כאן אנו מציגים פרוטוקול להערכת שאירים זרע, נביטה תרדמת בתנאי שדה באמצעות קבור, רצועות זרע שכותרתו כלוריד tetrazolium בדיקות כדאיות (ט"ז).
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
דרך אמין להערכת זרע נביטה, תרדמת, ותמותה בתנאי שדה
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנו מתארים טכניקות לקירוב דינמיקת בנק זרעים לאורך זמן באמצעות Helianthus annuus כדוגמה למין מחקר. ניתן לקפל ולהדביק רצועות של בד פוליאסטר חדיר ודבק לבניית רצועה של תאים המכילים זרעים ומידע מזהה, תוך מתן אפשרות למגע עם תשטיף אדמה, מים, מיקרואורגניזמים וטמפרטורת הסביבה. רצועות עשויות להיבנות עם מגוון רחב של מספרי תאים וגדלים ולאפשר לחוקר לאכלס מגוון גנוטיפים בתוך מין יחיד, מינים שונים או זרעים שחוו טיפולים שונים. בניגוד לחבילות זרעים בודדות, רצועות נשלפות ביתר קלות כיחידה. בעוד שניתן לכלול מנות משוכפלות בתוך רצועה, רצועות שונות יכולות לשמש כבלוקים או שניתן לאחזר אותן בזמנים שונים לצורך תצפית על התנהגות הזרעים לאורך זמן. השתמשנו באקדח דבק בטמפרטורה גבוהה כדי לתחום תאים ואטמנו את הרצועות לאחר הכנסת הזרע והתגים המזהים את הבלוק וזמני ההסרה. לאחר מכן נקברו רצועות הזרעים בשדה בעומק הרצוי, כאשר המיקום סומן להסרה מאוחרת יותר. טורפי בעלי חיים מתחפרים הודרו למעשה על ידי שימוש בכיסוי של בד חומרה מרשת מתכת על פני האדמה. לאחר מרווח הזמן שנבחר לקבורה, נחפרו רצועות והזרעים הוערכו לנביטה, תרדמה ותמותה. בעוד שלעתים קרובות ניתן להבחין בין זרעים מתים בבירור לבין זרעים חיים לא מונבטים בעין, זרעים רדומים זוהו באופן חד משמעי באמצעות מבחן קולורימטרי סטנדרטי של טטרזוליום כלוריד לכדאיות זרעים.
מבוא
המטרה הכללית של שיטה זו היא להעריך הישרדות זרע ובמהימנות לאורך זמן בתנאי שדה.
בנק זרעי קרקע הם עתודה התפזרו, זרעי קיימא עדיין ungerminated מופצים גם על פני הקרקע, בתוך חול משטח, או בתוך פרופיל הקרקע, אשר עשוי להימשך זמני או במשך שנים רבות 1,2. כאשר שיטות קבורות זרע דומה לזו המוצגת כאן יושמו מחקר 17 שנים באמצעות כמה עשרות מינים, זרעי קיימא נמצאו רבי מהמינים נבדקו 3. תרדמת זרעים היא לחסום זרע נביטה עד השילוב המתאים של תנאי שתיל הישרדות להתעורר 4. נותרים רדומים יכול להרשות זרעים לשרוד בתנאים קשים, כגון טמפרטורות חורף נמוכות, הגבלה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. לאסוף זרע ממינים מרובים או מבוקרת צלבים של מין יחיד
הערה: זה זרע למשל בשימוש מ 15 סוגים הדדית בתוך annuus המינים Helianthus (חמניות) באמצעות פרא, היברידי, וסוגי יבול כמו (המייצר זרע) האימהי ההורה.
- בסוף עונת הגידול, לאסוף ראשי זרע בוגרים בשקיות שכותרתו. זרע נקי מזרע מוץ ומניחים מעטפות שכותרתו עם סוג צלב הורי בפורמט סטנדרטי (דהיינו אב x האימהית).
