Drosophila melanogaster meyve sinekinde çiftleşme davranışını etkileyen çevresel ve genetik ipuçlarını analiz etmeye yönelik bir analiz yapacağız.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem
Bu makalede
Özet
Özet
Bir kişinin cinsel gücü, genotip, deneyim ve çevresel koşullardan etkilenir. Bu faktörlerin cinsel davranışları modüle etmek için nasıl etkileşim kurdukları çok iyi anlaşılmamıştır. Drosophila melanogasterında , besin mevcudiyeti gibi çevresel ipuçları, cinsel davranışları modüle eden mekanizmaları araştırmak için uyumlu bir sistem sunan çiftleşme aktivitesini etkiler. D. melanogaster'da çevresel ipuçları genellikle kemoterapi tatlısı ve koku sistemleriyle algılanır. Burada, çevresel kimyasal ipuçlarının çiftleşme davranışı üzerindeki etkisini test etmek için bir yöntem sunuyoruz. Tahlil, besin ortamı ve çift çift içeren küçük bir çiftleşme arenasından oluşur. Çiftler için çiftleşme frekansı 24 saat süreyle sürekli olarak izlenir. Burada, bu tahlilin çevresel bileşenleri basınçlı bir hava sistemi vasıtasıyla harici bir kaynaktan denemek için uygulanabilirliğini ve çevresel bileşenlerin doğrudan çiftleşme arenasında manipüle edilmesini sunuyoruz. SenBasınçlı bir hava sisteminin bileşimi, çok uçucu bileşiklerin etkisini test etmek için özellikle faydalıdır, oysa doğrudan eşleşme arenasındaki bileşenlerin manipüle edilmesi, bir bileşiğin varlığını saptamak için değerli olabilir. Bu tahlil, diğer erkek ve dişi üreme davranışlarının yanı sıra, çiftleşme davranışına ve doğurganlığa genetik ve çevresel ipuçlarının etkisi hakkında sorulara cevap verecek şekilde uyarlanabilir.
Giriş
Üreme davranışları, özellikle erkeklerinkinden daha büyük gametler üreten ve gelişmekte olan yavrularını yükseltmek için koşulları özenle seçmek zorunda kalan dişiler için, genellikle yüksek enerji maliyetlerine sahiptir. Enerji maliyeti nedeniyle, üremenin beslenme koşullarıyla bağlantılı olması şaşırtıcı değildir. Yetişkin beslenme nedeniyle ergenliği ertelenebilen memeliler de dahil olmak üzere hayvanlara rağmen hepsi olmasa da çoğu geçerlidir ve cinsel yönelimleri gıda kısıtlamasından olumsuz yönde etkilenebilir 1 .
Genetik model organizmanın çoğalması Drosophila melanogaster de beslenme koşullarından ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Çevresel Kontrollü Eşleştirme Kutusu
- Kontrollü ve kolay temizlenebilen bir test alanı sağlamak için, Şekil 1A'da gösterildiği gibi 120 cm x 64 cm x 85 cm paslanmaz çelik mutfak dolabını kurun.
- Tavanın hemen altındaki dolabın arkasına bir delik açın ve her biri 2 cm çapında dört yuva dört delik açın. Kutunun altından 7 cm, delikler arasında 12.5 cm yükseklikte kutunun her iki tarafındaki dört delikten oluşan ilk iki kümeyi delin. Kutunun her iki yanındaki diğer iki seti tabandan 35 cm yükseklikte delin.
NOT: Dört delik dört set kamera güç kabloları ve hava pompası boruları kabin içine girip çıkmak için kullanılır. Ark....
- Tavanın hemen altındaki dolabın arkasına bir delik açın ve her biri 2 cm çapında dört yuva dört delik açın. Kutunun altından 7 cm, delikler arasında 12.5 cm yükseklikte kutunun her iki tarafındaki dört delikten oluşan ilk iki kümeyi delin. Kutunun her iki yanındaki diğer iki seti tabandan 35 cm yükseklikte delin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu devamlı testi, çiftleşme davranışını ve çiftleşme frekansını spesifik olarak kullanarak, deneysel çevre koşulları altında belirlenebilir. Çevresel koşulları kontrol altında tutmak için, paslanmaz çelik bir mutfak dolabını, kendi ışık kaynağıyla ve difüzyonuyla, yüksek bir bolluk ışığı ve eşleşme arenalarından en az miktarda parıltı sağlayan bir test alanı haline getirdik ( Şekil 1A ) . İç test alanı, hekzan veya etanol gibi organik çözücülerle temizlemeye izin veren p.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, çiftleşme çiftinin çiftleşme frekansını belirlemek için kullanıldığı varsayılan çevresel ipuçlarını sürekli kontrol ederken, çiftleşme davranışını 24 saat boyunca test eden bir testi açıklamaktadır. Ortam mayayı da içerdiğinde basınçlı bir hava sistemi vasıtasıyla sağlanan maya havasına yanıt olarak çiftleşme frekansını arttırmak mümkündür ( Şekil 2B ). Ek olarak, çiftleşme frekansında benzer bir tepki, ortamda doğrudan agar, pepton ve asetik asit kokusu içeren basitleştirilmiş bir besin or.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa ettikleri hiçbir çıkar çıkarları yoktur.
