Summary
Mínimamente invasiva constricción de la aorta transversal (MTC) conserva los elementos esenciales de la constricción de la aorta transversal regular (TAC) al tiempo que elimina el uso de un ventilador con intubación traqueal. Demuestra ser un método altamente deseable para los estudios de alto rendimiento de sobrecarga ventricular izquierda, sobre todo en estudios de traducción.
Abstract
Mínimamente invasiva constricción de la aorta transversal (MTC) es un método más deseable para la constricción de la aorta transversal en ratones que a tórax abierto constricción de la aorta transversal estándar (TAC). Aunque la constricción aórtica transversal es un método altamente funcional para la inducción de alta presión en el ventrículo izquierdo, que es un procedimiento más difícil y prolongado debido a su uso de la ventilación artificial con la intubación traqueal. TAC es a menudo también menos de supervivencia, como el método más reciente, MTAC, ni requiere el corte de las costillas y los músculos intercostales ni la intubación traqueal con una configuración de la ventilación. En MTAC, en oposición a una toracotomía para acceder a la cavidad torácica, el arco aórtico se alcanza a través de una incisión de línea media en el cuello anterior. La tiroides se tira hacia atrás para revelar la horquilla esternal. El esternón se corta posteriormente hasta el segundo nivel de costilla, y el arco aórtico se alcanza simplemente mediante la separación de los tejidos conectivos y el timo. Deallí, una sutura puede ser envuelto alrededor del arco y atado con un espaciador, y después el corte del esternón y de la piel se puede cerrar. MTAC es una manera mucho más rápida y menos invasivo para inducir la hipertensión ventricular izquierda y permite la posibilidad de que los estudios de alto rendimiento. El éxito de la constricción se puede verificar usando alta frecuencia ecocardiografía transtorácica, en particular de color Doppler y de la onda de impulsos Doppler, para determinar las velocidades de flujo del arco aórtico y la izquierda y la arteria carótida derecha, la dimensión de los vasos sanguíneos, y la función ventricular izquierda y la morfología. Una constricción éxito también dará lugar a cambios histopatológicos significativos, tales como la hipertrofia de células del músculo cardiaco con fibrosis intersticial y perivascular. A continuación, se describe el procedimiento de MTAC, lo que demuestra cómo los cambios en los flujos resultantes en las arterias carótidas pueden ser examinados con la ecocardiografía, morfología general, y los cambios histopatológicos en el corazón.
Introduction
El propósito general de este artículo es demostrar cómo transversal constricción de la aorta (TAC) en ratones puede ser modificado para producir una cirugía simple y más conveniente. TAC se introdujo por primera vez en 1991 1 y activar los biólogos moleculares para estudiar las vías celulares y moleculares que conducen a la hipertrofia en el ventrículo izquierdo y a la insuficiencia cardíaca, en particular en los pequeños animales con genomas manipulados 2, 3, 4, 5, 6. A pesar de su eficacia en la producción de la sobrecarga de presión deseada, la técnica es en última instancia limitado por la dificultad en realizar el procedimiento y por su baja tasa de supervivencia. Un cirujano la realización de TAC debe ser capaz de realizar la intubación endotraqueal, una toracotomía, y el uso de la ventilación artificial con el fin de evitar el colapso pulmonar 1.
