होश में कृन्तकों में गुर्दे समारोह के Transcutaneous आकलन

Introduction

Glomerular निस्पंदन दर (जीएफआर) सबसे अच्छा पैरामीटर समग्र गुर्दे समारोह का आकलन करने के लिए है। जीएफआर निर्धारित करने के लिए सोने के मानक ऐसे inulin ^{1 के} रूप ^में exogenous गुर्दे मार्कर, के मूत्र या प्लाज्मा निकासी पर निर्भर करता है। हालांकि, इन प्रक्रियाओं के समय लेने वाली और जटिल है, इसके विश्लेषण के लिए धारावाहिक रक्त और / या मूत्र के नमूने और पीछे प्रयोगशाला assays के संग्रह की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, इन तरीकों को आक्रामक और जानवरों के लिए तनावपूर्ण रहे हैं, समय और आवृत्ति जिसमें माप दोहराया जा सकता है की संख्या सीमित है। वैकल्पिक तरीकों की एक संख्या में शास्त्रीय प्रक्रियाओं जीएफआर निर्धारित करने के लिए सरल करने के लिए विकसित किया गया है, लेकिन वे अभी भी मूत्र और प्लाज्मा नमूना ^2-4 पर भरोसा करते हैं और / या गहरी संज्ञाहरण ^5,6, जो गुर्दे hemodynamics और समारोह ⁷ को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है की आवश्यकता होती ^{है, 8।} ऐसे क्रिएटिनिन के रूप में चयापचय के अंत उत्पादों, भी व्यापक रूप से गुर्दे समारोह का अनुमान किया जाता है। हालांकि, यह है कि accur में जाना जाता हैइन अंतर्जात मार्कर की acy इष्टतम नहीं है और, इसके अलावा, उनमें विश्लेषण करने के लिए, मूत्र या रक्त नमूने भी अपरिहार्य है।

यहाँ हम होश में पशुओं में गुर्दे समारोह का आकलन करने के लिए एक ट्रांसक्यूटेनस कार्यप्रणाली का वर्णन है। इस विधि को सरल और पारंपरिक तरीकों के साथ-साथ ही कम से कम चीरे से भी तेज है। इस तकनीक, एक छोटी ऑप्टिकल डिवाइस और exogenous गुर्दे मार्कर fluorescein आइसोथियोसाइनेट (FITC) -sinistrin का उपयोग कर के साथ, यह प्लाज्मा या मूत्र के नमूने लिए और मादक द्रव्यों के प्रशासन के लिए शल्य कैथीटेराइजेशन के बिना एक आवश्यकता के बिना लगभग वास्तविक समय में गुर्दे समारोह का निर्धारण करने के लिए संभव है। इन विशेषताओं के कारण, विधि एक ही पशु में अनुक्रमिक माप प्रदर्शन करने के लिए उपयुक्त है।

FITC-sinistrin एक गुर्दे मार्कर स्वतंत्र रूप से glomerulus द्वारा फ़िल्टर, कोई ट्यूबलर पुनःअवशोषण या स्राव के साथ है। छोटी डिवाइस के ऑप्टिकल भाग दो प्रकाश उत्सर्जक डायोड (एलईडी) है, जो उत्तेजित होते हैंप्रशासित मार्कर और एक photodiode प्रतिदीप्ति त्वचा के माध्यम से उत्सर्जित पता लगाने के लिए। दर्ज आंकड़ों के आंतरिक डिवाइस में एकीकृत स्मृति में जमा हो जाती है और वे FITC-sinistrin उन्मूलन कैनेटीक्स की अवस्था उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। पावर एक छोटे रिचार्जेबल लिथियम बैटरी द्वारा आपूर्ति की है। डिवाइस और अपनी व्यक्तिगत घटकों के बारे में अधिक विस्तृत जानकारी के लिए Schreiber एट अल। ⁹ को देखें। उपकरण आसानी से एक दो तरफा चिपकने वाला ऑप्टिकल घटकों के लिए एक पारदर्शी खिड़की ले जाने पैच का उपयोग पशु शरीर पर मुहिम शुरू की है। परिणाम आसानी से उपलब्ध होने के बाद रिकॉर्डिंग की अवधि खत्म हो गया है कर रहे हैं।

