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Medicine

मल्टी fluorinated पित्त अम्ल और उपयोग करना Published: November 27, 2016 doi: 10.3791/54597
Automatic Translation
1, 2, 2, 2, 3, 4, 5, 5, 2,6
1Department of Surgery, University of Maryland School of Medicine, 2Department of Medicine, University of Maryland School of Medicine, 3Department of Radiology, University of Maryland School of Medicine, 4Food and Drug Administration, 5Department of Pharmaceutical Sciences, University of Maryland School of Pharmacy, 6VA Maryland Health Care System

Summary

उपकरण पित्त अम्ल malabsorption का निदान करने और सीमित कर रहे हैं विवो में पित्त अम्ल परिवहन को मापने के लिए। जीवित पशुओं में एक नवीन दृष्टिकोण वर्णित है कि संयुक्त प्रोटॉन (1 एच) प्लस फ्लोरीन (19 एफ) चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग का इस्तेमाल करता है; इस उपन्यास पद्धति नैदानिक ​​व्यवहार में पित्त अम्ल malabsorption के लिए स्क्रीन translational क्षमता है।

Abstract

डिटर्जेंट कि वसा अवशोषण की सुविधा के रूप में अपने पारंपरिक भूमिका के साथ-साथ, उभरते साहित्य इंगित करता है कि पित्त अम्ल शक्तिशाली संकेतन अणुओं है कि कई अंगों को प्रभावित कर रहे हैं; वे पेट गतिशीलता और हार्मोन का उत्पादन मिलाना, और नाड़ी स्वर, ग्लूकोज चयापचय, लिपिड चयापचय, और ऊर्जा के उपयोग में परिवर्तन। मल पित्त अम्ल में परिवर्तन पेट Microbiome में परिवर्तन और cholerrheic दस्त और पेट के कैंसर सहित पेट के विकृति को बढ़ावा देने सकता है। मल पित्त अम्ल रचना की प्रमुख नियामकों छोटी आंतों शिखर सोडियम निर्भर पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टर (ASBT) और fibroblast वृद्धि कारक -19 (FGF19) कर रहे हैं। कम अभिव्यक्ति और ASBT के समारोह में कम हो जाती है आंतों पित्त अम्ल ऊपर ले। इसके अलावा, इन विट्रो आंकड़े बताते हैं कि कुछ एफडीए को मंजूरी दी दवाओं को बाधित ASBT समारोह। कमी FGF19 रिहाई यकृत पित्त अम्ल संश्लेषण को बढ़ाता है और स्तर है कि ASBT डूब आंतों में जारी। या तो ASBT शिथिलता या FGF19 कमी बढ़ जाती है चECAL पित्त अम्ल और क्रोनिक दस्त का कारण और पेट के रसौली को बढ़ावा देने सकता है। अफसोस, उपकरण पित्त अम्ल malabsorption और vivo में पित्त अम्ल परिवहन पर दवाओं की कार्रवाई को मापने के लिए सीमित कर रहे हैं। पित्त अम्ल के जटिल कार्यों को समझने के लिए तकनीक की आवश्यकता होती है पेट और चयापचय के ऊतकों में पित्त अम्ल के एक साथ निगरानी की अनुमति है। इस प्रोटॉन (1 एच) और फ्लोरीन (19 एफ) चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) के संयोजन का उपयोग जीवित पशुओं में पित्त अम्ल परिवहन को मापने के लिए एक अभिनव पद्धति गर्भ धारण करने के लिए हमें का नेतृत्व किया। फ्लोरीन (19 एफ) के लिए उपन्यास ट्रेसर, दोनों आधारित इन विट्रो और इन विवो में रहते हैं जानवर एमआरआई बनाया है और परीक्षण किया गया। इस दृष्टिकोण की ताकत नैदानिक ​​अनुसंधान और अभ्यास के लिए विकिरण और translational क्षमता ionizing के लिए जोखिम की कमी शामिल है।

Introduction

डिटर्जेंट कि पेट से वसा अवशोषण की सुविधा के रूप में उनकी भूमिका के साथ-साथ शास्त्रीय, पित्त अम्ल प्रबल संकेत उनकी enterohepatic परिसंचरण 1,2 से जुड़े लोगों के अलावा कई अंगों को प्रभावित अणुओं के रूप में उभरा है। अपने स्वयं के चयापचय को नियंत्रित करने के अलावा, पित्त अम्ल जठरांत्र शरीर विज्ञान (जैसे, पेट गतिशीलता और incretin हार्मोन का उत्पादन, पेट के शरीर क्रिया विज्ञान, और कैंसर का खतरा) के कई पहलुओं को मिलाना और नाड़ी स्वर, ग्लूकोज और लिपिड चयापचय, और ऊर्जा के उपयोग पर प्रणालीगत प्रभाव है। इन प्रभावों में से कुछ के पेट में मध्यस्थता कर रहे हैं, वहीं दूसरों के रूप में मोटापे से ग्रस्त रोगियों में या गैस्ट्रिक बाईपास सर्जरी के बाद का उल्लेख किया, प्रणालीगत पित्त अम्ल के स्तर में भोजन के बाद परिवर्तन की वजह से कर रहे हैं। जटिल चयापचय जठरांत्र संबंधी मार्ग और मेटा में है कि विभिन्न संरचनात्मक डिब्बों में पित्त अम्ल का स्तर की एक साथ निगरानी परमिट पित्त अम्ल नई तकनीक की आवश्यकता है की कार्रवाई, स्पष्ट करने के लिएलाता ऊतकों (यकृत, अग्न्याशय, कंकाल मांसपेशियों और वसा)। उपन्यास पित्त अम्ल ट्रेसर के रूप में यहाँ वर्णित इस तरह के एक उपन्यास दृष्टिकोण है का उपयोग vivo इमेजिंग में - इस तरह के अस्थायी और स्थानिक जानकारी प्राप्त करने के लिए नवीन प्रौद्योगिकी की आवश्यकता है।

पित्त अम्ल की संरचना और संरचनात्मक डिब्बों में वितरण कारक है कि उनके यकृत संश्लेषण और ileal तेज, आहार, शल्य चिकित्सा, एंटीबायोटिक का उपयोग और आंत वनस्पति में परिवर्तन सहित मिलाना द्वारा विनियमित रहे हैं। उनकी enterohepatic परिसंचरण 3 (चित्रा 1) के लिए आंतों पित्त अम्ल तेज की एक प्रमुख नियामक ileal शिखर सोडियम निर्भर पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टर (; SLC10A2 ASBT) है। हालांकि निष्क्रिय अवशोषण आंतों भर में होता है, ASBT आंतों पित्त अम्ल का 95% की तेज तो यह है कि सामान्य रूप से वहाँ मल में पित्त अम्ल की सीमित spillage है मध्यस्थता करता है। Asbt की कमी (Slc10a2 - / -) चूहों मल पित्त अम्ल और एक कम पित्त एसीआई में वृद्धि हुई हैडी पूल 4।