contenido "> A menudo, se desea un método simple y menos invasiva. Como consecuencia, mínimamente invasiva constricción aórtica transversal (MTAC) fue ideado 3. Aunque el resultado (en concreto, la hipertrofia ventricular izquierda) es el mismo, el procedimiento consiste en un número significativamente menor aparatos y menos daño a la animal. MTAC resulta ser un método conveniente que tiene una tasa de supervivencia mayor, por encima de 90%, y tiene un tiempo de operación de sólo de 15 a 25 min. los casos poco frecuentes de muerte después de la cirugía con éxito puede ser atribuible a demasiado constricción -tight del arco aórtico, dando como resultado la sobrecarga ventricular izquierda tremenda y la reducción fatal del suministro de sangre a los órganos críticos, tales como los riñones.Después de que se completa el procedimiento, la ecocardiografía se puede utilizar para evaluar el éxito de las bandas y la morfología y la función cardíaca. Un sistema de ultrasonido de alta frecuencia se puede utilizar para medir el diámetro y los cambios de flujo en la izquierda y derechacarótida arterias, para visualizar la constricción del arco aórtico para mediciones de pico de velocidad de flujo, y para determinar el espesor de la pared del ventrículo izquierdo y los parámetros funcionales 7, 8. Después de la eutanasia, los órganos también pueden ser recogidos para los estudios histopatológicos con hematoxilina y eosina y la tinción de colágeno Picrosirius, siendo esta última particularmente útil para la observación de la fibrosis.
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Protocol
El protocolo sigue las directrices del Comité para el uso de animales vivos en la Enseñanza y la Investigación (CULATR) de la Universidad de Hong Kong.
1. Operación Preparación del Sitio
- Desinfectar el lugar de la operación con alcohol isopropílico al 75%. Ajustar la temperatura almohadilla térmica a 37 ° C para evitar cambios en el ritmo cardíaco y respiratorio del sujeto animal.
- Utilizar instrumentos quirúrgicos esterilizados en un esterilizador de desplazamiento por gravedad a 121 ° C durante 30 minutos o por otros métodos apropiados.
- Tome 2 - 4 agujas de calibre 30 y les curva con un soporte de aguja, como se ve en la Figura 1, para hacer una herramienta para la ligadura y el tejido de separación y para el uso como un retractor. Montar ahora la aguja curvada en un aplicador de algodón para su uso en la cirugía.
- Embotar una aguja de calibre 27 y la curva de 90º con el soporte de la aguja. Suavizar la punta por el roce de una superficie dura para hacer una 0,4 mm espaciador en etapa de ligación.
- Anestesiar a 2 meses de edad, de sexo masculino, 22-25 g de ratón C57BL / 6N con una mezcla de ketamina y xilazina adecuada en relación con el peso corporal: 100 mg / kg + 10 mg / kg ip Confirmar la anestesia con el reflejo pizca cola negativa .
- Quitar el pelo en la parte anterior del cuello y el pecho con una aplicación de 2 a 3 min de la crema depilatoria. Retire la crema con agua tibia y un aplicador de algodón.
- Aplicar pomada oftálmica o gel para los ojos de los animales para evitar la desecación de la córnea.
- Colocar el animal sobre una almohadilla térmica en la posición supina y llevar a cabo el monitoreo intraoperatorio, asegurándose de mantener la documentación apropiada en cada intervalo de 15 minutos.
- Utilice cinta de papel quirúrgico para asegurar las extremidades a la resistencia de calentamiento con el fin de mantener al animal en la posición correcta durante la cirugía.
- Desinfectar la piel alternativamente con alcohol y solución de povidona yodada tres veces.
- Use un dr estérilmono con un campo de operación expuesta para evitar la contaminación. Utilizar nuevos guantes estériles para cada ratón y según sea necesario.
3. Procedimiento de ligadura
- Abra la piel del ratón en la posición de la línea media del cuello y el pecho con un bisturí.
- Tire de la glándula tiroides hacia la cabeza separando suavemente los tejidos conectivos con tijeras de punta roma.
- Se separa la capa muscular de la tráquea en la línea media hacia ambos lados con las agujas curvas.
- Uso de las tijeras de punta roma, cortar el esternón a la segunda costilla (aproximadamente 5 mm). Abrir el corte con un retractor o pinzas curvas.
- Separar los lóbulos del timo el uno del otro y la pared inferior del pecho mediante la separación del tejido conectivo con la aguja curvada; el arco aórtico transverso y dos arterias carótidas serán claramente visibles en este punto.
- Coloque la aguja curva bajo el arco y perforar entre la pared del vaso y el tejido conectivo en el otro lado por pusHing la cabeza curvada hacia fuera.
