Introduction
La méthode décrite vise à analyser les concentrations de corticostérone dans les fèces équins afin de fournir une évaluation non invasive de l'activité surrénale. Mesure de l'activité (HPA) axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien est une approche acceptée pour étudier la réponse à des situations potentiellement aversif chez les deux espèces en captivité et domestiques. La technique de référence et la méthode la plus largement utilisée est l'utilisation du plasma sanguin 1 cependant, d' autres méthodes telles que l' analyse fécale ont été développés afin de surmonter le stress induit par le prélèvement de sang lui - même et permettre à la capacité de surveiller les espèces en liberté.
Dans une situation aversif, l'homéostasie physiologique est perturbé. L'hypothalamus dans le cerveau libère Corticolibérine (CRH) qui agit sur l'hypophyse antérieure et stimule la libération de l'hormone corticotrope (ACTH). ACTH pénètre dans le sang et stimule le cortex surrénalien à sécréter espèces glucocorticoïdes spécifiques (GC). Les glucocorticoïdes sont étroitement liés à des événements stressants plutôt que d' être produite de manière cohérente dans tous les états d'énergie accrue par conséquent , ils sont souvent mesurés en priorité sur les autres contraintes liées hormones 2. Les glucocorticoïdes sont responsables de plusieurs effets adaptatifs chez les chevaux. L' énergie est rapidement mobilisée à partir de sites de stockage dans le corps sous la forme d'acides gras et de glucose, l' apport en oxygène est augmentée, la fonction sensorielle est améliorée 3 et le flux sanguin est réduit dans les zones ne sont pas nécessaires pour le mouvement 4. En plus d'agir comme mécanisme d' adaptation, le stress hausse induite par les glucocorticoïdes peut également aider à préparer l'animal pour la prochaine stresseur 5.
L'évaluation des niveaux d'hormones dans le plasma et la salive consiste à mesurer l'hormone circulante réelle cependant, la mesure des métabolites dans les mesures de fèces le produit final métabolique de l'hormone. stéroïdes circulantes sont catabolized dans la lIver avant l' excrétion de la bile où ils subissent d' autres changements facilitées par les activités enzymatiques de la flore bactérienne intestinale dans la piste 6. Par conséquent, immunoessais dirigés vers glucocorticoïdes sanguins peuvent ne pas être adapté à l' analyse des métabolites glucocorticoïdes fécaux 7.
Comme la collecte fécale peut être effectuée sans perturbation du cheval, l'analyse des selles pour la corticostérone, a été largement utilisé pour surveiller l'activité HPA dans un certain nombre de circonstances. Corticostérone Elevated dans les selles des chevaux a été rapporté en réponse à des situations potentiellement aversif , y compris pendant le traitement vétérinaire post-opératoire 8 et dans le logement 9 restrictive. Échantillonnage fécal reflète un niveau de glucocorticoïdes mis en commun au fil du temps plutôt que le point dans l' échantillonnage de temps offert par le plasma et la salive rendant approprié pour le suivi à long terme, chronique ou modèles saisonniers 10. En raison de la non-invasivenature de la méthode, des échantillons peuvent être recueillis à plusieurs reprises pour un individu sans qu'il soit nécessaire de capture ou de retenue 11. Cependant, les espèces spécifiques gut temps de transit doit être pris en compte lors de la planification d'un protocole d'échantillonnage. Chez les chevaux, le temps de transit intestinal est d' environ 18 h 12 donc, la réponse des surrénales et des métabolites de corticostérone ultérieures peuvent être détectées dans les selles un jour après l' activation initiale de l'axe HPA.