आकृति 1
चित्रा 1: पित्त अम्ल की enterohepatic परिसंचरण।
Enterohepatic सर्कुलेशन जिससे पित्त अम्ल जिगर में संश्लेषित कर रहे हैं, पित्त ट्री, पित्ताशय की थैली में संग्रहित में उत्सर्जित का चित्रण, भोजन के साथ समीपस्थ छोटी आंत में जारी है, और सक्रिय रूप से बाहर का Ileum में ASBT के माध्यम से ऊपर ले लिया। जबकि पित्त अम्ल की छोटी मात्रा में पेट भर निष्क्रिय अवशोषित कर रहे हैं, आंतों पित्त अम्ल का लगभग 95% ASBT मल जिसमें नए पित्त अम्ल संश्लेषण के एक समान राशि से मुआवजा दिया जाता है में कम से कम (लगभग 5%) नुकसान में जिसके परिणामस्वरूप से सक्रिय रूप से ले जाया जाता है जिगर, जिससे एक स्थिर राज्य पित्त अम्ल पूल बनाए रखने। सही पर तीर कारक है कि देशी और फ्लोरीन लेबल पित्त अम्ल स्थिरता को प्रभावित कर सकता है, गैस्ट्रिक एसिड, अग्नाशय और आंतों श्लैष्मिक एंजाइमों, और सबसे importantl सहित पहचानवाई, hydrolytic Clostridial प्रजाति है कि बाहर का छोटी आंत और पेट के उपनिवेश द्वारा जारी एंजाइमों। (अनुमति 16 के साथ संशोधित) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पित्त अम्ल कुअवशोषण तीन प्रकार, जिनमें से प्रत्येक मल dihydroxy पित्त अम्ल बढ़ जाती है, जिससे रुक-रुक कर या पुरानी दस्त के कारण में वर्गीकृत किया जा सकता है। टाइप सकल ileal विकृति (जैसे, लकीर, क्रोहन रोग) 5 से 1 का परिणाम है। टाइप cholecystectomy, vagotomy, सीलिएक रोग, जीवाणु ऊंचा हो जाना, और अग्नाशय कमी से 3 का परिणाम है। इसके विपरीत, 'प्राथमिक' (टाइप 2) पित्त अम्ल malabsorption के साथ लोगों को एक दुर्जेय नैदानिक ​​चुनौती है क्योंकि वे इस तरह की स्थिति पूर्ववर्ती की कमी है और लघ्वान्त्र में विकृति का सबूत नहीं है। इसलिए, प्राथमिक पित्त अम्ल कुअवशोषण सामान्यतः दस्त-पी के रूप में misdiagnosed हैredominant चिड़चिड़ा आंत्र सिंड्रोम (IBS-डी), गैस्ट्रोएंटरोलॉजी संबंधी बाहर मरीज के दर्शक के लिए शायद सबसे आम कारण है। यह अनुमान लगाया गया है कि IBS-डी के साथ रोगियों में से एक-तिहाई प्राथमिक पित्त अम्ल malabsorption है; अमेरिका में, यह कई लाख व्यक्तियों 5 प्रतिनिधित्व कर सकते हैं। हाल ही में अंतर्दृष्टि से संकेत मिलता है कि प्राथमिक बेम आंतों fibroblast वृद्धि कारक -19 (FGF19) द्वारा यकृत पित्त अम्ल संश्लेषण का बिगड़ा प्रतिक्रिया निषेध से निकला है, कम अभिव्यक्ति या ASBT के समारोह से नहीं।

प्राथमिक पित्त अम्ल कुअवशोषण में, FGF19 की कम प्लाज्मा स्तर यकृत पित्त अम्ल संश्लेषण बंद करने में विफल - आंतों पित्त अम्ल में जिसके परिणामस्वरूप वृद्धि संतृप्त ASBT सहित पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टरों, और मल में पित्त अम्ल का संवर्धित बहाव दस्त 6 का कारण बनता है (चित्रा 2)। चूहे Fgf15 (murine FGF19) में कमी एक पित्त अम्ल पूल का विस्तार और वृद्धि मल पित्त अम्ल 7 है।


चित्रा 2: पेट पित्त अम्ल malabsorption के तंत्र।
आम तौर पर, के रूप में पैनल में दिखाया गया है, आंतों पित्त अम्ल का लगभग 95% सक्रिय परिवहन द्वारा ASBT के माध्यम से बाहर का लघ्वान्त्र में अवशोषित कर रहे हैं। ASBT अभिव्यक्ति या गतिविधि कम हो जाता है जब (पैनल बी), पेट में पित्त अम्लों के बहाव में बिगड़ा आंतों पित्त अम्ल तेज परिणाम है। बिगड़ा FGF19 संकेतन (पैनल सी) के साथ, आंतों पित्त एसिड होता है जो पेट के डूब में पित्त अम्लों के बहाव के साथ ASBT परिवहन क्षमता की वृद्धि की सांद्रता में यकृत पित्त अम्ल संश्लेषण परिणामों की प्रतिक्रिया निषेध की कमी है। यहां का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें यह आंकड़ा।

लंबे समय तक, मल पित्त एसीआई में पुरानी ऊंचाईडी एस पेट के रसौली को बढ़ावा देने सकता है। आंतों रसौली दैहिक जीन म्यूटेशन, लेकिन पर्यावरणीय कारकों है कि मल पित्त अम्ल में तेजी लाने और इस प्रक्रिया को बढ़ाने सकता वृद्धि के साथ जुड़े प्रगतिशील श्लैष्मिक डिसप्लासिया से उठता है। मूषक में वृद्धि हुई मल पित्त अम्ल या तो बहिर्जात प्रशासन या Asbt की कमी का एक परिणाम के रूप में पेट के dysplasia और ट्यूमर गठन 8-10 बढ़ावा देने के।

विशेष रूप से, उत्तेजक नतीजों से संकेत मिलता है कि सामान्य रूप से प्रयुक्त दवाओं के खाद्य एवं औषधि प्रशासन (एफडीए) ने मंजूरी दे दी potently ASBT द्वारा इन विट्रो 11 पित्त अम्ल परिवहन को बाधित। इन दवाओं विवो में छोटे आंतों पित्त अम्ल परिवहन को कम करने और मल पित्त अम्ल का स्तर बढ़ाने के लिए, पेट के पैथोलॉजी पर संभावित प्रभाव के विषय में होगा। भी पेट विकृति में एक छोटे से वृद्धि एक ऐसी दवा का उपयोग करने के लिए एक प्रमुख स्वास्थ्य प्रभाव हो सकता है के लिए जिम्मेदार ठहराया। एक टूलकिट जो इन विट्रो निष्कर्ष और महामारी विज्ञान ओबी में इन की दिखावट आकलन कर सकते हैंservations के बाद विपणन सुरक्षा अध्ययन सहित अतिरिक्त अनुसंधान, प्रेरणा मिलेगी।