- Uso de la aguja curva, tirar de la sutura monofilamento 6-0 bajo el arco aórtico.
- Coloque el espaciador en el bucle y fijar la sutura en su lugar con un doble nudo. Retire el espaciador con suavidad.
- Confirmar una constricción éxito con la posición de nudo y cortar los extremos de la sutura.
- Cierre de la pared torácica usando 6/0 sutura de seda con un simple patrón de sutura interrumpida. Cierre la piel con una sutura de monofilamento de 6/0 en un patrón de sutura continua.
4. Cuidado post-operatorio
- Aplique una solución de povidona yodada al sitio de sutura y colocar al animal en una jaula pre-calentado para la recuperación y el seguimiento post-operatorio.
- Inyectar buprenorfina (0,05 - 0,1 mg / kg sc cada 12 h) después de que el animal ha recuperado la conciencia para aliviar el dolor y proporcionar el ratón con comida suave apropiada.
- Devolver el animal a un 12 h luz / sala de ciclo de oscuridad después de la recuperación completa.
5.Ecocardiografía: Confirmación de ligadura exitosa y Medidas
- Después de una semana, anestesiar el ratón previamente en bandas con 3-5% de isoflurano, para la inducción, y 1 a 1,5%, para el mantenimiento, con una tasa de 1 L / min de oxígeno de flujo.
- Quitar el pelo en el pecho usando la crema depilatoria. eliminar completamente la crema con agua tibia y un aplicador de algodón.
- Asegure el ratón en la posición supina a la plataforma de manejo de animales, mantenida a 37 ° C. Aplicar el gel de electrodos a las patas y papeles pegados a la almohadilla con electrodos.
- Aplique el gel de ultrasonido en el pecho del ratón. Con una sonda de 40 MHz MS550D y un sistema de ultrasonido de alta frecuencia, realizar Doppler escaneado en color y Doppler de onda pulsada en las arterias carótidas izquierda y derecha, así como en el arco aórtico.
- Usando el modo B, localizar el ventrículo izquierdo. El uso de M-Mode, la presión sistólica y diastólica espesor de pared se pueden medir. Uso Cine tienda y artículos enmarcados para guardar datos e imágenes según sea necesario.
- Tcantar el modo B, localizar la arteria carótida común izquierda antes del punto de ramificación. Utilice impulsos de onda y de color Doppler para evaluar el flujo. Repita con la arteria carótida derecha en un punto similar. Guardar las imágenes en Cine tienda y artículos enmarcados modos de analizar más adelante.
- Inclinar la plataforma de manejo de los animales en el extremo izquierdo de manera que el ratón está en posición de decúbito izquierdo. Coloque la sonda en el ratón, a 30 ° de desplazamiento desde una posición paralela a la cabeza en la posición paraesternal y manipular X e Y para encontrar el arco aórtico.
- Busque la constricción. Utilice el modo Doppler color para hacer el sitio de la constricción más visible, como la sangre fluirá a través de un canal estrecho entre el punto donde las dos arterias carótidas se ramifican desde el arco aórtico.
- Utilice impulsos de onda y de color Doppler para medir la velocidad de flujo máximo. Uso Cine tienda y artículos enmarcados para guardar datos e imágenes según sea necesario.
- Deje que el animal se recupere en una almohadilla térmica en la posición prona.Devolver el animal a la jaula original en una sala de ciclo de 12 h de luz / oscuridad después de que se ha recuperado completamente de la anestesia.
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Representative Results
MTAC permite la inducción de hipertensión significativa en el ventrículo izquierdo de una manera oportuna.
Como se ve en la Figura 1, la preparación de las principales herramientas para el procedimiento es simple y mínima, que requiere sólo 2-4 agujas de calibre 30 a curvar y en su lugar con un tubo de poliuretano. El procedimiento quirúrgico en sí también es menos complicado, en comparación con TAC, y se puede realizar fácilmente. Una vez que el tiroides se ha retraído, el esternón se corta y el timo se mueve para despejar la vista. El arco aórtico es fácilmente localizable para el proceso de ligadura (Figura 2).
