant IAV से खंडों वर्तमान में स्वाइन को संक्रमित IAVS के बीच बेहद प्रचलित रहते हैं। 5

"> दुनिया भर में, IAV ठेठ नैदानिक ​​लक्षण बुखार, भूख न लगना, सुस्ती, खाँसी शामिल हैं जिसमें स्वाइन में सांस की बीमारी का एक महत्वपूर्ण कारण है, नाक मुक्ति और गरीब वजन छींकने, श्वास अस्वाभाविक। IAV जहां प्रजनन फार्मों बोने के लिए विशेष रूप से महंगा हो सकता है कारण IAV प्रेरित बुखार और कमजोर जन्मे piglets करने के लिए विफलता दर्ज किया गया है। 6.7 संयुक्त राज्य अमेरिका के भीतर, IAV आमतौर पर वाणिज्यिक स्वाइन झुंड और IAV को संक्रमित स्वाइन बीच व्यापक प्रतिजनी और जीनोमिक विविधता और सतत विकास में पता चला है इस पर नियंत्रण बाधा उत्पन्न की है वायरस। 8-11

ट्रिपल reassortant उत्तरी अमेरिकी स्वाइन वंश और यूरेशियाई एवियन की तरह स्वाइन वंश से जीन खंडों से युक्त एक सूअर-वंश IAV एक दुनिया भर में महामारी की वजह से जब 2009 में महसूस किया गया स्वाइन में reassortment से उत्पन्न एक महामारी IAV तनाव के उद्भव के बारे में सार्वजनिक स्वास्थ्य की चिंता मानव में। 12 महामारी वायरस (एक (H1N1) pdm09) के बाद से हैस्थानिक स्वाइन साथ reassorted IAV 13,14 तनाव और इन नव reassorted स्ट्रेन के कुछ मनुष्य के लिए वापस प्रेषित किया गया है। 15 reassortment घटनाओं और महामारी क्षमता के साथ नए IAV उपभेदों के उद्भव स्वाइन अनिवार्यता में IAV वायरस घूम की सक्रिय निगरानी करता है की आवृत्ति, विशेष रूप से स्वाइन-मानव इंटरफेस में।

स्वाइन मानवीय IAV की द्वि-दिशात्मक interspecies संचरण के लिए महत्वपूर्ण है। मानव को स्वाइन वाणिज्यिक स्वाइन उत्पादन में होने वाली संचरण स्वाइन आबादी में वर्तमान में मौजूद IAV विविधता की एक बड़ी राशि के लिए जिम्मेदार है। कृषि मेलों संयुक्त राज्य अमेरिका में लोगों और सूअर की comingling के लिए सबसे बड़ा सेटिंग कर रहे हैं और एक संस्करण H3N2 IAV के प्रकोप के दौरान, IAV की जूनोटिक संचरण के लिए साइटों। 2012 में 15-21 में जाना जाता है, के मामलों के 93% से कम उपस्थिति की सूचना दी दिन में एक कृषि मेले में इस बीमारी की शुरुआत करने से पहले। 15 जीनोमिक विश्लेषणजूनोटिक संचरण की पुष्टि की मानव वियोजन के साथ तुलना में प्रदर्शनी सूअरों से वायरल वियोजन की। IAV से संक्रमित 21 प्रदर्शनी स्वाइन अक्सर प्रत्यक्ष नैदानिक ​​परीक्षण के लिए की जरूरत का संकेत बीमारी, 21-23 के नैदानिक ​​लक्षण नहीं दिखा है।

