Summary
Behavioral testen is de gouden standaard voor het bepalen van de resultaten na hersenletsel, en kan de aanwezigheid van ontwikkelingsstoornissen bij zuigelingen en kinderen te identificeren. Neurologische reflexen zijn een vroege indicator van deze afwijkingen. Een groot aantal eenvoudig te realiseren ontwikkelingsstoornissen reflex testen in de neonatale knaagdieren werden ontwikkeld en beschreven.
Abstract
Neurologische reflex testen wordt vaak gebruikt in de klinische praktijk om de rijping van het zenuwstelsel te beoordelen. Neurologische reflexen ook wel primitieve reflexen. Ze zijn gevoelig en in overeenstemming met latere uitkomsten. Abnormale reflexen worden beschreven als een afwezigheid, persistentie, opnieuw verschijnen of latentie reflexen, voorspellende indices van kinderen die een hoog risico op neurologische aandoeningen. Diermodellen van neurologische handicap, zoals hersenverlamming, vertonen vaak afwijkende ontwikkelingsstoornissen reflexen, zoals in de menselijke baby's zouden worden nageleefd. De beschreven technieken in diverse neurologische reflexen in neonatale ratten. Neurologische reflex testen biedt de onderzoeker een testmethode die anders niet beschikbaar in zulke jonge dieren. De hier gepresenteerde methode is bedoeld om onderzoekers te helpen bij het onderzoeken van mijlpalen in de ontwikkeling van pasgeboren ratten als een methode voor het detecteren early-onset brain letsel en / of het bepalen van de effectiviteit van therapeutische interventies. De hier gepresenteerde methodologie is erop gericht om een algemene richtlijn voor onderzoekers.
Introduction
Neurologische reflexen, of mijlpalen in de ontwikkeling, zijn een van de vroegste evaluaties gebruikt op menselijke pasgeborenen en zuigelingen. Neurologische reflexen onwillekeurige en herhaalde bewegingen die hersenstam en ruggenmerg reflexen te tonen. Rijping van hogere corticale netwerken gekenmerkt door zich ontwikkelende migratie, myelinisatie en synaptogenese bevorderen willekeurige controle en corticale inhibitie. Veranderingen in het normale verloop van het centrale zenuwstelsel evolutie kan verstoren ontwikkeling van de hersenen, wat resulteert in abnormale corticale bedrading, functioneren en myelinisatie, waardoor neurologische reflex vertragingen of afwezigheid. Human zuigelingen met een hoog risico op neurologische handicap, worden vaak abnormaal vroege reflexen. Abnormale reflexen kunnen presenteren als een vertraging in aankopen, afwezigheid, langdurige aanwezigheid of terugkeer later in het leven, en zijn voorspellend ontwikkelingsstoornissen. 1, 2 Daarom, Is het belangrijk om reflex vertragingen in experimentele modellen van neurologische handicap na te bootsen.
Knaagdieren worden gewoonlijk gebruikt als experimentele modellen. Rat pups altricial toen geboren, en dus te onvolwassen aan specifieke of complexe motorische, zintuiglijke en / of cognitieve gedragstherapie taken uit te voeren. In dit opzicht hun ontwikkelings onvolwassenheid heeft betrekking op zowel hun fysieke en orgel ontwikkeling. Ratten zijn geboren haarloze met een onvermogen om thermoregulate, zijn blind, en niet in staat om te lopen. Verwijzend naar hersenontwikkeling aanzienlijke corticale rijping plaatsvindt postnataal. Pasgeboren ratten (dag van de geboorte aangeduid als postnatale dag 1; PD1) zijn voorgesteld om een ontwikkeling van het brein niveau dat vergelijkbaar is met een premature menselijk brein van 23 te bereiken - 28 weken zwangerschap, terwijl PD7-10 pups zijn gelijkwaardig aan near- menselijk brein termijn. 3, 4, 5, 6Deze correlatie is gebaseerd op bruto anatomische analyses echter andere maatregelen van het brein zoals myelinisatie en amplitude geïntegreerd electroencephalograms zijn eveneens beschreven. 5, 7 bijvoorbeeld, pre-oligodendrocyten zijn de belangrijkste cellen in het ontwikkelende menselijke foetale hersenen 23-32 weken in utero en maturatie dit stadium correspondeert met een PD1-3 knaagdieren. 5, 8, 9, 10 Bovendien myelinisatie begint in utero bij mensen terwijl bij jonge ratten blijkt in de voorhersenen rond PD7-10; de pasgeborene knaagdierenbrein blijft grotendeels un-gemyeliniseerde. 11, 12 Tucker et al. gevonden dat de amplitude geïntegreerde elektro patroon van een P1 rat te vergelijken met een 23 weken zijn gestatie menselijke foetus, terwijl een PD7 en PD10 pup is te vergelijken met een 30-32 week en termijn zuigeling, respectievelijk. 7 Om deze redenen, pasgeboren reflex testen in de neonatale rat pups biedt een mogelijkheid voor het vastleggen van de ontogenie en / of verstoring van de ontwikkeling van de hersenen.
De batterij reflexen hieronder beschreven zijn afgeleid van studies van WM Fox en A. Lubics 13, 14 WM Fox was een van de eerste onderzoekers met betrekking tot de ontogenie van reflexen in de muis. 13 Deze reflexen omvatten, maar zijn niet beperkt tot, ledematen grijpen en plaatsen, klif vermijding, rechtzetten, versnelde rechtzetten, gang, auditieve schrikreactie, houding en opening van de ogen. Zowel voorpoot en achterpoot greep (hierna handpalm en plantaire greep bij de mens, respectievelijk) worden vergemakkelijkt door spinale reflexen en corticospinal remming van niet-primaire motorische gebieden. 15, 16 achterbeen plaatsing (voetzoolreflex) weerspiegelt rijping van de corticospinal darmkanaal. 16, 17, 18 Cliff vermijden (beschermende responsen) oprichten (doolhof) en versnelde oprichten omvatten integratie en communicatie tussen sensorische input en motoruitgang (zoals die betrokken zijn bij de vibrissae en vestibulaire systemen). 19, 20, 21 Gait weerspiegelt motoriek. 14 Auditieve schrikreactie beoordeelt akoestische stimulatie en synaptische verbindingen van grote neuronen in de nucleus reticularis pontis caudalis. 21 houding impliceert geschikte corticale-spinale / spinale-corticale uitsteeksels, spierkracht en neuromusculaire innervatie. 22, 23 Maturation van het gamma-aminoboterzuur receptoren correleren met eye opening. 24 Het is belangrijk om in gedachten te houden dat de reflexen weerspiegelen een veel ingewikkelder netwerk en die hier is een algemene correlatie. Bovendien zijn deze reflexen zorgen voor een snelle en eenvoudige methode voor het beoordelen van de neurologische ontwikkeling op zeer jonge leeftijd, waar meer complexe gedragsproblemen testen is niet haalbaar.
