Flagellar मोटर कार्यों की biophysical विशेषता

Introduction

Flagellar मोटर्स पेचदार बाह्य तंतु घूर्णन द्वारा तैरने के लिए कोशिकाओं को सक्रिय करें। टोक़ की राशि मोटर कशाभिका (यानी, चिपचिपा लोड) का एक दिया अवधि के लिए उत्पन्न कर सकते हैं तैराकी गति निर्धारित करता है। दूसरी ओर, रोटेशन की दिशा में स्विच करने की क्षमता रसायन, एक प्रक्रिया chemotaxis रूप में जाना जाता है के जवाब में सेल प्रवास को नियंत्रित करता है। Chemotaxis और गतिशीलता डाह जा रहा कारकों ^1-3, flagellar मोटर्स ⁴ वर्ष से अधिक अच्छी तरह से विशेषता की है। बढ़ते सबूत अब पता चलता है कि मोटर एक mechanosensor रूप में कार्य करता है - यह यंत्रवत् ठोस substrates ^5,6 की उपस्थिति का पता लगाता है। इस क्षमता की संभावना सतह उपनिवेशवाद और संक्रमण ^5.7 ट्रिगर में मदद करता है। नतीजतन, तंत्र जिससे मोटर होश सतहों और शुरू संकेतन महत्व ^8,9 के हैं।

कशाभ मोटर आसानी से flagell tethering द्वारा अध्ययन किया जा सकता हैउम एक सब्सट्रेट करने के लिए और सेल रोटेशन देख। इस तरह के टेदरिंग पहले सिल्वरमैन और शमौन, जो विरोधी हुक एंटीबॉडी ^{10 के} साथ ई कोलाई में एक polyhook उत्परिवर्ती और कांच substrates के लिए सफलतापूर्वक जुड़ी हुक के साथ काम करके हासिल की थी। सीमित सेल परख सक्षम शोधकर्ताओं ने रासायनिक उत्तेजनाओं की एक किस्म के लिए मोटर का स्विच की प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए। उदाहरण के लिए, Segall और सह कार्यकर्ताओं रासायनिक iontophoretic pipettes की सहायता के साथ सीमित कोशिकाओं को प्रेरित किया। सीडब्ल्यू _{पूर्वाग्रह} में इसी परिवर्तन के लिए उन्हें सक्षम chemotaxis नेटवर्क ^11,12 में अनुकूलन के कैनेटीक्स को मापने के लिए (समय मोटर्स के अंश का दक्षिणावर्त, सीडब्ल्यू स्पिन)। जबकि सीमित सेल परख स्विच प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने में प्रभावी था, यह केवल चिपचिपा भार ¹³ की एक सीमित रेंज पर मोटर यांत्रिकी में अंतर्दृष्टि की पेशकश करने में सक्षम था। इस समस्या को दूर करने के लिए, रयु और सह कार्यकर्ताओं सतहों के लिए अटक कोशिकाओं पर स्टब्स फिलामेंट के लिए गोलाकार, लेटेक्स मोती सीमित। मोती थेतो कमजोर ऑप्टिकल जाल ¹⁴ के साथ वापस फोकल इंटरफेरोमेट्री का उपयोग कर लगाया। विभिन्न आकार के मोतियों के साथ काम करके, शोधकर्ताओं भार का एक बहुत व्यापक रेंज पर मोटर अध्ययन कर सकता है। इस परख बाद में युआन और बर्ग, जो एक photomultiplier आधारित मनका-ट्रैकिंग लेजर अंधेरे क्षेत्र रोशनी के साथ संयुक्त रूप से विकसित तकनीक से सुधार हुआ है। सीमित सोने nanobeads कि इतने छोटे थे (~ 60 एनएम) है कि बाहरी चिपचिपा प्रतिरोध रोटेशन ^15,16 करने के लिए आंतरिक चिपचिपा प्रतिरोध की तुलना में कम थे की उनकी पद्धति सक्षम ट्रैकिंग। यह ई कोलाई में अधिकतम प्राप्त गति (~ 300 हर्ट्ज) की माप के लिए नेतृत्व किया। वी alginolyticus में, इसी तरह मनका assays के मध्यवर्ती चिपचिपा भार (~ 700 हर्ट्ज) ¹⁷ में सक्षम कताई दरों की माप। (शून्य लोड से पास-स्टाल के लिए) चिपचिपा भार के पूरे संभव सीमा से अधिक मोटर प्रतिक्रियाओं की माप सक्षम करके, मनका assays टी समझने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण प्रदान की biophysicalorque पीढ़ी प्रक्रिया ^18,19।