जाहिरा तौर पर बीमार सूअरों की सैम्पलिंग अकेले सफलतापूर्वक स्वाइन में IAV प्रसार की पहचान नहीं होगा और सूअर के बीच उभरते IAV के नए उपभेदों की पहचान करने के लिए पर भरोसा नहीं किया जा सकता। सक्रिय निगरानी IAV के उभरते उपभेदों स्वाइन में और सूअर और सार्वजनिक स्वास्थ्य दोनों के लिए उनके खतरे का आकलन करने का पता लगाने के लिए बहुत जरूरी है। अधिकांश IAV निगरानी गतिविधियों स्वैच्छिक है और इसलिए न्यूनतम विघटनकारी तरीकों की जरूरत है कर रहे हैं। IAV स्वाइन को संक्रमित करने के लिए तीन प्रमुख पूर्व-मार्टम नमूना संग्रह की प्रक्रिया कर रहे हैं: नाक swabs, मौखिक तरल पदार्थ, और नाक पोंछे। IAV सूची सिंथेटिक फाइबर की प्रविष्टि का पता लगाने के लिए अलग-अलग स्वाइन नमूना लेने के लिए वर्तमान सिफारिशों पसंदीदा विधि के रूप में नाक में swabs इत्तला दे दीनाक स्राव और उपकला कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए। 24,25 सूअर या तो स्वयं या एक जाल जानवर के आकार पर निर्भर करता है के साथ सूअरों को नियंत्रित करना चाहिए इस प्रक्रिया, प्रशिक्षित कर्मियों की एक टीम से बचने के लिए कोशिश कर सकते हैं। 26 संयम प्रक्रिया के लिए श्रमसाध्य है कर्मियों, और सूअरों के लिए तनावपूर्ण। एक प्रतियोगिता जानवर पर कहा कि तनाव की धारणा निगरानी प्रयासों के मालिकों प्रतिरोधी बना सकते हैं ताकि इसके अतिरिक्त, प्रदर्शनी स्वाइन अक्सर एक मेले में कई प्रतियोगिताओं में शामिल कर रहे हैं।

80-100% से IAV में संक्रमित झुंड लेकर IAV का पता लगाने की संभावनाओं के साथ, मौखिक तरल पदार्थ स्वाइन की आबादी में IAV की आणविक पता लगाने के लिए swabs के नाक के लिए एक लोकप्रिय विकल्प बन गए हैं। 27,28 इसके अतिरिक्त, मौखिक तरल पदार्थ की एक व्यापक खिड़की प्रदान कर सकता है प्रारंभिक संक्रमण के बाद नाक swabs से IAV का पता लगाने। हालांकि, मौखिक तरल पदार्थ से IAV अलगाव वायरस अलगाव के प्रयास का केवल 50% आइए में जिसके परिणामस्वरूप के साथ समस्याग्रस्त किया गया हैवी वसूली। 29

स्वाइन में IAV निगरानी के दौरान नाक swabs के एवज में नाक पोंछे का उपयोग करके उपरोक्त वर्णित सीमाओं पर काबू। नाक पोंछे एक निरोधक फंदे के उपयोग की आवश्यकता नहीं है और प्रक्रिया के जानवरों या गवाहों को बल देते हुए बिना किया जा सकता है। कम से कम तकनीकी प्रशिक्षण निगरानी के नमूने एकत्र करने के लिए, सूअर मालिकों सहित गैर पशु चिकित्सा पेशेवरों, जो की अनुमति देता नाक पोंछे, इकट्ठा करने की जरूरत है। नाक पोंछे पहले एक वायरस से 30 और नमूने के इस गैर इनवेसिव विधि के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल नीचे वर्णित है का पता लगाने और इन्फ्लूएंजा के अलगाव के लिए नाक swabs की तुलना में थे।

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Protocol

निम्न डेटा के संग्रह में इस्तेमाल सभी स्वाइन ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति के तहत संरक्षित किया गया (पशु का उपयोग प्रोटोकॉल संख्या 2009A0134-आर 1)।