Het doel van dit document is een algemene richtlijn voor neurologische reflextesten die gemakkelijk in neonatale ratten experimentele studies opgenomen kan worden. De beschreven methode werd uitgevoerd in Long-Evans neonatale ratten uitgevoerd en kwantificering van de resultaten was gebaseerd op de eerste dag van verschijning. De dag dat het testen reflex wordt geïnitieerd en de gebruikte apparatuur kan worden aangepast om beter bij een ander experimenteel model (zoals verschillende stammen en species). Hiertoe werd het normale fysiologische progressie van reflex rijping in een bepaald diermodel, kunnen onderzoekers de effecten van externe stressoren, endogene manipulaties en / of therapeutische ingrepen op neurodevelopment neonatale ratmodellen evalueren. Kortom, het gebruik van reflexen als een bepaling van hersenrijping voordelig bij het voorspellen perinatale hersenletsel en weerspiegelt latere neurologische resultaten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De Animal Care en gebruik Comite, Health Sciences aan de Universiteit van Alberta keurden alle dierproeven.
Noot: Hoewel dit protocol kan worden aangepast aan andere soorten en stammen, wordt dit protocol geschreven Long-Evans ratten. Deze ratten bleken superieur motor prestaties en gezichtsscherpte in vergelijking met andere knaagdieren stammen. 25 26 Het protocol voor getimede zwangerschappen, voedingssupplementen, moeder ontsteking, en neurologische reflexen is als volgt.
1. Proefdieren
- Bij ratten komen de stallen faciliteit, zich te onthouden van enige interactie voor een dag of twee om hen in staat stellen om te wennen aan hun nieuwe omgeving. Na acclimatisatie, omgaan met de ratten elke dag voor ongeveer vijf dagen, of wanneer de ratten niet meer tekenen van stress. Door de mens veroorzaakte stress kan testresultaten en le veranderenadvertentie naar de zwangerschap verlies.
- Zodra de ratten zijn comfortabel, het fokken begint. Plaats twee vrouwtjes en een mannelijke rat in een dubbeldeks kweekkooi (h = 38 cm, 1800 cm 2 vloeroppervlakte) overnacht (03:00-08:00). Deze kooien voorkomen dat stress en overbevolking. 'S Morgens hand van een transferpipet Spoel de vagina van het vrouwelijke ratten met ongeveer 0,25 ml zoutoplossing. De oplossing wordt in een microcentrifugebuis.
- Plaats de twee vrouwelijke en mannelijke terug in hun respectieve conventionele kooien.
- Bekijk de oplossing verzameld in paragraaf 1.2 onder een lichtmicroscoop (100X) om te bepalen welke fase van de loopsheid de rat ervaart en of zaadcellen aanwezig zijn. Als er zaadcellen, noteer datum embryonale dag (E1) (figuur 1). Als u zwanger bent, geef de vrouw haar eigen kooi op E14.
OPMERKING: De cellen in het vaginale uitstrijkje duidelijk zijn, daarom gebruik maken van een weinig licht setting. Zorg ervoor dat de condensor is afgestemd op de laagste stand. Advertentiealleen de helderheid van het licht te dimmen. Als een helderheid wijzerplaat is beschikbaar, stel deze in op 1.
2. Voedingssupplementen
LET OP: Dit protocol is bedoeld om de therapeutische effecten van voeding broccoli spruit verbruik tijdens de laatste week van de zwangerschap te beoordelen. Groeien de spruiten volgens Wu et al. 27.
- Week de broccoli spruiten zaden voor de 2 - 3 uur. Verspreid de zaden op een aanrecht zaad sprouter doos en zet op een warme ondergrond voor kieming.
- Water de zaden tweemaal per dag, een keer in het uur (8-9 uur) en een keer in het uur (3-4 uur).
- Op dag vijf, plaatst de spruitjes door een venster voor de dag (spruiten moeten twee bladeren elkaar te hebben en zal groen over de dag worden).
- Aan het eind van de dag, het oogsten van spruiten voorzichtig uit het gezeefde box trekken van de broccoli spruiten en lag op een vlak oppervlak te drogen.
- Zodra de scheuten volledig gedroogd, wEigh uit 200 mg nauwkeurig af in een afgesloten plastic zak.
- Beginnend op E14, voer elk zwangere rat 200 mg gedroogde broccolikiemen dagelijks tot PD21 (de dag pups gespeend).
3. Ontsteking
- Om de ontsteking te veroorzaken en te reproduceren witte stof schade bij nakomelingen, injecteren zwangere ratten met lipopolysaccharide (LPS) om de 12 uur op de E19 en E20. Op de dag van de injectie, breng de kooi in het laboratorium van de behuizing faciliteit. Laat de zwangere rat te acclimatiseren en zich kalm gedurende ten minste 1 uur. Wanneer een rat geeft klinische verschijnselen van systemische of permanente nierbeschadiging, zal het onmiddellijk worden gedood en uit het onderzoek.
- Weeg de zwangere dam.
- Oplossen 200 ug / kg LPS (serotype 0127: B8) in 100 pl zoutoplossing. Verstuif de oplossing in een 1 ml spuit met een 30 G naald ½.
- Gebruik een nieuwe naald voor elke injectie. Laat de oplossing op te warmen voor een paar minuten om het ongemak te minimaliseren.
- Noteer de tijd en injecteer de zwangere dam intraperitoneaal. Alternatieve injecties tussen partijen een gelijke verdeling ontstaat.
OPMERKING: Machholz et al. beschrijving van de juiste terughoudendheid en injectie procedures. 28
4. Developmental Reflex Tests
- Op PD1 (geboortedag), verwijder pups van de dam en opnemen geboortegewicht. Plaats de pups terug in hun respectieve kooien en verplaats ze naar het dier faciliteit tot PD3. Hierdoor maternale binding tussen moeder en jong.