Teşekkürler
Sinek stokları için Bloomington Drosophila Stok Merkezi'ne teşekkür ediyoruz; C. Gahr, JT Alkema ve S. van Hasselt, basınçlı hava testini geliştirme konusundaki ilk girişimlerinden; Maya yetiştirme tavsiyesi için Jasper Bosman; Ve Rezza Azanchi ve Joel Levine, orijinal olarak Drosophila çiftleşme davranışının zaman aşımı izlemesini geliştirdiler. JA Gorter bir Neuroscience Araştırma Okulu BCN / NWO Lisansüstü Programı hibe tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma, kısmen Hollandalı bilimsel araştırma organizasyonu (NWO) (referans: 821.02.020) tarafından JC Billeter tarafından desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Dolap< / güçlü > | |||
| paslanmaz çelik mutfak dolabı | Horecaworld | 7412.0105 | |
| Beyaz LED'ler | Şanslı Işık | ll-583wc2c-001 | Soğuk beyaz, 20 mAmp ve 2 V |
| Kırmızı LED'ler | Lucky Ligt | ll-583vc2c-v1-4da | 625 nm, 20 mAmp ve 6 V |
| arasında dalga boyu Direnç | Royal Ohm | CFR0W4J0561A50 | 560 ohm, 0,25 W, 250 V ve %5 tolerans |
| Akıllı telefon ışık ölçer uygulaması | Patrick Giudicelli | Işık/Lüks Ölçer ÜCRETSİZ, sürüm 1.1.1 | |
| Güç zamanlayıcı | Alecto | TS-121 | |
| Metal braketler | Keskin açı 5 x 5 mm, 2 x 5450 ve 1 x 1100 mm uzunluk | ||
| Buzlu cam plaka | 1190 x 545 x 5 mm | ||
| Filtre kağıdı çarşaflar | LEE filtreler | 220 | Beyaz don |
| Küçük fan | Nanoxia Derin sessizlik | 4260285292828 | 80 mm Ultra Sessiz PC Fanı, 1200 RPM |
| Büyük fan | Nanoxia Derin sessizlik | 4260285292910 | 120 mm Ultra Sessiz PC Fanı, 650-1500 RPM |
| Web kamerası | kamera Logitech | 950270 | B910 HD WEBCAM OEM, Açı: 78 derece, çözünürlük: 5 milyon piksel |
| Kamera yazılımı | DeskShare | Güvenlik monitörü pro | |
| Name | Company< | strong>Katalog Numarası | Comments |
| Fly yetiştirme | |||
| Fly yetiştirme şişeleri | Flystuff | 32-130 | 6oz Drosophila stoğu şişe |
| Flypad | Flystuff | 59-114 | |
| Vahşi tip sinekler | Kanton-S | ||
| Sinek yetiştirme şişeleri | Dominique Dutscher | 789008 | Drosophila tüpleri dar 25x95 mm |
| Kuluçka makinesi | Sanyo | MIR-154 | |
| Manyetik sıcak plaka | Heidolph | 505-20000-00 | MR Hei-Standard |
| Agar | Caldic Malzemeler B.V. | 010001.26.0 | |
| Glikoz | Gezond & wel | 1019155 | Dekstroz/Druivensuiker |
| Sükroz | Van Gilse | Toz şeker | |
| Mısır unu | Flystuff | 62-100 | |
| Buğday tohumu | Gezond& wel | 1017683 | |
| Soya unu | Flystuff | 62-115 | |
| Pekmez | Flystuff | 62-117 | |
| Aktif kuru maya | Red Star | ||
| Tegosept | Flystuff | 20-258 | %100 |
| Pepton (pastırma) | BD | 211677 | |
| Asetik Asit | Merck | 1000631000 | Buzul, %100 |
| Küçük petrik | Greiner bio-one | 627102 | 35 x 10 mm havalandırma delikleri ile |
| Parafin filmi | Bemis NA | Parafilm | |
| Name< | strong>Company | Katalog Numarası | Comments |
| Maya ve basınçlı hava kurulumu | |||
| Büyük taşlı | Gosselin | BP140-01 | 140 x 20,6 mm |
| Ultra saf su | Millipore şirketi | MiliQ | |
| Maya özü | BD | 212750 | |
| Agar (saf) | BD | 214530 | pastırma |
| Glikoz (0 (+) - glikoz monohidrat) | Merck | 18270000004 | |
| Açık kapaklar | Schott | 29 240 28 | GL45 |
| Silikon septum | VWR | 548-0662 | |
| Dikenli bölme bağlantı parçaları | Nalgene | 6149-0002 | |
| Büyük PVC boru | çapı: dış 1,2 cm ve iç 0,9 cm | ||
| Küçük PVC boru | çapları: dış 0,8 cm ve iç 0,5 cm | ||
| 15 ml tüp | Falcon | ||
| Akvaryum pompası | Sera hassasiyeti | Sera air 110 plus, AC 220-240 V, 50/60 Hz, 3 W ve basınç >100 mbar | |
| Aktif kömür | Superfish | A8040400 | Norit aktif karbon |
| Tek kullanımlık filtre ünitesi | Whatman | 10462100 | |
| Serolojik pipetler | VWR | 612-1600 | |
| Şırınga | BD Plastipak | 300013 | |
| Sıcak tutkal | Pattex | ||
| Şırınga filtresi | Whatman | FP 30 / gözenek boyutu 0,45 mm CA-S | |
| Name | Company | Katalog Numarası | Comments |
| >Analiz | |||
| İstatistik yazılımı | R | lme4 paketi |
Kaynaklar
- Hileman, S. M., Pierroz, D. D., Flier, J. S. Leptin nutrition, and reproduction: timing is everything. J. Clin. Endocrinol. Metab. 85 (2), 804-807 (2000).
- Grosjean, Y., et al. An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
