Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Администрирование и обнаружения меток белка на членистоногих для разгона исследований

7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53693

⸱

28 января 2016 г.

 , 
1USDA-ARS, Arid-Land Agricultural Research Center

В этой статье

Краткое содержание

Белки часто используются для маркировки членистоногих для исследований рассеивания. Продемонстрированы методы введения внутренних и внешних белковых меток членистоногим. Также проиллюстрированы методы обнаружения белковых меток с помощью непрямого или сэндвич-ферментного иммуноферментного анализа (ИФА).

Аннотация

Мониторинг движения членистоногих часто требуется, чтобы лучше понять динамику популяции, связанные, разгон модели, предпочтения растений-хозяев, и другие экологические взаимодействия. Членистоногие, как правило, отслеживаются в природе помечая их с уникальным знаком, а затем повторно собирать их в пространстве и времени, чтобы определить их возможности расселения. В дополнение к реальным физическим тегов, таких как цветной пыли или краски, различные виды белков оказались очень эффективными для маркировки членистоногих экологических исследований. Белки могут быть введены внутри и / или снаружи. Белки могут быть обнаружены на пойманных членистоногих с белком конкретных иммуноферментного анализа (ELISA). Здесь мы опишем протоколов внешне и внутренне пометки членистоногих с белком. Два простых экспериментальные примеры продемонстрированы: (1) внутренний знак белок представлен насекомого путем предоставления содержанием белка, обогащенного и (2) внешний знак белка местноpplied к насекомым с использованием медицинской распылитель. Мы тогда связать шаг за шагом руководство бутерброда и косвенных методов ELISA, используемых для обнаружения белка знаки на насекомых. В этой демонстрации, различные аспекты приобретения и обнаружения белковых маркеров на членистоногих для марки-релиз-повторной поимки, марки-захвата и типы самостоятельной знак захвата исследований обсуждаются, наряду с различными способами, что процедура immunomarking Был адаптированы к широкий спектр задач исследования.

Введение

Отслеживание перемещений членистоногих вредителей, естественных врагов (паразитов и хищников) и опылителей в природе имеет важное значение для лучшего понимания, как улучшить экосистемные услуги. Ключевым компонентом для большинства типов разгона исследований, имеющих надежный способ, чтобы отметить членистоногих (ы) интересов. Разнообразие материалов (например, краски, красители, цветные пыли, теги, редкие элементы, белки) были использованы, чтобы отметить членистоногих, чтобы оценить их динамику народонаселения, разгон возможности, кормление поведения и другие экологические взаимодействия 1,2.

Адекватность используемого маркера для любого заданного рассеивания исследований будет зависеть от типа исследования, проводимого. Есть три основных категоризация для маркировки членистоногих: (1) знак-релиз-повторной поимке (МРТ), (2) отметка-захвата, и (3) самостоятельно знак-захвата. Для разметки релиз-повторной поимке исследования, следователь, как правило, отмечает членистоногих вместе в laboratoры и освобождает их в центральной точке поля. Членистоногих затем отбили на различных пространственных и временных интервалов с помощью различных устройств сбора (например, чистый развертки, вакуумные, липкая ловушка) 3,4,5. В повторно пойманной особи затем проверяют на конкретный знак, чтобы отличить освобожден от родных лиц. Для исследования знака захвата, следователь, как правило, применяется знак непосредственно в поле, используя распыления (например, рюкзак распылителя, стрелы и сопла распылителя). Лучшие маркеры для исследования марка захвата недороги и легко наносится на среду обитания членистоногих в. Для исследования самостоятельно знак захвата, следователь, как правило, применяется знаки на членистоногих приманки 6,7 или гнездо входа 8. В свою очередь, членистоногие знаменует собой внутренне пожирая заметное приманку или внешне "чистки" против отметки, когда он выходит из гнезда.