विधि और यहाँ प्रदान प्रोटोकॉल के साथ, हम एक आशाजनक तकनीक है जो वर्तमान सोने के मानक जीएफआर निर्धारित करने के लिए, अनुसंधान में बल्कि नैदानिक ​​क्षेत्र में न केवल जगह ले सकता है परिचय।

Protocol

आवश्यक प्रयोगों प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए राष्ट्रीय नियमों के अनुसार प्रदर्शन किया गया और स्थानीय नैतिक विज्ञान समिति (Regierungspräsidium कार्ल्सृहे) द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. FITC-sinistrin इंजेक्शन समाधान की तैयारी

1. एक शेयर समाधान तैयार करने के लिए शारीरिक खारा में FITC-sinistrin भंग। चूहों में सिफारिश की खुराक, 7.5 मिलीग्राम / 100 ग्राम शरीर के वजन (BW) है, जबकि चूहों में 5 मिलीग्राम / 100 ग्राम BW FITC-sinistrin बेहतर है। चूहों के लिए 15 मिलीग्राम / एमएल FITC-sinistrin शेयर समाधान का एक समाधान तैयार है, जबकि चूहों के लिए 40 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता में तैयार करते हैं।
   नोट: FITC-sinistrin शेयर समाधान अग्रिम में तैयार किया जा सकता है और -20 डिग्री सेल्सियस प्रकाश से सुरक्षित में संग्रहीत।

2. पशु तैयारी

1. किसी भी प्रयोग में अपनी शुरूआत से पहले कम से कम एक सप्ताह के लिए जानवरों acclimate।
2. 5 एल / मिनट हे ₂ पर पशु 5% isoflurane का उपयोग anesthetize
3. पुष्टि करें कि पशु ठीक से अपने श्वास, जो धीमी और गहरा हो जाता देख कर anesthetized है, और एक पैर की अंगुली प्रतिक्रिया की कमी के साथ unresponsiveness की पुष्टि करें।
4. एक बार जानवर सो रहा है, 2 एल / मिनट हे ₂ प्रसव की दर में 2.5% isoflurane संज्ञाहरण को कम करने और BW ले।
5. एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग कर पशु के पीछे की ओर से फर निकालें। एक क्षेत्र ऐसा क्षेत्र है कि दो तरफा चिपकने वाला पैच, जो 3 सेमी x 6 सेमी के आयाम है का कब्जा हो जाएगा की तुलना में थोड़ा बड़ा दाढ़ी।
6. इसके बाद एक छोटी अवधि (2-3 मिनट) के लिए depilation क्रीम लागू शेष फर हटा दें।
7. अच्छी तरह से क्षेत्र धोने तक क्रीम पूरी तरह से हटा दिया गया है, के रूप में क्रीम से ही फ्लोरोसेंट हो सकता है।
   नोट: जानवर की त्वचा scratching के रूप में यह जलन / शोफ का उत्पादन कर सकते से बचें। depilated क्षेत्र त्वचा पर रंजकता से पता चलता है, के लिए एक गैर pigmented मौके जब तक एक बड़ा क्षेत्र दाढ़ीडिवाइस के ऑप्टिकल हिस्सा पाया जाता है। यह अग्रिम में 24 घंटा दाढ़ी बनाने के लिए संज्ञाहरण जोखिम को कम करने के लिए सिफारिश की है।

3. डिवाइस तैयारी

1. ऑप्टिकल डिवाइस दो तरफा चिपकने वाला पैच के एक पक्ष पर गुर्दे समारोह को मापने के लिए, स्थिति पारदर्शी खिड़की (चित्रा 1) सुरक्षात्मक पन्नी के साथ दूसरे तट छोड़ने ऊपर ऑप्टिकल भाग रखें।
   नोट: के रूप में चित्रा 2 में दिखाया गया है जब छोटे कृन्तकों के साथ काम कर रहे हैं, पैच के आकार को कम।
2. के रूप में 3 चित्र में दिखाया बैटरी से मिलान आकार की दो तरफा चिपकने वाला पैच का एक टुकड़ा देते।

