يتم عرض بروتوكول فيديو خطوة بخطوة للاستئصال القمي في هذه الدراسة. الاستئصال القمي هو نهج جراحي تم تسليط الضوء عليه مؤخرا في أبحاث تجديد قلب الثدييات. قد تعزز هذه الدراسة تطبيق الاستئصال القمي كمنهجية قياسية في البحث في الآلية الكامنة وراء تجديد القلب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قمي استئصال نموذج الفأر لدراسة المبكر الثدييات تجديد القلب
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أمراض القلب والأوعية الدموية يصيب العالم كله بسبب تغيير نمط الحياة المركزة. تجديد القلب يحمل وعودا كبيرة لإصلاح وترميم العضلية التي فقدت بسبب الاصابة والمرض. وعلى النقيض من تجديد القلب القوي لبعض الفقاريات الدنيا، تظهر قلوب الثدييات الكبار عادة القدرة الحد الأدنى لتجديد القلب والإصلاح. ومع ذلك، فقد أثار الدراسات الحديثة أهمية علمية كبيرة مع النتيجة أنه بين يوم بعد الولادة 1-7 (P1 إلى P7)، يحتفظ قلب الفأر حديثي الولادة إمكانات التجدد كبيرة بعد استئصال القمي (أي بتر جراحية وتعرض اليسرى قمة البطين). واحد جدل كبير على هذا الاستنتاج قد يكون راجعا إلى الإجراءات المتعلقة جراحة المتنوعة المستخدمة في الجهود الرامية إلى تكرار أو توسيع بناء على هذه النتائج الهامة. هذه التعليمات يعرض حيوي المواد ومنهجية لاستئصال القمي في نموذج الفأر. الخطوات البارزة لهذه القوارض بقاؤهعملية جراحية ل تنطوي التخدير انخفاض حرارة الجسم، بضع الصدر، البتر الجراحي للبطين القلب قمة، وخياطة والانتعاش من الفئران. النهج الموصوف يمكن توسيع تطبيق استئصال نموذج الفأر القمي للأبحاث القلب والأوعية الدموية.
المقدمة
يؤدي عمر الإنسان الطويل إلى العديد من الأمراض المرتبطة بالشيخوخة ونمط الحياة ، بما في ذلك قصور القلب ، وهو سبب رئيسي للوفيات. ومع ذلك ، بدون استبدال خلايا عضلة القلب المفقودة أو المختلة وظيفيا ، يمكن للعلاجات الحالية فقط تحسين وظائف القلب بشكل عابر1 ، 2. وبالتالي ، من الضروري اكتشاف وتطوير استراتيجيات مبتكرة لتجديد القلب وإصلاحه. قلب الثدييات البالغة لديه إمكانات تجديدية محدودة. قدمت الدراسات التي أجريت على الفقاريات السفلية ، مثل البرمائيات urodele وأسماك teleost ، رؤى غير مسبوقة حول الآليات الجزيئية والخلوية الكامنة وراء تجديد القلب3 ، 4. في الآونة الأخيرة ، ظهر نموذج فأر حديثي الولادة لتجديد القلب قد يمكن من تحديد وتوصيف الأحداث الفيزيولوجي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب الماوس عن طريق رعاية الحيوان واستخدام البرنامج في المعاهد الوطنية للصحة (NIH) مع عدد بروتوكول H0083R3. وافق NHLBI IACUC البروتوكول دون مسكنات.
1. انخفاض حرارة الجسم التخدير في الفئران حديثي الولادة
- تطهير اسفنجات والمعدات الجراحية في الأوتوكلاف قبل الجراحة. إعداد جميع المواد الجراحية والتبديل على الساخن حبة تعقيم 15-20 دقيقة مقدما لتصل إلى 240 درجة مئوية إلى 270 درجة مئوية.