Lors de l' utilisation des techniques de dosage immunologique non invasifs une validation minutieuse pour l'espèce étudiée est essentielle 13. En outre, les différences de sexe en hormone métabolite excrétion ont été rapportés probablement en raison de différences dans le taux métabolique et le type de corticostérone métabolite excrété dans diverses espèces , y compris les souris 14, et les poulets 15. Il était donc important dans le cadre de cette méthode que le test a été validé pour une utilisation à la fois mâle et chevaux domestiques comme cela est détaillé dans eProtocole e. Cette différence dans le métabolisme hormonal entre les sexes a des conséquences sur la qualité des données mais il est rarement pris en compte et inclus dans le cadre de la validation du test.
Cette méthode non-invasive permet à long terme l'évaluation de l'activité des glandes surrénales chez les chevaux domestiques. Les détails du protocole à la fois la validation de l'essai et de la technique de dosage elle-même.
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Protocol
déclaration éthique: les procédures impliquant l'échantillonnage sur le terrain et les animaux sujets ont été approuvés par l'École des animaux, rural et sciences de l'environnement (ARES) à l'Université de Nottingham Trent.
1. Prélèvement des échantillons fécaux
NOTE: Les gants doivent être portés lors de la manipulation des échantillons fécaux et le méthanol. S'il y a une forte suspicion que l'animal pourrait souffrir d'une maladie zoonotique, des vêtements de protection comme une blouse de laboratoire devraient également être portés.
- Recueillir les échantillons de matières fécales dans les plus brefs délais (min à quelques heures) après la défécation et les placer dans un sac de prélèvement. Prendre trois à cinq sous-échantillons de tout échantillon déféqué avec un poids total d'environ 10 g. Etiqueter le sac avec le temps et la date de collecte, ID individuelle et congeler l'échantillon à -20 ° C jusqu'à l'analyse.
- Pour minimiser l'erreur, de geler tous les échantillons à -20 ° C jusqu'à ce que l'étude soit terminée, puis rassembler les échantillons ensemble pour l'analyse en un seul lot. </ Li>
2. Fecal Hormone Extraction
- Laisser les échantillons fécaux décongeler à la température ambiante.
- Veiller à ce que les échantillons sont homogénéisés en mélangeant manuellement chaque échantillon dans son propre sac de l'échantillon.
- Pour chaque échantillon, peser 0,50 (± 0,003 g) de la matière fécale sur une microbalance dans un bateau peser ensuite transférer les matières fécales à 8 ml flacon en verre. Utilisez une nouvelle pesée bateau pour chaque échantillon et nettoyer les pincettes avec 30% de méthanol entre chaque échantillon.
- Mélanger 0,5 g de matières fécales avec 5 ml de méthanol à 90%: l'eau, et agiter O / N sur un agitateur orbital à température ambiante.
- Le lendemain matin, VORTEX l'échantillon, puis centrifuger pendant 20 min à 600 g.
- Décanter la fraction de méthanol dans un tube et lieu 16 x 125 mm 2 verre dans un rack dans un bain d'eau réglé à une température de 37 ° C. Evaporer à sec utilisant de l'air dans une hotte. Rincer la fiole d'extraction et de placer la pastille fécale restante dans un sac de déchets cliniques pour l'élimination.
- Resuspendre les extraits fécaux dans 100%, 1 ml de methanol et transférer dans un tube de 12 x 75 mm 2 en polypropylène. Boucher immédiatement et conserver à -20 ° C jusqu'à l'analyse.
3. Analyse Hormone
- Effectuer l'analyse avec un lien immuno-enzymatique (EIA) utilisant des anticorps polyclonaux corticostérone CJM006 antisérum.
NOTE:. Une deuxième EIA a été testé (Cortisol R4866 antisérum, mais cela n'a pas réussi à atteindre l'étape de validation biochimique (voir section 4.1) L'antisérum polyclonaux corticostérone CJM006 et Cortisol R4866 antisérum et le HRP de respectif sont fournis par CJ Munro, Université de Californie, Davis, CA. - Diluer l'antisérum à 1: 15.000 dans un tampon de revêtement (0,05 M NaHCO3, pH 9,6) à l'aide d'une pipette répétitive et une pointe de pipette 50 pi, charger une plaque de microtitration 96 puits avec 50 pl / puits. Couvrir la plaque avec un scellant pour plaques et incuber O / N à 4 ° C. Laissez deux puits non couchés pour représenter les puits de liaison non spécifiques (NSB).
