Summary
水槽で飼育された魚の生殖生態学の研究を可能にする一連の基本的方法が記載されている。これらは、SCUBAを使用して魚を採集し、生きた魚を輸送し、水棲生物に飼われた野生の魚の生殖行動を観察するための有用なプロトコルである。
Abstract
捕獲飼育観察は、継続的な現場調査が不可能な場合に、魚の行動や生態学の側面を明らかにするために重要である。ここでは、水族館に保管された野生の捕獲されたゴビードルのモデルの生殖行動を観察するための一連の基本的な技術が説明されています。この方法は、収集、輸送、および基板スポイナーの生殖生態系の観察の3つのステップに焦点を当てています。生きている魚の収集と運搬の重要な側面は、（1）魚の怪我を防ぐこと、（2）水槽に慎重に慣れさせることです。生きている魚を集めるときは、引っかき傷や水圧の急激な変化などの傷害による害を防ぐことが不可欠です。肉体的な損傷が魚の生存やその後の行動に悪影響を与える可能性があります。水槽への慎重な順応は、死亡率を減少させ、輸送のショックを緩和する。捕獲飼育中の観察には、（1）indiviの同定（2）魚や卵に悪影響を及ぼすことなく産卵した卵を監視することにより、調査種の生殖生態系の詳細な調査を可能にする。可視インプラントエラストマー（VIE）タグの皮下注射は、その後の個々の魚の同定のための正確な方法であり、生存および行動に与える影響を最小限に抑えながら、幅広い範囲の魚と共に使用することができる。研究種が付着卵を堆積させる基質スポイナーである場合、ポリ塩化ビニル（PVC）パイプから構築された人工巣場に脱着可能な防水シートを追加すると、卵の計数とモニタリングが容易になり、研究者の巣の保持魚の卵を保護する行動などが挙げられる。この基本的な方法では、研究論文ではあまり詳しく述べられていない技術が必要ですが、野生の魚を捕獲する実験が必要です。
Introduction
壮大な適応進化は、魚の形態学、生態学および行動において明らかである1 。特に、生殖に関連する生態学的特徴は多様であり、これらのほとんどは個々の適応度2によって直接的に影響され得る。異なる魚種の独特の特徴の進化をもたらした選択圧についての洞察を得るためには、生きた魚を用いた生殖行動および社会行動を直接観察することが、理論的仮説を立証するためにしばしば有益である。
しかし、魚の継続的な野外観察には、保守が困難な特殊な水中設備や施設が必要になる場合があります。これらのケースでは、野生キャッチ水族館飼育魚の観察は3、4、5人がすることができます。さらに、そうでなければまれであるか奇異である魚の行動の効率的な観察自然条件の下で観察するULTは水槽6、7、8で実験を操作することで可能になることができます。人工的なストレスや物理的な損傷を最小限に抑えて良好な条件下で魚を飼育することは、正確な生態学的調査のためには不可欠です。
ピグミーハゼTrimma marinaeは 23〜25ミリメートル全長に達し、9〜26メートル9の深さで、それは静かな、保護されたベイに見出される西太平洋に分布しています。この研究では、 T. marinaeは、自給式水中呼吸装置（SCUBA）、魚の輸送、および直接観察のための水槽への魚の最終的な順応を使用して魚を収集するための一連の基本的技術を記述するモデルとして使用される研究種の生殖行動と生態学の
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Protocol
1.生きた魚の収集と運搬
注：このプロトコールは、15m以上の深さからガス膀胱を持つ魚を採取する方法を記述しています。表面への迅速な運搬は、魚に重大な損害を与えたり殺したりする圧力の変化によって気体膀胱の膨張を誘発する。この最初のステップの間に魚に与えられた損傷は、それらの生存および後の行動に悪影響を与えるので、注意が必要である。
- SCUBAでダイビングする前に、以下の材料を集めてください。水中の標的種を捕獲するのに適したハンドネット。魚のために十分な大きさの二重ポリエチレン袋;ゴムバンド（ø80mm×6mm）。収集袋を表面に膨張させる酸素シリンダーと、抗菌剤であるElbaginは、10％ニフルスチレンナトリウムを含む。収集バッグを置くためのポリスチレンフォームボックス;ピペット;必要であれば（ステップ1.4参照）、長さのロープ最大潜水深度に相当するだけでなく、少なくとも2kgの重量が必要です。
- ダイビング中にハンドネットを使用して標的魚種を収集する。まだ水中で、捕獲された魚をポリエチレンバッグに入れ、ゴムバンドでバッグの口を結ぶ。魚を水槽に運ぶために1日以上かかる場合は、他の袋の自然の生息地から水を守り、魚の水を更新するために使用してください。