हाल ही में, हम युआन-बर्ग परख संशोधित ऑप्टिकल चिमटी हमें सक्षम है कि व्यक्ति की मोटरों ^{से 6} सटीक यांत्रिक उत्तेजनाओं लागू करने के लिए शामिल करने के लिए। इस तकनीक का उपयोग करना, हम पता चला कि बल-जनरेटर है कि मोटर बारी बारी से गतिशील mechanosensors हैं - वे चिपचिपा भार में बदलाव के जवाब में फिर से तैयार करना। ऐसा नहीं है कि इस तरह के लोड संवेदन रेंगनेवाले बैक्टीरिया में सेल भेदभाव से चलाता है, हालांकि तंत्र अस्पष्ट रहते संभव है। यह भी संभावना है कि अन्य प्रजातियों में flagellar मोटर्स हालांकि प्रत्यक्ष सबूत की कमी है, mechanosensitive ²⁰ भी कर रहे हैं। यहाँ, हम कशाभ तंतु ¹⁵ के लिए सीमित लेटेक्स मोतियों की रोटेशन पर नज़र रखने के लिए photomultiplier आधारित (पीएमटी) दृष्टिकोण पर चर्चा की। ultrafast कैमरों के साथ ट्रैकिंग की तुलना में, photomultiplier-सेटअप फायदेमंद है क्योंकि यह अपेक्षाकृत वास्तविक समय में और लंबे ड्यूरा अधिक एकल मोती ट्रैक करने के लिए सीधा हैमाहौल। यह विशेष रूप से उपयोगी है जब पर्यावरण उत्तेजनाओं ²¹ के कारण लंबे समय कशाभ मोटर परिसरों में remodeling का अध्ययन कर रहा है। हालांकि हम विस्तार से विशेष ई कोलाई के लिए प्रोटोकॉल, वे आसानी से अन्य प्रजातियों में flagellar मोटर्स के अध्ययन के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

Protocol

1. सेल तैयार

1. 10 एमएल ताजा टीबी में 100 कमजोर पड़ने: tryptone शोरबा (टीबी, 1% Peptone, 0.5% NaCl) 1 पर टीका के द्वारा पीछा में एलील ^15,22 चिपचिपा Flic ले जाने वांछित तनाव की रात भर संस्कृतियों आगे बढ़ें। आयुध डिपो के ₆₀₀ = 0.5 जब तक एक प्रकार के बरतन इनक्यूबेटर में 33 डिग्री सेल्सियस पर संस्कृति विकसित।
2. के लिए 1,500 XG पर गोली कोशिकाओं के 5 - 7 मिनट और फिर से फैलाने गोली सख्ती फिल्टर निष्फल गतिशीलता बफर के 10 एमएल में (MB, 10 मिमी फॉस्फेट बफर: 0.05-0.06 एम NaCl, 10 ^-4 एम EDTA, 1 माइक्रोन methionine, 7.0 पीएच)।
3. दोहराएँ कदम 1.2 दो बार और 1 एमएल एमबी में अंतिम गोली फिर से फैलाने के।
4. (- 12 सेमी लंबा, 0.58 मिमी भीतरी व्यास 7) आगे और पीछे 21 से 23 गेज पॉलीथीन ट्यूबिंग से जुड़े एडाप्टर के साथ दो सीरिंज के बीच ~ 75 बार गुजर द्वारा निलंबन कतरनी। 45 S - 30 के लिए बाल काटना के लिए कुल समय सीमा।
5. 5-7 मिनट के लिए 1,500 XG पर sheared कोशिकाओं अपकेंद्रित्र और फिर से फैलानेएमबी की 500 μL - 100 में गोली।