MTAC produce de forma fiable la sobrecarga de presión ventricular izquierda en ratones ligados. La figura 3 ilustra claramente, como una aorta transversal estrechada se puede observar claramente en la figura 3C, como well como un aumento de la velocidad de flujo máximo a través del sitio constricción en 3D. Esto puede ser comparado con el ratón simulacro de accionamiento, visto en la Figura 3A y 3B, que no presenta constricción con la velocidad de flujo máximo normal. Como consecuencia de la ligadura ve en la Figura 4C, la velocidad de flujo se aumenta de manera significativa en la arteria carótida derecha, y la presión se puede acumular la aorta ascendente y en el corazón para producir la hipertrofia ventricular izquierda. Sin embargo, como consecuencia de la constricción aguas arriba, la velocidad de flujo se reduce significativamente en la arteria carótida común izquierda, como en la figura 4D. Por otro lado, el flujo sanguíneo de la carótida arteria casi idéntica se observa en el ratón simulacro de accionamiento, como en la Figura 4A (arteria carótida derecha) y 4B (arteria carótida izquierda).
El parámetro relacionado con la hipertrofia resultantes y la curva de supervivencia se observan fácilmente en la Figura 5, en la que el corazón del ratón se ligó-MTAC se puede observar a ser significativamente ampliada y deformado. Esto sólo se verá más en el nivel celular, como se demuestra en la Figura 6A y 6B, que muestra el agrandamiento del corazón del ratón operado-MTAC en comparación con el ratón con operación simulada. Lo que se observa más es el aumento de tamaño del músculo cardiaco celular y fibrosis en los ratones MTAC (Figura 6D, 6F, y 6H), en comparación con los ratones no ligado (Figura 6C, 6E y 6G).
Desde MTAC puede ser verificada por un sistema de ultrasonidos de alta frecuencia, la falta de éxito constreñir el arco aórtico se dará a conocer por la falta de una constricción visible de la aorta transversal en la ecocardiografía de dos dimensiones, como en la Figura 3B 3D. Esto se puede verificar adicionalmente con los modos de Doppler pulsado de onda y de color, una constricción exitoso debe mostrar una velocidad de flujo mayor en la arteria carótida derecha y se reduce la velocidad del flujo en la arteria carótida izquierda (Figura 4C y 4D).
Figura 1: Proceso de formación de la ganchos de aguja deseado por plegado de una punta de la aguja 1-in, 30 de calibre. A) La punta de la aguja de 1 pulgada, calibre 30 originales. B) Agarre la punta de la aguja con el soporte de la aguja y doblar aproximadamente a medio camino a lo largo de su longitud. Doblar la aguja en un bucle, utilizando el soporte de la aguja y las manos, según sea necesario, para formar el bucle representado en la parte superior derecha de la figura. C) cubrir la aguja con un tubo de poliuretano con el fin de mantener el segmento doblado en su lugar. D) El uso de laporta-agujas, doblar la punta del bucle en la forma deseada. En este caso, una punta de aguja con dos 45 - 60 ° curvas se ha mostrado a efectos ilustrativos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: El proceso de ligar el arco aórtico transverso. A) El arco aórtico es claramente visible. B) Utilización de la aguja del gancho antes mencionado, separar el arco aórtico del tejido conjuntivo cercano. C) El uso de la aguja de gancho, a guiar el hilo de sutura bajo el arco aórtico, y con el uso de un espaciador, atar una constricción del diámetro deseado. D) ligadura Completado. pl aliviar clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: Color y Doppler de onda pulsada las imágenes por ultrasonido del arco aórtico de ratones se ligan y se ligaron-no. A) Doppler color del arco aórtico de un ratón que no se ligaron. Las dos arterias carótidas son claramente visibles, así como la falta de una constricción entre ellos. B) pico de velocidad del flujo aórtico de un ratón que no se ligaron. C) Doppler color del arco aórtico de un ratón se ligaron. La constricción entre las dos arterias carótidas en el arco aórtico es visible (puntas de flecha de color amarillo). D) la velocidad de flujo espiratorio máximo en el lugar de la constricción. