Abstract
Omgivande jonisering källor för masspektrometri (MS) har varit föremål för stort intresse under det senaste decenniet. Matrix-assisterad laserdesorption elektrosprayjonisering (MALDESI) är ett exempel på sådana metoder, där egenskaperna hos matrisassisterad laserdesorption / jonisering (MALDI) (t.ex. pulsad karaktär desorption) och elektro (ESI) (t.ex. mjuk jonisering ) kombineras. En av de stora fördelarna med MALDESI är dess inneboende flexibilitet. I MALDESI experiment, kan en ultraviolett (UV) eller infraröd (IR) laser användas för att resonans excitera en endogen eller exogen matris. Valet av matrisen är inte analyt beroende och beror enbart på laservåglängden som används för excitering. I IR-MALDESI experiment, är ett tunt skikt av is som avsatts på provytan som en energiabsorberande matris. IR-MALDESI källa geometri har optimerats med hjälp av statistisk utformning av experiment (DOE) för analys av vätskeprover samt Biological vävnadsprover. Dessutom har en robust IR-MALDESI imaging källa utvecklats, där en avstämbar mid-IR-laser är synkroniserad med en datorstyrd XY translationell skede och en hög upplösningsförmåga masspektrometer. En anpassad grafiskt användargränssnitt (GUI) gör att användaren val av repetitionsfrekvensen hos lasern, antalet bilder per voxel, steg storlek av provstadiet, och fördröjningen mellan desorption och skanna händelser för källan. IR-MALDESI har använts i olika applikationer, såsom kriminalteknisk analys av fibrer och färgämnen och MSI av biologiska vävnadssektioner. Fördelningen av olika analyter som sträcker sig från endogena metaboliter exogena xenobiotika inom vävnadssnitt kan mätas och kvantifieras med hjälp av denna teknik. Protokollet presenteras i detta manuskript beskriver viktiga åtgärder som krävs för IR-MALDESI MSI av hela kroppen vävnadssnitt.
Introduction
Masspektrometri imaging (MSI) i mikrosond läge innebär desorption av provet från en yta av en stråle (laser eller joner) vid diskreta platser över ytan av ett prov. Vid varje rasterpunkt är en masspektrum genereras och de förvärvade spektra, tillsammans med den rumsliga plats varifrån de samlades in, kan användas för att samtidigt kartlägga många analyter i provet. Denna etikett fritt sätt för avbildning kopplad till känslighet och specificitet av masspektrometri har hjälpt MSI blivit en av de snabbast utvecklas fält i masspektrometri 1,2.
Matrix-assisterad laserdesorption / jonisering (MALDI) är den vanligaste jonisering metod som används för MSI analyser. Emellertid behovet av en organisk matris och vakuum kraven i MALDI utgöra betydande begränsningar av reproducerbarhet, provkapacitet, och de typer av prov som kan analyseras med användning av metoden. Ett antal atmosfärstryck (AP) iosationen metoder har utvecklats under de senaste åren för att kringgå dessa begränsningar 3. Dessa omgivande jonisering metoder möjliggör analys av biologiska prover i en miljö som är mycket närmare sitt naturliga tillstånd och förenkla provberedningssteg före analys. Matrix-assisterad laserdesorption elektrosprayjonisering (MALDESI) är ett exempel på en sådan jonisering metod 4,5.
I IR-MALDESI experiment, är ett tunt skikt av is som avsatts på vävnadsytan som den energiabsorberande matris. En mid-IR laserpulsen absorberas av isen matris, och underlättar desorption av neutrala material från ytan genom resonans spännande OH stretching sättet vatten. Den desorberade neutrala partition i de laddade droppar av en ortogonal elektro och är efterjoniseras i en ESI-liknande sätt 4-6. Tillsatsen av exogena is matris är att föredra framför att enbart förlita sig på den endogena vattnet i vävnaden, eftersom det hjälper acräknas för variationer i vattenhalten i olika vävnadsavdelningar, och har visat sig förbättra desorption 6 och förbättra ion överflöd av ~ 15-faldigt 7,8 i vävnadsavbildningsexperiment.