- Noteer de reflex testen voor een betrouwbare beoordeling. Stel de videocamera zodat deze bij maximale sluitersnelheid voor beeld-voor-beeld analyse (1 / 1.000 s). Plaatst de videocamera zodat deze direct boven of naast de rattenpup en alle materialen die voor elke reflex. Bijvoorbeeld voor hindlimb plaatsen, plaats de camera naast het rattenpup te zorgen voor optillen en plaatsen van de achterpoot wordt vastgelegd.
- Voor versnelde oprichtend, plaats de camera boven de rattenpup en contacteervlakje teneinde het vermogen van de pup naar rechts in de lucht opnemen.
- Record gewichten dagelijks tot het einde van het experiment. Aan PD3 beginnen neurologische reflex test (Figuur 4). Verplaats kooien in een rustige kamer voor een minimum van 1 uur voorafgaand aan het testen te laten wennen aan de omgeving.
- Voer neurologische reflex testen op een consistente tijd elke dag als ratten zijn nachtdieren. Bijvoorbeeld, testen tussen 09:00-12:00 dagelijks. Houd de pups direct onder een warmtelamp of een warmte-pad te allen tijde een stabiele lichaamstemperatuur van 36,5 ° C te handhaven; rat pups van deze leeftijd verliest warmte gemakkelijk. Meten met een rectale temperatuursensor. Als efficiënt gedaan, hoeft pups lichaamstemperatuur niet veranderen, omdat ze niet van de dam en strooisel lang genoeg worden verwijderd. OPMERKING: Controleer de temperatuur van warmtelamp om te verzekeren dat niet meer dan 37 ° C.
- voorpoot Grasping
- Beginnend op PD3, het gedrag van de voorpoot grijpreflex test. Plaats een stompe stang tegen de palm van elke voorpoot en lichte druk handmatig toepassen. Gelet druk moet iets verdringen voorpoot te kontakt ontstaat waarborgen en de pups kan de stang voelen. Grasping zal verschijnen als buiging van alle cijfers om de staaf. Succesvolle overname van deze reflex treedt op wanneer beide voorpoten grijpen de stang voor twee dagen op een rij.
- Score de voorpoot greep:
0 voor geen enkele grijpen
1 voor een succesvolle grijpen met één voorpoot (links of rechts voorpoot kan hier worden gespecificeerd)
2 voor een succesvolle grijpen door beide voorpoten
- achterbeen Grasping
- Beginnend op PD3, het gedrag van de achterbeen grijpreflex test. Plaats een stompe stang tegen de zool van elke achterpoot en lichte druk handmatig toepassen. Gelet druk moet iets verdringen achterpoot om kontakt ontstaat waarborgen en de pups kan de stang voelen. Succesvolle grijpen van de staaf verschijnt als flexie van de vingers om de staaf. Succesvolle overname van deze reflex treedt op wanneer beide achterpoten begrijpen de hengel voor twee dagen op een rij.
- Score het achterbeen greep:
0 voor geen enkele grijpen
1 voor een succesvolle grijpen één achterpoot (linker of rechter achterpoot kan hier worden vermeld)
2 voor een succesvolle grijpen door beide achterpoten
- Oprichtproef
- Beginnend op PD3, beginnen de oprichtende reflex test. Stevig vast te houden de pup in een liggende positie, met alle vier poten rechtop. Laat of de pup en onmiddellijk start de timer. Oprichtende wordt bereikt wanneer de pup kan draaien / rollen op vier poten, en elke poot loodrecht op het lichaam. Geef elke pup een maximum van 15 s om dit doel te bereiken.
- Score de oprichtende:
0 voor het liggen op de rug (of 15 s voor de maximale geplande tijd)
1 voor het liggen op de zijde (links of rechts kan hier worden vermeld) of het vermogen van de pup naar rechts, maar in de verkeerde houding (of 15 s voor de maximale geplande tijd)
2 voor een succesvolle opricht en passende houding
- achterbeen plaatsing
- Beginnend op PD4, beginnen met het achterbeen plaatsen reflex test. Houd de pup verticaal in de lucht, door de romp. Voorzichtig slag dorsum van de achterpoot met een stomp oppervlak (zoals de rand van een tabel). Een juiste plaatsing reflex is wanneer de rattenpup intrekt gestimuleerde achterpoot, gevolgd door plaatsing van de achterpoot naar beneden op dat oppervlak.
- Score het achterbeen placing reflex:
0 voor geen enkele successen
1 voor het plaatsen van een achterpoot (linker of rechter achterpoot kan hier worden vermeld)
2 voor een succesvolle achterbeen plaatsing voor zowel hindpaws
- Cliff vermijden
- Beginnend op PD4, beginnen de klif vermijding testen. Plaats het rattenpup aan de rand van een vlakke ondergrond, zodat de voorpoten en snuit van de pup zijn over de rand. De juiste resultaat is een beschermende reactie, waarbij de rattenpup zich van de rand van de rots. De experimentator de hand of een schuim landing wordt geplaatst onder de klif naar de pup van de val op te vangen.
- Score de klif vermijden:
0 voor geen beweging of de rand valt
1 voor het doorbreken van de klif bewegen maar met opknoping ledematen
2 voor een succesvolle beweging weg van de rots
- Gang
- Begin de evaluatie van de gang op PD6. Plaats pups in het centrum van een 15 cm Diameter cirkel en laat de pup 30 s om de taak te voltooien. 14 Een succesvolle gang wordt uitgevoerd wanneer de rattenpup kan zowel voorpoten buiten de kring binnen 30 s verplaatsen.
- Ril de gang als de tijd in seconden is van rattenpup buiten de cirkel bewegen. Noteer de tijd die het kost de pup om zowel voorpoten buiten de cirkel te verplaatsen. Record 30 s als de pup niet in staat is om de taak binnen de gegeven tijd te voltooien
- auditieve schrikreactie
- Begin de analyse van de auditieve schrikreactie op PD10. Indiening van een hard geluid (bel) direct via pup te beoordelen of een schrikreactie aanwezig is. Een positieve schrikreactie wordt waargenomen wanneer de pup wordt een 'schokken' beweging van het geluid.
- Score de schrikreacties:
(Of geen) zonder schrikreactie
(Of yes) een positieve schrikreactie
- Houding
- Begin houding analyse van PD12. Plaats pups op een stroef open oppervlak gebruiken en de houding van de pup bij het verplaatsen. Een onvolwassen houding wordt gereflecteerd door het slepen van het abdomen bij het verplaatsen, en loodrecht richten van beide voorpoten en achterpoten opzichte van het lichaam. Een volwassen houding wordt verkregen wanneer de pup de buik van het oppervlak kan optillen en beide voorpoten en achterpoten zijn recht gericht, parallel aan het lichaam, bij het verplaatsen.