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: la técnica de Doppler de onda pulsada de las arterias carótidas izquierda y derecha de los ratones se ligaron para no ligado y. A) Doppler de onda pulsada de la arteria carótida izquierda de un ratón no ligado. B) Doppler de onda pulsada de la arteria carótida derecha de un ratón no ligado. Es de destacar que la velocidad del flujo de sangre es casi idéntica a la de la arteria carótida izquierda. C) Doppler de onda pulsada de la arteria carótida derecha de un ratón con un estrechamiento en su arco aórtico. La velocidad de la sangre se incrementa significativamente debido a la constricción aguas abajo de la entrada a la arteria carótida izquierda. D) Doppler de onda pulsada de la arteria carótida izquierda de un ratón con un estrechamiento en su arco aórtico. La velocidad del flujo sanguíneo se reduce significativamente debido a la constricción aguas arriba de la entrada dela arteria carótida izquierda. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: hipertrofia cardíaca y los parámetros relacionados con una curva de supervivencia de 3 semanas no se ligan y se ligaron-ratones. A) El corazón de un ratón de 3 meses de edad, sin constricción de la aorta transversal. El corazón está sano y de una forma normal, sin ningún tipo de patologías inmediatamente evidentes. B) El corazón de un ratón de 3 meses de edad que sufrió MTAC durante 3 semanas. Nótese la naturaleza claramente deformada del corazón debido a la ampliación de la pared ventricular izquierda. La ligación en el arco aórtico es también visible. C) Una sección transversal del corazón de un 3 meses de edad de ratón no se ligó. D) Una sección transversal del corazón de un 3-mes-ratón de edad que sufrió la constricción aórtica transversal durante 3 semanas. El agrandamiento del ventrículo izquierdo es claramente visible. El corazón en general, también se agranda debido a la sobrecarga de presión ventricular izquierda causada por MTAC. E) La relación de corazón a peso corporal es significativamente mayor en los ratones con bandas durante 3 semanas. F) La relación de longitud de hueso de la tibia de corazón a la izquierda es significativamente mayor en los ratones con banda durante 3 semanas (*, p <0,05; **, p <0,01; *** p <0,001). Curva G) Supervivencia para un experimento de 3 semanas de duración (MTAC = 12 y SHAM = 12). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6: Las diapositivas histológico del ratón del corazón. A) Una sección transversal de un shcorazón de ratón am-operada. B) Una sección transversal de un corazón MTAC ligó-durante 3 semanas, con una pared ventricular izquierda espesado y fibrosis parcial. El tamaño general del corazón se incrementa también. C) Sección longitudinal de las fibras musculares cardíacas a partir de un ratón con operación simulada. D) Sección longitudinal de las fibras musculares cardíacas a partir de un ratón se ligó-MTC. Las células se agrandan de manera significativa, como lo demuestra su mayor diámetro, mientras que el núcleo se ha mantenido el mismo tamaño. E) la sección transversal de las fibras musculares de un ratón con operación simulada. F) la sección transversal de las fibras musculares cardíacas de un ratón se ligó-MTC. Las células se amplían debido a la sobrecarga de presión como resultado de la MTAC. G) Las arterias coronarias de un ratón con operación simulada se tiñeron con rojo picrosirio para el colágeno. H) Las arterias coronarias de un ratón se ligó-MTC. Una cantidad significativa de tejido de colágeno se observa around el vaso sanguíneo dilatado, indicativo de fibrosis perivascular debido a la sobrecarga de presión en las arterias coronarias. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Rockman y sus colegas desarrollaron el primer método de constricción aórtica como método para estudiar la sobrecarga de presión en el corazón. Esta investigación permitió comenzar a descubrir las consecuencias celulares y moleculares de la hipertensión y la insuficiencia cardíaca 1. Un método mejorado, mínimamente invasivo constricción aórtica transversal (MTAC), proporciona un método susceptible, dependiente del tiempo para la inducción de ventricular izquierda sobrecarga de presión y la insuficiencia cardíaca, sin los inconvenientes de la constricción de la aorta transversal convencional 9. El procedimiento en sí se puede realizar considerablemente más fácil y con un aumento de las tasas de supervivencia en comparación con TAC. La principal ventaja de este método es que permite que el rendimiento del experimento de constricción de la aorta, pero con significativamente menos equipo, habilidad quirúrgica, y el tiempo de funcionamiento para el mismo o un mejor resultado.