1. वायरल ट्रांसपोर्ट मीडियम की तैयारी और नमूना संग्रह शीशियों

  1. शुद्ध पानी की 900 मिलीलीटर के मस्तिष्क दिल आसव की 37 ग्राम जोड़ें और हीटिंग के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पूरी तरह से पाउडर भंग करने के लिए, जबकि एक हलचल बार और चुंबकीय उत्तेजक के साथ अच्छी तरह मिला लें।
  2. 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर शोरबा आटोक्लेव। शोरबा तक बेंच शीर्ष पर शांत कमरे के तापमान तक पहुँचता है। 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर सर्द अगर जरूरत है।
  3. एक चुंबकीय हलचल पट्टी, पेनिसिलिन ग्राम सोडियम नमक की 6.02 ग्राम और कमरे के तापमान पर शुद्ध पानी की 50 मिलीलीटर में स्ट्रेप्टोमाइसिन सल्फेट के 10 ग्राम के साथ मिश्रण से, भंग। 100 मिलीलीटर की कुल मात्रा लाने के लिए अतिरिक्त शुद्ध पानी जोड़ें। एक बाँझ बोतल में 0.22 माइक्रोन polyethersulfone झिल्ली के माध्यम से समाधान फ़िल्टर।
  4. Aseptically ठंडा मस्तिष्क दिल आसव शोरबा में फ़िल्टर पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन समाधान जोड़ने और वायरल परिवहन माध्यम बनाने के लिए अच्छी तरह से (हलचल पट्टी या हाथ से ज़ुल्फ़ फ्लास्क) मिश्रण।
  5. Aseptically वायरल परिवहन माध्यम से पीएच परीक्षण; यदि आवश्यक हो तो, एचसीएल या NaOH का उपयोग 7.4 ± 0.2 पीएच को समायोजित करें।
  6. जांग और हारमोन द्वारा वर्णित के रूप में, आर आर टी पीसीआर द्वारा इन्फ्लूएंजा के लिए एक वायरस मैट्रिक्स प्रोटीन के परीक्षण के द्वारा वायरल परिवहन माध्यम पर गुणवत्ता आश्वासन परीक्षण प्रदर्शन करते हैं। 22
  7. 8 मिलीग्राम क्षमता के साथ बाँझ उच्च घनत्व polyethylene बोतलों में वायरल परिवहन माध्यम के 5 मिलीलीटर बांटना। क्षेत्र में उपयोग के लिए शीशियों लेबल।
  8. नमूना संग्रह तक -20 डिग्री सेल्सियस पर मानक क्रायो बक्से में तैयार करने के लिए उपयोग शीशियों स्टोर।

स्वाइन से नाक पोंछे 2. संग्रह

  1. नमूना संग्रह के लिए तुरंत पहले शीशियों की उपयुक्त संख्या गला लें; एक शीशी जांचा सुअर प्रति की जरूरत होगी। कमरे में विगलनतापमान लगभग 30-45 मिनट लगते हैं। Thawed शीशियों उपयोग करें जब तक आइस पैक पर शांत रखें।
  2. डॉन उपयुक्त व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण स्थिति से तय (जैसे coveralls, बूट कवर, श्वास, कान प्लग,) के रूप में।
  3. पशु क्षेत्र दर्ज करें। यदि आवश्यक हो, एक छोटे से क्षेत्र के लिए सुअर सीमित लेकिन नियंत्रित नहीं कर। जानवरों आराम कर जगाना मत करो।
  4. डिस्पोजेबल परीक्षा दस्ताने की एक जोड़ी पर डाल दिया। छू सूअर, लोगों को, या निर्जीव वस्तुओं से दस्ताने दूषित करने के लिए नहीं ख्याल रखना।
  5. (2। में × 2।) 5.08 सेमी × एक बाँझ 5.08 सेमी दूर करने के लिए एक दस्ताने हाथ का प्रयोग करें कपास धुंध पैड अपने आवरण से। बाँझ धुंध पैड जब भी संभव हो इस्तेमाल किया जाना चाहिए। व्यक्तिगत लिपटे धुंध पैड पैकेज के अनुसार दो धुंध पैड के साथ लिपटे उन से अधिक का उपयोग करने के लिए और अधिक सुविधाजनक हैं।
  6. एक हाथ की उंगलियों नमूना लेने के लिए संभव के रूप में पैड के रूप में ज्यादा प्रकाश में लाने के साथ कपास धुंध पैड पकड़ो।
  7. ले रही है, सुअर के थूथन भर धुंध पैड साफ कर लेंयदि संभव हो तो अतिरिक्त देखभाल बाहरी nares दर्ज करने के लिए। एक ही धुंध पैड के साथ दिखाई नाक स्राव (लगभग 1 मिलीलीटर) लीजिए।
  8. एक ही हाथ का उपयोग करना, वायरल परिवहन मध्यम युक्त शीशी में प्लेसमेंट की सुविधा के लिए खुद पर धुंध पैड गुना।
  9. दूसरे हाथ का उपयोग, शीशी से टोपी को हटा दें और शीशी में तह धुंध पैड रखें। शीशी संक्षिप्त और धुंध पैड और वायरल परिवहन माध्यम के मिश्रण को सुनिश्चित करने के लिए शीशी हिला।
  10. एक उपयुक्त गोदाम में दस्ताने और जगह निकालें। प्रत्येक सुअर के बीच दस्ताने बदल जाते हैं।
  11. शीशी पहचानकर्ता सत्यापित करें। रिकार्ड सुअर पहचान संख्या, उम्र, लिंग, नैदानिक ​​लक्षण, और अन्वेषक द्वारा आवश्यक समझा अन्य नोटों।
  12. तुरंत संग्रह के बाद नमूनों को शांत रहो। कई फ्रीज पिघलना चक्र को रोकने के लिए ठंड से पहले नमूना की aliquots बनाने पर विचार करें। जैसे ही संग्रह के बाद संभव हो, प्रयोगशाला के लिए परिवहन के लिए सूखी बर्फ पर नमूने रखें। शीशियों पर स्टोर -80परीक्षण शुरू की है, जब तक सी °।