2. स्लाइड तैयार

1. एक कवर पर्ची और एक खुर्दबीन स्लाइड के बीच दो दो तरफा चिपकने वाला टेप sandwiching द्वारा एक इमेजिंग कक्ष तैयार करें। chemotaxis assays के लिए, किसी भी microfluidic चैम्बर कि एमबी और रासायनिक उत्तेजक के आदान प्रदान के लिए सक्षम बनाता है रोजगार।
2. चैम्बर में 0.01% पाली एल लाइसिन समाधान जोड़ें और 5 मिनट के बाद धीरे MB के साथ सतहों कुल्ला (80 - 100 μL)।
3. सेल निलंबन के 40 μL के चेंबर में जोड़ें और कांच की सतह के लिए कुर्की के लिए पर्याप्त समय की अनुमति (7 - 8 मिनट)। चैंबर के एक तरफ 100 μL एमबी जोड़ते समय दूसरी ओर से एक फिल्टर पेपर के साथ समाधान बाती से unstuck कोशिकाओं बाहर प्रवाह।
4. लेटेक्स मोतियों की 15 μL कक्ष में और मोती पर्याप्त समय बसा है और कोशिकाओं को संलग्न करने की अनुमति - 10 जोड़े (7 - 8 मिनट)। 2.3 कदम में वर्णित है, मोती unstuck को दूर करने के रूप में धीरे, एमबी की 100 μL से कुल्ला। मनका-सी की एक श्रृंखला का उपयोगप्रयोगों के रूप में एक अच्छा विपरीत उपलब्ध है इतने लंबे समय के लिए माहिर।

3. मनका ट्रैकिंग

1. एक खुर्दबीन मंच पर नमूना प्लेस और मोटर्स से जुड़ी मोती के लिए सतह को स्कैन। टिप्पणियों बनाने के लिए हालांकि चरण माइक्रोस्कोपी आवश्यक नहीं है एक 40x चरण उद्देश्य का उपयोग करें। वैकल्पिक रूप से, इतने लंबे समय के रूप में पर्याप्त विपरीत स्पष्ट रूप से एक काले रंग की पृष्ठभूमि पर एक उज्ज्वल मनका भेद करने के लिए बनाए रखा है रोजगार उज्ज्वल क्षेत्र इमेजिंग।
2. एक बार एक मनका चयनित किया गया है, के रूप में चित्रा 1 बी में दिखाया गया है एक पूर्व निर्धारित कोने में मनका की स्थिति के लिए laterally चरण के लिए कदम। एक ही कोने पर स्थिति मोती सुनिश्चित करने के लिए कि मनका के रोटेशन की दिशा सही ढंग से जाना जाता है। आदर्श मनका प्रक्षेपवक्र लगभग परिपत्र है लेकिन अण्डाकार प्रक्षेप पथ स्वीकार्य हैं।
3. दो बार मोटर अलियासिंग से जुड़े त्रुटियों से बचने के लिए की घूर्णी आवृत्ति की तुलना में नमूने आवृत्ति उच्च बनाए रखें। इस काम में, एक मोटर कि कम से घूर्णन गया था का उपयोग50 हर्ट्ज और आवृत्तियों है कि 10 गुना अधिक (500 हर्ट्ज) थे पर नमूना, एक चिकनी संकेत प्राप्त करने के लिए।

4. डेटा विश्लेषण

1. केंद्र और affine परिवर्तनों के साथ पीएमटी उत्पादन वोल्टेज और प्रक्षेप पथ में सही अण्डाकार पैमाने पर अगर ²³ की जरूरत है। रोटेशन दरों ¹⁷ निर्धारित करने के लिए एक शक्ति स्पेक्ट्रम विश्लेषण का प्रयोग करें।
2. ध्रुवीय कोण, θ (टी) = atan (y (टी) / एक्स (टी)) निर्धारित करते हैं। मोटर की गति में बदलाव का निर्धारण करते हैं और ω की गणना के द्वारा समय पर स्विच ^14।
3. मोटर गति डेटा सुचारू करने के लिए एक मंझला फिल्टर रोजगार। दो पूर्ण घुमाव पर एक फिल्टर खिड़की ^23,24 सिफारिश की है।