Как упоминалось выше, многие виды маркеров были намиред пометить различные членистоногих. Тем не менее, очень немногие являются полезными для всех трех этих разгона исследовательских категорий. Развитие процедуры белок immunomarking был крупный прорыв для маркировки насекомых. Immunomarking ставит метку белка на членистоногих внутри или снаружи, который, в свою очередь, обнаруживает анти-белка специфического иммуноферментного анализа (ИФА). Первые маркеры, такие белковые были использованы кроличьим иммуноглобулином (IgG) и куриный IgG / IgY 9,10. Они оказались очень эффективными знаки для МРТ и исследования самостоятельно знак захвата (см обсуждения). К сожалению, IgG / IgY белки являются дорогостоящими, и поэтому не подходит для исследований знак захвата и большинство видов исследований самостоятельно знак захвата. Впоследствии, ИФА обнаружения белка второго поколения были разработаны для белков, содержащихся в куриных яиц белых (альбумин), коровье молоко (казеин) и соевого молока (ингибитор трипсина белок). Каждый анализ обладает высокой чувствительностью, конкретными, и, самоеважно, использует белки, которые значительно дешевле, чем белков IgG / Igy 11. Эти белки оказались эффективными для МРТ, марки-захвата, и исследования самостоятельно знак захвата (см обсуждения).

В этой статье мы опишем, и продемонстрировать, как проводить исследования белков Все хранения лабораторией. Такие исследования являются первым этапом исследований, необходимых для любого типа поля рассеивания исследования. В частности, важно, что следователи знают, как долго знак будут сохранены на целевых видов членистоногих, до начала разгона на поле исследований. Здесь мы опишем и продемонстрируем, как внутренне и внешне отметить насекомых для МРТ, Марк-захват, и само знак-захвата исследования типа поля. Затем мы продемонстрируем, как определить наличие отметок с косвенными и сэндвич-ИФА.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Внутренний Марк, хранения, и порядок обнаружения

  1. Внутренняя процедура маркировки
    1. Соберите насекомых интересов (п ≈ 100 человек) из лаборатории колонии выращенных на искусственном диеты или с поля и делятся на две чистые контейнеры выращивания.
    2. Поставьте обычный 20 мл диеты пакет (без опознавательных знаков негативное отношение управления) в одном из контейнеров. Дополнение второй 20 мл искусственного диеты пакет с 1,0 мл 1,0 мг / мл куриного IgG / решения IgY, тщательно перемешать и поместить его в другую емкость.
      Примечание: Если насекомое интерес не имеют искусственный рацион, знак может быть помещен на или в какой-либо диеты, как правило, они выдержаны по (например, зеленая фасоль, яйца, моли вода, сахар, мед).
    3. Разрешить насекомые возобновить свою деятельность подачи в течение 24 часов.
  2. Процедура удержания внутреннего знак
    1. Удалить диета пакеты из каждого контейнера и поставить насекомых жIth другого источника пищи, чтобы поддерживать их в течение продолжительности эксперимента (например, зеленые бобы).
    2. Сбор когорту (п = 20) ежедневно насекомых (или в любой желаемый промежуток времени) от каждой обработки и немедленно заморозить при -20 ° С.
  3. Сэндвич процедура ИФА
    1. Добавить 50 мкл кроличьего анти-куриный IgY первичного антитела, разбавленного 1: 500 в трис-солевой буферный раствор (TBS) в каждую лунку чистого ELISA микропланшет и инкубировать в течение как минимум 1 часа при комнатной температуре (примечание: микропланшетов также можно инкубировать O / N при 4 ° С).
    2. Откажитесь от антитела из пластины и блокировать каждую лунку по 300 мкл 1,0% обезжиренного сухого молока решения для 30 мин.
    3. В ожидании предыдущих этапов инкубации поместите замороженные насекомых индивидуально в 1,6 мл микропробирок 1,0 мл TBS.
    4. Измельчите каждый насекомое с чистой пестиком до полного гомогенизировали и добавить 100 мкл каждого образца в отдельной лунке ELISAпластина. Разрешить образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа.
    5. Добавить 100 мкл отрицательного (только ТБС) и положительных (яичные белки в TBS) управления в скважинах в первом столбце каждой ELISA пластины. Кроме того, добавить 100 мкл отрицательного контроля насекомых (без опознавательных знаков) насекомых к 8 скважин в последнем столбце каждой пластины (рис 1). Разрешить контрольные образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Обратите внимание, что шаблон приводится на рис 1 это шаблон мы используем для наших стандартных анализов. Размещение образцов в скважинах на усмотрение исследователя.
    6. Промыть каждую лунку три раза забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS) -tween, а затем добавить 50 мкл кроличьего антитела против IgG-куриного / IgY, конъюгированного с пероксидазой хрена, разбавленного 1: 10000 в 1% растворе молока и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре.
    7. Промыть каждую лунку три раза PBS-Tween и добавить 50 мкл тетраметилбензидина (ТМВ) подложки в каждую лунку.
    8. Через 10 мин, читать скважинс микропланшетов спектрофотометра, установленного на длине волны 650 нм.