4. जानवर पर डिवाइस का निर्धारण

1. पशु शरीर के वजन के आधार पर इंजेक्शन की उचित मात्रा की गणना।
2. isoflurane साथ पशु anesthetize के रूप में पहले वर्गों 2.1-2.3 पर संकेत दिया।
3. ट्यूबलर लोचदार धुंध पट्टी ओ का एक टुकड़ा काटच दो तरफा चिपकने वाला पैच की चौड़ाई से अधिक समय के बारे में 1 सेमी इस्तेमाल किया जाएगा।
4. जानवर और अपनी पीठ पर जगह के सिर पर लोचदार धुंध पट्टी खींचो, मुंडा क्षेत्र का पर्दाफाश किया जा रहा।
   नोट: वैकल्पिक रूप से, केवल चिपकने वाला टेप का उपयोग कर डिवाइस को ठीक है, लेकिन डिवाइस पर अनुचित दबाव के बारे में पता हो।
5. डिवाइस पर इसी बंदरगाह के लिए बैटरी कनेक्टर plugging द्वारा उपकरण के लिए बैटरी से कनेक्ट। उसके बाद पैच का टुकड़ा से सुरक्षात्मक पन्नी को हटाने और डिवाइस (चित्रा -4 ए) की ऊपरी सतह पर बैटरी माउंट। सुनिश्चित करें कि बैटरी ठीक से जाँच कि डिवाइस निमिष शुरू द्वारा खामियों को दूर किया जाता है।
   नोट: चूहों में, बैटरी भी सीधे चिपकने वाला पैच पर, अगले डिवाइस (चित्रा 4 बी) से सम्बद्ध किया जा सकता है।
6. ऑपरेटिंग डिवाइस के साथ पैच से सुरक्षा कवर निकालें और इसे धारण जानवर की पीठ पर मुंडा क्षेत्र पर जगहकिनारों तक इसे सही ढंग से तय हो गई है।
7. ट्यूबलर लोचदार धुंध पट्टी पैच के चिपकने वाली सतह के लिए यह पालन (चित्रा 5) के साथ डिवाइस को कवर किया।
8. ठीक से जानवर के पेट पर ट्यूबलर पट्टी में खिंचाव, यह सुनिश्चित करना है कि अंग स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित कर सकते हैं।
9. एक बेहतर निर्धारण और डिवाइस की सुरक्षा के लिए, डिवाइस के आकार के बाद और बैटरी के तारों को कवर चिपकने वाला टेप की एक पट्टी लागू होते हैं।
10. 1 से 3 मिनट, के लिए पृष्ठभूमि को मापने डिवाइस पर दबाव डालने के बिना

5. FITC-sinistrin प्रशासन और माप प्रक्रिया

1. यदि आवश्यक हो, इंजेक्शन या सभी प्रक्रिया के साथ एक तापमान नियंत्रित हीटिंग थाली से पहले गर्म पानी का उपयोग कर पशु की पूंछ गर्म।
2. FITC-sinistrin शेयर समाधान की उचित मात्रा नस पूंछ के माध्यम से इंजेक्षन। इंजेक्शन की मात्रा पशु BW पर निर्भर करता है और इसलिए प्रत्येक व्यक्ति के विपक्ष के लिए गणना की जानी चाहिएवांछित खुराक और शेयर समाधान की एकाग्रता, धारा 1.1 में ऊपर उल्लिखित idering।
3. सुनिश्चित करें कि सभी FITC-sinistrin समाधान नसों और subcutaneously नहीं किया जाता है।
   नोट: वैकल्पिक रूप से, FITC-sinistrin एक पूर्व प्रत्यारोपित नसों में कैथेटर कृन्तकों में या चूहों में रेट्रो कक्षीय इंजेक्शन के माध्यम से गर्दन के डब में से बाहर निकल गया का उपयोग कर प्रशासित किया जा सकता है।
4. ध्यान से, अपने घर पिंजरे मजबूत आंदोलनों और डिवाइस पर किसी भी दबाव से बचने के लिए पशु वापसी के रूप में यह आंदोलन कलाकृतियों शुरू होगा।
5. एक शांत जगह में घर पिंजरे की जगह से बचने के लिए है कि पशु परेशान है।
6. यदि चूहों और 2 घंटा जब चूहों का उपयोग कर के साथ काम करने में कम से कम 1 घंटे के दौरान माप प्रदर्शन करना। उस अवधि के दौरान, ऑप्टिकल डिवाइस त्वचा के माध्यम से उपाय करेंगे प्रतिदीप्ति FITC-sinistrin द्वारा उत्सर्जित।
   नोट: रिकॉर्डिंग अवधि के दौरान पशु अकेले होस्ट किया जाना चाहिए। इसके अलावा पानी की आपूर्ति, साथ ही फैला हुआइस तरह के तार पलकों के रूप में संरचनाओं, वस्तुओं के साथ प्रभावों के कारण इलेक्ट्रॉनिक डिवाइस और आंदोलन कलाकृतियों के हानिकारक से बचने के लिए हटा दिया जाना चाहिए।