3. जांच इन्फ्लूएंजा के एक वायरस न्यूक्लिक एसिड

  1. 5 मिनट के लिए एक 37 डिग्री सेल्सियस सूखी मनका स्नान में नमूने गला लें और फिर 20-30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर बेंच शीर्ष पर नमूने विगलन खत्म। मोती के लिए कई शीशियों के साथ-साथ इसके अलावा स्नान करने के लिए गर्मी के कारण होगा; सावधानी शीशियों नहीं ज़्यादा गरम करने के लिए के रूप में प्रयोग किया जाना चाहिए।
  2. आरएनए निकासी के लिए वायरल परिवहन माध्यम के 100 μl निकालें।
    1. नमूनों की एक बड़ी संख्या में से शाही सेना को निकालने के लिए एक उच्च throughput (96 अच्छी तरह से थाली प्रारूप) चुंबकीय मनका मंच का प्रयोग करें। 31
  3. तेजी से पता लगाने इन्फ्लूएंजा ए वायरस के लिए वास्तविक समय रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर assays का प्रयोग करें। 31

इन्फ्लूएंजा के 4. अलगाव नाक पोंछे से एक वायरस

  1. धारा 3.1 में ऊपर वर्णित के रूप में नमूने गला लें
  2. (1,000 जेंटामाइसिन सल्फेट के साथ thawed नमूनों को समझोमाइक्रोग्राम / एमएल), amphotericin बी (22.5 माइक्रोग्राम / एमएल), और केनामाइसिन सल्फेट (325 माइक्रोग्राम / एमएल)।
  3. Madin-डार्बी कुत्ते गुर्दे में टीका लगाना (MDCK) पहले से वर्णित के रूप में उपकला कोशिकाओं। 32

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Representative Results

इस विधि के सफल प्रयोग आर आर टी पीसीआर किसी भी पर्यावरण मलबे नमूने के दौरान उठाया से शाही सेना निकासी और आर आर टी पीसीआर के दौरान एक आंतरिक नियंत्रण के उपयोग के साथ साथ, इस शो के नमूने पीसीआर अवरोधकों को शामिल नहीं किया था, कि परिणाम प्राप्त होते हैं। नमूना टीकाकरण के बाद, वायरस अलगाव कुओं नमूना से दिखाई पर्यावरण मलबे से मुक्त होना चाहिए। पीसीआर वायरल न्यूक्लिक एसिड, जरूरी नहीं कि व्यवहार्य वायरस का पता लगाता है क्योंकि पीसीआर अक्सर वायरस अलगाव तुलना में एक उच्च IAV सकारात्मक दर पैदावार समझ के साथ कि आर आर टी पीसीआर परिणाम और वायरस अलगाव परिणाम के बीच उचित समझौता नहीं है।