figure-protocol-1
Рисунок 1. схема, показывающая стандартизированные обозначения, используемые для также типичного 96-луночного ELISA микропланшет. Каждая пластина содержит 7 скважин, посвященные Трис-солевом буфере отрицательных контролей (TBS), хорошо выделенные для положительного контроля белка (поз Ctrl), 80 отдельные скважины, посвященные пойманных насекомых (образец 1 ... 80), и 8 лунок, посвященных немаркированных (негативных) управления насекомых (отр Ctrl 1 ... 8). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

2. Внешний Марк, хранения, и порядок обнаружения

  1. Внешний маркировка процедура
    1. Соберите насекомых интересов (п ≈ 100физические лица) из лаборатории колонии или из области и месте в двух 1.0 л пластиковые контейнеры с отверстием диаметром 2,5 см ударил из стороны каждого контейнера.
    2. Спрей насекомых в первом контейнере с 1,0 мл ЦТ 2 O (отрицательный контроль) лечения с использованием медицинского распылителя. Спрей насекомых во втором контейнере с 1,0 мл 5,0% раствора яичного белка куриного использованием медицинской распылитель.
    3. Прикрепите шланг распылителя к стандартной розетке лаборатория воздуха, а затем вставьте рот распылитель в 2,5 см отверстие контейнера. Затем поверните на выходе воздуха постепенно, пока распылитель не производит пар.
    4. Продолжить распыления (маркировка), пока раствор яичных белков не было обойтись (прибл. 2-5 мин).
    5. Удалить распылитель и поместите пробку в отверстие пластикового контейнера. Разрешить насекомые стоять при комнатной температуре в пока раствор не полностью высох.
  2. Процедура удержания внешнего знак
    1. Поместите каждую лечение сухих насекомых в отдельный чистый контейнер выращивания, чтобы избежать дальнейшего воздействия знака.
    2. Добавить еду и воду в чистых емкостях для поддержания насекомых на протяжении исследования.
    3. Сбор когорту (п = 20) насекомых из каждой обработки ежедневно и немедленно заморозить при -20 ° С.
  3. Косвенное процедура ИФА
    1. Поместите замороженные насекомых индивидуально в 1,6 мл микропробирок и добавить 1,0 мл TBS.
    2. Замочите образцы в течение 1 часа на орбитальном шейкере набор на 120 оборотов в минуту.
    3. Добавить отрицательные и положительные элементы управления, как описано в шаге 1.3.5.
    4. После замачивания, пипетки 100 мкл аликвоты из каждой пробы в одну из 80 назначенных образцов скважин на новой 96-луночный ELISA пластины, как показано на рисунке 1 Разрешить образцы инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре (примечание:. Микропланшеты могут быть также инкубировали O / N при 4 ° С).
    5. Вымойте лунки три разаPBS-Tween и затем добавить 300 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина (PBS-BSA) в каждую лунку.
    6. Через 30 мин при комнатной температуре дважды промывали PBS-Tween.
    7. Добавить 50 мкл кроличьего анти-яичного альбумина первичного антитела, разбавленного 1: 8000 в PBS-BSA-Silwet (0,05%) к каждой лунке и инкубировать в течение 1 часа при комнатной температуре.
    8. Промыть каждую лунку три раза PBS-Tween, а затем добавить 50 мкл козьего антитела против кроличьего IgG-конъюгированного с пероксидазой хрена, разбавленного 1: 2000 в PBS-BSA-Silwet (0,05%) в течение 1 ч при комнатной температуре.
    9. Промыть каждую лунку три раза PBS-Tween и добавить 50 мкл субстрата ТМВ в каждую лунку.
    10. Через 10 мин чтения лунки микропланшетов спектрофотометра, установленного на длине волны 650 нм.

Анализ данных 3.