6. डिवाइस हटाने

1. एक बार रिकॉर्डिंग की अवधि खत्म हो गया है, संज्ञाहरण के बिना डिवाइस को हटाने; हालांकि, अगर जरूरत है, पशु संक्षेप में 5% isoflurane के तहत 5 एल / मिनट हे ₂ प्रसव की दर पर 2 मिनट के दौरान anesthetize।
2. ध्यान से, पहला चिपकने वाला टेप पुल बंद, फिर ट्यूबलर पट्टी।
3. धीरे त्वचा से दो तरफा चिपकने वाला पैच अलग और अपनी सामान्य घर पिंजरे में पशु वापसी।

7. डेटा से बाहर पढ़ने के

1. डिवाइस से बैटरी डिस्कनेक्ट और चिपकने वाला पैच को हटा दें।
   नोट: डेटा डिवाइस पर जमा हो जाती है जब तक एक नई माप शुरू होता है। जब एक बैटरी से जुड़ा हुआ है संग्रहीत डेटा नई रिकॉर्डिंग के साथ ओवरराइट कर रहे हैं। इसलिए, से डेटा डाउनलोड करने से पहले बैटरी फिर से कनेक्ट नहीं हैडिवाइस। वहाँ एक 10 सेकंड रियायती अवधि बैटरी की आकस्मिक reconnections के लिए करना है।
2. एक पीसी एक माइक्रो यूएसबी केबल का उपयोग करने के लिए डिवाइस से कनेक्ट करें और प्रदान की सॉफ्टवेयर का उपयोग कर डेटा डाउनलोड करें। आउटपुट फ़ाइल एक .csv फ़ाइल है कि खोला और एक स्प्रेडशीट कार्यक्रम के साथ संशोधित किया जा सकता है।
3. ऑप्टिकल डिवाइस के लिए विशेष सॉफ्टवेयर के साथ डेटा फ़ाइल को खोलने और सॉफ्टवेयर प्रोटोकॉल का उपयोग उन्मूलन कैनेटीक्स की अवस्था उत्पन्न करते हैं।
4. ऑप्टिकल डिवाइस के साथ दिए गए निर्देशों का पालन करके वक्र विश्लेषण। शीघ्र ही, डेटा के मूल्यांकन के लिए, पृष्ठभूमि संकेत से पहले FITC-sinistrin प्रशासन मापा और मार्कर, जो आमतौर पर 15 मिनट के लिए और सांस में इंजेक्शन के बाद 45 मिनट होता है की घातीय उत्सर्जन चरण की शुरुआत का प्रतीक चूहों और चूहों में क्रमशः सेट, ।
   नोट: सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से FITC-sinistrin आधा जीवन (टी _1/2) एक आर ² मूल्य के साथ साथ, एक 1-compar द्वारा निर्धारित प्रदर्शित करेगाtment मॉडल। टी _1/2 एक रूपांतरण कारक ^9,10 का उपयोग करके जीएफआर गणना करने के लिए उपयोग किया जा सकता है।