- Immédiatement avant utilisation, se laver les plaques de microtitration cinq fois en utilisant un laveur de plaques de microtitrage automatisé (solution de lavage; 0,15 M de NaCl, 0,05% de Tween 20).
- Chargez les plaques avec 50 pl par puits pour l'ONN et des puits [tampon EIA (0,1 M NaPO 4, 0,149 M de NaCl, 0,1% d' albumine de sérum bovin, pH 7,0) seulement] «zéro», les normes (corticostérone, 3,9 - 1,000 pg / bien) ou des échantillons d'extraits fécaux (dilué de manière appropriée à 1h20 tampon EIA, voir section 4.1). Normes et zéros doivent être exécutés en triple et quadruple, respectivement. échantillons d'extrait de selles dilué et ONN devraient être en double.
- Suivre cette immédiatement avec l' addition de 50 pl / puits du marqueur conjugué à la peroxydase de raifort ᵻ dilué dans le tampon EIA à 1: 70.000.
- Incuber les plaques de microtitrage dans l'obscurité pendant 2 heures à température ambiante.
- Laver les plaques de microtitrage avec une solution de lavage 5 fois et incuber les plaques à la température ambiante dans l'obscurité avec 100 pl / well de substrat RT [0,4 mM de 2,2'-azino-di- (acide sulfonique 3-éthylbenzothiazoline) de sel de diammonium, 1,6 mM de H 2 O 2, 0,05 M de citrate, pH 4,0]. Préparer le substrat immédiatement avant l'utilisation.
- Utilisez un spectrophotomètre à une longueur d'onde de 405 nm pour lire les plaques de microtitrage. L'incubation des plaques est considérée comme terminée lorsque la densité optique des puits zéro atteint entre 0,8 et 1,0.
- Pour assurer la répétabilité, les contrôles [normes EIA ou un échantillon biologique dilué dans un tampon EIA pour se lier à environ 30% (norme EIA), 50% (un échantillon biologique , par exemple, la piscine du cheval domestique extrait fécal) et 70% (norme EIA) utiliser ] de démontrer un intra- et inter-dosage coefficients de variation de <10% et <15% respectivement.
4. Enzyme Linked-immunologique: Validation pour les espèces études et le sexe
- Biochemical Validation (Parallélisme)
- Utilisation de tampon EIA, effectuer une dilution en série sur groupée supplémentaire fécalect, idéalement prises à partir d'échantillons de concentration de l'hormone haute et basse soupçonnés de plusieurs individus (plage: propre, 1: 2 à 1: 8192) et exécuter sur l'EIA comme décrit dans la section 3.
REMARQUE: Un parallélisme est considéré comme atteint quand les dilutions en série d'extraits fécaux donnent une courbe de déplacement parallèle aux résultats et la courbe de régression standard démontrent R2> 0,90, une pente> 0,50 et p <0,05. L'extrait fécal dilué de série qui se lie à environ 50% sur la courbe standard doit être considérée comme la dilution idéale pour exécuter tous les extraits fécaux (par exemple, 01:20). Il n'y a pas d'interférence considéré sur le dosage lorsque les résultats de régression linéaire montrent R2> 0,90 et p <0,05.
- Utilisation de tampon EIA, effectuer une dilution en série sur groupée supplémentaire fécalect, idéalement prises à partir d'échantillons de concentration de l'hormone haute et basse soupçonnés de plusieurs individus (plage: propre, 1: 2 à 1: 8192) et exécuter sur l'EIA comme décrit dans la section 3.