El método de tórax abierto en el procedimiento TAC sí permite gacceso reater y una mejor vista de la totalidad de la corazón y los vasos. La ventaja potencial es que puede ser fácilmente llevado a cabo en combinación con otros procedimientos, tales como el rendimiento de la constricción de la arteria pulmonar derecha para la sobrecarga de presión ventricular o ligadura de la arteria coronaria para condiciones de isquemia, al mismo tiempo que se realiza las bandas arco aórtico. Por el contrario, el método mínimamente invasiva no es adecuado para que no sea ascendente o transversal constricción arco aórtico nada.
Es de destacar que este método ha sido adaptado y modificado en una variedad de maneras. En algunos casos, el uso de clips de titanio en lugar de una sutura para constreñir la aorta se ha considerado más apropiado, dado que es una condición experimental que es fácilmente reproducible: las bandas no pueden deslizarse como pueden en los procedimientos estándar de TAC y MTAC que implican 6 puntos de sutura. En el caso de que, cuando se probó con el sistema de ultrasonido de alta frecuencia,un gran número de ratones que no han sido ligados con éxito durante el experimento, se requiere más práctica. Tal vez la aplicación de los clips de titanio antes mencionados puede mejorar la tasa de éxito de la cirugía de 6.
Al llevar a cabo el experimento, es fundamental que la sutura alrededor de la aorta no está demasiado apretada. Se puede dañar la aorta o causar una reducción fatal de flujo de sangre al resto del cuerpo, incluyendo los órganos críticos, tales como los riñones. También se debe tener cuidado para ser suave cuando se utiliza el gancho curvado para separar la aorta desde el tejido y los vasos conectivo circundante, ya que puede dañar las venas pulmonares y otras embarcaciones y puede conducir a la pérdida de sangre mortal. La cavidad del pecho tiene negativo y el medio ambiente exterior tiene presión positiva. En este procedimiento, aunque la pared torácica fue abierto desde el esternón y el arco aórtico fue anillada, la cavidad torácica y el medio ambiente de presión negativa estaban intactos. Si había accidental daño y la presión negativa en el interior se cambió, los pulmones se han colapsado, y el animal habría muerto instantáneamente, ya que no habría habido ninguna ventilación con presión positiva. Por lo general, el procedimiento puede realizarse con seguridad dentro de 30 min, incluso con bajo rendimiento, si no hay lesiones mortales. El cuidado postoperatorio es también crítico, ya que la presión puede reducirse si el animal está deshidratado, o el animal puede morir de hambre debido al dolor y dificultad para llegar a la comida. Fácilmente disponibles alimentos blandos, analgésicos, y la rehidratación son esenciales para la recuperación, así como para un resultado exitoso.
El uso posterior de los sistemas de ultrasonido, en particular el modo de Doppler de color, permite la visualización del arco aórtico transverso, la constricción éxito, y los efectos de MTAC. El sistema de ultrasonido permite la medición de la velocidad de flujo en las arterias carótidas, del espesor de las paredes arteriales, y de la morfología del ventrículo izquierdo.En particular, la relación de velocidades de flujo en los ratones normales o con operación simulada debe ser de aproximadamente 1 10. La velocidad de flujo máximo en el sitio de constricción se puede utilizar para calcular el gradiente de presión utilizando la ecuación de Bernoulli modificada (4 x V max 2) para un parámetro fiable como la relación de la carótida. Vale la pena señalar que durante la ecocardiografía, que la temperatura corporal y el ritmo cardíaco deben mantenerse lo más cerca posible a la gama fisiológica normal y deben ser similares entre los animales para producir puntos de datos comparables 10.