आवश्यकता के बावजूद, व्यावहारिक assays की पहचान करने के लिए पित्त अम्ल malabsorption के साथ लोगों की कमी है। मल पित्त अम्ल के प्रत्यक्ष माप, बोझिल अव्यावहारिक, और अविश्वसनीय रूप में 5 साल पहले खारिज कर दिया था। वैकल्पिक तरीकों एक रेडियोधर्मी सेलेनियम लेबल cholic एसिड व्युत्पन्न (75 SeHCAT) और 7α हाइड्रोक्सी-4-cholesten-3-वन (सी 4), या पित्त अम्ल बाँधने का चिकित्सीय परीक्षण के प्लाज्मा स्तर की अवधारण को मापने शामिल हैं। 75 SeHCAT परीक्षण है अमेरिका में उपयोग के लिए यूरोप में सीमित उपलब्धता और न एफडीए को मंजूरी दे दी है या उपलब्ध इसके अलावा, यहां तक कि मामूली विकिरण जोखिम (0.26 mSv / 75 SeHCAT परीक्षण) नैदानिक परीक्षण से चिंताओं को बढ़ा, और बैक्टीरियल अतिवृद्धि और उन्नत जिगर की बीमारी हो सकती है उलझाना 75 SeHCAT का परिणाम है। सी 4 परीक्षण के संभावित आकर्षक के बाद से ही प्लाज्मा की आवश्यकता है, लेकिन यह कम सकारात्मक भविष्य कहनेवाला वैल हैUE और परीक्षण व्यापक रूप से उपलब्ध नहीं है। मापने FGF19 के सीरम का स्तर समान सीमाएँ हैं। अक्सर पूछे जाने वाले चिकित्सकों पित्त अम्ल sequestrants का चिकित्सीय परीक्षण का सहारा है, लेकिन इस दृष्टिकोण पित्त अम्ल कुअवशोषण 5 का एक निश्चित निदान प्रदान नहीं कर सकते।

इन कारणों के लिए, एक उपन्यास एमआरआई दृष्टिकोण अभिनव बहु fluorinated पित्त अम्ल (MFBA एमआरआई) का उपयोग पित्त अम्ल परिवहन और vivo में वितरण को मापने के लिए नियोजित किया गया था। MFBA फ्लोरीन (19 एफ), 100% प्राकृतिक बहुतायत के एक स्थिर आइसोटोप के तीन परमाणुओं से युक्त, देशी पित्त अम्ल 12 को इसी तरह से ले जाया जाता है, और प्रोटॉन (1 एच) और फ्लोरीन (के संयोजन के साथ पित्त अम्ल परिवहन कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता 19 एफ) एमआरआई, विकिरण जोखिम 13,14 ionizing बिना एक संवेदनशील, सुरक्षित तरीका है।

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Protocol

निम्नलिखित प्रोटोकॉल संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) चिकित्सा मैरीलैंड विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ (IACUC प्रोटोकॉल # 0415011, 18 जून, 2015 को मंजूरी दे दी) द्वारा अनुमोदित दिशा निर्देशों का पालन करता है।

1. 19 एफ लेबल पित्त अम्ल के साथ Gavaging चूहे

  1. 150 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन 19 एफ लेबल पित्त अम्ल के साथ Gavage चूहों। 19 एफ लेबल पित्त अम्ल शेयर समाधान [cholic एसिड trifluoro एसिटाइल लाइसिन के साथ आवश्यक मात्रा करने के लिए एक 1 मिलीलीटर सिरिंज भरें (सीए-Lys-टीएफए; 1: 1 में पॉलीथीन ग्लाइकोल 400: Dulbecco फॉस्फेट बफर खारा) या cholylsarcosine- trifluoro-एन मिथाइल-acetamide (सीए-सर-TFMA;। 60% पॉलीथीन ग्लाइकोल 400 और 40% Dulbecco फॉस्फेट बफर खारा] और एक 20 गेज 1.5 इंच घुमावदार बल्ब इत्तला दे दी गैस्ट्रिक gavage सुई देते यकीन gavage सुई बनाने में काफी लंबे समय के लिए माउस के xyphoid उपास्थि के स्तर तक पहुँचने के लिए है जब सुई के हब के लिए घेघा अप में डाला
  2. मजबूती जीअंगूठे और तर्जनी के बीच गर्दन के पीछे ढीली त्वचा द्वारा पशु रगड़कर साफ करना और पीठ के निचले हिस्से पर और पूंछ त्वचा काबू करने के लिए शेष उंगलियों का उपयोग करें।
  3. ईमानदार माउस पकड़ और पक्ष के साथ gavage सुई और घेघा में और पेट में नीचे मुँह की छत से गुजरती हैं। प्रतिरोध ग्रसनी में सामना करना पड़ा है, तो सुई की स्थिति बदलने जब तक पशु 'निगल' यह - प्रतिरोध के खिलाफ धक्का नहीं है।
  4. संज्ञाहरण gavage के लिए आवश्यक है, तो 5 मिलीलीटर isoflurane और करीब युक्त एक घंटी जार में माउस जगह है। माउस अपने पक्ष पर गिर जाता है, 7 सेकंड रुको, माउस को हटाने और gavage प्रदर्शन करते हैं। संवेदनाहारी वाष्प से कर्मियों की रक्षा करने के लिए, केवल एक धूआं हुड में बेल जार का उपयोग करें।
  5. जानवर कुछ मिनट में isoflurane से उबरने का निरीक्षण करें।
    नोट: चूंकि isoflurane जिगर द्वारा metabolized है, एक फ्लोरीन संकेत बरकरार दवा या इसके चयापचयों से चलाई पित्त प्रणाली में उत्सर्जित और पित्ताशय की थैली Fluo उलझाना कर सकते हैंrine 19 एफ लेबल पित्त अम्ल 15 से संकेत है। एक वैकल्पिक ketamine प्लस xylazine (खुराक के लिए धारा 3.1 देखें) का उपयोग है।

2. फसल काटने वाले पित्ताशय की थैली, लीवर और पित्त अम्ल माप के लिए रक्त तरल क्रोमैटोग्राफी / मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग

  1. अंगों की कटाई से पहले कम से कम 6 घंटे के लिए अधिक से अधिक पित्ताशय की थैली भरने, तेजी से चूहों को प्राप्त करने के लिए। फॉस्फेट बफर खारा में ketamine और xylazine तैयार (100 μl ketamine, 62.5 μl xylazine, 840 μl पीबीएस)।
  2. एक 1 मिलीलीटर बाँझ सिरिंज का प्रयोग, 15 μl / g शरीर ketamine / xylazine समाधान (150 मिलीग्राम ketamine और शरीर के वजन किलो प्रति 18 मिलीग्राम xylazine) के वजन के साथ अंग फसल से पहले एक माउस subcutaneously 1 घंटा इंजेक्षन।
  3. ketamine / xylazine का प्रबंध करने के बाद एक घंटे के पैर के अंगूठे चुटकी द्वारा पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करें और anesthetized माउस लापरवाह जगह है।
  4. xyphoid और फाई को pubis से एक midline पेट की त्वचा चीरा बनाने के लिए 5 या 6 इंच कैंची का प्रयोग करेंne कैंची (4 इंच) पेरिटोनियल अस्तर में कटौती और पेट अंगों को बेनकाब करने के लिए - डायाफ्राम बेध नहीं है।
  5. एक 5 इंच क्लैंप के साथ xyphoid प्रक्रिया समझ और ऊपरी उदर गुहा का पर्दाफाश करने के लिए सीने के पार वापस उठा। काटना और जिगर की तरफ स्थानांतरित करने के लिए, पित्ताशय की थैली को प्रकाश में लाने संदंश और एक कुंद साधन का प्रयोग करें।
    नोट: जिगर फाड़ना या पूर्व के रूप में पित्ताशय की थैली मत छुओ गंभीर रक्तस्राव का कारण होगा और बाद पित्ताशय की थैली संकुचन और खाली उत्तेजित कर सकते हैं।
  6. आम पित्त नली के पार एक 4 इंच की जगह दबाना (चित्रा 3, धराशायी तीर)। बंध डायाफ्राम को पित्ताशय की थैली के बेहतर पोल संलग्न काटें और धीरे पेट के दाहिने हिस्से को पित्ताशय की थैली ले जाते हैं।

चित्र तीन
चित्रा 3: शारीरिक और प्रोटोन एमआरआई माउस पित्ताशय की थैली के दृश्य।
बाएं पैनल अवगत कराया समझौता ज्ञापनों से पता चलता हैmidline के बाईं पेट चीरा के बाद करने के लिए ई पित्ताशय की थैली। दबाना xyphoid प्रक्रिया grasps। पित्त से भरे उपवास पित्ताशय की थैली बड़े तीर और धराशायी तीर से clamped आम पित्त नली ने संकेत दिया है। [इनसेट: excised आम पित्त नली के साथ बरकरार पित्ताशय की थैली clamped। शासक मिलीमीटर (मिमी) में चिह्नित है।] सही पैनल उपवास murine पित्ताशय की थैली (तीर) के एक उच्च संकल्प प्रोटॉन घनत्व भारित एमआरआई छवि को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

  1. पित्ताशय की थैली कार्डियक पंचर, फसल खून करते हैं, और इच्छामृत्यु को सत्यापित करने के लिए पशु रक्तहीन excising से पहले।
    नोट: पित्ताशय की थैली की कटाई में पहली जिगर हृदय पतन और एक पर्याप्त रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए विफलता (≥ 200 μl) के कारण फाड़ना सकता है।
  2. बाएं डायाफ्राम के नीचे बेनकाब औरदिल की धड़कन सतह की पहचान। अधिक से अधिक हृदय धड़कन के बिंदु पर डायाफ्राम और एक 23 गेज एक 1 मिलीलीटर सिरिंज से जुड़ी सुई के साथ दिल पंचर।
    1. जबकि श्वास धीरे धीरे सिरिंज वापस ले लें। रक्त सिरिंज भरने के लिए शुरू होता है, वापस लेने बंद करो और 0.2 इकट्ठा करने के लिए सक्शन बनाए रखने - 0.6 मिलीलीटर रक्त। धीरे सुई घूर्णन या यह थोड़ा वापस लेने के लिए अगर यह नहीं रहता सकता है फिर से स्थापित प्रवाह।
    2. 15 मिनट के लिए 2,000 XG पर एक 1.5 मिलीलीटर heparinized ट्यूब और सेंट्रीफ्यूज के लिए रक्त का स्थानांतरण। 10 मिनट के लिए 12,000 XG पर चार भागों acetonitrile और सेंट्रीफ्यूज के साथ प्लाज्मा वेग। तरल क्रोमैटोग्राफी / मास स्पेक्ट्रोस्कोपी (नियंत्रण रेखा / एमएस / एमएस) 11-1312-1412-1412-1412-14 से सतह पर तैरनेवाला का विश्लेषण। यदि आवश्यक हो, विश्लेषण से पहले ओ सी -80 में प्लाज्मा की दुकान।
  3. कुंद विच्छेदन का उपयोग करना, जिगर से पित्ताशय की थैली मुक्त। दबाना नीचे आम पित्त नली आड़ा काट, हटाने और पित्ताशय की थैली तौलना, और एक 1.5 मिलीलीटर microcen में जगहtrifuge ट्यूब। जिगर हार्वेस्ट।
  4. जिगर के लगभग 100 मिलीग्राम और एक आकार 21 गिलास ऊतक homogenizer में बर्फ पर पूरे पित्ताशय की थैली Homogenize। 10 मिनट के लिए 12,000 XG पर 75% और 25% acetonitrile पानी (जिगर के लिए 800 μl, पित्ताशय की थैली के लिए 300 μl) और सेंट्रीफ्यूज के साथ निकालें। अर्क पतला के रूप में आवश्यक है और का उपयोग कर नियंत्रण रेखा / एमएस / एमएस 11-13 पित्त अम्ल सामग्री यों।

3. लाइव पशु प्रोटोन (1 एच) और फ्लोरीन (19 एफ) चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग

  1. इमेजिंग से पहले कम से कम 6 घंटे के लिए अधिक से अधिक पित्ताशय की थैली भरने, तेजी से चूहों को प्राप्त करने के लिए। ketamine और xylazine का प्रयोग, एमआरआई स्कैनर में गति को रोकने के लिए चूहों anesthetize। फॉस्फेट बफर खारा (130 μl ketamine, 42.5 μl xylazine, 827 μl पीबीएस) में ketamine प्लस xylazine के एक शेयर समाधान तैयार है। एमआरआई से पहले एक घंटे, इस समाधान के 5 μl / जी शरीर के वजन (65 मिलीग्राम ketamine और 4.25 मिलीग्राम xylaz के साथ एक माउस subcutaneously इंजेक्षन करने के लिए एक 1 मिलीलीटर बाँझ सिरिंज का उपयोग करेंप्रति किलो शरीर के वजन ine)। रोकने के लिए संज्ञाहरण के तहत सूखापन जानवर की आँखों के लिए पशु चिकित्सा मरहम लागू होते हैं।
  2. जैसा कि ऊपर ketamine / xylazine के साथ शामिल करने के बाद, # 40 या महीन बिजली क्लिपर ब्लेड का उपयोग कर पेट माउस के बाएं निचले आधे पर एक 1.5 सेमी 2 क्षेत्र क्लिप। फर हटाने के बाद, 8 के साथ क्षेत्र तैयार - 12% पतला आयोडीन शल्य साफ़ समाधान और 70% शराब के साथ कुल्ला - दोनों चरणों को दोहराएँ। उदर गुहा में 0.75 इंच की सुई / कैथेटर subcutaneously और सुरंग द्वारा एक 24 गेज सम्मिलित करें। सुनिश्चित करें कि कैथेटर अंधान्त्र या अन्य उदर अंग में नहीं है सवार पर वापस खींच कर बनाओ - कोई खून या कैथेटर में fecal सामग्री होनी चाहिए।
  3. सुई निकालें और intraperitoneal कैथेटर छोड़ दें। एक तापमान नियंत्रित एमआरआई स्कैनर पशु कक्ष में थर्मल पैड पर माउस रखें।
  4. एक 1 मिलीलीटर बाँझ सिरिंज फॉस्फेट बफर खारा में ketamine और xylazine युक्त (1,000 μl ketamine, 300 μl xylazine तैयार, 6700 μl पीबीएस) और 72 इंच बाँझ ट्यूबिंग के वांछित लंबाई भरें। प्रीफिल्ड बाँझ ट्यूबिंग को intraperitoneal कैथेटर कनेक्ट और यह एमआरआई स्कैनर से दूर हूं। बनाए रखने के लिए संज्ञाहरण इस समाधान के 50 μl इंजेक्षन हर 20 मिनट अगर माउस के महत्वपूर्ण संकेत स्थिर हैं।
    नोट: इमेजिंग से पहले, कुछ धातुओं कोई एमआरआई स्कैनर के पास हैं।
  5. 1 घंटे के लिए 300.283 मेगाहर्ट्ज और 19 एफ नाभिक के लिए 282.524 मेगाहर्ट्ज पर संचारित और रेडियो आवृत्ति संकेतों को प्राप्त करने के लिए एक 19 एफ / 1 एच दोहरे देखते रेखीय मात्रा एमआरआई तार का उपयोग करें।
    1. तीन-टुकड़ा (अक्षीय, मध्य-बाण, और राज्याभिषेक) स्काउट छवियों को एक तेजी से कम कोण गोली मार दी अनुक्रम (फ्लैश) का उपयोग कर के साथ प्रणाली अंशांकन 11, 13 और पशु स्थानीयकरण प्रदर्शन करना। प्रयोग शुरू करने के लिए, सॉफ्टवेयर कंसोल पर स्कैन नियंत्रण विंडो में 'ट्रैफिक लाइट' बटन पर क्लिक करें।
    2. छूट के साथ तेजी से अधिग्रहण को बढ़ाने का उपयोग कर multislice 1 एच एमआर छवियों का मोलबयान (दुर्लभ) नमूना या पुनरावृत्ति समय 2,200 मिसे के साथ पशु के शरीर, इको समय 8.9 मिसे के पार दृश्य में अनुक्रम, दुर्लभ कारक 8, देखने के लिए 4 x 4 सेमी 2 के क्षेत्र, टुकड़ा मोटाई 1.0 मिमी, मैट्रिक्स आकार 266 एक्स 266, में विमान संकल्प 150 x 150 माइक्रोन 2, और औसत 6. प्रयोग शुरू करने के लिए की संख्या, सॉफ्टवेयर कंसोल पर स्कैन नियंत्रण विंडो में 'ट्रैफिक लाइट' बटन पर क्लिक करें।
    3. पुनरावृत्ति समय के साथ 1 एच एमआरआई के एक ही क्षेत्र में एक फ्लैश अनुक्रम का उपयोग कर 19 एफ छवियों का मोल 220 एमएस, फ्लिप कोण = 30 डिग्री, इको समय 3.078 एमएस, मैट्रिक्स आकार 32 x 32, में विमान संकल्प 1.25 x 1.25 मिमी 2, मोटाई 4.0 मिमी टुकड़ा है, और औसत 768 की संख्या में प्रयोग शुरू करने के लिए, क्लिक करें 'GOP' (जी हे हे एन पी ipeline) सॉफ्टवेयर कंसोल पर स्पेक्ट्रोमीटर नियंत्रण उपकरण विंडो में बटन।
  6. एमआरआई के बाद, intraperitoneal injecti के साथ माउस euthanize15 μl / जी की पर शरीर के वजन ketamine / xylazine समाधान (150 मिलीग्राम प्रति किलो शरीर के वजन ketamine / 18 मिलीग्राम xylazine) exsanguination के लिए हृदय पंचर द्वारा पीछा किया।
  7. संज्ञाहरण से एक माउस को ठीक करने के लिए, intraperitoneal कैथेटर को हटाने लेकिन जब तक यह स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए पर्याप्त होश आ पशु छोड़ पहुंच से बाहर नहीं है।
  8. अंग फसल से 19 एफ लेबल पित्त अम्ल सांद्रता 11-13 मापने के लिए, ketamine प्लस xylazine साथ संज्ञाहरण के रूप में ऊपर वर्णित बनाए रखें।

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Representative Results

इन विवो एमआरआई के लिए MFBA के उपयोग 'देखना' के लिए वास्तविक समय में पित्त अम्ल परिवहन दोनों अनुसंधान और नैदानिक इस्तेमाल के लिए महान क्षमता है। इसके अलावा, यहां तरीकों पित्ताशय की थैली की लकीर और उसकी सामग्री तरल क्रोमैटोग्राफी और मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग के जैव रासायनिक विश्लेषण के लिए वर्णित इमेजिंग परिणाम की पुष्टि करने का एक साधन प्रदान करते हैं। हालांकि, इन तरीकों की वैधता सटीक खुराक, assays के समय, और इमेजिंग या शल्य हटाने के लिए पित्ताशय की थैली के स्थानीयकरण की आवश्यकता है। बाद के लिए, यह बहुत महत्वपूर्ण है कि माउस के पेट अंगों में संभव के रूप में छोटे रूप में परेशान किया जा रहा है; पित्ताशय की थैली की भी कोमल हेरफेर संकुचन और खाली प्रोत्साहित कर सकते हैं। इसलिए, अपनी सारी सामग्री पर कब्जा करने के लिए, यह महत्वपूर्ण है के रूप में जल्द ही संभव के रूप में आम पित्त नली के पार दबाना जगह है।

शल्य दृष्टिकोण यहाँ का सुझाव दिया पित्ताशय की थैली का उपयोग करना,आसानी से पेट के दाहिने ऊपरी चक्र में जिगर का सही पूर्वकाल पालि (चित्रा 3) के पीछे की पहचान की जानी चाहिए। जिगर तरफ चल रहा है, पित्ताशय की थैली को छूने के बिना clamping के लिए आम पित्त नली को उजागर करता है। एक बार इस दबाना जगह में है, वहाँ प्रोटोकॉल में वर्णित पित्ताशय की थैली बरकरार दूर करने के लिए अन्य कदम के साथ आगे बढ़ने में कोई कठिनाई नहीं होनी चाहिए।