- Score de houding:
0 voor geen beweging
1 van onvolwassen lichaamshouding verplaatsen
2 naar volwassen houding tijdens het verplaatsen
- Oog opening
- Begin-eye opening analyse PD12. Noteer de dag beide oogleden geopend:
0 voor geen zichtbare ogen
1 één zichtbaar oog (links of rechts kan hier worden vermeld)
2 twee zichtbare ogen
- Begin-eye opening analyse PD12. Noteer de dag beide oogleden geopend:
- versnelde oprichtende
- Beginnend op PD14, beginnen versnelde oprichtende testen. Plaats de pup in liggende positie 30.48 centimeters boven een schuim landing. Laat de pup en observeer haar vermogen om recht zelf. Oprichtend verwijst wanneer de pup kan draaien om buikligging en land op zijn poten.
- Score de versnelde oprichtende:
0 voor vallende op zijn rug
1 om plat te zijde (links of rechts kan hier worden vermeld)
2 voor de landing op zijn poten
Opmerking: Verschillende types van kwantificering van de reflexen zijn beschikbaar, afhankelijk van de vraag van de onderzoekers. Kwantificering van de reflexen kan worden gedaan als de eerste waarneming van een reflex, eerste dag van verschijning tot het verdwijnen van de reflex, tijd die nodig is om de taak succesvol uit te voeren, de snelheid van de prestaties, en / of verbetering van de prestaties in de tijd. 13, 14, 29, 30, 31 voor de cUIDIGE studie, de eerste dag van verschijning werd gebruikt als een score. Bij het gebruik van multiparous modellen, pups uit hetzelfde nest meestal werken op dezelfde manier als gevolg van hun genetische make-up, in de baarmoeder en postpartum milieu, en nutritionele beschikbaarheid. 32 Derhalve één pup kan niet worden verwerkt als n = 1 als gevolg van afval bias. Pups daarvan binnen een toom kan worden gemiddeld, zodat elk nest een n = 1. 32, 33 tevens verschillende pups binnen hetzelfde nest kan worden geanalyseerd met de gemengde effecten model, dat rekening houdt pups binnen hetzelfde nest. 32, 33
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De tijdlijn van het experimentele ontwerp is weergegeven in figuur 2. 30 De methoden en resultaten zijn eerder gepubliceerd. 30 Het doel van de studie was om te beoordelen of aanvulling van de voeding met broccoli spruiten tijdens de dracht en het spenen periode beschermd de nakomelingen van neurologische vertraging veroorzaakt door in utero blootstelling aan LPS. Getimede drachtige ratten kregen intraperitoneale injecties van zoutoplossing (controle 100 pl) en LPS (200 ug / kg verdund in 100 pl steriele zoutoplossing) voor E19 en E20 om de 12 uur. Willekeurig geselecteerde zwangere moederdieren waren ook dieetsuppletie gedroogde broccolikiemen (200 mg / dag) vanaf E14 tot PD21. LPS werd gebruikt om de moeder ontsteking en broccoli spruiten kregen als een potentiële therapeutische interventie aan het nageslacht te beschermen na te bootsen. Pups zijn natuurlijk geboren op E23 (
geboortegewichten
Analyse van geboortegewichten onthulde een hoofdeffect van de behandeling (F (1,23) = 18,5, 0,0003), voeding (F (1,23) = 6,5, p = 0,02) en een interactie-effect (F (1,23) = 7,4, p = 0,01). LPS, als afspiegeling van maternale ontsteking, geleid pups (5,1 ± 0,2 g) geboren beduidend kleiner dan Saline pups (6,3 ± 0,2 g, Tukey p <0,001), zoutoplossing + broccolispruiten pups (6,2 ± 0,2 g, Tukey p <0,001) en LPS + broccolispruiten pups (6.0 ± 0,1 g, Tukey p <0,01). Geboortegewicht van de LPS + Broccoli spruiten pups waren niet anders dan de controles, wat suggereert dat de broccolikiemen gespaard de LPS pups van groei wordt beperkt.
Neurodevelopmental Reflex Testing
grijpreflex
Geen effecten van de behandeling of een dieet werden waargenomen voor zowel de voorpoot en achterbeen grijpen. Alle pups waren in staat om deze taken uit te voeren.
achterbeen Plaatsing
Een belangrijk effect van de behandeling (F (1,23) = 6,8, p = 0,02) werd gedetecteerd achterbeen brengen. Vergeleken met zoutoplossing (4,3 ± 0,1 dagen, Tukey p <0,05) en zoutoplossing + broccolispruiten (4,3 ± 0,0 dagen, Tukey p <0,05), werden LPS pups aanzienlijk vertraagd (5.1 ± 0.3dagen). Hoewel de prestaties van LPS + Broccoli Sprouts pups verschilden niet van LPS pups, ze niet langer verschilden van controles, wat suggereert een verbetering in deze reflex taak van die pups ontvangen LPS en geen behandeling.
Cliff vermijden
Een belangrijk effect van de behandeling (F (1,25) = 6,0, p = 0,02) na klif vermijding analyse werd gedetecteerd. LPS pups (5,8 ± 0,4 dagen) waren significant gecompromitteerd in het verkrijgen van deze reflex in vergelijking met zoutoplossing (4,4 ± 0,2 dagen, Tukey p <0,05). LPS + Broccoli Sprouts pups niet anders uit te voeren van een van de groepen, hetgeen duidt op een verbetering van de prestaties.
Gang
Een significant effect van de behandeling (F (1,24) = 15,1, p = 0,0007), voeding (F (1,24) = 6,3, p = 0,02), en een interwerking tussen behandeling en voeding (F (1,24) = 9,5, p = 0,005) bleek na analyse gang. Een vertraagde overname van looppatroon waargenomen in LPS pups (9,7 ± 0,4 dagen) vergeleken met zoutoplossing (7,5 ± 0,3 dagen, p Tukey's <0,001), zoutoplossing + broccolispruiten (7,7 ± 0,3 dagen, Tukey p <0,001) en LPS + broccoli Sprouts pups (7,9 ± 0,2 dagen, Tukey p <0,01).
auditieve schrikreactie
Er werden geen verschillen waargenomen.