注：安全のために、水中タスクは少なくとも2人で作業する必要があります。 - 収集地点から魚の袋を1m /分以下の速度で地面：10m以上の深さでは、2mごとに1〜5分上昇します。 10 mの深さから1 mごとに1〜5分の表面停止まで。捕獲された魚がバッグ内で浮力を維持することができない場合（ すなわち 、膨張したガス袋で浮遊しながら底部に向かって泳動しようとする場合）、同じ深さを1〜5分間維持するか、1〜2 mほど深く走査する。魚が浮力を回復したように見えると、表面への上昇を再開します。
注：SCUBAタンク内の空気が上昇している間に枯渇する可能性がある場合は、ロープをポリエチレンバッグに固定し、2kg以上の重りを取り付けます。水中オペレーターが安全に上昇した後、これを上記の同じ速度で表面に引き上げる。 - ビーチやボートでは、表面処理後に各ポリエチレン袋の水に10ppmのElbaginを溶かします。
注：一部の魚は表面に持ち込まれた直後に浮力を維持できない場合がありますが、ほとんどの場合、1日以内に回復が見込まれます。 - 収集袋の中の魚の密度が高い場合は、魚をより多くの袋の中に分け、輸送中にお互いを擦ってお互いを傷つけないようにします。魚が攻撃的な種である場合、それらを袋の間で個別に分割する。
- 収集バッグを酸素で膨らませ、再びrubberbands。バッグに酸素を導入するときは、ノズルをバッグの水に入れて溶存酸素量を増やします。完全に膨張したバッグは1/4の水で満たされるべきである。
- 収集袋をポリスチレン発泡箱に入れ、安定した水温を維持し、暗い条件下で魚のストレスを減らします。
- 魚を水槽に運ぶのに1日以上かかる場合は、1日に1回、各飼育袋の水の1/4〜1/3を交換します。生息場所から守った水にElbagin 、それぞれ酸素で再パックする。毎日、死んだ魚や排泄物を手のネットやピペットで底に取り除く。
注：飛行機の輸送が含まれている場合、短時間で2つのステップの圧力変化（水面から表面、表面から上部の空気へ）が悪影響を及ぼす可能性があるため、魚を空気の圧力に慣らして輸送する前に少なくとも1日待ってください魚の生存。 i>
2.水槽に魚を釣り上げる
- 魚を入れた袋を水槽に30分間置いて、水温を均等にします。
- 10分間に渡って、水の化学（ 例えば 、pH、塩分）の突然の違いによって引き起こされるショックを避けるために、袋の水を水槽の水と徐々に交換する。
注：水の化学の差が大きすぎるとショックを受ける魚は、体色や行動に異常な変化を示すことがあります。順化中にこれを注意深く監視する。 - 10ppmのElbaginを水槽の水に溶かします。
- その後、1日1回、3日間、1/3の水槽水を交換し、10ppmのElbaginを補充水に加えた。
- 最後に、1日1回、水色の水が半分になるまで、色が消えるまでElbaginを取り除きます。
3.個々の魚を識別するための可視インプラントエラストマー（VIE）タグの注入
この研究では、個々の魚はVIEタグを用いて同定されており、例えばFrederick 10 、Olsen and Vorllestad 11 、Leblanc and Noakes 12を参照してください。ステップ3.2で使用される外科用テーブルは必要ありません。- 各個体の注入位置とタグの色を決定する。最も安全な選択肢は、身体の厚い筋肉の背側または尾側部分の注入点を選択し、それを内部器官が穿孔され得る腹部に注入することを避けることである。
注：ナンバリングシステムは図1に記載されています 。研究種が8つの可能な位置に注入するのに十分な大きさであれば、このシステムは単一の色を使用して154人の識別を可能にします。 VIEタグの10色は市販されている。魚の体色に基づいて識別可能な色を選択します。 - <強い>手に入れることができるよりも小さい魚については、以下のように手術台を準備する（Kinkel ら 13参照）（ 図2 ）。
- ペトリ皿の高さより少なくとも5〜10mm低い5cm L x 5cm Wの柔らかいスポンジを切り取ってください。
- 約5〜10mmの深さのスポンジに溝を切って、その幅を魚のおおよその身体幅の幅に調整する。ポリ塩化ビニル（PVC）板（厚さ0.3 mm）を5 cm L x 5 cm Wに切断し、それを谷折り（またはM字形）に曲げます。
- 溝のあるスポンジの上に溝付きのPVCボードをセットし、スポンジをペトリ皿（φ160 mm、深さ30 mm）にセットします。 PVCボードが適切に浸されるまで、回収タンクの水を使用してペトリ皿を満たしてください。
- VIEタグ付けマニュアルに従ってVIEタグを準備します。エラストマー材料を混合し、混合物を3mLのsyriキットに含まれているように、29ゲージのニードルを使用してください。
- タグの注入を行う際に使用する2つの水タンクを用意します.1つは麻酔用、もう1つは回復用です。これらの温度と塩分の濃度を飼育水槽の水に合わせて調整します。エアーストーン付きのエアーポンプを使用して、回収タンク内の水を穏やかに循環させます。