Representative Results

ट्रांसक्यूटेनस माप की स्थापना बहुत ही सरल और तेज है: डिवाइस दो तरफा चिपकने वाला पैच (चित्रा 1) पर रखा गया है और यदि आवश्यक हो तो (चित्रा 2) आकार में समायोजित किया जाता है, बैटरी तैयार किया जाता है (चित्रा 3) और जुड़े (चित्रा 4)।

गुर्दे समारोह का आकलन करने के लिए इस विधि को पहले से ही प्लाज्मा निकासी ^9,11,12 के परंपरागत दृष्टिकोण के साथ तुलना द्वारा विभिन्न प्रजातियों में मान्य किया गया है। प्रोटोकॉल यहाँ उजागर होने के बाद, Schreiber एट अल। विभिन्न माउस मॉडल में तकनीक की वैधता का प्रदर्शन किया, सभी समूहों के लिए ट्रांसक्यूटेनस माप और प्लाज्मा निकासी के बीच अत्यधिक तुलनीय परिणाम दिखा अध्ययन (तालिका 1) ^9। इस काम में प्राप्त टी _1/2 एक माउस विशिष्ट अर्द्ध अनुभवजन्य रूपांतरण का उपयोग करने के लिए परिवर्तित कर दिया गया जीएफआरकारक है।

गुर्दे समारोह के ट्रांसक्यूटेनस आकलन की निरंतरता भी चूहों के विभिन्न प्रकारों का उपयोग कर साबित कर दिया गया है। एक ही पशु में 3 दिन के भीतर अनुक्रमिक माप 3.0-6.2% ¹³ के प्रसरण के गुणांक से पता चला है। इस अध्ययन में जीएफआर करने के लिए कोई रूपांतरण नहीं थी, लेकिन परिणाम व्यक्त की और टी _1/2 के मामले में सीधे व्याख्या की गई।

लगभग वास्तविक समय में परिणाम है की संभावना इस विधि के महान लाभ में से एक है। रिकॉर्डिंग अवधि के बाद, परिणाम के विश्लेषण के लिए तुरंत उपलब्ध हैं और प्रदान की सॉफ्टवेयर FITC-sinistrin के उत्सर्जन की अवस्था तत्क्षण (चित्रा 6) को प्रदर्शित करता है। एक ही सॉफ्टवेयर FITC-sinistrin की टी _1/2 प्राप्त किया जा सकता है, जो सीधे जीएफआर के मामले में परिवर्तित के गुर्दे समारोह का मूल्यांकन करने के पैरामीटर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता भीतर। चित्रा 7 1/2 पदार्थ के कम उत्सर्जन और वक्र परिवर्तन की उपस्थिति के कारण बढ़ जाती है। आमतौर पर, मापा वक्र वापस पृष्ठभूमि स्तर के लिए आते हैं और वक्र के तहत एक बढ़ा क्षेत्र को प्रस्तुत नहीं करता। एक ही पशु में, के बाद चोट के लिए पूर्व से माप अपनी कम उत्सर्जन की वजह से मार्कर के संचय के कारण अधिकतम प्रतिदीप्ति तीव्रता में वृद्धि का अनुभव कर सकते हैं। गुर्दे की विफलता की उपस्थिति में, FITC-sinistrin की transcutaneously मापा वक्र गंभीर रूप से प्रभावित समारोह (चित्रा 7B) के कारण एक स्थिर राज्य दिखा सकते हैं।

विभिन्न स्वास्थ्य की स्थिति के साथ मूषक के कई प्रकारों में छोटी डिवाइस के उपयोग से पता चला है इस तकनीक का उपयुक्त और पर्याप्त संवेदनशील परिवर्तन का पता लगाने के लिए है कि घUE गुर्दे की बीमारी और उम्र बढ़ने के लिए। तालिका 2 इस विधि के साथ डेट करने के लिए अध्ययन किया murine मॉडल की एक सारांश दिखाता है।