Oprichtproef
Een geslacht effect werd waargenomen (F (1,43) = 16,3, p = 0,0002) voor het rechtzetten derhalve mannelijke en vrouwelijke pups werden afzonderlijk onderzocht. Er werden geen verschillen waargenomen voor mannen. Bij vrouwen, een hoofdeffect van voeding (F (1,21) = 11,8, p = 0,002) en een interactie-effect (F (1,21) = 15,6,p = 0,0007) werd gevonden. LPS + Broccoli Sprouts pups (4,9 ± 0,4 dagen) waren in staat om recht eerder in vergelijking met LPS pups (6,7 ± 0,6 dagen, p Tukey's <0,05).
versnelde oprichtende
De versnelde oprichtende openbaarde een significant hoofdeffect van de behandeling (F (1,25) = 4,51, p = 0,04). LPS (17,4 ± 0,6 dagen) en LPS + broccolispruiten pups (16,9 ± 0,2 dagen) werden vertraagd uitvoeren versnelde oprichten vergelijking met zoutoplossing (16,0 ± 0,4 dagen) en zoutoplossing + broccolispruiten (16,4 ± 0,5 dagen).
Houding
Een significant interactie-effect van de behandeling en voeding (F (1,24) = 5,8, p = 0,02) werd waargenomen na analyse van houding. LPS + Broccoli Sprouts pups (14,9 ± 0,4 dagen) had een volwassen houding eerder dan LPS (17,0 ± 0,4 dagen, Tukey p <0,05).
Oog opening
Een significant hoofdeffect van voeding (F (1,23) = 4,71, p = 0,04) werd waargenomen met betrekking tot opening van de ogen. Beide Saline + BrSp (15,9 ± 0,1 dagen) en LPS + broccolispruiten pups (15,4 ± 0,2 dagen) bereikte deze reflex eerder dan zoutoplossing (16,0 ± 0,2 dagen) en LPS pups (16,0 ± 0,1 dagen).
Over het algemeen, broccoli spruit verbruik tijdens de late zwangerschap en het spenen periode was in staat om bescherming te bieden tegen LPS-geïnduceerde ontwikkelingsstoornissen vertragingen veroorloven in een aantal van de reflexen onderzocht. Raadpleeg de vermelde artikel voor verdere details. 30
Figuur 1. PoSitive Vaginale Smear. Een voorbeeld van een vaginaal uitstrijkje afgebeeld met een 10x objectief op een lichtmicroscoop. Deze schuif een positieve dia aangegeven door de aanwezigheid van sperma (pijl). Bij het uitvoeren van een vaginaal uitstrijkje kan de loopsheid van de rat worden beoordeeld als ofwel pro-oestrus, oestrus, metestrus of di-oestrus. Dit helpt bij het nauwkeurig timing voedingsbodem voor een hoger slagingspercentage zwangerschap.
Figuur 2. Experimenteel ontwerp tijdlijn. De experimentele tijdslijn voor het evalueren van nakomelingen van moederdieren gegeven intraperitoneale injecties van LPS. Dietary suppletie met broccoli spruiten begint op E14 tot PD21. Dammen geïnjecteerd E19 en E20 elke 12 uur (aangeduid als gele pijlen). Maternale gewichten worden opgenomen met een weegschaal en lichaamstemperatuur met een rectale temperatuursensor bedekt met glijmiddel. Pups zijn geboren naturally op E23 (aangeduid als zwarte pijl). Beginnend op PD3, pups ondergaan verschillende reflex testen. Op PD21, pups ondergaan het open veld test om gedragsreacties te evalueren.
Figuur 3. Voorbeeld van een tijdlijn voor het beoordelen van neurologische reflexen. Reflexen verschijnen in verschillende stadia van ontwikkeling, dus het vastleggen van de overname van deze reflexen vereist dat het testen beginnen een paar dagen voor. Deze studie gebruikte Long-Evans ratten, maar de verschillen tussen de stammen en soorten, zodat er een voorlopig experiment moet worden uitgevoerd met behulp van deze data als een algemene leidraad. Voorpoot greep, hindlimb greep, en oprichtende worden beoordeeld op PD3, achterbeen plaatsing en klif vermijding op PD4, en manier van lopen op PD6. Auditieve schrikreactie wordt beoordeeld op PD10, houding en oog openingen aan PD12 en versnelde oprichtende op PD14.
Figuur 4. Beelden van Developmental Reflexen. Beelden van reflex testen uitgevoerd op PD3 in Long-Evans ratten. Voorpoot greep (A), achterpoot greep (B), alsmede het oprichten (C) onderzoek begint op PD3. Klif vermijding (D) en achterpoot plaatsen (E) test begint op PD4. Gait (F) analyses begint op PD6. De inrichting voor versnelde oprichtende afgebeeld (G). Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
| onderzoek Parameter | Groepen (gemiddelde ± SEM) | Belangrijkste effecten (p-waarde) | |||||
| Worpgrootte en Gewichten | Zoutoplossing | Saline + Broccoli Sprouts | LPS | LPS + Broccoli Sprouts | Behandeling | Dieet | wisselwerking |
| Nestgrootte (aantal pups) | 13.3 ± 1.0 | 13.1 ± 1.0 | 10.3 ± 1.5 | 11 ± 1.2 | 0.03 | 0.8 | 0.7 |
| Geboortegewicht * # d | 6.3 ± 0.2 | 6.2 ± 0.2 | 5.1 ± 0.2 | 6.0 ± 0.1 | 0,0003 | 0.02 | 0.01 |
| PD7 Gewicht * d | 15,0 ± 0,5 | 15.5 ± 0.4 | 11,4 ± 1,1 | 13.6 ± 0.3 | 0,0006 | 0.09 | 0.2 |
| PD21 Gewichten d | 50,0 ± 1,4 | 48.7 ± 1.6 | 46.4 ± 1.2 | 48,2 ± 1,4 | 0.2 | 0.9 | 0.3 |
| Neurodevelop- mentale Reflexen | |||||||
| Voorpoot Pak een | 3,0 ± 0,0 | 3,0 ± 0,0 | 3,0 ± 0,0 | 3,0 ± 0,0 | n / a | n / a | n / a |
| Achterbeen Pak een | 3.6 ± 0.3 | 3,5 ± 0,3 | 4,6 ± 0,6 | 3.3 ± 0.1 | 0.3 | 0.1 | 0.1 |
| Achterbeen Plaatsing * a | 4.3 ± 0.1 | 4.3 ± 0.0 | 5.1 ± 0.3 | 4,5 ± 0,2 0.02 | 0.07 | 0.2 | |
| Cliff Vermijden * a | 4.4 ± 0.2 | 4.7 ± 0.2 | 5.8 ± 0.4 | 5,0 ± 0,4 | 0.02 | 0.4 | 0.1 |
| Gait * # a | 7.5 ± 0.3 | 7.7 ± 0.3 | 9.7 ± 0.4 | 7,9 ± 0,2 | 0.0007 | 0.02 | 0,005 |
| Auditieve schrikreactie een | 11.5 ± 0.3 | 11.5 ± 0.1 | 12,0 ± 0,5 | 11,8 ± 0,2 | 0.2 | 0.8 | 0.9 |
| houding #a | 15,6 ± 0,5 | 15,9 ± 0,6 | 17,0 ± 0,4 | 14.9 ± 0.4 | 0.8 | 0.08 | 0.02 |
| Eye Openingen een | 16,0 ± 0,2 | 15,9 ± 0,1 | 16,0 ± 0,1 | 15,4 ± 0,2 | 0.08 | 0.04 | 0.2 |
| Versnelde Oprichtproef een | 16,0 ± 0,4 | 16.4 ± 0.5 | 17,4 ± 0,6 | 16,9 ± 0,2 | 0.04 | 1 | 0.3 |