- 等体積の99.5％エタノールと2-メチルキノリンを混合することにより麻酔液を調製する;これを麻酔タンクに加えて18ppmの濃度にする。
注：麻酔液の最適濃度は、個体の種およびボディサイズに依存する。したがって、事前に研究種の最適濃度を調べる。 - 個々の魚を麻酔タンクに移し、それらが麻酔されるようにする：すなわち、タンクの外側が叩かれたときに魚が触れたり振動したりするのを待つ。麻酔で体の色が変わると多くの魚でzed、また慎重に体の色を監視し、魚がその変化から麻酔されているかどうかを判断する。魚が麻酔タンクから飛び出す可能性があるので、少なくとも魚がゆっくりと動き始めるまで、透明なアクリル板を使って魚を覆っておいてください。
注：麻酔と麻酔液の濃度を調整するのに必要な時間を、試験種とその体格に応じて微調整します。麻酔によって術中の動きが止まると、魚は死亡リスクが高くなります。 - 体が暖かくなると魚が弱くなるので、魚を麻酔しながら比較的冷たい水の中に指を置いてください。
- 麻酔タンクから魚を持ち上げ、速やかに測定したり、必要なデータ（全長、性別など ）を記録する。魚が測定中に回復したように見える場合は、すぐに麻酔タンクに戻してください。
- 魚を手術台に移す。魚の腹側をtにセットする彼はPVCの溝。体のサイズが非常に小さい場合は、注入を行う際に両眼顕微鏡を使用してください。研究種が手に入るほど大きい場合は、VIEタグを持ちながらそれを注入します。
- 針の面取りされた側を外側に向け、魚の頭の方を向いてください。針を皮下に、多かれ少なかれ体に平行に、できるだけ皮膚のすぐ下に近づけて挿入します。魚の体の大きさと最終的にタグを見ることの容易さに応じて挿入深さを調整します。
- 針を引っ込めながらVIEタグを注入し、針の斜角が針の進入点に達する前に注射を停止する（これは、比較的広い領域にタグを注入すると分かりやすい）。
- タグ注入が完了したら、直ちに魚を回収タンクに移す。回復が遅すぎる場合は、水を手で静かに循環させます。
- 回復後、飼育水槽に魚を戻し、10 ppmのEl3日間バニリンを水に加える。
注：VIEタグの可視性が低い条件では、UVAでフィルタされたライトがタグの認識を容易にします。
4. Demersal Adhesive Eggsのカウント
- 魚が接着卵を預けることができる人工産卵場所を作るには、不透明なPVCパイプ（直径5cm、長さ6cm）を直径に垂直に半分に切断します。
注：上記パイプサイズは、比較的小さいゴビT. marinaeの産卵に適しています。したがって、試験種に適したPVCパイプのサイズと形状を調整してください。 - 防水シートに5 mm x 5 mmのグリッドを印刷し、PVCパイプの内側にフィットするようにカットします。
- ゴムバンドを使用して防水シートをPVCパイプの内側に固定します。
注：女性が防水シート上に卵を付着させることが困難で、卵がシートから落ちる場合は、シートをサンドペーパーで織ります。 - 水槽の底を砂の層で覆う、1- 厚さ2cm。シート固定側を下にして、PVCパイプの約1/3を斜めに砂の中に挿入します。
- 魚がうまく産卵した後、PVCパイプから卵塊が入ったシートを取り出し、水槽水を入れたペトリ皿に入れます。 PVCパイプの内側に新しいシートを固定し、水槽の底に戻します。最後に、卵の数を撮影して卵を数えます。
- また、産卵後に親の卵のケアの観察を行う場合は、卵を水から出さないように注意してください。むしろ、ペトリ皿を使用して卵とシートを水槽の水と一緒に掬い上げ、卵塊を素早く写真撮影し、卵の塊を慎重に同じPVCパイプに再度貼り付けてから元の位置に戻します。水槽の底。最後に、画像を使用して卵を数えます。
- ImageJを使用して卵を数える（ 図3
- そうでなければ、卵が密に沈着している場合は、面積密度比を計算することによって卵の数を推定する：卵密度を計算するために印刷された5×5mm 2グリッド中の卵を数え、ImageJによって卵で覆われた表面積を測定し、単位と表面積あたりの密度より卵の総数を推定する。上記のImageJによる表面積測定方法は、以下のように説明されている：スケールの設定...（Research Services Branch、https://imagej.nih.gov/ij/docs/menus/analyze.html）;画像の空間スケールを定義する方法を説明しています。 ImageJを使用して表面積を測定する（Keene State College、Academic）Technology、https://dept.keene.edu/at/2011/04/15/by-matthew-ragan/）。
注：卵が透明の場合、ImageJは卵の輪郭を個別に認識できるため、黒の防水シートは自動カウント方法に適しています。