Representative Results

Photomultiplier सेटअप चित्रा 1 ए में दिखाया गया है। यह महत्वपूर्ण है कि PMTs ब्याज की माला से बिखरे हुए तरंग दैर्ध्य की सीमा पर उच्च संवेदनशीलता है। PMTs यहाँ कार्यरत दिखाई और लगभग अवरक्त पर्वतमाला में काम करते हैं, और एक हलोजन प्रकाश स्रोत से प्रकाशित मोतियों से बिखरे हुए प्रकाश का पता लगाने में सक्षम थे। इष्टतम प्रकाश व्यवस्था की स्थिति और आपूर्ति voltages एक सेटअप से दूसरे को अलग अलग होंगे। इस काम में इस्तेमाल सेटअप, एक पीएमटी लाभ ~ 10 ⁴ - 10 ⁵ पर्याप्त साबित कर दिया। प्रत्येक photomultiplier एक 3 एक्स 1 मिमी भट्ठा photomultiplier के सामने तैनात लिए छोड़कर कवर किया गया था। slits सेल नमूना प्रकाश से photomultipliers प्रवेश कर सकते हैं में इस क्षेत्र की सीमा है, और दो slits एक दूसरे के orthogonal रहे हैं। एक घूर्णन मनका सही स्थान (चित्रा 1 बी) पर तैनात किया जाता है, photomultiplier बढ़ जाती है में प्रवेश करने वाले प्रकाश की मात्रा मनका रूप में आता हैदेखें और अपने परिपत्र पथ के रूप में कम हो जाती है में यह दृश्य से दूर ले जाता है। sinusoidal पीएमटी वोल्टेज outputs की आवृत्तियों रोटेशन की गति से संकेत मिलता है और दो संकेतों के बीच मतभेद चरण रोटेशन की दिशा का संकेत मिलता है। एक आस्टसीलस्कप का उपयोग पीएमटी outputs प्रदर्शित करने के लिए वास्तविक समय में मनका प्रक्षेप पथ के दृश्य के लिए सक्षम बनाता है।

समय-अलग पीएमटी का संकेत है, वाई (टी) और एक्स (टी), एक प्रतिनिधि मोटर से चित्रा 2A में दिखाया जाता है। दो slits के orthogonality दो संकेतों के बीच एक चरण अंतराल परिचय। संकेत आयाम संकेत करने वाली शोर अनुपात के रूप में अच्छी तरह से रोटेशन की सनक पर निर्भर करते हैं। मनका की इसी प्रक्षेप पथ चित्रा 2 बी में संकेत कर रहे हैं।

गति एक Chey में एक प्रतिनिधि मोटर से मापा के एक हिस्टोग्राम - नष्ट कर दिया तनाव चित्रा 3 ए में दिखाया गया है 25 के साथ सीमित मोटर्स के लिए पिछली रिपोर्टों के साथ संगत कर रहे हैं। मनका पहले, निचले सही कोने में तैनात किया गया था के रूप में चित्रा 1 बी में योजनाबद्ध में देखा। इसी कोणीय गति चित्रा 3 बी (शीर्ष पैनल) में दिखाया गया है। आसन्न निचले बाएँ कोने में मनका पोजिशनिंग मोटर गति पर हस्ताक्षर (नीचे पैनल) का उलटा में हुई। इस प्रकार, एक बगल कोने में मनका चलती मोटर रोटेशन की दिशा मनाया बदल जाएगा। इस संबंध में तिरछे विपरीत कोनों समान हैं। इसलिए यह माप के दौरान मनका के स्थान का पता करने के लिए सही ढंग से स्विचिंग गतिशीलता निर्धारित करने के लिए महत्वपूर्ण है। चित्रा -3 सी रोटेशन के दो दिशाओं के बीच एक जंगली प्रकार के मोटर की दोहराया संक्रमण से पता चलता है।

डेटा-अधिग्रहण सॉफ्टवेयर के लिए कस्टम कोड पहले काम से अनुकूलित किया गया एक कंप्यूटर ¹⁵ पर डेटा रिकॉर्ड करने के लिए। पीएमटी उत्पादन एसी-युग्मित किया गया था और कम पास 100 हर्ट्ज की एक आवृत्ति के साथ कटऑफ फ़िल्टर। वास्तविक समय पर नज़र रखने के लिए एक आस्टसीलस्कप के लिए फ़िल्टर outputs जोड़ने से सक्षम किया गया था।