तालिका 1 में डेटा पित्ताशय की थैली 13,14 में MFBA की अत्यधिक चयनात्मक एकाग्रता प्रकट करते हैं। अंग (जिगर और पित्ताशय की थैली) MFBA की सांद्रता 1 जी / एमएल 13,14 के घनत्व संभालने के द्वारा गणना की गई। मौखिक खुराक के 7 घंटा के भीतर, पित्ताशय की थैली में MFBA की औसत संचय परिमाण (1,000 गुना) या तो जिगर या रक्त 13,14 में मनाया तुलना में अधिक के कई आदेशों था; millimolar स्तरों जिगर और रक्त (तालिका 1 में micromolar स्तरों की तुलना में पित्ताशय की थैली में मनाया गया </ Strong>)। रक्त में 1.4 माइक्रोन के 14.5 - - जिगर में 78.8 मिमी, और 18.4 - पित्ताशय की थैली में 27.0 मिमी औसत MFBA सांद्रता में 0.4 से लेकर। इन निष्कर्षों MFBA के साथ लगातार शारीरिक पित्त अम्ल के रूप में ही संभाला जा रहा है; मौखिक खुराक के बाद, MFBA सक्रिय रूप से ASBT द्वारा enterohepatic परिसंचरण जिससे वे सोडियम / taurocholate सह परिवहन पॉलीपेप्टाइड (NTCP) द्वारा hepatocytes में सक्रिय परिवहन के लिए जिगर के लिए किया जाता है में पित्त पेड़ में एकाग्रता के लिए पित्ताशय की थैली में ले जाया जाता है, और उत्सर्जित (चित्रा 1)।

चित्रा 4 MFBA साथ gavage के बाद पित्ताशय की थैली में 19 एफ संकेत के समय पर निर्भर संचय से पता चलता है। एक अधिक विस्तृत समय पाठ्यक्रम विश्लेषणात्मक तरीकों का उपयोग (नियंत्रण रेखा / एमएस / एमएस) ने संकेत दिया है कि MFBA के शिखर पित्ताशय की थैली सांद्रता मौखिक खुराक 12, शारीरिक कैनेटीक्स के साथ एक सुसंगत पाने के बाद 7 घंटा करने के लिए 4 की रेंज में मनाया गयापित्त अम्ल की enterohepatic संचलन की। चित्रा 4 में छोड़ दिया पैनल, एक एमआरआई छवि दो हासिल कर लिया और MFBA के साथ मौखिक gavage के बाद चार घंटा के लिए एक से डेढ़ से पता चलता है 19 एफ क्या आम पित्त नली (धराशायी तीर) और एक और अधिक मजबूत संकेत से चलाई प्रतीत होता है से चलाई संकेत पित्ताशय की थैली (तीर); 7 से 8.5 घंटा के द्वारा, आम पित्त नली संकेत नहीं रह पाया जाता है और पित्ताशय की थैली 19 एफ संकेत आसन्न MFBA प्रेत (चित्रा 4, सही पैनल, तीर) से निकलती है कि के रूप में एक ही तीव्रता बढ़ गया है।

हम Asbt की कमी अभिव्यक्ति के साथ चूहों का इस्तेमाल किया पित्त अम्ल की कम आंतों तेज पता लगाने के लिए MFBA एमआरआई की क्षमता का परीक्षण करने के लिए। जैसा कि चित्र 5 ए, एक लगभग 22 गुना Asbt की कमी चूहों से पित्ताशय की थैली में MFBA की एकाग्रता में कमी में सचित्र नियंत्रण रेखा द्वारा मापा गया था / एमएस 13,14; इन निष्कर्षों यह वें प्रत्याशित था पर आधारितइन जानवरों में MFBA 19 एफ एमआरआई संकेत में पता लगाने की सीमा के नीचे होगा। दरअसल, के रूप में चित्रा 5 ब में दिखाया गया है, जबकि एक मजबूत 19 एफ संकेत पित्ताशय की थैली से उत्पन्न एक जंगली प्रकार माउस में पता चला था, वहाँ Asbt की कमी माउस 13,14 में कोई इसी 19 एफ संकेत था। इन निष्कर्षों की पुष्टि है कि MFBA शारीरिक पित्त अम्लों को इसी तरह से नियंत्रित किया जाता है और MFBA एमआरआई पित्त अम्ल का बिगड़ा आंतों तेज पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

चित्रा 4
चित्रा 4: प्रतिनिधि MFBA-एमआरआई छवियों।
लाइव चूहों में प्रयोगों के परिणाम 19 एफ के पुनर्निर्माण ओवरले और 1 एच प्रदर्शन है कि 19 एफ संकेतों murine पित्ताशय की थैली (बड़े तीर) से निर्गत छवियों को दिखाने के। संदर्भ 19 एफ लेबल पित्त अम्ल के ज्ञात सांद्रता वाले phantoms थेमाउस (बाएँ तीर) के साथ एमआरआई स्कैनर में रखा। बाएं पैनल में, धराशायी तीर 19 एफ लेबल पित्त अम्ल संकेत आम पित्त नली से निकलती है इंगित करता है। प्रत्येक पैनल के ऊपर दर्ज की गई 19 एफ लेबल पित्त अम्ल के साथ gavage कि एमआरआई समय है कि छवि अधिग्रहण पूरा कर लिया गया था (1.5 घंटे) करने के लिए शुरू किया गया था के बाद का समय है। के रूप में प्रत्याशित, पित्ताशय की थैली समय के साथ 19 एफ लेबल पित्त अम्ल वृद्धि के साथ भरने। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5: Asbt की कमी चूहों के पित्ताशय से तनु MFBA-एमआरआई संकेत।
(ए) बार ग्राफ दिखाता है MFBA की एकाग्रता नियंत्रण रेखा से मापा / एमएस / एमएस लगभग Asbt की कमी चूहों की तुलना में कम 22 गुना अधिक है किडी चूहों पर नियंत्रण करने के लिए। (बी) के एक Asbt की कमी माउस के पित्ताशय की थैली से अनुपस्थित MFBA एमआरआई संकेत। तीर 19 एफ लेबल पित्त अम्ल phantoms (बाएं पैनल) और phantoms से 19 एफ एमआरआई संकेत (सही पैनल) से संकेत मिलता है। ऊपरी सही पैनल में तीर इंगित करता है 19 एफ लेबल पित्त अम्ल संकेत पित्ताशय की थैली से चलाई; कोई इसी Asbt की कमी माउस (निचले सही पैनल) में 19 एफ लेबल पित्त अम्ल संकेत है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पित्ताशय की थैली वजन (एमजी) MFBA एकाग्रता
पित्ताशय की थैली (मिमी) लिवर (माइक्रोन) प्लाज्मा (माइक्रोन)
सीए-Lys-टीएफए 25.2 ± 3.2 27.0 ± 2.4 78.8 ± 35.1 0.4 ± 0.2
सीए-सर-TFMA 29.2 ± 2.4 18.4 ± 1.6 14.5 ± 0.6 1.4 ± 0.1

तालिका 1: 19 एफ लेबल पित्त अम्ल के पित्ताशय की थैली, लिवर और प्लाज्मा सांद्रता के लिए प्रतिनिधि मान।
मतलब ± मानक त्रुटि (एसई) मूल्यों पित्ताशय की थैली के वजन और पित्ताशय की थैली, जिगर, और प्लाज्मा 12,13 में संकेत MFBA की सांद्रता के लिए दिखाए जाते हैं। दिखाए मूल्यों संकेत दिया MFBA के 150 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन के साथ चूहों gavaging के बाद 5 से 7 मानव संसाधन को मापा गया। पित्ताशय की थैली में नोट MFBA की millimolar सांद्रता जिगर और प्लाज्मा में micromolar सांद्रता की तुलना में। एन = 3 मीलसीए-Lys-टीएफए और सीए-सर-TFMA के लिए मूल्य प्रति 5 चूहों के लिए मूल्य प्रति सीई।