I detta arbete använder vi IR-MALDESI MSI att framkalla fördelningen av metaboliter i olika organ i en neonatal mus hela kroppen. En översikt över justerbara parametrar för IR-MALDESI källa anges, och de åtgärder som krävs för framgångsrik avbildning av vävnadssnitt demonstreras.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Obs: Följande protokoll beskriver alla nödvändiga åtgärder för att utföra IR-MALDESI MSI experiment. Djupgående kan hittas information om den optimerade geometrin för IR-MALDESI källa och dess synkronisering med lasern, arrangera, och masspektrometer någon annanstans 5,6. Djur vävnadsprover som används i detta protokoll erhölls enligt Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) och North Carolina State University förordningar.
1. Vävnadsberedning
- Framställa en isopentan / torrisbad genom att placera ~ 200 ml isopentan i en ren bägare inuti en sekundär behållare med torris i ett dragskåp. Använd skyddshandskar och skyddsglasögon vid alla tidpunkter vid hantering av isopentan / torr isbad och vävnaden.
- Avliva två dagar gamla hela neonatal mus pup av Avertin överdos (7,5 mg / g kroppsvikt), och sedan frysa vävnaden i isopentan / torrisbad för att bevara vävnadsstruktur. Använd en pre-rened pincett för att placera och avlägsna mus valp i cryomold från isopentan / torris. Lagra flash-fryst vävnad vid -80 ° C fram till analys.
- Genom att använda skyddshandskar, tillämpa ett lager av optimal skär temperatur (oktober) monteringsmedium till en 40 mm kryostat provskiva. Placera försiktigt fryst hel mus på oktober belagda provhållaren att hålla musen till skivan i önskad riktning för sektionering.
Notera: Oktober används enbart för att fästa vävnaden till preparatskivan för sektionering. Inte helt bädda vävnad i oktober och undvika överdrivna oktober är känd för att ha skadliga effekter på MSI analys. Andra medier, såsom gelatin, kan användas för att kryo-bädda vävnaden innan skivning den 9. - Placera skivan (med oktober och vävnadssnitt) på Peltier provhållaren i kryostat och tryck Peltier strömbrytaren. Vänta 10 min för prov för att komma till termisk jämvikt.
- Placera proverna skivan (med vävnaden monterad påden) innanför skivhållaren, och möta vävnaden ned till önskat plan för analys. Skär vävnaden i sektioner med önskad tjocklek vid -20 ° C med hjälp av roterande mikrotom inrymd inuti kryostaten 10.
Obs! För hela kroppen analyser, skär vävnaden i 25-fim tjocka sektioner för att bibehålla vävnadsintegritet. För mindre regioner (t.ex., lever, hjärna, njure), skär vävnaden i 10-fim tjocka sektioner.- Använda antirullningsglasplatta för att förhindra den skivade vävnaden sektionen från att rulla. Använd kryostat sugslangen och borstar för att avlägsna oönskade vävnadsrester. När vävnaden är sektionerad, använd klingskyddet för att täcka den kraftiga mikrotomen bladet för att undvika personskador.
- Orient mus avsnitt på provet plattan och tina monterad på en i förväg rengjord glas objektglas genom att bilden så nära som möjligt till vävnadssnittet, utan att röra den 10.
Obs: För kvantitativ MSI erfament, vapen sliden med en intern standard med användning av en automatiserad pneumatisk spruta före montering vävnaden, och tina-montera vävnadssektionen på det belagda objektglaset 11. - Avlägsna mikrotomen bladet som används för att snittning i vävnaden med hjälp av blad ejektor, och säkert kassera bladet i det lämpliga "skarpa avfall" behållare.
- Håll glasskiva inuti kryostaten tills steg 3,2 för att bibehålla frysförvaring av vävnaden.
2. IR-MALDESI Förberedelse / Kalibrering
- Slå på mitten av IR-laser och starta laserstyrning programmet på datorn. Välja den önskade våglängden med hjälp av laser styrapplikation som levereras av tillverkaren. IR-MALDESI experiment utförs typiskt vid 2940 nm.
Obs: Nya experiment har undersökt beroendet av mitten-IR laservåglängder och isen matris med noterade skillnader som tycks vara analyt specifik åtta. - Slå på stage controller, starta den anpassade användarstyrprogrammet (RASTIR) och kalibrera scenen position med hem-knappen.