| Oprichtproef #A (vrouwtjes) | 4.9 ± 0.5 | 5.1 ± 0.4 | 6,7 ± 0,6 | 4.6 ± 0.4 | 0.09 | 0,003 | 0.0007 |
| Oprichten a (mannetjes) | 3.9 ± 0.2 | 4.6 ± 0.3 | 5.9 ± 1.9 | 4,2 ± 0,6 | 0.4 | 0.6 | 0.2 |
| een Dag van het uiterlijk | * Significant verschillend tussen LPS en Saline | ||||||
| b Het aantal keren dat de activiteit werd uitgevoerd | # Significant verschillend tussen LPS en LPS + BrSp | ||||||
| c seconden | |||||||
| d gram | |||||||
Tabel 1. Gewichten en Neurodevelopmental Reflex Outcomes. De resultaten van nakomelingen blootgesteld aan in de baarmoeder ontsteking en / of dieet broccoli spruiten suppletie. 30 De gewichten hier gepresenteerde zijn vanaf de geboorte, PD7 en PD21. De tijdstippen werden geselecteerd om een te vroeg geboren, termijn, en 1-2-jarige kind te vertegenwoordigen. De gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SEM. Statistische analyses gebruikt in de studie was een two-way ANOVA gevolgd door post hoc Tukey's test.a = dag van verschijning, b = aantal maal de activiteit werd uitgevoerd, en c = tijd (s) de activiteit werd uitgevoerd, * = significant verschil tussen LPS en controle, # = significant verschil tussen LPS en LPS + broccolispruiten. n = 5-7 per groep nesten (waarden uit vier pups, twee mannetjes en twee vrouwtjes in een nest werden gemiddeld om het strooisel te vertegenwoordigen).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Neurologische reflextesten de voorspellende maatstaf van abnormale corticale ontwikkeling en rijping, die van belang onder omstandigheden waarin openlijke neuropathologie niet evident zijn. Tijdens neurologische testen, is het essentieel om te waarborgen dat pups tegelijkertijd dagelijks onderzocht. Ratten zijn nachtdieren en daarom kunnen hun circadiane ritme prestaties veranderen als het testen wordt uitgevoerd op verschillende tijdstippen gedurende de dag. 34 Tests moeten in een rustige kamer te vullen zoals harde geluiden stress kan toevoegen aan de pups. 35 De pups vereisen een minimum van 1 uur te acclimatiseren aan nieuwe omgevingen, omdat het transport, de menselijke behandeling, en nieuwe instellingen stress in de pups kan induceren. 35 Pups moeten ook direct worden getest onder een verwarmde lamp of op een verwarmd kussen. Hoe jonger de pups, de minder goed in staat zijn ze in staat om thermoregulate. 36 Daarom zijn pups gegeven 15s en 30 s voor het uitvoeren van de oprichtreflex op PD3 en lopen op PD6 resp. 36 Bovendien control pups mag niet worden beperkt wanneer de groei geboorte, het gewicht vertegenwoordigt een verstorende factor. Tomen moeten worden geruimd om 8-10 gelijke voeding en vertegenwoordiging van geslacht zijn. Zodra de pups geboren zijn, is het belangrijk om een dag zorgen voor de rat om een band met de dam te vormen om de moeder verwaarlozing te voorkomen.
Pups moeten worden getest een dag of twee voor de dag dat ze het verwerven van de reflex om het begin van het uiterlijk vast te leggen. Afhankelijk van het experimentele model kunnen enkele wijzigingen worden vereist. Pasgeboren muizen zijn veel kleiner dan ratten. Daarom is de grootte van de gebruikte apparatuur wellicht worden aangepast aan de grootte van de pasgeboren muizen. Sommige problemen kunnen ook nodig zijn. Verschillende stammen en species kan enigszins afwijken tijdstip van het begin van reflexen. 13 De timing die in dit rapport is specific Long-Evans pups met testen op nieuwe reflexen beginnend op PD3, 4, 6, 10, 12 en 14 (figuur 3). De onderzoeker moet mogelijk reflex tests op 2-3 nesten om de natuurlijke progressie reflex voorafgaand aan experimentele testen stellen. Wanneer bovendien het uitvoeren van statistische analyses van de verzamelde gegevens, de onderzoeker moet geschikte technieken om afval vertekening te voorkomen. Jongen uit hetzelfde nest vaak soortgelijke voeren elkaar, dus het strooisel een N = 1, niet de individuele pup. 32, 33
Het testen van neurologische reflexen is belangrijk omdat het de enige beschikbare testen voor pasgeboren knaagdieren, aangezien meer complexe gedragsproblemen testen is niet mogelijk op deze leeftijden. Geen enkele andere maatregelen zijn verkrijgbaar in deze vroege periode, naast het gewicht en de fysieke verschijning. De hier verschafte werkwijzen zijn gebruikt door verschillende onderzoekers, ondersteunt dus dehet gebruik van neurologische reflex testen, vooral bij jonge knaagdieren waar andere gedragstesten niet haalbaar zijn. 13, 14, 29, 30, 31, 37, 38 Deze testen evenwijdig aan testen uitgevoerd bij humane zuigelingen reflex, voorspellend zijn voor neurologische aandoeningen zoals cerebrale parese, en aanvullende informatie met betrekking tot de ontogenie van neurale netwerken. De opkomst van reflexen optreedt tijdens specifieke tijdstippen gedurende de periode van het spenen, die de rijping van het zenuwstelsel. 39 Een beperking van dit protocol is dat niet alle experimentele modellen kunnen worden beproefd reflex. Knaagdieren worden geboren onvolwassen, zodat hun postnatale ontwikkeling biedt het voordeel van het vastleggen van het begin van de reflex ontwikkeling. Andere dierlijke modellen zoalsals het Lam zijn volwassen geboren en anders ontwikkelen van knaagdieren, zodat een deel van de reflex testen is niet van toepassing op dit model. Ook reflex testen is niet een directe maat van cognitieve of gedragsmatige afwijkingen, en het is onzeker of alle waargenomen afwijkingen zijn voorbijgaande of persistent.