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Discussion

सीए-Lys-टीएफए और सीए-सर-TFMA और stably ट्रांसफ़ेक्ट Madin-डार्बी कुत्ते गुर्दे की कोशिकाओं ASBT और मानव भ्रूण गुर्दे की कोशिकाओं को व्यक्त सोडियम / taurocholate सह परिवहन पॉलीपेप्टाइड व्यक्त उपयोग करते हुए अपने परिवहन की इन विट्रो विश्लेषण के संश्लेषण (NTCP) कहीं और 13,14 विस्तृत रहे हैं। इधर, फोकस पशुओं, पित्ताशय की थैली, जिगर, और MFBA सामग्री के विश्लेषण के लिए रक्त की फसल के द्वारा पीछा रहने के लिए gavage द्वारा MFBA की मौखिक प्रशासन पर है, और, विशेष रूप से, जीना पशु एमआरआई से पित्ताशय की थैली में इमेजिंग MFBA। महत्वपूर्ण कदम, फ्लोरीन आधारित anesthetics जो प्रतिस्पर्धा 19 एफ संकेतों बना सकते परहेज आम पित्त नली जो पित्ताशय की थैली संकुचन में हो सकता है clamping और खाली करने से पहले अंग excised है पित्ताशय की थैली से पहले हेरफेर से बचने, और एमआरआई स्कैनर के निकट धातुओं के स्थान परहेज शामिल हैं।

के रूप में यहाँ और कहीं 13,14 विस्तृत, MFBA एमआरआई महान क्षमता टी हैओ सफलतापूर्वक दोनों सामान्य और असामान्य शारीरिक शर्तों के तहत इन विवो में पित्त अम्ल परिवहन का विश्लेषण। MFBA एमआरआई की प्रमुख ताकत हैं कि यह कोई विकिरण (न MFBA स्वाभाविक रूप से, गैर रेडियोधर्मी फ्लोरीन और न ही एमआरआई विकिरण का उत्सर्जन के साथ लेबल) और MFBA (चूहों के विपरीत venipuncture की आवश्यकता के बिना मौखिक रूप से प्रशासित रहे हैं शामिल है, सबसे अधिक मानव आंत्रेतर प्रशासन की आवश्यकता नहीं होगी anesthetics या बनी रहती की एमआरआई स्कैनर में गति विरूपण साक्ष्य को रोकने के लिए)। एक कृत्रिम पित्त आंत microflora 13,14 द्वारा हाइड्रोलिसिस के लिए प्रतिरोधी एसिड के साथ एक hydrolyzable पित्त अम्ल के प्रतिस्थापन, पेट में MFBA के vivo स्थिरता के बारे में मुद्दों दूर कर सकते हैं। MFBA के लिए प्रारंभिक प्रोटोटाइप cholic एसिड के अणु प्रति तीन फ्लोरीन परमाणुओं को जोड़ने शामिल है, एक स्वाभाविक रूप से मानव पित्त अम्ल कि पेट में Clostridial द्वारा hydrolyzed है 13,14 हाइड्रोलिसिस। एक उपन्यास त्रिकोणीय fluorinated पित्त अम्ल, सीए-सर-TFMA, एक sarcosine पर आधारितरीढ़ की हड्डी है कि बैक्टीरियल एंजाइमों द्वारा हाइड्रोलिसिस के लिए प्रतिरोधी है इस सीमा को धोखा दिया, MFBA 13,14 के आधे-जीवन का विस्तार।

अन्त में, एक संभावित प्रतिस्पर्धा कार्यप्रणाली, एन मिथाइल [11 सी] पीईटी / सीटी के लिए cholylsarcosine, का उपयोग दोनों radiolabeled पित्त अम्ल और सीटी, और, तैयार जहाज, और रेडियोधर्मी स्टोर करने के लिए जरूरत से विकिरण जोखिम द्वारा सीमित है पित्त अम्ल 17।

संशोधनों और इस उपन्यास पद्धति के लिए समस्या निवारण के बारे में, एक 19 एफ लेबल पित्त अम्ल या उसके bioavailability, छवि अधिग्रहण के समय, या अपर्याप्त भरने के साथ एक समस्या की वजह से एक एमआरआई संकेत पित्ताशय की थैली से उत्पन्न हो सकता है पता लगाने के लिए कि विफलता विचार कर सकते हैं पित्ताशय की थैली की। जैसा कि ऊपर चर्चा की, हम अपनी क्षमता से इन एजेंटों की संरचनात्मक अखंडता का परीक्षण इन विट्रो में सेल लाइनों उचित पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टरों को व्यक्त करने से ले जाया जा सकता है। हम कम से कम 1.5 घंटे के लिए अनुमति देते हैंछवि अधिग्रहण के लिए, लेकिन इस अवधि कुछ मामलों में अनुसंधान विस्तार की आवश्यकता हो सकती है। हम उपवास चूहों पूर्व एमआरआई सुनिश्चित करने के लिए कि अधिक से अधिक पित्ताशय की थैली भरने महत्वपूर्ण है पाते हैं।

19 एफ एमआरआई संकेतों के लिए पता लगाने की सीमा 90 के लिए पशु इमेजिंग की आवश्यकता होती है - पर्याप्त संकेत अधिग्रहण के लिए 120 मिनट; यह एक व्यावहारिक नैदानिक ​​परीक्षण के लिए भी लंबे समय से पता चलता है - रोगियों है कि अवधि के लिए एमआरआई स्कैनर में अभी भी झूठ बोलने के लिए होगा। इसके अलावा, वर्तमान, नैदानिक एमआरआई प्रोटॉन (1 एच) इमेजिंग पर मुख्य रूप से निर्भर करता है; फ्लोरीन के आवेदन (19 एफ) इमेजिंग हार्डवेयर में निवेश (19 एफ कुंडल) और सॉफ्टवेयर, एमआरआई स्कैनर अनुसार कम से कम एक $ 250,000 निवेश की आवश्यकता होगी। जब तक अन्य फ्लोरीन आधारित एमआरआई अनुप्रयोगों MFBA एमआरआई का उपयोग कर पित्त अम्ल malabsorption के लिए रोगियों का मूल्यांकन करने के लिए विकसित कर रहे हैं लागत प्रभावी होने की संभावना नहीं है।