परिणाम नाक पोंछे IAV के लिए वर्तमान सोने के मानक नमूना तकनीक हैं जो swabs, नाक के लिए एक उपयोगी विकल्प हैं कि दिखा। एडवर्ड्स एट अल। कि अध्ययन में 2013 के दौरान संयुक्त राज्य अमेरिका में कृषि मेलों में सूअरों से एकत्र किए गए थे कि थूथन पोंछे और नाक swabs की तुलना प्रदर्शन किया, सूअर दोनों नाक के साथ नमूना थेswabs और नाक पोंछे और नमूने आर आर टी पीसीआर और वायरस अलगाव के साथ समानांतर में परीक्षण किया गया। एडवर्ड्स एट अल। का पता लगाने और IAV के अलगाव आर आर टी पीसीआर द्वारा और संवर्धित कोशिकाओं में वायरस अलगाव दोनों के लिए क़बूल 553 बनती नाक झाड़ू की तुलना द्वारा प्रदर्शन किया गया और नाक के नमूने पोंछ सूचना दी। इन नमूनों का परीक्षण 30, 93.5% (517/553) आर आर टी-पीसीआर परीक्षण के परिणाम के समझौते (1 टेबल) और 92.4% (511/553) में थे MDCK कोशिकाओं में वायरस अलगाव का उपयोग करते हुए समझौते में नाक swabs की तुलना में नाक पोंछे के लिए अनुमानित आर आर टी पीसीआर संवेदनशीलता (तालिका 2)। 21 थे 92.9% और नाक swabs की तुलना में नाक पोंछे के लिए अनुमानित IAV अलगाव संवेदनशीलता 82.9% थी। एडवर्ड्स एट अल।, पहले से आर आर टी पीसीआर और वायरस अलगाव से दोनों सकारात्मक थे कि नाक पोंछे वायरस अलगाव (= 31.96 सीटी) के लिए आर आर टी पीसीआर द्वारा सकारात्मक लेकिन नकारात्मक रहे थे कि नाक पोंछे की तुलना में कम सीटी मूल्य (24.32) के औसत का उल्लेख किया। 21

तालिका 1:।। इन्फ्लूएंजा के आर आर टी-पीसीआर का पता लगाने 29 काउंटी मेलों (कम से स्वाइन से एकत्र नाक swabs और थूथन पोंछे से एक वायरस एट अल (थूथन 2014) उपयोगिता प्रदर्शनी स्वाइन आबादी में इन्फ्लूएंजा के लिए एक वायरस निगरानी के नमूने पोंछ एडवर्ड्स इन्फ्लुएंजा और से अन्य श्वसन वायरस 8 (5), 574-579।

सारणी 2

तालिका 2:।। इन्फ्लूएंजा के अलगाव 29 काउंटी मेलों (कम से स्वाइन से एकत्र नाक swabs और थूथन पोंछे से एक वायरस एडवर्ड्स एट अल (थूथन 2014) उपयोगिता इन्फ्लूएंजा के लिए प्रदर्शनी स्वाइन आबादी में एक वायरस निगरानी के नमूने पोंछ इन्फ्लुएंजा और अन्य श्वसन वायरस से 8 (5), 574-579।)

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Discussion

पॉलिएस्टर इत्तला दे दी नाक swabs का उपयोग कर सूअरों से नमूने एकत्रित IAV निगरानी के संचालन में उपयोगी साबित हो गया है; हालांकि, नाक झाड़ू प्रक्रिया के उपयोग के संयम के लिए एक जाल के लिए आवश्यक उपयोग की वजह से निगरानी के प्रयासों में अवरोध उत्पन्न होता। नाक पोंछे नमूना संग्रह के दौरान लोगों और सूअरों पर तनाव को कम करने के लिए वर्तमान में स्वाइन नमूना तकनीक का शोधन प्रतिनिधित्व करते हैं। विधि के लिए विकसित और प्रदर्शनी स्वाइन सेटिंग्स में मान्य किया गया है जबकि स्वाइन में IAV की पूर्व-मार्टम का पता लगाने के लिए आवश्यक है, जहां यह आसानी से अन्य स्थितियों के लिए लागू किया जा सकता है (यानी वाणिज्यिक सूअर, जीना पशु बाजार, जैव चिकित्सा अनुसंधान, आदि)