- Förbereda elektrospray lösning. Vanligtvis använder en 50:50 (volym / volym) metanol / vatten med 0,2% myrsyra för elektrospray lösningsmedel i positiv-jon-läge. Välja den elektrospray lösningsmedelskompositionen enligt experimentet. Till exempel, använder 5 mM ammoniumhydroxid som elektromodifierings för bildprogram i negativ-jon-läge.
Obs! Polaritet byta IR-MALDESI MSI använder 1 mM ättiksyra som modifierings. Denna modifierings befanns optimala för erhållande av en stabil och reproducerbar signal i både styrd och negativ-jon lägen 12. - Fyll en 1 ml spruta med elektro lösningsmedel och spola kiseldioxid kapillär med nya lösningsmedel.
- Rikta ESI emitter på axeln med MS inlopp med hjälp av källparametrar såsom ESI plats avstånd, spot-inlopp avstånd, provhöjd, och lösningsmedelsflödeshastighet som har optimerats med hjälp av statistiska DO E för analys av vävnadssnitt 6. Obs: Se figur 1 för en schematisk föreställande dessa parametrar och optimerade värden för MSI av vävnadssnitt.
- Starta elektrospray och utvärdera dess stabilitet (> 10 min) genom att övervaka den totala jonströmmen (TIC), som vid denna punkt, består enbart av omgivande föreningar. Vanligtvis är en TIC variation av <10% under 10-15 minuter en god indikation på stabilitet.
Figur 1. IR-MALDESI schematisk och parametrar. (A) Schematisk bild av IR-MALDESI källa setup (ej i skala) och justerbara parametrar. (B) Optimerade parametervärden för avbildning av vävnadssnitt. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
- Varning: Stäng av elektro innan du placerar provet på scenen.
- Placera tina monterade vävnad på IR-MALDESI provplattan i kameravyn.
- Se till att händerna är fria från ESI emitter och starta om elektro.
- Stäng dörren till IR-MALDESI källa och renings kapsling tillgång med torrt kväve för att förhindra kondensation av vatten på ytan av vävnaden. När den relativa fuktigheten inuti höljet når <3%, slå på DC strömförsörjning (~ 12 V) till Peltier plattan, som kommer att kyla provplattan. Notera: Kylprocessen i Peltier kylda stadiet diskuteras i detalj på annan plats 13.
- Kyla scenen till -9 ° C, och låt den monterade vävnad för att komma till termisk jämvikt (~ 5-10 min).
- Stoppa kväverening och exponera vävnaden till den omgivande relativa fuktigheten genom att öppna käll luckan. Ett tunt skikt av is kommer att avsättas på cold ytan på Peltier scenen och monterade vävnadssnitt på grund avsublimering av vatten från luften.
Obs: Om den relativa fuktigheten i labbet är under 10-15%, placera en bägare med varmt vatten inne i inneslutningen för att underlätta bildandet av isen matrislagret. - Efter att isen matrisskiktet är bildat, stängt åtkomstluckan och starta flödet av torr kvävgas för att reducera den relativa fuktigheten till 10 ± 2%. Justera flödet kväve för att hålla den relativa fuktigheten vid denna nivå, empiriskt befunnits vara balansen för isbildning och sublimering för att upprätthålla ett konstant lager av is under hela experimentet 6.
4. masspektrometri Imaging Data Acquisition
- Använda RASTIR GUI (Figur 2), flytta scenen till analysläge genom att klicka på knappen "laser läge". Används justeringsdiod av lasern för att säkerställa en off-vävnadsområdet kommer att avlägsnas. Avfyra en laserskott i en off-vävnad region för att kalibrera lasern förskjutna med avseende på kameran vy. Klicka på "Laser Test Fire" knappen för att uppdatera laserläget.
- Återgå till "kameraposition" och uppdatera laserläget i RASTIR genom att placera laserinriktnings hårkorset på laserablation plats (Figur 2-1).
- Klicka regionen intresse (ROI) knappen och justera storleken och läget för ROI för vävnadssektionen som analyseras (Figur 2-2). Input lämpliga experimentella parametrar såsom steglängden i X- och Y-led (i mm) (Figur 2-3), och namnge MSI-fil i "Project Name" rutan (Figur 2-4).
- När du ritar ett ROI, innefatta en del av off-vävnad som fungerar som kontroll. Använd denna off-vävnadssnitt för topp plockning (steg 5,4).