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Representative Results
上記の方法に従い、鹿児島県奄美大島沖合で、2014年4月、2015年および2016年4月にT. marinaeの41,15および96個体を収集した（ 表1 ）。いずれの場合も、水槽に卵を預けるまでは25人（61％）、14人（93％）、91人（95％）の人が住んでいました。 Fukuda et al 。 図3に示すように 、2014年の観測期間終了前に1匹の魚のみが死亡し、捕獲後7日目に魚の産卵が開始され、良好な条件下で飼育されていることが示された。
VIEタグは、この小型の魚であっても、目に見え、個体の同定を可能にした（ 図4A 、 4B ）。防水シート上に堆積した卵の写真を図4Cに示す。彼らは数えられるほど十分に見えました。それを取り出して撮影した後、そのシートを水槽の元の場所に戻し、入れ子の男性は直ちに父方のケアを続けた（ 図4D ）。
一緒に、これらの技術は、飼育された個々の魚の社会的相互作用および生殖の成功を記録することを目的とした実験に用いることができる。具体的には、Fukuda et al。 3は、上記の方法を用いて、アクアリアのT. marinaeの生殖生態学を調査した。結果は、女性の繁殖率と女性の体のサイズとの間に正の相関を示したが（ 図5 ）、サイズの異なる男性の間では生殖の成功の差は観察されなかった（ 図6 ）。また、 T. marinaeは連続的な生殖対を確立する傾向があり、これらの中でほとんどの産卵が起こった（ 表2 ）。雄T.マリーナのみが父方の卵のケアを行うことが観察された。個人間の積極的な相互作用は、一等交配系が主に女性交配者の保護に起因する可能性があることを示唆した。
| 収集日 | コレクションの深さ | コレクションメソッド | 収集された個体数 | 滞在期間 | 運送日 | 死者の数 | 生存率 | ||
| 浮上 | 輸送 | 順応 | |||||||
| 15Aプリンス2014 | - 21m | 表面まで魚の表面。 | 41 | 夜間 | 2014年4月16日 | 16 | 0 | 0 | 61％ |
| 2015年4月23日 | - 19 m | 12mの深さまで魚の表面を、表面まで縄で引き上げる。 | 15 | 1日 | 2015年4月25日 | 1 | 0 | 0 | 93％ |
| 2016年4月26日 | - 21m | 15mの深さまで魚の表面を、表面までロープで引き上げる。 | 96 | 1日 | 2016年4月28日 | 4 | 1 | 0 | 95％ |
表1：採集条件と魚の生存率。死者の数は、個々の魚が死亡した時期と数を示します。
表2：飼育実験中の産卵ペア。 M 、男性の個人識別（ID） F 、女性のID; 下線が引かれたID 、生まれた女性、 ID、彼らは継続的なペアを確立していなかったものの、男性と交配させ、女性を概説 。これらの結果は、 T. marinaeが一等交配系の一部として連続的な生殖対を確立する傾向があることを示している。この表は、Fukuda et al。 3 この表をダウンロードするにはここをクリックしてください。
図1： VIEタギング位置の配置。 （ A ）各数字は、噴射の位置に対応している。個々の魚の識別番号は、タグの位置を合わせることによって決定される。 （ B ）個々の魚No.93の例。
図2： 外科用テーブルを示す図。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図3： ImageJを使用した手動および自動卵カウント。 （ A ）セルカウンタープラグインを用いたマニュアルカウント。このプラグインを使用すると、いくつかのサブディビジョンでグループ化された卵を数えることができます。それは、卵4つのグループに細分され、数えられた。 （ B ）自動卵計数。 （ C ）自動卵カウント画像と元画像をマージした画像。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図4： VIEタグ付きの マリネ を 注入 し、人工産卵場所に寄託された卵を計数するための防水シートを用いること による代表的な個体識別 。 （ A ）ピンクのVIEタグで識別される個人番号1、 白い矢印は注射されたVIEタグを示す。 （ B ）2つの緑のVIEタグによって識別される個々のNo.11。 白い矢印は、注射されたVIEタグ。 （ C ）卵を防水シートに散らす。 （ D ）卵子シートを取り出して写真撮影した後、男性が再開した父親のケアを水槽に戻した。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図5. T. marinae におけるクラッチサイズと女性のボディサイズ（全長）の 関係 。