  1. Рассчитать среднее значение абсорбции 8 негативных насекомых управления на каждом ELISA пластины, а затем рассчитать стандартное отклонение на основе объединенных отрицательных контролей сюдам все ELISA пластины данного исследования 12.
  2. Добавить в шесть раз объединенных стандартное отклонение к среднему, полученного для каждого ELISA пластины чтобы получить положительный ELISA пороговое значение. Любой образец насекомых получая абсорбцию равную или большую, чем это значение, считается положительным на наличие отметки белка.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Внутренняя маркировка:

Результаты теста внутренней удерживания знак, показаны на рис 2А. Рассчитанная ИФА критический порог значение было 0,054. В целом (все четыре даты образец в сочетании), насекомые, обработанные без белка дали последовательно низкие значения ELISA (X = 0,038 ± 0,002, N = 80). С другой стороны, все насекомые подается белок, обогащенный диеты дали п...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Порядок immunomarking членистоногих белок был впервые описан почти четверть века назад 9. С тех пор, эта процедура была приспособлена для изучения расселения модели широкого спектра членистоногих, использующих и внутренне и внешне управляемые IgG / IgYs. Эти белки оказались стойких маркеров для широкого спектра видов насекомых проверенных сих пор. Тем не менее, как упоминалось выше, главное ограничение на использование IgG / IgYs том, что они очень дороги. Следовательно, IgG / IgYs полезны только для МРТ и са...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Упоминание торговых наименований или коммерческих продуктов в данной публикации исключительно в целях обеспечения конкретной информации и не подразумевает рекомендацию или одобрение со стороны Министерства сельского хозяйства США. Министерство сельского хозяйства США равные возможности и работодателем.

Благодарности

Финансирование было предоставлено USDA КРИС 5347-22620-021-00D и, в частности, по сельскому хозяйству и продовольственной исследовательская инициатива конкурентной грант №. 2011-67009-30141 от USDA Национальный институт продовольствия и сельского хозяйства. Мы благодарны за техническую поддержку Johanna Нассиф. Мы также поблагодарить Пола Бейкер, Дэвид Хортон, Диего Ньето, и Фрэнсис Sivakoff для обеспечения некоторых изображениях, используемых на рисунке 3.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Контейнер для хранения пищи (для разведения насекомых)Rubbermaid/TupperwareРазличные размерыРазличные производители и продавцы. Сетчатая ткань вклеивается в окошко
Небулайзер малого объема (Micro Mist)Teleflex-Hudson RCI1881Доступен в Интернете и в магазинах медицинских товаров. Другие бренды тоже подойдут.
Микроцентрифужные пробирки, 1,6 мл с крышкойContinental Lab Products4445.XПодойдет любой подобный тип. Мы отдаем предпочтение брендам, которые имеют легко открывающиеся крышки.