Anmärkning: desorption diameter (punktstorleken) hos lasern på vävnad är ungefär 150 pm; emellertid kan högre rumsliga upplösningar erhållas genom using sampling metoden 14,15.
- När du ritar ett ROI, innefatta en del av off-vävnad som fungerar som kontroll. Använd denna off-vävnadssnitt för topp plockning (steg 5,4).
- Välj lämplig laserfrekvensen från listrutan, antal laserpulser per voxel (heltalsvärden), och fördröjningen mellan lasertrigg och masspektrometer signal förvärv (Figur 2-5). Vanligtvis använder två laserpulser per voxel vid 20 Hz till fullständigt desorbera material i en IR-MALDESI MSI experiment med en 10 ms fördröjning för att tillåta joner skapas för att nå mass analysator för mätning 5.
Obs: Välj den högsta repetitionsfrekvens som lasern kan arbeta på. Det har nyligen visat att användning av högre repetitionstakt kommer att förbättra analyt detekterbarhet 16.
Figur 2. Användargränssnitt för IR-MALDESI MSI drift. Skärmdump på RASTIR Scan styrprogrammet presenteras. Stegen för performing en MSI experiment är (1) att placera laserpunkt, (2) att dra en ROI (3) val av scenen stegstorleken (i mm), (4) ger ett namn till filen, (5) att välja rätt nummer pulser per voxel tillsammans med den önskade repetitionsfrekvensen, och (6) kontrollera listan för avbildning och MS installationen. klicka här för att se en större version av denna siffra.
- Välja masspektrometer parametrar såsom jonisering läge, elektrospray spänning, lösningsmedlets flödeshastighet, kapillär temperatur, och insprutningstiden i masspektrometern programvara. Se tabell 1 för ett exempel på de parametrar som används i hela kroppen IR-MALDESI MSI.
OBS: På grund av komplexiteten i biologiska prover och brist på separationsmetoder i MSI analyser, är IR-MALDESI källa kopplad till en hög upplösningsförmåga och hög massa instrument noggrannhet. En förvärvsmetoden kan lastas för analyses såsom parallell reaktion övervakning (PRM) 7 eller polaritet byta MSI 12. - När alla parametrar (laser, arrangera, och masspektrometer) har valts, placera MS i "handskakning" -läge för synkronisering och starta MS förvärvet.
- Använda RASTIR bildhanteringsprogram, kontrollera alla steg i checklistan (Figur 2-6) är genomförda genom att kontrollera lådor och ladda programmet. När programmet har laddats kommer "Run" -knappen vara tillgängliga. Tryck på Kör för att starta MSI signal förvärv.
- Efter avslutad bild experimentet stoppa mass förvärv spektrometer och placera instrumentet i viloläge. Stäng av kväverening till kammaren, stänga strömmen till Peltier plattan och stänga scenen controller och laser.
- Öppna luckan, ta bort elektro emitter spetsen inifrån källinneslutningen, och ta bort den förlängda uppvärmda metall MS inlopp använda skyddshandskar. Varning: Den utvidgade metall MS inlopp kommer att vara mycket varmt.
- Handskar och skyddsglasögon, rengör den utökade metall kapillärinlopp av ultraljudsbad i 15% salpetersyra under 10 minuter, sedan i HPLC-kvalitet vatten under 10 minuter, och slutligen i HPLC-kvalitet metanol under 10 minuter. Torka metall kapillärinlopp under en ström av kväve, och sätt i MS. Obs: Släng lösningsmedel i lämpliga avfallsbehållare efteråt.
| Parameter | Värde |
| jonisering Läge | Positiv |
| elektrospray Spänning | R "style =" width: 216px; "> 3,8-4,2 kV|
| Lösningsflödeshastighet | 2 | j, l / min |
| kapillär Temperatur | 275 ° C |
| Scan Range | m / z 250-1,000 |
| Skanningstyp | Fullständig genomsökning |
| injektion Tid | 110 ms |
| upplösningsförmåga | width: 216px; "> 140.000
Tabell 1. Instrument parametrar som används i hela kroppen IR-MALDESI MSI.
