Method Article

برازي تحليل جلايكورتيكود: رصد الغدة الكظرية غير الغازية في الخيليات

DOI:

10.3791/53479

⸱

April 25th, 2016

 ,  , 
1School of Animal Rural and Environmental Science, Nottingham Trent University, 2Chester Zoo, Upton-by-Chester

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
يمكن تقييم نشاط الغدة الكظرية < p class = 'jove_content'> في أنواع الخيول عن طريق تحليل البراز لمستقلبات الكورتيكوستيرون. توفر الطريقة خيارا غير جراحي لتقييم الأنماط طويلة المدى في كل من الخيول المحلية والخيول الحرة. يصف هذا البروتوكول المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم والتحقق الكيميائي الحيوي المرتبط بها.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
يمكن تقييم نشاط الغدة الكظرية < p class = 'jove_content'> في أنواع الخيول عن طريق تحليل البراز لمستقلبات الكورتيكوستيرون. خلال حالة يحتمل أن تكون مكروهة, يتم إطلاق هرمون إفراز الكورتيكوتروفين (CRH) من تحت المهاد في الدماغ. هذا يحفز إفراز هرمون قشر الكظر (ACTH) من الغدة النخامية ، والذي بدوره يحفز إطلاق الجلوكوكورتيكويد من الغدة الكظرية. في الخيول ، يكون الكورتيكوستيرون الجلوكوكورتيكويد مسؤولا عن العديد من التعديلات اللازمة لدعم سلوك طيران الخيول والإزالة اللاحقة من الوضع البغيض. يمكن اكتشاف مستقلبات الكورتيكوستيرون في براز الخيول ويوفر التقييم خيارا غير جراحي لتقييم أنماط نشاط الغدة الكظرية على المدى الطويل. يوفر تقييم البراز مزايا مقارنة بالتقنيات الأخرى التي تراقب نشاط الغدة الكظرية بما في ذلك تحليل بلازما الدم واللعاب. تتجنب الطبيعة غير الغازية للطريقة إجهاد أخذ العينات الذي يمكن أن يربك النتائج. كما أنه يتيح فرصة أخذ العينات المتكررة بمرور الوقت وهو مثالي للدراسات في الخيول الحرة. يصف هذا البروتوكول المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (EIA) المستخدمة لتقييم براز الكورتيكوستيرون ، بالإضافة إلى التحقق من الصحة الكيميائية الحيوية المرتبطة بها.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أهداف الطريقة الموصوفة لتحليل تركيز الكورتيزون في البراز الخيول من أجل توفير تقييم غير الغازية للنشاط الغدة الكظرية. قياس النشاط (HPA) محور الغدة النخامية، الغدة الكظرية هو نهج قبولهم للدراسة الاستجابة لحالات يحتمل أن تكون مكره في كل من الأنواع في الأسر والمحلية. تقنية الإشارة وطريقة الأكثر استخداما هو استخدام بلازما الدم 1 ومع ذلك، الطرق البديلة مثل تحليل البراز وضعت من أجل التغلب على الإجهاد الناجم عن اخذ عينات من الدم نفسها والسماح القدرة على رصد الأنواع الطليقة.

أثناء وضع مكره، تعطل التوازن الفيزيولوجي. منطقة ما تحت المهاد في الدماغ النشرات المن....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاق: الإجراءات التي تنطوي على أخذ العينات الميدانية والحيوان موضوعات تم اعتمادها من قبل مدرسة الحيوان، الريفية والعلوم البيئية (آريس) في جامعة نوتنغهام ترنت.

1. جمع عينات البراز

ملاحظة: يجب ارتداء القفازات عند التعامل مع العينات البرازية والميثانول. إذا كان هناك شكوك قوية بأن حيوان يمكن أن يعاني من مرض حيواني المنشأ، ملابس واقية مثل وينبغي أيضا أن ترتديه معطف المختبر.

  1. جمع العينات البرازية في أقرب وقت ممكن (في غضون دقائق إلى بضع ساعة) ب....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخيول المحلية (ن = 16، 8 الأفراس، 8 الحيوانات المخصية) تم تجميع مع متوسط ​​أعمارهم 15 عاما (± 3) وفقا لنوع الجنس وتعرض لأربعة تصاميم المساكن مع مستويات متزايدة من العزلة الاجتماعية (ن = 4 حصان / العلاج). الإسكان 1 تشارك الخيول الذين يعيشون في بيئة القطيع، محاكاة عن كثب بيئتها الطبيعية. الإسكان 2 تشارك الخيول التي تعيش في أزواج في حظيرة في الأماكن المغلقة. الإسكان 3 الخيول المشاركة آوى وحده في الاسطبلات ولكن مع عيانا على الخيول الأخرى والإسكان 4 عز.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوفر تحليل البراز كورتيزون وسيلة لتقييم أنماط طويلة المدى لنشاط الغدة الكظرية في الخيول. طبيعة غير الغازية من طريقة تتغلب على آثار الخلط من طرق أخذ العينات الأخرى المستخدمة لتقييم نشاط الغدة الكظرية بما في ذلك اللعاب والبلازما تحليل 9. وبالإضافة إلى ذلك الأسلوب له ميزة واضحة غير الغازية إن كانت دراسة الخيول تتراوح مجانا.