चित्रा 1. दो तरफा चिपकने वाला पैच पर डिवाइस की नियुक्ति। डिवाइस पारदर्शी खिड़की में अपनी ऑप्टिकल हिस्सा चिपकने वाला पैच स्थिति पर मुहिम शुरू की है।

चित्रा 2 छोटे आकार के कृन्तकों के लिए चिपकने वाला पैच आदत डाल। छोटे जानवरों में उपयोग के लिए यह पैच के आकार को कम करने के लिए सिफारिश की है। एक: पैच ठीक से कटौती करने के लिए एक गाइड के रूप में डिवाइस का उपयोग करें। बी: एक बार इच्छित आकार प्राप्त किया गया है, इस उपकरण पैच का चिपचिपा सतह पर रखा जा सकता है। पीपट्टे यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 3. बैटरी की तैयारी। डिवाइस के लिए बैटरी देते हैं, दो तरफा चिपकने वाला पैच (ए और बी) का एक छोटा सा टुकड़ा काट और बैटरी (सी) की सतह पर जगह है। एक देखने के लिए यहाँ क्लिक करें यह आंकड़ा का बड़ा संस्करण।

चित्रा 4. माप के दौरान कनेक्शन और प्लेसमेंट बैटरी की। (ए) के लिए कम स्थान के कारण चूहों जैसे छोटे मूषक, में, बैटरी डिवाइस के शीर्ष पर रखा जाना चाहिए। (बी) के बड़े जानवरों में बैटरी गएक डिवाइस के बगल में रखा जा सकता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5. एक चूहे में ट्यूबलर लोचदार धुंध पट्टी की नियुक्ति। ट्यूबलर पट्टी जानवर की सुविधा के लिए अंगों की मुक्त आवाजाही के साथ हस्तक्षेप किए बिना दो तरफा चिपकने वाला पैच कवर किया जाना चाहिए। का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें यह आंकड़ा।

चित्रा 6 FITC-sinistrin की एक उन्मूलन की अवस्था के प्रतिनिधि छवि। संकेत FITC-sinistrin द्वारा उत्पन्न transcu का पता चला हैtaneously और डिवाइस की आंतरिक स्मृति में संग्रहीत। दर्ज आंकड़ों एक पीसी पर डाउनलोड कर रहे हैं, सॉफ्टवेयर एक वक्र छवि में प्रस्तुत करने के लिए तुलनीय एक उत्पन्न करता है। जबकि एक्स अक्ष समय [मिनट] में माप की अवधि का प्रतिनिधित्व करता है शाफ़्ट, दर्ज प्रतिदीप्ति तीव्रता [एयू], इंजेक्शन FITC-sinistrin मार्कर द्वारा उत्सर्जित पता चलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 7. बिगड़ा गुर्दे समारोह के साथ पशुओं में FITC-sinistrin की एक उन्मूलन की अवस्था के प्रतिनिधि छवि। (ए) कम गुर्दे समारोह के साथ पशुओं में FITC-sinistrin उन्मूलन की अवस्था आम तौर भीतर आधारभूत तक पहुंचने के लिए वक्र और अक्षमता के तहत एक वृद्धि क्षेत्र से पता चलता है सामान्य माप की अवधि । (बी) गंभीर रूप से प्रभावित पशुओं में transcutaneously मापा वक्र एक स्थिर अवस्था है जो गुर्दे की विफलता को इंगित करता दिखा सकते हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका 1. पारंपरिक प्लाज्मा निकासी के साथ तुलना करके ट्रांसक्यूटेनस माप के मान्यकरण। गुर्दे समारोह के ट्रांसक्यूटेनस माप अलग माउस मॉडल में मान्य किया गया है (स्वस्थ और एकतरफा (UNX) C57BL / 6-129 एसवी चूहों और nephronophthisis के माउस मॉडल (nephrectomized PCY)) प्लाज्मा मंजूरी के साथ तुलना करके। मान ± एसडी साधन हैं। जीएफआर, glomerular निस्पंदन दर ^9।