In aanvulling op reflexen, kan gedragstesten worden uitgevoerd voor aanvullende analyses op oudere leeftijd. Dit is van belang omdat afwijkende reflex vertragingen niet altijd leiden tot neurologische aandoeningen. 2, 40 De tests worden meestal toegediend beginnend op PD21 (de dag van het spenen) bij knaagdieren zijn in staat om cognitieve en motorische taken uit te voeren. Deze tests omvatten bot niet beperkt tot de rotarod, Morris water doolhof, en verhoogde plus doolhof. In het kort wordt de roterende staaf test uitgevoerd door het plaatsen van het knaagdier op een roterende staaf, en het registreren de prestaties op de stang gedurende een tijdsperiode of totdat het knaagdier Fallsuit. Deze test evalueert motorisch leren en kracht, evenals de integriteit van de hersenen structuren zoals basale ganglia en cerebellum. 41 De Morris water maze bestaat uit het plaatsen van het knaagdier in een plas melkachtig wit water, en het opnemen van de tijd die het kost het knaagdier een ondergedompeld platform te vinden. Signalen kunnen boven elk kwadrant van het zwembad met dezelfde cue altijd boven het platform worden geplaatst. Deze onderzoekt egocentrische vs allocentric vormen van hippocampus-gemedieerd ruimtelijke leren en geheugen. 42 De elevated plus maze test meet angstgevoelens, alsook inherent exploratiegedrag. Knaagdieren worden in het midden van vier armen, twee gesloten en twee open, boven de grond verheven. 43 Het vermijden en exploratiegedrag (bepaald als de tijd doorgebracht in elke arm) van de knaagdieren worden opgenomen. 43 Deze aanvullende tests onderzoeken sensomotorische en cognitief functioneren, waardoor de onderzoeker alssess of de belediging duurt tot in de volwassenheid, of dat het van voorbijgaande aard.
Ontwikkelingsstoornissen vertragingen zijn voorspellend, en aanvullende testen van het gedrag is nodig om aanvullende bewijs voor de aanwezigheid van een ziekte later in het leven te bieden. Bovendien moet controlereacties worden geoptimaliseerd voorafgaand aan het experimenteren met stam en species verschillen, genetische veranderingen, geneesmiddeltoediening, enz. Ondanks deze omstandigheden worden de beschreven technieken leerde snel, eenvoudig beheerst, goedkoop en geven belangrijke informatie over de ontwikkeling van de zenuwstelsel. Ze bieden een mogelijkheid om de ontogenie en rijping van het zenuwstelsel bij de jongen op een leeftijd te evalueren wanneer zij niet in staat om volwassen behavioral taken uit te voeren zijn. Bovendien humane zuigelingen ondergaan vaak ontwikkelingsstoornissen reflextesten en derhalve knaagdieren reflextesten verschaft een middel vertaalbaarheid. Samenvattend is dit een uitstekende werkwijze voor eerste screening van abnormaleneurologische ontwikkeling bij de pasgeborene die kunnen leiden tot een later onderzoek naar cognitie en gedrag.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
De auteurs willen onze financiering agentschappen, die NeuroDevNet (een Nationaal Centers of Excellence) onder meer dank, de ALVA Foundation, de Women's en Children's Health Research Institute, en de Universiteit van Alberta.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breeding | |||
| Transfer pipettes | Fisherbrand | 12-711-9AM | Used for vaginal flushes. |
| Sterile Saline | Hospira | 7983254 | The solution used to collect cells during vaginal flushes. |
| 400 µL Microcentrifuge tubes | Fisherbrand | 05-408-120 | Used to hold the saline solution. |
| Light microscope | Leica | Leica ATC 2000 | For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab. |
| Slides | Fisherbrand | 12-552-5 | The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab. |
| Coverslips | Fisherbrand | 12-545-F | To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab. |
| Dietary Supplementation | |||
| Broccoli Sprouts seeds | Mumm's Sprouting Seeds | Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab. | |
| Countertop Seed Sprouter Box | Mumm's Sprouting Seeds | A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest. | |
| 250 mL beaker | The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used. | ||
| Maternal Inflammation | |||
| Lipoplysaccharide (LPS) | Sigma | L3129 | The endotoxin used to mimic maternal inflammation. |
| 1 mL Syringe | BD Syringe | 309659 | Used to inject the pregnant rat. |
| Gauge (30 G x 1/2) | BD PrecisionGlide Needle | 305106 | Use the smallest needle to avoid pain and discomfort. |
| Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP) | Hospira | Saline is used to dissolve LPS. | |
| Weights | |||
| Scale | Denver Instrument | For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab. | |
| Neurodevelopmental Reflexes | |||
| Thin blunt rod | Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping. | ||
| Round filter paper | Whatman | 1001 150 | 15 cm diameter paper used for gait analysis. |
| Timer | Fisher Scientific | 06-662-51 | For timing the time allocated to righting and gait. |
| Blunt surface | Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance. | ||
| Foam landing | For when the pups perform accelerated righting. | ||
| Video recorder | Sony | VCT-D580RM | To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1,000 fps |
| Bell | For auditory startle. | ||
| Heat lamp or pad | To maintain the body temperature of the pups underoing examination. |
References
- Farber, J. M., Shapiro, B. K., Palmer, F. B., Capute, A. J. The diagnostic value of the neurodevelopmental examination. Clin Pediatr (Phila. 24 (7), 367-372 (1985).
- Zafeiriou, D. I. Primitive reflexes and postural reactions in the neurodevelopmental examination). Pediatr. Neurol. 31 (1), 1-8 (2004).