5. Dataanalys
- Konvertera rådata filer som genereras av instrumentet till dataformat som mzXML 17 eller imzML 18 med hjälp av fri programvara som MSConvert 17 och imzML omvandlare 19.
- Starta MSiReader v1.0, en öppen källkod som utvecklats för analys av hög upplösningsförmåga MSI uppgifter 20, på en särskild behandling dator. Ladda bildfilen på MSiReader. För användargränssnitt MSiReader och några av dess inbyggda funktioner, se figur 3.
- Generera jon kartor av analyter av intresse genom att mata in sitt m / z och välja en lämplig m / z fönster i delar per miljon (ppm) eller Thomson (Th) (Figur 3-1). För höga upplösningsförmåga (RP) instrumentVälj ett fönster i låga ppm-området.
Obs: Den lämpliga m / z fönster beror på RP och noggrannhet massmätning (MMA) hos det instrument som IR-MALDESI källa är kopplad till. - Ytterligare tolka data med hjälp av inbyggda funktioner såsom interpolation (Figur 3-2), normalisering (Figur 3-3), optisk bildlagring (Figur 3-4), och topp plocka (Figur 3-5) 20.
Figur 3. Användargränssnitt av MSiReader; v1.0 20. När en fil laddas i mjukvaran, är jon kartor över analyter av intresse som visas av (1) inmatning av m / z och tolerans i ppm eller Th. Vidare analys, såsom (2) interpolation eller (3) normalisering kan också utföras. En optisk bild av vävnaden kan också importeras och överlagras medjon kartor (4) för bättre visualisering. För oriktade analyserar topp plocka funktionen (5) kan användas för att extrahera vävnadsspecifika toppar genom att välja området av vävnad (magentafärgad linje) och ett referensområde utanför vävnad (green box). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
- Använd toppen plocka funktion för att generera en lista med vävnadsspecifika m / z-värden med hjälp av användardefinierade kriterier. Obs: PeakFinder algoritmen använder skillnader i genomsnittlig masspektrum av två regioner. Dessa m / z-värden kan sedan sökas mot metabolit databaser som METLIN 21 eller LIPID MAPS. 22
- Se Figur 3 för ett exempel på att välja en Interrogated vävnadsområde (magenta polygon ROI) och off-vävnadsreferensområdet (grön polygon ROI).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bilderna presenteras i Figur 4 visar den geografiska fördelningen av metaboliter i olika organ i avsnittet hela kroppen vävnad. Unik m / z-värden till specifika områden av kroppen hittades med hjälp av MSiReader PeakFinder, följt av satsvis behandling för bildgenerering. Bildlagring verktyg (Figur 3-4) användes för att justera den optiska bilden tas före is matrisbeläggning de resulterande jon kartor. Kolesterol observeras i alla vävnadstyper som väntas från strukturell roll i djurcellmembran (Figur 4A), medan andra metaboliter uppvisar tydliga fördel inom specifika organ eller vävnad fack (Figur 4B-D).
Figur 4. Representant IR-MALDESI MSI bilder; AD. Fyra Metabolite jon kartor som visar lokalisering av föreningar inom en hel mus sektion. Lipid klass kommenterad i det nedre högra hörnet av varje bild. Den optiska bilden av vävnadssnittet har runnit inom jon kartor för att underlätta med visualisering av organ. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protokollet ovan beskriver de viktigaste stegen för att utföra en IR-MALDESI MSI experiment. Matrisen ansökningsprocessen (avsnitt 3) tar ungefär 20 minuter, som liknar en typisk matris ansökningsprocessen för MALDI MSI experiment genom sublimering eller spraybeläggning med hjälp av en robot spruta. Vidare IR-MALDESI inte förlitar sig på uppdelning av analyter i matriskristaller 6, och isen matrisen kan allmänt användas för alla analyter oberoende av deras vikt, storlek, eller kemiska egenskaper. Dessutom användning av is eliminerar de matrisrelaterade joner i lägre m / z intervall som observerats i typiska MALDI-experiment 23.