Ящик для хранения микроцентрифужных пробирок из пенополистирола (сетка 5x20)RPI Corp.145746Этот дизайн хорош тем, что он не перегружает трубы.
Диспенсер, репитерEppendorf4982000322Что-либо подобное поможет ускорить выдачу.
Пестики, пластиковые одноразовые измельчители для салфеток, 1,5 млKimble Chase749521-1500Доступны у различных поставщиков. Пестики можно чистить и автоклавировать для повторного использования.
Планшеты BD Falcon ELISA, 96-луночные (плоскодонные)Пипетка BD351172
Ovation, ручная (20-200 &; l)VistaLab1057-0200 или 1070-0200Подойдет любой похожий тип. Данная модель отличается эргономичностью.
Резервуары, стерильный реактивVistaLab4054-1000Подойдет что-нибудь подобное.
Электронный пипетка, 8-канальный (50-1 200 &; l) (Biohit eLine)Sartorius730391Если бы вам пришлось выбрать одну электронную модель, этот размер был бы наиболее полезен.
Электронный пипетка, 8-канальный (10-300 &; l) (Biohit eLine)Sartorius730361Что-нибудь подобное подойдет.
Коллекторная, многолуночная пластинчатая шайба (8-позиционная, прямая)Sigma-AldrichZ369802 Что-то подобное подойдет и для ручного мытья тарелок.
Микропланшетный ридер с детекцией поглощенияMolecular DevicesSpectraMax 250Подойдет что-нибудь подобное.
Курица IgG/IgYСоединенные Штаты БиологическийI1903-15RТакже доступен из других источников
Яичные белкив продуктовом магазине" Все белые», « Взбиватели для яиц", etc.Смешайте 5 мл с 95 мл dH2O для получения 5% раствора
Tris (Trizma Base)Sigma-AldrichT15032,42 г/л для производства TBS
Sodium chloride (NaCl)Sigma-AldrichS988829,22 г/л для получения TBS и 8,0  g⁠/⁠ L для PBS
Sodium phosphate dibasic (Na2HPO4)Sigma-AldrichS08761,14 г/л для PBS
Калийфосфат одноосновной (KH2PO4)Sigma-AldrichP56550,2 г/л для PBS
Potassium chloride (KCl)Sigma-AldrichP95410,2 г/л для PBS
Tween 20, EIA маркиSigma-AldrichP1379Добавляйте 0,5 мл на л в PBS после растворения солей.
PBS с 1% BSASigma-AldrichP3688Mix 1 пакетик в 1 л dH2O
Anti-Chicken IgY (IgG) (цельная молекула) антитело, полученное у кролика (1:500)Sigma-AldrichC6409Mix 100 µ l в 50 мл TBS
сухого молока, сухого или свежего молока (1%)Продуктовый магазинСмешайте 10 г с 1 л dH2O для получения 1% раствора
Anti-Chicken IgY (IgG) (цельная молекула)-пероксидазное антитело, вырабатываемое у кролика (1:10,000)Sigma-AldrichA9046Mix 100 &m; l в 1 л 1% молочного
антитела против куриного яйца альбумина, вырабатываемые у кролика (1:8,000)Sigma-AldrichC6534Dilut 125 &микро; l в 1 л PBS-BSA
козий конъюгат против кролика IgG пероксидаза (1:2,000)Sigma-AldrichA6154Разведите 0,5 мл в 1 л PBS-BSA, затем добавьте 1,3&nbл; ml Silwet
Vac-In-Stuff (Silwet L-77) сополимер кремния и полиэфираLehle SeedsVIS-01Добавить в качестве последнего ингредиента
TMB Microwell Однокомпонентный пероксидазный субстратSurModicsTMBW-1000-01