- זרע גורף יחד במעטפות גדולות באמצעות כמויות שווות של זרע ממספר שווה של....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
סוגים צלב עם אחוז אלל הורות ועל היבול אימהי מגוון (טבלה 1) שונים ברחבי תאריכי הסרה באחוזים מונבטים, ungerminated, וזרעים מתים (איור. 2 ו -3). באמצעות בדיקות TZ של זרעי ungerminated, מצאנו כמה זרעים רדומים באמת על סילוקו השני (בתחילת האביב) (טבלה 2), בעוד כל הזרעים ungerminated ידי ההסרה השלישית (האביב) נמצאו רדום באמת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כאן אנו מציגים שיטות באמצעות רצועות קבורת הזרע להתבונן זרע נביטה, תרדמת ותמותה של מלאי מקור מגוונים בתקופות זמן שנבחרו מראש בתחום. היתרונות של שימוש רצועות ולא מנות בודדות לשכב (1) מהירות רצועה ובניית תא על בריאה של מנות בודדות; ו (2) הקלות והמהירות של הסרת תאים מרובים בתנועה אחת ללא הסכנה של השמטת חבילה או הסרה אחד שלא בכוונה. כפי שני מבין המועדים להסרת בדוגמה המוצגת כאן היו בחודשי החורף כאשר הקרקע היא קשה והן מבחינת התנאים הם קרים, שיטה זו מפחיתה הן העבודה ואת הפוטנציאל לטעויות .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המענקים להערכת סיכונים ביוטכנולוגית מס' תחרותי 2006-39454-17438 ל- A. Snow, K. Mercer ו- H. Alexander ממשרד החקלאות של ארצות הברית, המכון הלאומי למזון וחקלאות. ניסויים בשיטה זו נערכו ונתמכו על ידי תחנת השדה של אוניברסיטת קנזס, יחידת מחקר של הסקר הביולוגי של קנזס ואוניברסיטת קנזס. המחברים רוצים להודות ל-P. Jourdan ו-E. Regnier על סקירות מועילות על גרסאות קודמות של כתב היד הזה. בנוסף, עבודה זו נעזרה בתרומות של הצוות בתחנת השדה של אוניברסיטת קנזס, חוות ווטרמן באוניברסיטת אוהיו סטייט (OSU), מרכז הגרמפלזמה של צמחי הנוי של USDA ב-OSU, והמעבדה לביולוגיה של זרעים במחלקה לגננות ומדעי הגידולים ב-OSU, במיוחד E. Renze, S. Stieve, A. Evans, ו-E. Grass....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מעטפות מטבעות קטנות | כל | ||
| מעטפות מטבע גדולות | כל | ||
| רשת יתושים פוליאסטר משורשת עדינה | כל | ||
| אקדח דבק בטמפרטורה גבוהה | כל | ||
| מקל דבק בטמפרטורה גבוהה ממלא | מחדש כל | ||
| סמן קבוע תעשייתי | כל | ||
| תוויות גינה | מפלסטיק כל | ||
| מספריים | כל | ||
| חפירה | כל | ||
| רשת מתכת בד קשה | כל | ||
| דגלי מודד, צבעים מרובים | כל | ||
| עיתון רטוב | כל | ||
| מצנן | כל | ||
| נייר כתמים | כל | ||
| צלחות פטרי | כל | ||
| טמפ' תא גידול מבוקר | כל | ||
| סכיני גילוח | כל | ||
| כלי פטרי | כל | ||
| טטרזוליום כלוריד | כל | ||
| מים | כל | ||
| חום חממה | כל |
מקורות
- Walck, J. L., Baskin, J. M., Baskin, C. C., Hidayati, S. N. Defining transient and persistent seed banks in species with pronounced seasonal dormancy and germination patterns. Seed Sci Res. 15 (3), 189-196 (2005).
- Alexander, H. A., Schrag, A. M.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