चित्रा 1: मनका ट्रैकर सेटअप। ए) पीएमटी आधारित ट्रैकिंग सेटअप के योजनाबद्ध। बी) के दो orthogonal slits के लिए मनका (काला क्षेत्र) रिश्तेदार आदर्श स्थिति। प्रक्षेपवक्र बिंदीदार रेखा ने संकेत दिया है। सनक ई डॉटेड सर्कल की त्रिज्या है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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चित्रा 2: पीएमटी आउटपुट। ए) कम पास दो photomultipliers से फ़िल्टर आउटपुट, केंद्रित / स्केलिंग के बाद। बी) मनका प्रक्षेप पथ पीएमटी डेटा, 3 खत्म हो चुका है जांचा से प्राप्त की। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 3: मनका ट्रेजेकटोरीज़। ए) एक प्रतिनिधि मोटर के सीसीडब्ल्यू केवल गति की हिस्टोग्राम। बी) एक सीसीडब्ल्यू केवल मोटर निचले सही कोने (शीर्ष पैनल) पर imaged की घूर्णी गति। एक ही मोटर के घूर्णी गति जब निचले बाएँ कोने (नीचे पैनल) पर तैनात हैं। सी) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

आदेश सीमित मनका-ट्रैकिंग और मोटर-torques का सही आकलन की सुविधा के लिए, निम्न जानकारी की समीक्षा की जानी चाहिए। जब flagellated कोशिकाओं के साथ इन माप प्रदर्शन, बाल काटना एक महत्वपूर्ण कदम है। बाल काटना जिससे यह सुनिश्चित करना है कि मोटर पर चिपचिपा लोड मुख्य रूप से मनका की वजह से है और 10% त्रुटि ¹⁶ के भीतर अनुमान लगाया जा सकता है, एक मात्र ठूंठ को कशाभ रेशा कम कर देता है। बाल काटना भी कसकर वितरित सनकीपन (<मनका व्यास ¹⁴⁾ के साथ परिपत्र प्रक्षेप पथ पाने की संभावना में सुधार। स्वच्छंद प्रक्षेप पथ, जो ट्रैकिंग में और चिपचिपा drags की गणना, साथ ही गरीब संकेत शोर अनुपात में जिसके परिणामस्वरूप में त्रुटियों यौगिकों में अनुचित बाल काटना का परिणाम है। एक आस्टसीलस्कप का उपयोग इस तरह के डेटा की तेजी से समाप्त करने की अनुमति देता है। चूंकि कशाभ तंतु के biomechanical गुण प्रजातियों के साथ भिन्न करने की उम्मीद कर रहे हैं, बाल काटना तरीकों की संभावना टी में पर्याप्त बाल काटना सुनिश्चित करने के लिए अनुकूलित किया जा करने की आवश्यकता होगीवह ब्याज की बैक्टीरिया। बाल काटना के साथ जुड़े त्रुटियों को कम करने का एक प्रभावी तरीका कोशिकाओं है कि जीन है कि रेशा प्रोटीन सांकेतिक शब्दों की कमी के साथ काम करने के लिए है। जांच मोती तो विरोधी हुक एंटीबॉडी के माध्यम से हुक करने के लिए सीधे जुड़ा जा सकता है।

एक मनका कि उचित सीमित है चुनौतीपूर्ण हो सकता है ढूँढना। इसका कारण यह देखने के क्षेत्र में सबसे मोती या तो सेल निकायों या कांच की सतह के लिए अटक जाएगा। इस तरह के मोती आसानी से तेज ध्यान में लाया जा सकता है। अन्य मोती कांपना करने के लिए दिखाई देते हैं या बड़े आयाम या बड़े सनकीपन के साथ दिख बारी बारी से होगा (> 1.5 - 2x मनका व्यास)। ये आमतौर पर तंतु है कि पूरी तरह से sheared या एक हवाई जहाज़ है कि फोकल हवाई जहाज़ के लिए इच्छुक है में बारी बारी से नहीं किया गया flagellar के लिए सीमित कर रहे हैं। इस तरह के मोतियों की सैम्पलिंग आम तौर पर उच्च शोर में परिणाम होगा, और चिपचिपा भार में समय-रूपों एक दिया मनका आकार के लिए मोटर्स torques की एक मूल्यवान समझना हो सकता है। सीमित मोतियों का एक छोटा सा अंश यादृच्छिक गुजरना होगागति; ये केवल ब्राउनियन रोटेशन के दौर से गुजर रहे हैं। मोतियों का एक अंश धुंधला दिखाई देगा और आसानी से ध्यान में नहीं लाया जा सकता है। इन सबसे मोटर्स जो उचित रूप से सीमित कर दिया गया है और ब्याज की मोटरों हैं होने की संभावना है।