- نقل جميع C57BL / 6 ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الموت الرحيم كانت الجراء الماوس 1 و 2 و 21 يوما استئصال ما بعد القمي، وجمعت قلوبهم لH & E وماسون ثلاثي الألوان وصمة عار. اللون الأزرق في ماسون ثلاثي الألوان وصمة عار يشير إلى ترسب النخابية المصفوفة خارج الخلية 5. مع نجاح استئصال القمي، تتشكل جلطة الدم بشكل فعال لختم LV يوم واحد استئصال ما بعد القمي، كما هو مبين في الشكل 1A. ويلاحظ وجود ارتشاف التدريجي لتجلط الدم وتليف القلب في وقت مبكر، والاستعاضة عنها أنسجة عضلة القلب يحدث حتى تجدي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يظهر تجديد القلب إمكانية علاج قصور القلب والوقاية منه1 ، 2. لا غنى عن النماذج الحيوانية وتلعب دورا مهما في فهم كيفية حدوث تجديد القلب3-6. تقوم العديد من البرمائيات والأسماك بتجديد أنسجة القلب استجابة للإصابة ، مما يوفر نظرة ثاقبة لفهمنا لأمراض القلب والأوعية الدموية البشرية13 ، 14. ومع ذلك ، من حيث التطور ، يجب الحفاظ على الفيزيولوجيا المرضية بشكل أكبر بين نموذج الفأر والبشر. يعد تجديد القلب في نماذج الثدييات مجالا بحثيا جديدا نسبيا ولكنه مزدهر لعلاجات قصور القلب3-6.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
رعيت رسوم النشر لهذه المادة عن طريق هدية من أدوات العلوم الجميلة الدكتور جيان هوى.
شكر وتقدير
الكتاب أشكر الدكاترة. جيمس هوكينز، زو شي يو وشوان تشو من الوطني للقلب والرئة والدم المعهد (NHLBI) لمساعدتها مع جراحة الماوس وإعداد وتلطيخ أقسام البارافين. المؤلفون ممتنون لهيئة التحرير NIH الزملاء للمساعدة التحريرية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حاملات إبرة أولسن هيغار مع مقص ، أدوات | العلوم الدقيقة | 1.5 مم 12002-12 | |
| مقص زنبركي Vannas - 2 مم | أدوات العلوم الدقيقة | 15000-03 | مقص قزحية القزحية |
| معقم الخرز الساخن | أدوات العلوم الدقيقة | 18000-45 | |
| ملقط القزحية ، أدوات العلوم الدقيقة المستقيمة والمسننة | 11064-07 | ||
| ملقط القزحيةأدوات العلوم الدقيقة المنحنية والمسننة | 11065-07 | ||
| مقص الشيا - أدوات العلوم الدقيقة المنحنية / حادة / 12 سم | 14105-12 | ||
| ملقط ربط خياطة دائرية ، | أدوات العلوم الدقيقة | المستقيمة 18025-12 | |
| مقص زنبركي دائري مقص | العلوم الدقيقة | 15400-12 | |
| Fine Hemostat | 13007-12 | ||
| مصباح مكبر | Luxolamp Corp | IM120 | |
| مصباح التدفئة | Brandt Equipment LLC | 51152/3 | |
| 6-0 خيوط Prolene | Ethicon | 8889H | |
| لاصق الأنسجة اللاصق للجلد | 3M | 1469 | |
| أدوات تطبيق قطنية معقمة | Dynarex | 4305 | |
| WEBCOL وسادة تحضير الكحول | Covidien | 6818 | متوسطة 2 رقائق ، 200 / صندوق ، مشبعة ب 70٪ كحول الأيزوبروبيل |
| Curity الإسفنج لجميع الأغراض | Covidien | 9024 | غير المنسوجة 4 طبقات ، 4 "× 4" (10.2 سم & مرات ؛ 10.2 سم) |
| لوح واقي علوي من مقاعد البدلاء | KIMTECH SCIENCE | 7546 | 18 بوصة × 19.5 بوصة (45.72 سم × 49.53 سم) × 50 |
| 0.9٪ كلوريد الصوديوم ، 250 مل | Hospira Inc. | NDC 0409-6138-22 | |
| محلول البيتادين Swabsticks | منتجات بوردو LP | NDC 67618-153-03 | |
| الأوتوكلاف | تومي علم الأحياء الرقمي | SX-700 | معقم بالبخار عالي الضغط |
| ماسح ضوئي للشرائح | HAMAMATSU | NanoZoomer 2.0-RS |
المراجع
- Lin, Z., Pu, W. T. Strategies for cardiac regeneration and repair. Sci Transl Med. 6, 231-239 (2014).
- Xin, M., Olson, E. N., Bassel-Duby, R. Mending broken hearts: cardiac development as a basis for adult heart regeneration and repair. Nat Rev Mol Cell Biol....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