一般化された線形混合効果モデルで得られた、女性の各サイズ群における推定された繁殖率の実線曲線 。これらの結果は、女性の繁殖成績が体の大きさとともに増加したことを示している（ピアソン相関、 r = 0.56、 P <0.05、 n = 1 6）。この数字は、Fukuda et al。 3 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図6. T. marinae における推定交尾成功と男性の体格（全長）との 関係 。各データ項目は、雄の再生頻度と雌の推定繁殖率から推定した。これらの結果は、男性は体型にかかわらず再生産的に成功したことを示している（ピアソン相関、 r = 0.50、 P > 0.05、 n = 8）。この数字は、Fukuda et al。 3_upload / 55964 / 55964fig6large.jpg "target =" _ blank ">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
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Discussion
多数の魚の生殖生態学は実験的飼育を通じて明らかにされている。特に、性別変更6、8、14、チームメイトの選択15、16、種内競争7は 、17水槽 -ままの魚を使用して詳細な調査を頻繁に話題となっています。さらに、水槽で観察されたいくつかの結果は、後にフィールド8、18で確認されています。これらの成果は、野生の捕獲された魚を水棲魚で飼育実験することの有用性と信頼性を裏付けている。さらに、大規模な現場調査の予備段階として、自然に発生する可能性のある状況をシミュレートする飼育実験による操作は、野生条件ではごく稀である。
プロtocolは、接着剤の卵を堆積させる小型基材スポイナーに適した方法を記載している。水族館で飼育された魚にとって最適条件の大きな変化が種間で期待できるため、プロトコールのいくつかの点を調整する必要があります。特に、プロトコールの5つの点は、特定の研究種の予備評価の後に調整のために考慮されるべきである：（1）プロトコール1.4において、魚を浮上させる時間; （2）プロトコール3.1.3および3.1.5において、VIEタグを注入する直前の麻酔液の濃度および麻酔に費やされた時間; （3）プロトコール3.1.8のVIEタグを魚に注入する際の針の挿入深さ; （4）プロトコール3.2.1の人工巣場として使用されるPVCパイプの大きさと形状; （4）手動計数（正確ではあるが時間と労力がかかる）、自動計数と面積密度比推定（効率的だが粗い）。時少数の卵であるか、またはいくつかの細分化によってグループ化された集計が必要な場合（死んでいるか生きている、発達段階に基づく分類など）、手動計数方法が推奨される。多数の卵があり、ImageJが各卵を個別に区別できる場合、自動計数法が適しています。面積密度比の推定は、卵が多く、密度の高い場合に有効であり、ImageJは各卵を個別に区別できない。
多くの種の魚は、浮遊した後も浮力を完全に維持できないことがあります。しかし、このプロトコルに従った注意深い浮上は、ほとんどの魚が1日以内に回復することを可能にするかもしれない。表面に浮かんだ直後に収集袋に魚が上下逆さまに浮かんでいる場合は、少なくとも1日前に魚が死んでいるかどうかを確認してください。魚が表面に持ち込まれた直後に魚が死んだ場合、または回復するために1日以上が必要な場合は、よりゆっくりと表面をさらすか、その後の収集努力の過程で表面化する間の時間間隔を決定する。
VIEタグに加えて、着色された外部プラスチックストリーマー、ナイロンアンカータグ、フィンクリッピング、およびパッシブインテグレーテッドトランスポンダー（PIT）タグなど 、個々の魚を識別するための他の方法が存在する。しかし、特に小さな魚を集めるとき、これらの技術のいくつかは死亡率を増加させ、成長を妨げ、または現場で見ることができない。 10ほとんどの外部タグは魚の体から突出してまた、タグは巣穴に生息する種、狭い割れ目や密な藻場のいくつかの行動を制限することができます。これとは対照的に、小さな魚の多くの研究は、VIEのタグ付けは、死亡率と成長10、11には大きなマイナスの影響を与えなかったことがわかりました。 VIEタグは、皮下タグが突出しないので、魚の行動に無視できるほど影響を及ぼし得るが、魚は小さいので、特に適している小型種の行動観察のための同定法10 。いくつかの以前の研究によると、アクリル塗料はまたVIEが19、20のタグと同じように使用することができます。