यहाँ वर्णित एक के रूप में इस तरह के ट्रैकिंग एकल मोटर की सीमाओं के बीच उच्च throughput प्रयोगों का संचालन करने में असमर्थता है। एक उच्च गति कैमरा है कि छवियों के हित के एक बड़े क्षेत्र में इस संबंध में फायदेमंद हो सकता है। अन्य सीमाओं के कई संकेत PMTs के मद्देनजर क्षेत्र में निकट दूरी पर घूर्णन मोतियों से उत्पन्न होने वाली त्रुटियों के साथ जुड़े शामिल हैं। अंत में, दो photomultiplier slits के संबंध में दर्ज की गई मनका की सही स्थिति के निर्धारण में त्रुटियों स्विचिंग गतिशीलता के imprecise आकलन में परिणाम होगा।

यहाँ वर्णित व्यवस्था के लाभ लंबी अवधि खत्म हो गया है और वास्तविक समय में मोतियों की रोटेशन को ट्रैक करने की क्षमता शामिल है। इसत्रुटि प्रवण प्रक्षेप पथ का तेजी से समाप्त, कुछ है कि शायद मुश्किल ultrafast कैमरों के साथ प्राप्त करने के लिए सक्षम बनाता है। इसके अतिरिक्त, कुछ संशोधनों के साथ इस सेटअप उत्तेजनाओं की एक किस्म के लिए कोशिकाओं के अधीन करने के लिए डिज़ाइन किया गया assays के साथ एकीकृत किया जा सकता है। ठंडा thermoelectric ²⁶ के साथ संयुक्त, तकनीक थर्मल उत्तेजनाओं को अलग-अलग मोटर्स की प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए नियोजित किया जा सकता है। ऑप्टिकल चिमटी के साथ एकीकरण, यांत्रिक उत्तेजनाओं के जवाब में व्यक्ति मोटर्स के पुनर्गठन की माप सक्षम कर सकते हैं के रूप में हाल ही में ⁶ से किया गया है। अंत में, रासायनिक उत्तेजक करने के लिए मोटर के अनुकूलन के लिए एक उपयुक्त छिड़काव चैम्बर के उपयोग के साथ मापा जा सकता है और ¹¹ पंप।

ज्ञात बैक्टीरियल प्रजातियों में से एक बहुमत गतिशील होते हैं और कशाभ की मध्यस्थता गतिशीलता प्रकृति में प्रमुख है। यहां प्रदर्शन के तरीकों संरचनात्मक-remodeling में अंतर्दृष्टि के विकास और अनुकूलन क्षमता ओ में सहायता करने के लिए जारी रखने की उम्मीद कर रहे हैंकशाभ मोटर च।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Poly-L-lysine Solution (0.1%)	Sigma-Aldrich	P8920	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p8920?lang=en&region=US
Polybead Microspheres	Polysciences, Inc.	7307	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p8920?lang=en&region=US
1 mL Luer Slip Tip Syringe	Exel Int.	26048	http://www.exelint.com/tuberculin_syringes.php
Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter 23-gauge	Becton, Dickinson and Company	427565	http://www.bd.com/ds/productCenter/ES-LuerStubAdaptors.asp
Polyethylene tubing	Harvard Apparatus	59-8325	http://www.harvardapparatus.com/laboratory-polye-polyethylene-non-sterile-tubing.html
Photomultiplier Tubes	Hamamatsu	R7400U-20	Spectral response range of 300 to 920 nm, Peak wavelength 630 nm,  0.78 ns response time  http://pdf1.alldatasheet.com/datasheet-pdf/view/212308/HAMAMATSU/R7400U-20.html
3 x 1 mm precision slits	Edmund Optics	NT39-908	2 slits mounted at right angles to one another on photomultiplier tubes
Oscilloscope	Tektronix	TBS 1032B	Alternative brands are acceptable. Digital Oscilloscope, TBS 1000B Series, 2 Analogue, 30 MHz, 500 MSPS, 2.5 kpts  http://www.tek.com/oscilloscope/tbs1000b-digital-storage-oscilloscope
8 Pole LP/HP Filter	Krohn-Hite	3384	Alternative brands are acceptable. A frequency range from 0.1 Hz to 200 kHz is recommended.    http://www.krohn-hite.com/htm/filters/PDF/3384Data.pdf
Optiphot microscope	Nikon	NA	Any upright or inverted phase microscope can be used. https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=754
50:50 (R:T) Cube Beamsplitter	ThorLabs	BS013