- Biochemical Validation (Obstruction)
- Spike 200 ul de standards dilués en série (zéro, 3,9 à 1000 ng / puits corticostérone) avec 200 ul de l'extrait fécal dilué de façon appropriée mis en commun [dilué à 50% déterminée par la liaison parallelism (1:20)] et exécuter sur l'EIE comme dans la section 3. Après EIA tracé d'analyse de la concentration observée moins le fond (concentration de l'échantillon zéro) par rapport à la concentration attendue.
NOTE: Si l'ajout de dilution extrait fécal commun aux normes ne modifie pas de manière significative les résultats de la régression montant prévu et linéaires donne R 2> 0,90, une pente proche de 1,0 et p <0,05. Aucune interférence avec l'EIA a été atteint.
- Spike 200 ul de standards dilués en série (zéro, 3,9 à 1000 ng / puits corticostérone) avec 200 ul de l'extrait fécal dilué de façon appropriée mis en commun [dilué à 50% déterminée par la liaison parallelism (1:20)] et exécuter sur l'EIE comme dans la section 3. Après EIA tracé d'analyse de la concentration observée moins le fond (concentration de l'échantillon zéro) par rapport à la concentration attendue.
- La validation biologique:
NOTE: Une démonstration que l'EIE choisie a la capacité de mesurer les changements biologiquement pertinentes de l'hormone d'intérêt [par exemple, l'augmentation des concentrations de glucocorticoïdes suivantes un pharmacologique (ACTH est souvent une procédure autorisée) ou un défi biologique (par exemple, psychologique et / ou environnement; plus susceptibles d'être un événement non réglementée opportuniste)].- Sélectionnez, d'extraire et d'analyser des échantillons fécaux pour les concentrations de métabolites de glucocorticoïdesen utilisant le processus décrit dans les sections 1-3 avant et après un événement difficile.
NOTE: Un événement difficile sera d'espèces spécifiques. Un procédé d'exemple est fourni ci-dessous pour le cheval domestique. Des exemples complets d'événements difficiles pour les chevaux ont été publiés précédemment , y compris l'utilisation de la gestion 9 et élevage procédures 16. Une augmentation significative des concentrations de métabolites glucocorticoïdes après l'événement difficile doit être observée et confirmée par l'analyse statistique. Cela doit inclure le cas échéant, l'effet des mesures répétées, la date de l'échantillon et des particuliers. validation biologique est alors considéré comme atteint.
- Sélectionnez, d'extraire et d'analyser des échantillons fécaux pour les concentrations de métabolites de glucocorticoïdesen utilisant le processus décrit dans les sections 1-3 avant et après un événement difficile.
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Representative Results
chevaux domestiques (n = 16, 8 juments, 8 hongres) avec un âge moyen de 15 ans (± 3) ont été regroupés en fonction du sexe et soumis à quatre modèles de logement avec des niveaux croissants d'isolement social (n = 4 cheval / traitement). Logement 1 impliqué chevaux vivant dans un environnement de troupeau, simulant étroitement leur habitat naturel. Logement 2 impliqués chevaux vivant en couple dans une grange couverte. Logement 3 chevaux impliqués logés seuls dans les écuries, mais avec un contact visuel à d'autres chevaux et le logement 4 isolement total impliqué des chevaux.
L'exposition à chaque traitement était dans un plan en blocs aléatoires pendant une période de cinq jours. Après cela, les chevaux ont été avéré dans les paddocks d'herbe dans leurs groupes expérimentaux pendant deux jours avant l'exposition au prochain traitement du logement. Des échantillons fécaux ont été recueillis une fois par jour les jours 1, 2 et 3 utilisés dans chaque traitement de logement de n = 8 chevaux (n = 2 chevaux au sein de chaque traitement). Des échantillons fécaux ont été collectés dans les meilleurs délais et dans 1 heure après la défécation. Tous les échantillons ont été prélevés après 1200 h le premier jour plein de sens de stabulation que le premier échantillon le premier jour a été recueilli au moins 20 heures après que le cheval a été introduit pour le traitement du logement. Des échantillons du jour un, deux et trois (total de 24 échantillons par la conception du logement) ont été évalués pour les niveaux de corticostérone fécaux réfléchissantes des 18 dernières heures en raison de la vitesse de passage du digesta 12. Les mêmes chevaux individuels ont été utilisés pour l'analyse fécale tout au long de l'étude. Pour tous les détails de ce défi biologique, y compris les paramètres mesurés supplémentaires s'il vous plaît se référer aux travaux 9 Exemples d'alternatives publiées d'événements difficiles pour les chevaux domestiques peuvent également être trouvés dans la littérature 16.