Ссылки

  1. Hagler, J. R., Jackson, C. G. Methods for marking insects: Current techniques and future prospects. Annu. Rev. Entomol. 46, 511-543 (2001).
  2. Lavandero, B. I., Wratten, S. E., Hagler, J. R., Jervis, M. A. The need for effective marking and tracking techniques for monitoring the movements of insect predators and parasitoids. Int. J. Pest Manage. 50 (3), 147-151 (2004).
  3. Hagler, J. R., Jackson, C. G., Henneberry, T. J., Gould, J. Parasitoid mark-release-recapture techniques: II. Development and application of a protein marking technique for Eretmocerus spp., parasitoids of Bemisia argentifolii. Biocontrol Sci. Techn. 12 (6), 661-675 (2002).
  4. Blackmer, J. L., Hagler, J. R., Simmons, G. S., Henneberry, T. J. Dispersal of Homalodisca vitripennis (Homoptera: Cicadellidae) from a point release site in citrus. Environ. Entomol. 35 (6), 1617-1625 (2006).
  5. Swezey, S. L., Nieto, D. J., Hagler, J. R., Pickett, C. H., Bryer, J. A., Machtley, S. A. Dispersion, distribution and movement of Lygus.spp. (Hemiptera: Miridae) in trap-cropped strawberries. Environ. Entomol. 42 (4), 770-778 (2013).
  6. Hagler, J. R., Baker, P. B., Marchosky, R., Machtley, S. A., Bellamy, D. E. Methods to mark termites with protein for mark-release-recapture and mark-capture studies. Insect. Soc. 56 (2), 213-220 (2009).
  7. Baker, P. B., et al. Utilizing rabbit immunoglobulin G protein for mark-capture studies on the desert subterranean termite, Heterotermes aureus (Synder). Insect. Soc. 57 (2), 147-155 (2010).
  8. Hagler, J. R., Mueller, S., Teuber, L. R., Machtley, S. A., Van Deynze, A. Foraging range of honey bees, Apis mellifera, in alfalfa seed production fields. J. Insect Sci. 11 (1), 1-12 (2011).
  9. Hagler, J. R., Cohen, A. C., Bradley-Dunlop, D., Enriquez, F. J. A new approach to mark insects for feeding and dispersal studies. Environ. Entomol. 21 (1), 20-25 (1992).
  10. Hagler, J. R. Field retention of a novel mark-release-recapture method. Environ. Entomol. 26 (5), 1079-1086 (1997).
  11. Jones, V. P., Hagler, J. R., Brunner, J., Baker, C., Wilburn, T. An inexpensive immunomarking technique for studying movement patterns of naturally occurring insect populations. Environ. Entomol. 35 (4), 827-836 (2006).
  12. Sivakoff, F. S., Rosenheim, J. A., Hagler, J. R. Threshold choice and the analysis of protein marking data in long-distance dispersal studies. Methods Ecol. Evol. 2 (1), 77-85 (2011).
  13. Hagler, J. R., Jackson, C. G. An immunomarking technique for labeling minute parasitoids. Environ. Entomol. 27 (4), 1010-1016 (1998).
  14. Janke, J., et al. Serological marking of Pnigalio agraules (Hymenoptera: Eulophidae) for field dispersal studies. J. Pest Sci. 82 (1), 47-53 (2009).
  15. DeGrandi-Hoffman, G., Hagler, J. R. The flow of incoming nectar through a honey bee (Apis mellifera L.) colony as revealed by a protein marker. Insect. Soc. 47 (4), 302-306 (2000).
  16. Peck, S. L., McQuate, G. T. Ecological aspects of Bactrocera latifrons (Diptera: Tephritidae) on Maui, Hawaii: Movement and host preference. Environ. Entomol. 33 (6), 1722-1731 (2004).
  17. Hagler, J. R., Durand, C. M. A new method for immunologically marking prey and its use in predation studies. Entomophaga. 39 (3), 257-265 (1994).
  18. Hagler, J. R. An immunological approach to quantify consumption of protein-tagged Lygus hesperus by the entire cotton predator assemblage. Biol. Control. 58 (3), 337-345 (2011).
  19. Fournier, V., Hagler, J. R., Daane, K., de Leòn, J., Groves, R. Identifying the predator complex of Homalodisca vitripennis (Hemiptera: Cicadellidae): A comparative study of the efficacy of an ELISA and PCR gut content assay. Oecologia. 157 (4), 629-640 (2008).
  20. Hagler, J. R. Development of an immunological technique for identifying multiple predator--prey interactions in a complex arthropod assemblage. Ann. Appl. Biol. 149 (2), 153-165 (2006).
  21. Mansfield, S., Hagler, J. R., Whitehouse, M. A comparative study of the efficiency of a pest-specific and prey-marking ELISA for detection of predation. Entomol. Exp. Appl. 127 (3), 199-206 (2008).
  22. Buczkowski, G., Wang, C., Bennett, G. Immunomarking reveals food flow and feeding relationships in the eastern subterranean termite, Reticulitermes flavipes (Kollar). Environ. Entomol. 36 (1), 173-182 (2007).
  23. Lundgren, J. G., Saska, P., Honĕk, A. Molecular approach to describing a seed-based food web: The post-dispersal granivore community of an invasive plant. Ecol. Evol. 3 (6), 1642-1652 (2013).