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तालिका 2 murine मॉडल ट्रांसक्यूटेनस माप का उपयोग कर अध्ययन UNX, एकतरफा nephrectomized। ऐस, एंजियोटेनसिन परिवर्तित एंजाइम; टी ^{gumodwt / गुम्मट,} ट्रांसजेनिक uromodulin पीटा, एसडी, Sprague Dawley चूहे; PKD, पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग।

Discussion

वर्तमान कागज प्रक्रिया एक छोटी डिवाइस और exogenous गुर्दे मार्कर FITC-sinistrin का उपयोग कर होश में कृन्तकों में गुर्दे समारोह का निर्धारण करने का वर्णन है। जैसा कि पहले कहा, इस विधि मूत्र और प्लाज्मा निकासी की पारंपरिक प्रक्रियाओं के साथ तुलना में कई फायदे हैं। उनमें से एक रक्त और मूत्र के नमूने में से स्वतंत्रता जो उपभोज्य, समय के संदर्भ में महान बचत की ओर जाता है और, ज़ाहिर है, पशु तनाव है।

जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है, बहिर्जात गुर्दे मार्कर FITC-sinistrin और त्वचा के माध्यम से इसके उन्मूलन कैनेटीक्स की माप गुर्दे समारोह पर गुर्दे की विकृतियों के प्रभाव ^9,10,14-18 अध्ययन किया जा करने की अनुमति। रक्त प्लाज्मा निकासी या गुर्दे की बीमारी के बायोमार्कर का आकलन करने के लिए आवश्यक नमूने के धारावाहिक संग्रह जानवर के लिए तनावपूर्ण, बोझिल और समय लेने वाली शोधकर्ताओं के लिए कर रहे हैं। इसलिए, एक ही जानवर के भीतर अनुक्रमिक माप लिम किया गया हैजानवरों और methodological कारणों के कल्याण द्वारा ited। भीतर-पशु ट्रांसक्यूटेनस माप ¹³ के reproducibility साबित कर दिया है कि यह रोग प्रगति या उम्र बढ़ने के कारण गुर्दे के कार्य में परिवर्तन का पता लगाने के लिए एक आदर्श तरीका बना देता है। उसी कारण से, यह भी चिकित्सकीय दृष्टिकोण के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए बेहद उपयोगी हो सकता है।

इस तकनीक का एक सफल प्रयोग के लिए दो महत्वपूर्ण कदम मार्कर का सही प्रशासन जानवर पर ऑप्टिकल डिवाइस और का निर्धारण कर रहे हैं। डिवाइस को उचित आंदोलन कलाकृतियों से बचने के लिए तय की जानी चाहिए। उस प्रयोजन के लिए, लगाव और दो तरफा चिपकने वाला पैच की टुकड़ी को रोकने के लिए महत्वपूर्ण के रूप में यह जानवर पर अपने चिपकने वाला गुण की हानि और अंत में एक अनुचित निर्धारण करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। के रूप में चिपकने वाला टेप के साथ इसे कवर द्वारा प्रोटोकॉल, स्थिरीकरण और ऑप्टिकल डिवाइस की सुरक्षा में उल्लेख किया है एक प्रभावी तरीका एक adequat सुनिश्चित करने के लिए हैई निर्धारण। जब FITC-sinistrin सांस में इंजेक्शन प्रदर्शन कर यह नसों और subcutaneously नहीं सभी पदार्थ प्रशासन के लिए महत्वपूर्ण है। चमड़े के नीचे ऊतक में मार्कर की रिहाई के लिए आसानी से एक पीले रंग की अंगूठी पशु FITC-sinistrin के स्वयं के रंग द्वारा उत्पादित की पूंछ चक्कर से पहचाना जा सकता है। एक चमड़े के नीचे इंजेक्शन आम तौर पर एक चापलूसी की अवस्था और लंबे समय तक मार्कर उत्सर्जन समय के रूप में प्रकट होता है। इस विधि के संभावित सीमा प्रौद्योगिकी से प्रति के साथ की तुलना में इस्तेमाल किया मार्कर से संबंधित है। जब एक शोफ एक जानवर की त्वचा में मौजूद है, गुर्दे समारोह के ट्रांसक्यूटेनस मूल्यांकन, अनुशंसित नहीं किया जाएगा के रूप में वहाँ एक अतिरिक्त डिब्बे जो FITC-sinistrin के उत्सर्जन की गतिशीलता को बदल सकता है। इसी तरह, pigmented त्वचा FITC-sinistrin और मेलेनिन की ओवरलैपिंग उत्तेजना और उत्सर्जन स्पेक्ट्रा के कारण तकनीक के उपयोग को सीमित कर सकते हैं। हालांकि, पैच में त्वचा रंजकता के साथ पशुओं में, समस्या ऑप्टिकल रखकर हल हैएक unpigmented क्षेत्र में डिवाइस का हिस्सा है।