Cette section fournit des exemples de résultats d'une validation biochimique (parallélisme) pour les deux corticosterone et de cortisol dans les selles de chevaux domestiques mâles et femelles. Cette section fournit également des données représentatives obtenues à partir de l'extraction fécale et de l'analyse EIA. Les résultats ont été obtenus dans le cadre d'une étude plus vaste qui a étudié l'impact de l' isolement social causé par la conception du logement, sur le comportement et la physiologie équine 9.
Les résultats de la validation biochimique a révélé que l'EIA de corticostérone était appropriée pour mesurer l' activité des surrénales de liaison [Figure 1A échantillon mâle% = 25,349 + 0,729 (liaison norme%), R2 = 0,9545, F (1, 7) = 146,710, p moins de 0,001), figure 1B échantillon féminin% liaison = 29,989 + 0,7198 (liaison norme%), R2 = 0,95594, F (1, 7) = 151,865, p moins de 0,001] mais contraignant pas le cortisol EIA [Figure 1C échantillon mâle% = 79,089 + 0,0629 (liaison norme%), R2 = 0,175, F (1, 7) = 1,485, p = 0,262); Figure 1D échantillon féminin% Liaison = 81,652 + 0,0772 (liaison norme%), R2 = 0,257, F (1, 7) = 2.422, p = 0,164]. Comme l'EIA de corticostérone a démontré le parallélisme contrairement à l'EIA de cortisol et d'essai d'interférence sur la corticostérone EIE n'a révélé aucune preuve de la matrice des interférences, que l'addition d'extrait fécal dilué aux normes de corticostérone n'a pas modifié le montant prévu (mâle: Observé = 1.302 + 1.017 (attendu) , R2 = 0,9972, F1, 7 = 1287,128, p <0,001; femme: observé = 0,3169 + 1,0931 (attendu), R2 = 0,9972, F1, 7 = 2432,65, p <0,001;).
Les résultats de l'EIE ont révélé qu'il n'y avait pas de différence significative dans les niveaux de corticostérone entre chevaux mâles (M = 37,7, SD = 14,1) et les chevaux femelles (M = 33,8, SD = 12,7; t (70) = 1,23, p = 0,22) . Le niveau de corticostérone fécale a augmenté le niveau d'isolement accru. chevaux isolés (conception du logement 4) avaient significativement élevéer les niveaux de corticostérone fécale par rapport à toutes les autres conceptions de logement (Wilks Lambda = 0,58, F (3, 18) = 4,29, p = 0,01, eta partielle multivariée carré = 0,42; p ≤0.02). Le niveau de corticostérone fécaux était plus élevé pour tous les chevaux sur les trois jours échantillons pendant le logement le plus isolé par rapport aux autres traitements de logement. Les concentrations de corticostérone fécale moyenne pour chaque type de logement pour chaque jour sont présentés dans le tableau 1.