هناك عدة نقاط رئيسية لمناقشة بخصوص هذه الطريقة والاستخدام المناسب لها. خطوة حاسمة .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم توفير التمويل لإنتاج هذه المخطوطة من قبل جامعة نوتنغهام ترينت. يود المؤلفون أن يشكروا مديرة ساحة الجامعة ، آنا غريغوري على استخدام خيولها وتوفير عينات البراز لاستخدامها في البروتوكول. شكرا أيضا لمختبر الغدد الصماء للحياة البرية في حديقة تشيستر لاستخدام منشآتهم.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
الأجسام المضادة للكورتيكوستيرون & مجموعة HRPكورالي مونرو - جامعة كاليفورنيا في ديفيسلم تعد متوفرة من خلال جامعة كاليفورنيا في ديفيس - يرجى الاطلاع على
أجسام الكورتيزول المضادة لمقايسات أربور & مجموعة HRPCoralie Munro - UC Davisلم تعد متوفرة من خلال جامعة كاليفورنيا في ديفيس - يرجى الاطلاع على Arbor Assays
Corticosterone الهرمون القياسيالاصطناعي Sigma Aldrich50-23-7Harnful إذا تم تناوله أو مع ملامسة الجلد. استخدم في خزانة الدخان
كورتيزول الهرمون القياسيالاصطناعي سيجما ألدريتش15087-01-1ضار إذا تم تناوله أو ملامسة الجلد. استخدم في خزانة الدخان
الميثانولسيجما ألدريتش67-56-1مهيج. استخدم في خزانة الدخان
بيكربونات الصوديومSigma Aldrich144-55-8
كربونات الصوديوم المهيجة اللامائيةSigma Aldrich497-19-8
فوسفات الصوديوم المهيج ثنائي القاعدةSigma Aldrich7558-79-4
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدةمهيج Sigma Aldrich10049-21-5مهيج
BSASigma Aldrich9048-46-8توين مهيج
20سيجما ألدريتش9005-64-5
حامض الستريكسيجما ألدريتش77-92-9مهيج
ABTSسيجما ألدريتش30931-67-0
بيروكسيد الهيدروجين المهيج 30٪سيجما ألدريتش7722-84-1
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتش7647-14-5مهيج
كبسولات عازلة - درجة الحموضة 4VWR332732B
كبسولات عازلة - درجة الحموضة 7VWR332742D
كبسولات عازلة - درجة الحموضة 10VWR332762H
حمض الهيدروكلوريكسيجما ألدريتش435570مهيج. استخدم في خزانة الدخان
هيدروكسيد الصوديومسيجما ألدريتشS5881مهيج
الميزان التحليليفيشر العلميBFS-525-010A
ضاغط
الطرد
الكمبيوتر + طابعة
ثلاجة فريزر
تجفيف جهاز
+ أنابيب
خزانة تخزين السوائل القابلة للاشتعالVWR649-002
خزانة
محرك لوحة ساخنةVWR640-282
قارئ صفيحةVWR
غسالة MicroplateVWR
درجة الحموضة مترVWR
Eppendorf Research & reg الماصات - خيار الحزم المتعددة 2ماصة VWR
- 1,000 & micro ؛ لماصة VWR
- 200 ومايكرو ؛ لماصة VWR
- 20 وميكرو ؛ لماصة مكرر VWR
حشو ماصةVWR
شاكر مداريبروجين علمي
سونيكاتورهيلسونيك
دوامةVWR
الماء
الدافئ نظام تنقية المياهميليبور
المهيج المهيج الهواء جهاز المركزيالدخان حمام

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mormède, P., et al. Exploration of the hypothalamic-pituitary-adrenal function as a tool to evaluate animal welfare. Physiology and Behaviour. 92 (3), 317-339 (2007).
  2. Lane, J. Can non-invasive glucocortic....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fecal Glucocorticoid AnalysisCorticosterone MetabolitesEnzyme Linked ImmunoassayFecal Sample ExtractionMethanol ExtractionSerial Dilution ValidationParallelism AssayBiological ValidationNon invasive MonitoringEquine Adrenal Activity

Related Articles