人工産卵巣は、一般に、デマース接着卵を産卵する魚の生殖の調査に用いられる。これまでの研究では、テラコッタ屋根瓦21 、セラミックタイル22 、シェル23 、PVC箱24 などの異なる種類の材料から作られた人工巣を使用した。これらの人工産卵巣は、多くの基質産卵者にとって有用であり得る。これらの研究は、形状やサイズなどの人工巣の利用可能性は、それが作られたものよりも重要であることを示唆している。 PVCパイプは入手し処理が容易な材料であるため、本論文では、産卵地としてPVCパイプを使用した。
捕獲飼育観察によって得られた生態学的情報の限界は十分に評価されるべきである。当然のことながら、水槽で飼育、種の自然環境と比較して、様々な生態系の水生生息地の条件（水の例えば 、物理的および化学的特徴、食品エコロジー、内および間特異的相互作用のための機会、生息地の範囲を制限し、および人口密度）。個人が自然なものとは異なる特定の行動を示すようになる可能性があります。したがって、現地調査は、魚の生殖行動の適応進化を推定するための最良の背景を提供するために飼育観察を補完すべきである。
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Disclosures
著者は何も開示することはない。
Acknowledgments
魚を集めるのを助けてくれた横山さんに感謝します。また、飼育方法に関する助言については、W。Kawamuraに感謝する。本研究は、日本学術振興会（KAKENHI）がTSに授与された助成金（第24370006号及び第16K07507号）
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hand net | Nisso | AQ-17 | Select for the target species size. |
| Polyethylene bag | San-U Fish Farm | 8194 | |
| Rubber band | ESCO Co. LTD. | 78-0420-64 | ø 80 mm x 6 mm |
| Oxygen cylinder | N/A | N/A | Oxgen cylinder for diving equipment suits. |
| Elbagin | Japan Pet Design Co. Ltd. | 75950 | Pafurazine F (provided from same company) is equivalent drug to Elbagin. |
| Polystyrene foam box | N/A | N/A | |
| Pipette | AS ONE | 1-8625-04 | |
| Rope | Mizukami Kinzoku Co. LTD. | 95301601 | |
| Weight | N/A | N/A | Weight for diving equipment suits. |
| Water tank | N/A | N/A | |
| Air pump | KOTOBUKI | 4972814 062115 | |
| Air stone | KOTOBUKI | 4972814 232204 | |
| 2-Methylquinoline | Wako | 170-00376 | |
| Ethanol (99.5) | Wako | 057-00456 | |
| Visible implant elastomer tag kit | Northwest Marine Technology | N/A | http://www.nmt.us/products/vie/vie.shtml |
| Soft sponge | N/A | N/A | |
| PVC board | N/A | N/A | 0.3 mm thickness is easy to use. |
| Petri dish | N/A | N/A | A large one, such as ø 160 mm and 30 mm depth, is convenient for the injection of the VIE tag. |
| Transparent acrylic board | N/A | N/A | |
| UVA filtered light | N/A | N/A | |
| PVC pipe | N/A | N/A | ø 5 cm |
| Waterproof sheet | SOMAR Corp. | 3EKW03 | The film for the plain copier. |
| Sand | N/A | N/A | |
| Stereo microscope | N/A | N/A | |
| Camera | N/A | N/A |
References
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