Figure 1. Biochemical Validation (Parallélisme) d'un corticostérone et Cortisol Enzyme Linked-Immunoassay pour Homme et Femme Chevaux. Cette figure détaille la liaison de pools dilué en série des hommes et des chevaux domestiques extraits fécaux femmes contre l' augmentation des concentrations de corticostérone et de cortisol courbe standard sur pour cent une EIE. Les résultats montrent que lacorticostérone (A, mâle; B, femelle) et non pas le cortisol EIA (C, mâle; D, femelle). a donné une courbe de déplacement réussie parallèlement à la courbe corticostérone standard EIA S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
| MEAN (± SD) CORTICOSTERONE FÉCALE (ng / g) DANS LE TRAITEMENT CHACUN DE LOGEMENT | ||||
| TRAITEMENT DU LOGEMENT | jour 1 | Jour 2 | jour 3 | GLOBAL |
| 1 | 31.73 ± 10.2 | 32,18 ± 8,0 | 29,22 ± 5,9 | 31.05 ± 7,8 |
| 2 | 32,75 ± 10,0 | 33,66 ± 12,9 | 34.67 ± 9.3 | 33,69 ± 10,3 |
| 3 | 35.06 ± 14.6 | 35.14 ± 15,9 | 33,13 ± 12,5 | 34,44 ± 13,6 |
| </ Td> | * | |||
| 4 | 38.16 ± 17,8 | 42.00 ± 16.7 | 41,52 ± 17,6 | 40,56 ± 16,5 |
Tableau 1. Moyenne (± écart - type) Fecal corticostérone (ng / g) de chaque traitement de logement pour Days One, Two et Three et Mean Fecal corticostérone (ng / g) pour tous les trois jours (ensemble) dans chaque traitement de logement. Ce tableau indique pour les valeurs moyennes de la corticostérone dans les selles (ng / g) ± l'écart type pour chacun des traitements au logement pendant le jour un, deux et trois. Des échantillons ont été prélevés au moins 20 heures après les chevaux sont entrés dans le logement. Elle montre également la corticostérone fécale moyenne (ng / g) ± écart-type pour tous les trois jours (au total) de chaque traitement de logement. La corticostérone concentrat fécaleion était significativement plus élevée (*) lors de la conception du logement isolé. La plus faible concentration de corticostérone fécale pour tous les jours a été trouvée dans le groupe de traitement logé (traitement 1). Adapté de Yarnell et al. (2015), avec la permission du Journal of Physiology and Behaviour.
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Discussion
analyse de corticostérone Fecal fournit un moyen d'évaluer les modèles à long terme de l'activité des glandes surrénales chez les chevaux. La nature non-invasive de la méthode permet de surmonter les effets de confusion d'autres méthodes d'échantillonnage utilisées pour évaluer l' activité des glandes surrénales , y compris la salive et le plasma analyse 9. En outre, la technique présente un avantage non-invasive clair si l'étude des chevaux libres allant.
Il y a plusieurs points clés à discuter au sujet de cette méthode et son utilisation appropriée. Une étape critique dans le protocole est la validation de l'essai pour l'espèce en question et le choix approprié d'anticorps. Si l'anticorps utilisé réagit de manière croisée avec les métabolites de glucocorticoïdes structurellement similaires mais fonctionnellement différentes ce qui pourrait brouiller les résultats 17. Par conséquent, des dosages pour mesurer les métabolites d'hormones nécessitent une validation physiologique ou biologique étroite, dont les détails existent dans la littérature 18,19 et dans le protocole described.
L'état de l'échantillon de selles doit être considéré , y compris la fraîcheur de l'échantillon et l' exposition environnementale qui ont été montré à la fois d'influer sur les niveaux de métabolites hormonaux 20. L' excès de pluie ou l' exposition au soleil sont connus pour provoquer des augmentations ou des diminutions des concentrations de métabolites en raison de la métabolisation bactérienne 21. Les chercheurs qui souhaitent recueillir des échantillons de divers degrés de fraîcheur doivent étudier les effets du temps sur l'intégrité de l'échantillon, en plus de l'impact environnemental. Cela peut être fait avant l'étude en mettant en place une petite expérience et périodiquement échantillonner les matières fécales des individus mâles et femelles, avec des degrés de fraîcheur et une exposition variable à des variables climatiques.