Även om alla steg inom experimentet behövs för att generera kvalitets MSI data är väsentliga för reproducerbar IR-MALDESI ion generation elektrospray stabilitet under loppet av experimentet. Den relativa luftfuktigheten måste övervakas under loppet av en avbildande experiment för attupprätthålla en konstant is matrisskikt. IR-MALDESI desorption är relativt ogenomträngligt för tjockleken av is 6; Dock kan vissa avbildningsexperiment ta flera timmar där ett isskikt kan bli besvärande om inte övervakas. För detta ändamål har en proportionell-integral-derivat (PID) regulator nyligen integrerats i källan för att övervaka temperaturen och relativa fuktigheten i höljet, och justera dem efter behov.
Eftersom MSI innebär direkt provtagning av analyter från ytor, kan kromatografiska separationer inte användas för att minska komplexiteten i spektra. Dessutom kan omgivande joner närvarande i laboratoriemiljön stör signalen från analyt (er) av intresse. Den spektrala komplexiteten från omgivande joner i kombination med varierat utbud av föreningar inom biologiska prover kräver koppling av IR-MALDESI (och andra omgivnings MSI källor) till hög massa noggrannhet och hög upplösningsförmåga masspektrometrar, ärUCH som den som används i detta experiment, för att underlätta generering av noggranna och detaljerade jon kartor.
I detta arbete, var IR-MALDESI användes för att avslöja den rumsliga fördelningen av en mångfald av endogena metaboliter i olika organ i en hel mus. Toppen plockar algoritmen i MSiReader kunde identifiera mer än 500 vävnadsspecifika joner, av vilka många var lipider från olika klasser. Detta protokoll kan också användas för att samtidigt övervaka fördelningen av exogena föreningar, såsom läkemedel och läkemedelsmetaboliter, i olika organ 24,25. Den gyllene standarden för hela kroppen distributionsstudier läkemedel är hela kroppen autoradiografi 24. Emellertid är detta förfarande tidskrävande, kräver radiomärkta föreningar, och kan inte skilja mellan moderläkemedlet och dess metaboliter, eftersom det inte ger information om den molekylära strukturen av analyter. Hela kroppen MSI med IR-MALDESI kringgår dessa frågor, samtidigt som möjliggöranalysen som skall utföras i omgivande miljö, utan tillsats av organiska matriser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IR-MALDESI Source | Custom-made | N/A | Please refer to references 4 and 12 for an in-depth discussion of IR-MALDESI source development. |
| Q Exactive Plus | Thermo Scientific | Q Exactive Plus Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer | |
| Water, HPLC Grade | Burdick & Jackson | AH365-4 | |
| Methanol, HPLC Grade | Burdick & Jackson | AH230-4 | |
| Formic Acid | Sigma Aldrich | 56302 | |
| Tunable mid-IR Laser | Opotek Inc. | IR Opolette | Tunable 2,700-3,100 nm IR OPO laser |
| Nitrogen Gas | Arc3 Gases | AG S-NI300-5.0 | Grade 5.0 high purity nitrogen gas cylinder (300) |
| Cryostat | Leica Biosystems | CM 1950 | Cryomicrotome |
| High Profile Microtome Blades | Leica Biosystems | 3802123 | Leica DB80HS |
| Mounting Medium (OCT) | Leica Biosystems | 3801480 | Surgipath FSC 22 mounting medium |
| Cryostat Specimen Disc | Leica Biosystems | 14047740045 | 40 mm diameter |
| Glass Microscope Slides | VWR | 48312-003 | Frosted, selected, pre-cleaned |
References
- Mcdonnell, L. A., Heeren, R. M. A.
- Chughtai, K., Heeren, R. M. A. Mass spectrometric imaging for biomedical tissue analysis. Chem. Rev. 110 (5), 3237-3277 (2010).
- Robichaud, G., Barry, J. A., Muddiman, D. C. Atmospheric Pressure Mass Spectrometry Imaging. Encycl. Anal. Chem. , (2014).
- Sampson, J. S., Hawkridge, A. M., Muddiman, D. C. Generation and detection of multiply-charged peptides and proteins by matrix-assisted laser desorption electrospray ionization (MALDESI) Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 17 (12), 1712-1716 (2006).
- Robichaud, G., Barry, J. A., Garrard, K. P., Muddiman, D. C. Infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization (IR-MALDESI) imaging source coupled to a FT-ICR mass spectrometer. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24 (1), 92-100 (2013).
- Robichaud, G., Barry, J. A., Muddiman, D. C. IR-MALDESI Mass Spectrometry Imaging of Biological Tissue Sections Using Ice as a Matrix. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25 (3), 319-328 (2014).