  24. Kelly, J. L., Hagler, J. R., Kaplan, I. Semiochemical lures reduce emigration and enhance pest control services in open-field augmentation. Biol. Control. 71, 70-77 (2014).
  25. Zilnik, G., Hagler, J. R. An immunological approach to distinguish arthropod viviphagy from necrophagy. BioControl. 58 (6), 807-814 (2013).
  26. Irvin, N. A., Hagler, J. R., Hoddle, M. S. Laboratory investigation of triple marking the parasitoid, Gonatocerus ashmeadi (Hymenoptera: Mymaridae) with a fluorescent dye and two animal proteins. Entomol. Exp. App. 143 (1), 1-12 (2011).
  27. Hagler, J. R., Mueller, S., Teuber, L. R., Van Deynze, A., Martin, J. A method for distinctly marking honey bees, Apis mellifera, originating from multiple apiary locations. J. Insect Sci. 11 (143), 1-14 (2011).
  28. Peck, G. W., Ferguson, H. J., Jones, V. P., O'Neal, S. D., Walsh, D. B. Use of a highly sensitive immunomarking system to characterize face fly (Diptera: Muscidae) dispersal from cow pats. Environ. Entomol. 43 (1), 116-122 (2014).
  29. Boina, D. R., Meyer, W. L., Onagbola, E. O., Stelinski, L. L. Quantifying dispersal of Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) by immunomarking and potential impact of unmanaged groves on commercial citrus management. Environ. Entomol. 38 (4), 1250-1258 (2009).
  30. Lewis-Rosenblum, H., Tawari, X. M. S., Stelinski, L. L. Seasonal movement patterns and long-range dispersal of Asian citrus phyllid in Florida citrus. J. Econ. Entomol. 108 (1), 3-10 (2015).
  31. Krugner, R., Hagler, J. R., Groves, R. L., Sisterson, M. S., Morse, J. G., Johnson, M. W. Plant water stress effects on the net dispersal rate of the insect vector, Homalodisca vitripennis (Germar) (Hemiptera: Cicadellidae), and movement of its egg parasitoid, Gonatocerus ashmeadi Girault (Hymenoptera: Mymaridae). Environ. Entomol. 41 (6), 1279-1289 (2012).
  32. Klick, J., et al. Distribution and activity of Drosophila suzukii in cultivated raspberry and surrounding vegetation. Entomol. Exp. App. , (2015).
  33. Basoalto, K., Miranda, M., Knight, A. L., Fuentes-Contreras, E. Landscape analysis of adult codling moth (Lepidoptera: Tortricidae) distribution and dispersal within typical agroecosystems dominated by apple production in Central Chile. Environ. Entomol. 39 (5), 1399-1408 (2010).
  34. Horton, D. R., Jones, V. P., Unruh, T. R. Use of a new immunomarking method to assess movement by generalist predators between a cover crop and tree canopy in a pear orchard. Amer. Entomol. 55 (1), 49-56 (2009).
  35. Swezey, S. L., Nieto, D. J., Pickett, C. H., Hagler, J. R., Bryer, J. A., Machtley, S. A. Spatial density and movement of the Lygus spp. parasitoid Peristenus relictus (Hymenoptera: Braconidae) in organic strawberries with alfalfa trap crops. Environ. Entomol. 43 (2), 363-369 (2014).
  36. Sivakoff, F. S., Rosenheim, J. A., Hagler, J. R. Relative dispersal ability of a key agricultural pest and its predators in an annual agroecosystem. Biol. Control. 63 (3), 296-303 (2012).
  37. Slosky, L. M., Hoffmann, E. J., Hagler, J. R. A comparative study of the retention and lethality of the first and second generation arthropod protein markers. Entomol. Exp. App. 144 (2), 165-171 (2012).
  38. Hagler, J. R., Machtley, S. A., Blackmer, F. A potential contamination error associated with insect protein mark-capture data. Entomol. Exp. App. 154 (1), 28-34 (2015).
  39. Hagler, J. R., Jones, V. P. A protein-based approach to mark arthropods for mark-capture type research. Entomol. Exp. App. 135 (2), 177-192 (2010).
  40. Hagler, J. R., Naranjo, S. E., Machtley, S. A., Blackmer, F. Development of a standardized protein immunomarking protocol for insect mark-capture dispersal research. J. Appl. Entomol. 138 (10), 772-782 (2014).
  41. Hagler, J. R. Variation in the efficacy of several predator gut content immunoassays. Biol. Control. 12 (1), 25-32 (1998).
  42. Clark, M. F., Adams, A. N. Characteristics of microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses. J. Gen. Virol. 34 (3), 475-483 (1977).
  43. Crowther, J. R. The ELISA guidebook. , Humana Press. Totowa, NJ. (2001).
  44. Stimmann, M. W. Marking insects with rubidium: Imported cabbageworm marked in the field. Environ. Entomol. 3 (2), 327-328 (1974).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Маркировка белковрасселение насекомыхдетекция методом ИФАвнутренняя меткавнешняя меткаIgY куриного яйцаяичный белоксэндвич-ИФАнепрямой ИФАмедицинский небулайзер
Администрирование и обнаружения меток белка на членистоногих для разгона исследований
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.