- Clancy, B., Finlay, B. L., Darlington, R. B., Anand, K. J. S. Extrapolating brain development from experimental species to humans. Neurotoxicology. 28 (5), 931-937 (2007).
- Dobbing, J., Sands, J.
- Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog. Neurobiol. , (2013).
- Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch. Dis. Child. 48 (10), 757-767 (1973).
- Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr. Res. 65 (1), 62-66 (2009).
- Dean, J. M., et al. Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with. Dev. Neurosci. 33 (3-4), 251-260 (2011).
- Back, S. A., Riddle, A., McClure, M. M. Maturation-dependent vulnerability of perinatal white matter in premature birth. Stroke. 38, 724-730 (2007).
- Back, S. A., et al. Late oligodendrocyte progenitors coincide with the developmental window of vulnerability for human perinatal white matter injury. J. Neurosci. 21 (4), 1302-1312 (2001).
- Downes, N., Mullins, P.
- Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front. Neuroanat. 3 (5), (2009).
- Fox, W. M. Reflex-ontogeny and behavioural development of the mouse. Anim. Behav. 13 (2), 234-241 (1965).
- Lubics, A., et al. Neurological reflexes and early motor behavior in rats subjected to neonatal hypoxic-ischemic injury. Behav. Brain Res. 157 (1), 157-165 (2005).
- Futagi, Y., Toribe, Y., Suzuki, Y. The grasp reflex and moro reflex in infants: hierarchy of primitive reflex responses. Int. J. Pediatr. , 191562 (2012).
- Hashimoto, R., Tanaka, Y. Contribution of the supplementary motor area and anterior cingulate gyrus to pathological grasping phenomena. Eur. Neurol. 40 (3), 151-158 (1998).
- Isaza Jaramillo, S. P., et al. Accuracy of the Babinski sign in the identification of pyramidal tract dysfunction. J. Neurol. Sci. 343 (1-2), 66-68 (2014).
- Donatelle, J. M. Growth of the corticospinal tract and the development of placing reactions in the postnatal rat. J. Comp. Neurol. 175 (2), 207-231 (1977).
- Palanza, P., Parmigiani, S., vom Saal, F. S. Effects of Prenatal Exposure to Low Doses of Diethylstilbestrol, o,p'DDT and Methoxychlor on Postnatal Growth and Neurobehavioral Development in Male and Female Mice. Horm. Behav. 40 (2), 252-265 (2001).
- Pantaleoni, G. C., et al. Effects of maternal exposure to polychlorobiphenyls (PCBs) on F1 generation behavior in the rat. Fundam. Appl. Toxicol. 11 (3), 440-449 (1988).
- Yeomans, J. S., Frankland, P. W. The acoustic startle reflex: neurons and connections. Brain Res. Rev. 21 (3), 301-314 (1995).
- Vinay, L., Brocard, F., Clarac, F. Differential maturation of motoneurons innervating ankle flexor and extensor muscles in the neonatal rat. Eur. J. Neurosci. 12 (12), 4562-4566 (2000).
- Geisler, H. C., Westerga, J., Gramsbergen, A.
- Heinen, K., et al. Gabaa receptor maturation in relation to eye opening in the rat visual cortex). Neuroscience. 124 (1), 161-171 (2004).
- Whishaw, I. Q., Gorny, B., Foroud, A., Kleim, J. A. Long-Evans and Sprague-Dawley rats have similar skilled reaching success and limb representations in motor cortex but different movements: some cautionary insights into the selection of rat strains for neurobiological motor research. Behav. Brain Res. 145 (1-2), 221-232 (2003).
- Prusky, G. T., Harker, K. T., Douglas, R. M., Whishaw, I. Q. Variation in visual acuity within pigmented, and between pigmented and albino rat strains. Behav. Brain Res. 136 (2), 339-348 (2002).
- Wu, L., et al. Dietary approach to attenuate oxidative stress, hypertension, and inflammation in the cardiovascular system. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (18), 7094-7099 (2004).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and. J. Vis. Exp. (67), (2012).
- Rousset, C. I., et al. Maternal exposure to lipopolysaccharide leads to transient motor dysfunction in neonatal rats. Dev. Neurosci. 35 (2-3), 172-181 (2013).
- Nguyen, A. T., Bahry, A. M. A., Shen, K. Q., Armstrong, E. A., Yager, J. Y. Consumption of broccoli sprouts during late gestation and lactation confers protection against developmental delay induced by maternal inflammation. Behav. Brain Res. 307, 239-249 (2016).
- Black, A. M., Armstrong, E. A., Scott, O., Juurlink, B. J., Yager, J. Y. Broccoli sprout supplementation during pregnancy prevents brain injury in the newborn rat following placental insufficiency. Behav. Brain Res. 291, 289-298 (2015).
- Wainwright, P. E. Issues of design and analysis relating to the use of multiparous species in developmental nutritional studies. J. Nutr. 128 (3), 661-663 (1998).
- Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, 14-37 (2013).
- Sergio, D. P., Sanchez, S., Ruben, V. R., Ana, B. R., Barriga, C. Changes in behaviour and in the circadian rhythms of melatonin and corticosterone in rats subjected to a forced-swimming test. J Appl Biomed. 1 (47), (2005).
- Castelhano-Carlos, M., Baumans, V. The impact of light, noise, cage cleaning and in-house transport on welfare and stress of laboratory rats. Lab. Anim. 43 (4), 311-327 (2009).
- Zimmerberg, B., Ballard, G. A., Riley, E. P. The development of thermoregulation after prenatal exposure to alcohol in rats. Psychopharmacology (Berl. 91 (4), 479-484 (1987).
- Fan, L. W., et al. Hypoxia-ischemia induced neurological dysfunction and brain injury in the neonatal rat). Behav. Brain Res. 165 (1), 80-90 (2005).
- Smart, J. L., Dobbing, J. Vulnerability of developing brain. VI. Relative effects of foetal and early postnatal undernutrition on reflex ontogeny and development of behaviour in the rat. Brain Res. 33 (2), 303-314 (1971).
- Fox, M. W. Neuro-Behavioral ontogeny: A synthesis of ethological and neurophysiological concepts. Brain Res. 2 (1), 3-20 (1966).
- Piper, M. C., Mazer, B., Silver, K. M., Ramsay, M. Resolution of neurological symptoms in high-risk infants during the first two years of life. Dev. Med. Child Neurol. 30 (1), 26-35 (1988).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J. Neurosci. Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nat. Protoc. 1 (2), 848-858 (2006).
- Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat. Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).