Diferentes niveles de constricción pueden ser derivados de diferentes niveles de experiencia de los operadores y pueden influir significativamente en la morfología obtenida. Para obtener resultados consistentes, comprobando la constricción éxito con los niveles de gradiente de presión y sólo utilizando ratones dentro de ciertos límites, como un gradiente de presión entre 40-80 mmHg, es importante. Siempre que sea posible, de alta frecuencia echocardiography se debe utilizar para los criterios de confirmación y selección animal para lograr consistencia en los resultados del estudio. Sin embargo, la ecocardiografía no es necesario para el método de MTAC sí mismo.
Si la ecocardiografía de alta frecuencia no está disponible, la constricción de éxito puede ser verificada con el peso del corazón y relaciones relativas y con el estudio histopatológico al final del experimento. La constricción éxito aumentará el peso del corazón magra y la relación relativa con el peso corporal y la longitud de hueso de la tibia izquierda. Del mismo modo, la hipertrofia cardiaca célula muscular y ambos fibrosis intersticial y perivascular también pueden ser observados en ratones ligados con éxito. Este experimento 3 semanas de duración está destinado únicamente para inducir hipertrofia cardiaca, pero no para provocar un fallo. La dilatación cardíaca y la insuficiencia cardíaca generalmente se fijan después de 6 - 8 semanas o más tarde.
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Acknowledgments
Nos gustaría reconocer el Fondo para la Investigación de la Universidad de Ciencias de la Vida (ULS) de la Universidad Politécnica de Hong Kong para la prestación de Vevo 2100 sistema de ultrasonido. Un agradecimiento especial a la Dra Chunyi Wen de la División Interdisciplinaria de Ingeniería Biomédica, Universidad de Hong Kong Polytechnic, para la capacitación y facilitación. Este trabajo fue apoyado por el gobierno de Hong Kong RGC subvención GRF 17127215, 764812 y HKU6 / CRF / 11G a Billy Chow KC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 inch 30 Gauge Needles | BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA. | 305128 | Curved as in the procedure and Figure 1 |
| 27 Gauge Needle | BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA. | 301629 | Make blunt and smooth for spacer |
| 6/0 Dafilon | B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany. | C0933066 | |
| 6/0 Silkam | B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany. | C0762067 | |
| Sterile gloves | A.R. Medicom, Inc (Asia), Hong Kong. | ||
| Cotton Applicator | Mannings, Quarry Bay, Hong Kong. | Local Shopping Center | |
| Depilatory Cream | Veet (Hong Kong), Kwun Tong, Kowloon, Hong Kong | Local Shopping Center | |
| Lexer-Baby Scissor | FST, British Columbia V7H 0A6, Canada. | 14078-10 | |
| Curved Iris Forcep | FST, British Columbia V7H 0A6, Canada. | 11065-07 | |
| Micro Olsen-Hegar Needle Holder | WPI, Sarasota, FL 34240, USA. | 501989 | |
| Stereo Micrioscope | WPI, Sarasota, FL 34240, USA. | PZMIII-BS | |
| GenTeal Eye Gel | Novartis, East Hanover, NJ 07936, USA. | Local Pharmacy | |
| Heating Pad | Kent Scientific Corporation, Torrington, CT 06790, USA. | DCT-20 | |
| Surgical tape | Laboratory Animal Unit | ||
| Ketamine and Xylazine | Laboratory Animal Unit | ||
| Betadine | Laboratory Animal Unit | ||
| Buprenorphine | Laboratory Animal Unit |
References
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