- Barry, J. A., et al. Mapping Antiretroviral Drugs in Tissue by IR-MALDESI MSI Coupled to the Q Exactive and Comparison with LC-MS/MS SRM Assay. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25 (12), 2038-2047 (2014).
- Rosen, E. P., Bokhart, M. T., Ghashghaei, H. T., Muddiman, D. C. Influence of Desorption Conditions on Analyte Sensitivity and Internal Energy in Discrete Tissue or Whole Body Imaging by IR-MALDESI. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 26, 899-910 (2015).
- Nelson, K. A., Daniels, G. J., Fournie, J. W., Hemmer, M. J. Optimization of whole-body zebrafish sectioning methods for mass spectrometry imaging. J. Biomol. Tech. 24 (3), 119-127 (2013).
- Park, J. J., Cunningham, M. G. Thin sectioning of slice preparations for immunohistochemistry. J. Vis. Exp. (3), e194 (2007).
- Bokhart, M. T., Rosen, E., Thompson, C., Sykes, C., Kashuba, A. D. M., Muddiman, D. C. Quantitative mass spectrometry imaging of emtricitabine in cervical tissue model using infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization. Anal. Bioanal. Chem. 407 (8), 2073-2084 (2015).
- Nazari, M., Muddiman, D. C. Polarity Switching Mass Spectrometry Imaging of Healthy and Cancerous Hen Ovarian Tissue Sections by Infrared Matrix-Assisted Laser Desorption Electrospray Ionization (IR-MALDESI). Analyst. 141, 595-605 (2016).
- Hsu, C. C., et al. Design and Application of a Low-Temperature Peltier-Cooling Microscope. J. Pharm. Sci. 85 (1), 70-74 (1996).
- Jurchen, J. C., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. MALDI-MS imaging of features smaller than the size of the laser beam. J. Am. Soc.Mass Spectrom. 16 (10), 1654-1659 (2005).
- Nazari, M., Muddiman, D. C. Cellular-level mass spectrometry imaging using infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization (IR-MALDESI) by oversampling. Anal. Bioanal. Chem. 407 (8), 2265-2271 (2015).
- Rosen, E. P., Bokhart, M. T., Nazari, M., Muddiman, D. C. Influence of C-Trap Ion Accumulation Time on the Detectability of Analytes in IR-MALDESI MSI. Anal. Chem. 87, 10483-10490 (2015).
- Kessner, D., Chambers, M., Burke, R., Agus, D., Mallick, P. ProteoWizard: open source software for rapid proteomics tools development. Bioinformatics. 24 (21), 2534-2536 (2008).
- Schramm, T., et al. ImzML - A common data format for the flexible exchange and processing of mass spectrometry imaging data. J. Proteomics. 75 (16), 5106-5110 (2012).
- Race, A. M., Styles, I. B., Bunch, J. Inclusive sharing of mass spectrometry imaging data requires a converter for all. J. Proteomics. 75 (16), 5111-5112 (2012).
- Robichaud, G., Garrard, K. P., Barry, J. A., Muddiman, D. C. MSiReader: an open-source interface to view and analyze high resolving power MS imaging files on Matlab platform. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24 (5), 718-721 (2013).
- Smith, C. A., O'Maille, G., et al. METLIN: a metabolite mass spectral database. Ther. Drug. Monit. 27 (6), 747-751 (2005).
- Sud, M., et al. LMSD: LIPID MAPS structure database. Nucleic Acids Res. 35, D527-D532 (2007).
- Schwartz, S. A., Reyzer, M. L., Caprioli, R. M. Direct tissue analysis using matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry: practical aspects of sample preparation. J. Mass Spectrom. 38 (7), 699-708 (2003).
- Takai, N., Tanaka, Y., Inazawa, K., Saji, H. Quantitative analysis of pharmaceutical drug distribution in multiple organs by imaging mass spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 26 (13), 1549-1556 (2012).
- Liu, J., Gingras, J., Ganley, K. P., Vismeh, R., Teffera, Y., Zhao, Z. Whole-body tissue distribution study of drugs in neonate mice using desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging. Rapid Commun. Mass Spectrom. 28 (2), 185-190 (2014).