MFBA एमआरआई 75 SeHCAT प्रतिधारण को मापने के लिए एक आशाजनक विकल्प प्रदान करता है, प्लाज्मा 7α हाइड्रोक्सी 4 -cholesten-3-वन (सी 4), और प्लाज्मा FGF19, या पित्त अम्ल बाँधने का उपयोग कर एक चिकित्सीय परीक्षण प्रदर्शन। अमेरिका, 75 SeHCAT परीक्षण है, जो विकिरण जोखिम शामिल है में, एफडीए को मंजूरी दी नहीं है। सी 4 और FGF19 परीक्षण कम सकारात्मक भविष्य कहनेवाला मूल्य है और परीक्षण के वर्तमान में केवल विशेष प्रयोगशालाओं के माध्यम से उपलब्ध है। इसके अलावा, दोनों C4 और FGF19 स्तरों पित्त अम्ल का यकृत संश्लेषण दर्शाते हैं। इसलिए, MFBA एमआरआई के विपरीत, इन परीक्षणों बदल अभिव्यक्ति या ileal पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टरों या कि वृद्धि पित्त अम्ल संश्लेषण से सम्बंधित पित्त अम्ल malabsorption के अन्य तंत्र का उत्परिवर्तन का पता नहीं लगा सकते हैं। पित्त अम्ल बाँधने की चिकित्सीय परीक्षणों में मददगार हो सकता है लेकिन अनिश्चित भविष्य कहनेवाला मूल्य है और पित्त अम्ल कुअवशोषण 5 का एक निश्चित निदान नहीं प्रदान कर सकते हो सकती है। अंत में, हालांकि मल पित्त अम्ल के प्रत्यक्ष माप प्रतीत होता है उचित है यह भी बोझिल अव्यावहारिक है, और नियमित नैदानिक उपयोग 5 के लिए अविश्वसनीय रूप साल पहले खारिज कर दिया था।

ईएनटी "> अतिरिक्त चुनौतियों दूर किया जाना चाहिए ताकि इस नवीन दृष्टिकोण (जैसे, पुराना दस्त का एक कारण के रूप में पित्त अम्ल malabsorption के निदान के लिए) क्लिनिक में विवो पित्त अम्ल परिवहन में मापने में अनुवाद किया जा सकता है। एक बड़ी चुनौती अधिकतम करने के लिए है प्राकृतिक पित्त अम्ल, वह है, एक पित्त अम्ल अणु है कि भी है क्योंकि जोड़ा 19 एफ परमाणुओं के भारी है या तो द्वारा ले जाया जा नहीं होगा की तरह व्यवहार करने MFBA की क्षमता में बाधा पहुँचा के बिना प्रति पित्त अम्ल अणु 19 एफ परमाणुओं की संख्या में वृद्धि से संकेत तीव्रता जिगर में ASBT या पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टरों। उपन्यास MFBA की क्षमता इन विट्रो में ले जाया जा करने के लिए महत्वपूर्ण मानव पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टरों 13,14 व्यक्त सेल लाइनों में परीक्षण किया जा सकता है और इन विवो परिवहन के भविष्य कहनेवाला होना चाहिए। वृद्धि की संवेदनशीलता, MFBA एमआरआई के साथ पूरे पित्त पेड़ (जैसे, आम पित्त नली और अपनी शाखाओं) के बेहतर इमेजिंग के लिए क्षमता है, इस संबंध में क्षमता टीओ छवि (चित्रा 4, बाएं पैनल) कुछ चूहों में आम पित्त नली का वादा प्रकट होता है।

हालांकि MFBA एमआरआई द्वारा पित्त अम्ल का पता लगाने की वर्तमान सीमा केवल पित्ताशय की थैली में अपने दृश्य की अनुमति, तकनीक की संवेदनशीलता को संभालने में सुधार किया जा सकता है हम MFBA एमआरआई पित्त अम्ल परिवहन और vivo में वितरण को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता आशा जिससे व्यापक स्थानिक उपलब्ध कराने वास्तविक समय में जानकारी anatomically; एक समर्थकारी प्रौद्योगिकी है कि आणविक इमेजिंग अग्रिम होगा। MFBA एमआरआई भी जीन बहुरूपताओं और दवाओं है कि ख़राब पित्त अम्ल ट्रांसपोर्टर समारोह के प्रभाव का आकलन करने के लिए एक उपन्यास प्रौद्योगिकी की पेशकश करेगा। MFBA एमआरआई मदद करने के लिए चिकित्सकों पित्त अम्ल malabsorption के लिए स्क्रीन और इस तरह की पहचान करने और वृद्धि हुई मल पित्त अम्ल (जैसे, दस्त कि mimics चिड़चिड़ा आंत्र सिंड्रोम) से उत्पन्न बीमारियों का प्रबंधन translational क्षमता है। अन्त में, चाहिए कि इस तकनीक चिकित्सकीय उपलब्ध यह महान समर्थक बन जाता हैअपडेट किया क्षमता प्रदान पेट के रसौली या अन्य परिस्थितियों है कि मल पित्त अम्ल में परिवर्तन से प्रभावित हो सकता है के साथ लोगों में बदल आंतों पित्त अम्ल तेज की पहचान करने से सटीक चिकित्सा के क्षेत्र में प्रगति में तेजी लाने के लिए।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों, मधुमेह और पाचन के राष्ट्रीय संस्थान और गुर्दा रोग (अनुदान संख्या R21 DK093406 और T32 DK067872 JP.R. के लिए) और एक VA मेरिट अवार्ड (अनुदान संख्या 1BX002129 JP.R. के लिए) द्वारा समर्थित किया गया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Duall size-21 all glass tissue grinder Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ 885351-0022
Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T horizontal bore MR Scanner Bruker Biospin MRI GmbH, Germany Use companion Paravision Version 5.1 software (see step 3.5)
Bruker 40 mm 19F/1H dual-tuned linerar volume coil Bruker Biospin MRI GmbH, Germany Use companion Paravision Version 5.1 software (see step 3.5)
Waters Acquity UPLC System with Quadrupole Detector Waters Corporation, Milford, MA
Waters Acquity UPLC ethylene bridged hybrid C8 1.7 μm 2.1 x 50 mm column Waters Corporation, Milford, MA
Gavage Needle Braintree Scientific, INC. N-010 20 G-1.5" curved 2.25 mm ball
2 Stainless Steel Hemostats  VWR 10755-018 4 and 5 inch, straight
Ketamine MWI Veterinary Supply 501090 Ketamin zetamine 100 mg/ml
Xylazine Akorn, Inc. 20 mg/ml
Intraperitoneal Catheter Abbott AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42 24-G x 0.75"

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References

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चिकित्सा अंक 117 पित्त अम्ल चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग फ्लोरीन लेबलिंग पित्ताशय की थैली माउस परिवहन
मल्टी fluorinated पित्त अम्ल और उपयोग करना<em&gt; Vivo</em&gt; चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग को मापने के लिए पित्त अम्ल परिवहन
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Felton, J., Cheng, K., Said, A.,… More

Felton, J., Cheng, K., Said, A., Shang, A. C., Xu, S., Vivian, D., Metry, M., Polli, J. E., Raufman, J. P. Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport. J. Vis. Exp. (117), e54597, doi:10.3791/54597 (2016).

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