В этой рукописи описывается хирургическая модель пиелонефрита на крысах с использованием прямого внутрипочечного заражения Escherichia coli в почечную лоханку. Экспериментальная процедура может быть использована для изучения патогенеза пиелонефрита, а также связанного с ним воспаления и фиброза.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Интранальная инъекция Escherichia coli В крысиной модели пиелонефрита
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Пиелонефрит - это бактериальная инфекция почек, которая чаще всего вызывается кишечной палочкой. Рецидивирующие инфекции могут вызвать значительное воспаление почек и фиброз, что в конечном итоге приводит к снижению функции почек. Прежде чем можно будет начать улучшенное клиническое лечение и профилактику пиелонефрита, необходимо создать надежную модель на животных для изучения механизмов прогрессирования, рецидива и терапевтической эффективности. Модель трансуретральной инфекции близко имитирует пиелонефрит человека, но демонстрирует значительные вариации из-за ее зависимости от уретрального рефлюкса для транспортировки бактерий в почки. В настоящем документе представлен подробный хирургический протокол для выполнения бактериальных инъекций в почечную лоханку крысы, который подтверждается неинвазивной магнитно-резонансной томографией (МРТ). Используя этот протокол, животные получают прямой контакт с желаемой концентрацией бактерий E. coli и могут полностью восстановиться после хирургической процедуры при адекватном послеоперационном уходе. Это облегчает последующую продольную МРТ-оценку экспериментальных моделей на животных для сравнения с физиологическим раствором (фиктивным) контролем. При использовании этого подхода прямой доставки тяжесть инфекции контролируется и применима для механистических исследований прогрессирования, а также для разработки новых стратегий лечения.
Введение
Модели грызунов использовались для изучения многочисленных проявлений заболеваний человека, включая пиелонефрит и инфекции мочевых путей (ИМП). ИМП являются глобальной проблемой здравоохранения и могут влиять на детей, мужчин и женщин всех возрастов. 1 , 2 , 3. Первоначальное проявление ИМП включает цистит, и если инфекция поднимается вдоль мочеточника, может появиться инфекция почек (пиелонефрит). В то же время распространенность диабета приближается к 400 миллионам человек во всем мире. 4 , 5 Важно отметить, что за....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все исследования на животных проводились в соответствии с утвержденными протоколами Комитета по институциональному контролю и использованию животных (IACUC) в Университете Case Western Reserve. Продолжительность хирургической процедуры, описанной ниже, составляет приблизительно 45-60 мин. Сама процедура МРТ составляет приблизительно 15 минут для каждой временной точки.
1. Анестезия
- Анестезируйте крысу в изофлурановой камере, установленной на 2% изофлуране, смешанном с кислородом, для облегчения обработки животных и сдержанности перед введением инъекционной анестезии внутрибрюшинно.
- Через 3-5 минут воздействия изофлюра....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Медицинские методы визуализации дают возможность неинвазивно оценивать ИМП и терапевтическую эффективность. Поэтому МРТ использовалась для подтверждения индукции острой инфекции после инъекции 1-2 × 10 7 UTI89 E. coli и для визуализации изменений в почках до и после операции. На рис. 1а-б показан прогрессивно увеличивающийся участок почек (желтые стрелки). Изображения МРТ, полученные для каждого животного в 1 и 4 день после инфицирования, характеризую.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Восходящий острый пиелонефрит у грызунов (т.е. мышей и крыс) может быть получен путем трансуретральной катетеризации. 16 , 17 , 18 Этот метод трансуретральной инфекции выгоден тем, что он неинвазивный и имитирует патофизиологию человека восходящей инфекции. 17 , 18 , 19 , 20 Однако этот метод.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Других разглашений у авторов нет.
Благодарности
Авторы выражают признательность за поддержку NIH/NIDDK K12 DK100014 (Lan Lu), Case Comprehensive Cancer Center (NIH/NCI P30 CA43703) и Clinical and Translation Science Collaborative of Cleveland (NIH/NCATS UL1 TR000439).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Впитывающая прокладка | Fisher | 14-127-47 | |
| Стерильная ватная марлевая салфетка | Fisher | 22-415-469 | |
| Латексные хирургические перчатки | Henry Schein Animal Health | 21540 | |
| Изогнутые ножницы Майонеза | Fisher | S17341 | |
| Прямая тупоя форцепс | Fisher | 08-895 | |
| Ручка скальпеля | Fisher | 08-913-5 | |
| Стерильные лезвия скальпеля | Fisher | 53220 | |
| 1 мл Шприц Luer-Lok | BD Biosciences | 309628 | Для бактериальных инъекций |
| 20 мл Шприц Luer-Lok | BD Biosciences | 301031 | Для промывки солевым раствором |
| Hemostat | Seneca Medical | 240267 | |
| 23 г 3/4 дюйма. Игла | BD Biosciences | 305143 | |
| 30 G 1 дюйм Игла | BD Biosciences | 305128 | |
| Инсулиновый шприц U-100 | Exel International | 25846 | Для инъекций лекарств |
| Изофлуран | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| ксилазин | Henry Schein Animal Health | 33197 | Inject IP |
| Кетамин | Patterson Vetrinary | 07-881-9413 | Инъекции |
| йохимбина (Атипамезола) | Patterson Vetrinary | 07-867-7097 | Инъекция ВП после операции |
| Бупивакаин (Маркаин) | Patterson Vetrinary | 07-890-4584 | Введение SQ в область разреза |
| 4-0 Хромовый шов для кишечника | Ethicon Inc. | U203H | |
| 4-0 Плетеный викрил Шовный материал | Ethicon Inc. | J304H | |
| 1 мл SubQ Шприц | BD Biosciences | 309597 | |
| E. coli UTI89 или CFT073 | ATCC | 700928 | |
| Surgicel Absorbable Hemostat | Ethicon Inc. | ETH1951CS | |
| Biospec 9.4T MRI | Bruker | 94/20 ЕВР |
Ссылки
- Saliba, W., Barnett-Griness, O., Rennert, G. The association between obesity and urinary tract infection. Eur J Intern Med. 24 (2), 27-31 (2012).
- Semins, M., Shore, A., Makary, M., Weiner, J., Matlaga, B. The impact of obesity on urinary tract infection risk. Urology. 79 (2),....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