ऊपर बताया गया है, इस नमूना तकनीक के प्रमुख ड्राइवर प्रदर्शनी स्वाइन आबादी किया गया है। कृषि मेलों के दौरान स्वाइन मालिकों सुअर के समग्र संरचना के आधार पर वित्तीय पुरस्कार और कुख्याति अर्जित करने के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं। वास्तविक सबूत ओ, एक सुअर अच्छी तरह से प्रदर्शित नहीं करता है कि इंगित करता हैwners संयम और नमूना संग्रह के दौरान सुअर के तनाव के स्तर के लिए यह विशेषता हो सकती है। नाक पोंछे कम पशु तनाव की आवश्यकता है कि सेटिंग में नमूने व्यक्ति जानवरों को शामिल करना है कि निगरानी के प्रयासों के लिए उपयोगी होते हैं। नाक प्रदर्शन करते हुए snaring और जाहिरा तौर पर चिंताजनक सूअरों से बचने की क्षमता तकनीक पोंछ प्रदर्शनी स्वाइन में IAV निगरानी के प्रयासों की सार्वजनिक स्वीकृति में सुधार हुआ है। नाक की 33 कम तनाव प्रकृति विधि भी वाणिज्यिक स्वाइन खेतों के लिए यह अच्छी तरह से अनुकूल बनाता है पोंछे। इसके अलावा, नाक विधि यह कम कर्मियों की आवश्यकता है और विशेष प्रशिक्षण जनादेश नहीं है क्योंकि लागत कम करने में मदद कर सकते हैं पोंछे।

Swabs के नाक के अलावा, वाणिज्यिक स्वाइन में रोगज़नक़ का पता लगाने का एक और आमतौर पर इस्तेमाल किया प्रपत्र एक साथ रखे जाते हैं कि सूअर उनकी कलम में रखा गया है कि एक सूती रस्सी पर जुगल करने के लिए अनुमति शामिल है। वे रस्सी से एकत्र किया जा सकता है, जो मौखिक तरल पदार्थ जमा। 27,34,35 मौखिक द्रव संग्रह उत्पादों होगाजानवरों के एक समूह से एकत्र नमूनों पर आधारित है और रोगज़नक़ प्रसार या प्रसारण के अध्ययन के लिए सीमाएं हैं कर रहे हैं कि सीईएस का परिणाम है। इसके अतिरिक्त, मौखिक तरल पदार्थ से IAV अलगाव गरीब किया गया है। रस्सियों तर करने के लिए सूअरों कर्मियों संसाधनों के लिए अक्षम हो सकता है के लिए 29 मौखिक तरल पदार्थ व्यक्ति स्वाइन के लिए इस्तेमाल किया गया है, लेकिन समय रस्सियों लटका करने के लिए आवश्यक है। नाक पोंछे का उपयोग 36 के लिए अनुमति देता है अलग-अलग जानवरों के तेजी से मूल्यांकन। दोनों नाक पोंछे से IAV का पता लगाने और अलग करने की क्षमता मौखिक तरल पदार्थ पर एक विशिष्ट लाभ प्रदान करता है। अन्य नमूना तरीकों की तरह, नाक पोंछे शिखर वायरल बहा के दौरान सबसे अधिक प्रभावी हो सकता है।

नाक के साथ जुड़े कुछ सीमाएं प्रक्रिया को लागू करने से पहले विचार किया जाना चाहिए कि विधि पोंछ कर रहे हैं। सूअरों उनके snouts के साथ रूट कि उत्सुक जानवर हैं। अक्सर तुलना में नाक swabs के लिए, एक नाक पोंछने पर एकत्र अधिक मलबे क्योंकि नम, गंदे वातावरण से, वहाँ हैसुअर थूथन के बाहरी पर संपर्क पोंछे। नाक के बीच संपर्क सब्सट्रेट पोंछ और सुअर नाक पर नाक swabs से श्वसन तंत्र, अक्सर पर्यावरण मलबे (यानी बिस्तर, चारा, खाद, आदि) के बिना किसी खास उद्देश्य बयान में यह परिणाम है कि एक स्थिति का एक और अधिक बाहरी सतह के लिए प्रतिबंधित है पोंछे। ये पर्यावरण दूषित पदार्थों को पीसीआर रोकना या वायरल अलगाव प्रयास के दौरान सेलुलर विषाक्तता पैदा कर सकता है। नमूना स्थान और पर्यावरण मलबे के स्तरों की साफ-सफाई नाक प्रोटोकॉल पोंछ के साथ आगे बढ़ने से पहले मूल्यांकन करने की आवश्यकता हो सकती है। नाक पोंछे के पर्यावरण प्रदूषण की घटना भी IAV इस विधि का परीक्षण जानवर द्वारा बहाया गया है नहीं हो सकता के साथ पता लगाया है, बल्कि वातावरण में मौजूद था कि इसका मतलब है। एक IAV विशेषता करने की क्षमता निगरानी गतिविधियों या झुंड आधारित निदान के लिए एक चिंता का विषय नहीं हो सकता है एक विशेष जानवर को अलग-थलग, वहीं इस प्रयोगशाला आधारित टीआर के लिए विचार करने के लिए एक सीमा हो सकती हैansmission अध्ययन करता है।