यह क्रम में विभिन्न जानवरों की प्रजातियों और / या दृष्टिकोण को अनुकूल करने के लिए प्रक्रिया में गुर्दे समारोह के ट्रांसक्यूटेनस मूल्यांकन के विभिन्न पहलुओं को संशोधित करने के लिए संभव है। उदाहरण के लिए, की सिफारिश की FITC-sinistrin खुराक या माप की लंबाई प्रयोग के रूप में अच्छी तरह के रूप में विभिन्न प्रजातियों या पशु मॉडल के लिए लक्ष्य के आधार पर समायोजित किया जा सकता है। विधि इस अनुकूलन क्षमता पहले से ही मूषक और विभिन्न स्वास्थ्य की स्थिति के साथ उपभेदों के कई प्रकार की विभिन्न प्रजातियों में इसके सफल आवेदन के द्वारा पुष्टि की गई है। इसके अलावा, गुर्दे समारोह के ट्रांसक्यूटेनस मूल्यांकन हाल ही में कुत्तों और बिल्लियों के उत्कृष्ट परिणाम के साथ ¹² में मान्य किया गया है। इन जानवरों और कृन्तकों के बीच स्पष्ट मतभेद के कारण, इस अध्ययन दोनों, कुत्तों और बिल्लियों के लिए FITC-sinistrin की उचित खुराक निर्धारित किया है, और यह एक बहुत लंबे समय तक मापने समय के बजाय 4 घंटे 1 या 2 घंटे का उपयोग किया जाता है,मूषक में घ।

साथ में ले ली, इस तकनीक का उपयोग हमें मदद कर सकते हैं, नेफ्रोलॉजी में और अधिक सटीक अंतर्दृष्टि हासिल करने के लिए गुर्दे की बीमारी बढ़ने का एक बेहतर समझ और उपचार का असर भी शामिल है। गुर्दे समारोह के ट्रांसक्यूटेनस आकलन की विशेषताओं एक उपयुक्त तकनीक भविष्य में मानव और पशु चिकित्सा नैदानिक ​​क्षेत्रों में लागू किया जाना है के रूप में यह देता है, और पारंपरिक तरीकों को बदलने के लिए एक आशाजनक प्रौद्योगिकी के रूप में माना जाना चाहिए।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
NIC-Kidney device	Mannheim Pharma & Diagnostics GmbH		Software, batteries and chargers are provided together with the device/s. Orderings should be done through info@mapdiagnostics.com
FITC-sinistrin	Mannheim Pharma & Diagnostics GmbH		Orderings should be done through info@mapdiagnostics.com
Double-sided adhesive patch	Mannheim Pharma & Diagnostics GmbH		Orderings should be done through info@mapdiagnostics.com
Isis Rodent electric shaver	Braun Aesculap	GT420
Isoflurane	Abbott GmbH	PZN4831850
Leukosilk adhesive tape	BSN medical	102200
Tubular elastic gauze bandage	MaiMed Medical GmbH	73012	There are different sizes available. Size 1 is recommended for mice.
Veet depilation cream	Reckitt Benckiser	PZN7768307	Sensitive skin formulation is recommended as is more gentle with the skin of the animals
Micro USB cable	Samsung	APCBU10BBE
Deltajonin Physiologic solution	AlleMan Pharma GmbH	3366954	Alternatively, it can be used saline or PBS