Dans la plupart des scénarios de recherche, des échantillons provenant de personnes connues seront utiles ou nécessaires 10. Chez les chevaux domestiques, cela peut être obtenu en contrôlant un groupe pour la défécation, ou en utilisant des marqueurs de nourriture ingérée pour identify fèces des individus dans des groupes plus importants 12. Chez les espèces en liberté cela peut se révéler fastidieux que le suivi individuel sera nécessaire.
Lors de la sélection de la méthode d'analyse de glucocorticoïdes, il faut considérer que les résultats du test de corticostérone fécaux représentent un échantillon groupé au fil du temps plutôt que d'un point de mesure du temps; Par conséquent, il y aura moins de fluctuations dans les données. Si le chercheur est intéressé par les effets à long terme d'une situation, la technique de l'élevage ou de la pratique de gestion, puis l'analyse des fèces offre une technique appropriée. Si l'évaluation des tendances à court terme de la concentration de l'hormone est nécessaire, le plasma ou l'analyse salivaire serait la méthode préférée.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Corticosterone antibody & HRP kit | Coralie Munro - UC Davis | No longer available through UC Davis - please see Arbor Assays | |
| Cortisol antibody & HRP kit | Coralie Munro - UC Davis | No longer available through UC Davis - please see Arbor Assays | |
| Corticosterone synthetic standard hormone | Sigma Aldrich | 50-23-7 | Harnful if ingested or with skin contact. Use in fume cupboard |
| Cortisol synthetic standard hormone | Sigma Aldrich | 15087-01-1 | Harmful if ingested or with skin contact. Use in fume cupboard |
| Methanol | Sigma Aldrich | 67-56-1 | Irritant. Use in fume cupboard |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | 144-55-8 | Irritant |
| Sodium Carbonate Anhydrous | Sigma Aldrich | 497-19-8 | Irritant |
| Sodium Phosphate Dibasic | Sigma Aldrich | 7558-79-4 | Irritant |
| Sodium Phosphate Monobasic | Sigma Aldrich | 10049-21-5 | Irritant |
| BSA | Sigma Aldrich | 9048-46-8 | Irritant |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | 9005-64-5 | Irritant |
| Citric Acid | Sigma Aldrich | 77-92-9 | Irritant |
| ABTS | Sigma Aldrich | 30931-67-0 | Irritant |
| Hydrogen Peroxide 30% | Sigma Aldrich | 7722-84-1 | Irritant |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | 7647-14-5 | Irritant |
| Buffer capsules - pH 4 | VWR | 332732B | |
| Buffer capsules - pH 7 | VWR | 332742D | |
| Buffer capsules - pH 10 | VWR | 332762H | |
| Hydrochloric Acid | Sigma Aldrich | 435570 | Irritant. Use in fume cupboard |
| Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | S5881 | Irritant |
| Analytical balance | Fisher Scientific | BFS-525-010A | |
| Air compressor | |||
| Centrifuge | |||
| Computer +printer | |||
| fridge-freezer | |||
| Drying apparatus | |||
| +tubing | |||
| Flammable liquid storagecabinet | VWR | 649-002 | |
| Fume cupboard | |||
| Hot-plate stirrer | VWR | 640-282 | |
| Microplate reader | VWR | ||
| Microplate washer | VWR | ||
| pH meter | VWR | ||
| Eppendorf Research® pipettes - multipack option 2 | VWR | ||
| Pipette - 1,000 µl | VWR | ||
| Pipette - 200 µl | VWR | ||
| Pipette - 20 µl | VWR | ||
| Repeater pipette | VWR | ||
| Pipette filler | VWR | ||
| Orbital shaker | Progen Scientific | ||
| Sonicator | Hilsonic | ||
| Vortex | VWR | ||
| Warm water bath | |||
| Water purification system | Millipore |
References
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