इस विधि को चुनने के लिए नाक की बड़ी संख्या के नमूने की आवश्यकता होगी पोंछ है कि वृद्धि की भंडारण और परिवहन जगह नहीं है पहले की जरूरत है कि एक और मुद्दा संबोधित किया जाना है। पोंछे के लिए इस्तेमाल किया शीशियों नाक झाड़ू भंडारण के लिए इस्तेमाल मानक 2 मिलीलीटर क्रायोजेनिक भंडारण शीशियों की तुलना में काफी बड़े होते हैं और लंबी अवधि के भंडारण और प्रयोगशाला में वापस परिवहन के लिए कूलर की जगह के लिए लगभग तीन से चार गुना अधिक फ्रीजर अंतरिक्ष में ले जाएगा। प्रशीतन के तहत, कमरे के तापमान पर समय की विस्तारित अवधि के लिए नमूने भंडारण, या फ्रीज विगलन नमूने होगा वायरस व्यवहार्यता की कमी में सभी परिणाम। अतिरिक्त देखभाल इन नमूनों विगलन जब उठाए जाने की जरूरत है। धुंध वायरल परिवहन माध्यम से बहुत अवशोषित कर लेता है, क्योंकि नमूने एक सूखी मनका स्नान में जल्दी से ज़्यादा गरम करना होगा। अनजाने में भी वायरस व्यवहार्यता की कमी में परिणाम कर सकते हैं विगलन प्रक्रिया के दौरान नमूने overheating। इसके अलावा, के कारण पोंछे कंप्यूटर अनुप्रयोग से इन विट्रो में IAV वसूली में कमी आईswabs के लिए ared, यह नाक व्यवहार्य वायरस वसूली के लिए उच्च संवेदनशीलता की आवश्यकता होती है स्थितियों में इस्तेमाल नहीं किया जा वाइप्स की सिफारिश की है। 30

नाक से सूअरों में IAV निगरानी के सफल प्रयोग विधि जानवरों पर नमूने के अधिक से अधिक आराम, निगरानी के प्रयासों की वृद्धि की स्वीकृति, और कम तनाव में परिणाम कर सकते हैं पोंछे। भविष्य में, यह एक निष्पक्ष करने के लिए या वाणिज्यिक स्वाइन झुंड में अलग-अलग सूअरों की कम तनाव परीक्षण के लिए प्रवेश पर सूअरों नमूना लेने के लिए उपयोगी हो सकता है। इस विधि में स्वाइन अन्य सांस रोगजनकों का पता लगाने के उपयोग के लिए जांच की जा सकती है। स्वाइन उपन्यास IAV उपभेदों के उद्भव में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं क्योंकि, सूअरों में IAV के लिए सक्रिय निगरानी महत्वपूर्ण है जारी रखा। जैसे, इस विधि उपन्यास IAVS का आकस्मिक उपभेदों का पता लगाने और महामारी विज्ञान की जांच में सहायता कर सकते हैं।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
BBL Brain Heart Infusion Becton, Dickinson and Company 211059
Penicillin G Sodium Salt MP Biomedicals, LLC 021194537 1500 u/mg
Streptomycin Sulfate AMRESCO LLC 0382
Gentamicin Solution Mediatech, Inc. 30-005-CR 50 mg/ml
Amphotericin B Solution Fisher S 24 25 250 ug/ml
Kanamycin Sulfate Teknova K2105 5000 ug/ml
TPP Rapid Filtermax System TPP Techno Plastic Products AG  99150
Nalgen Diagnostic Bottles Thermo Scientific 342002-9025 HDPE with white PP closure
Dermacea Gauze Sponge, 8 ply Covidien 441211 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) 
Nitrile Exam Gloves Saftey Choice 19-170-010 (A-D)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Nolting, J. M., Szablewski, C. M., Edwards, J. L., Nelson, S. W., Bowman, A. S. Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine. J. Vis. Exp. (106), e53313, doi:10.3791/53313 (2015).

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