يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

النانومترية الحمض النووي كأداة مرنة لدراسة البوليمرات سيميفليكسيبلي

6.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56056

⸱

أكتوبر 25, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

سيميفليكسيبلي البوليمرات عرض الخصائص الميكانيكية الفريدة التي يتم تطبيقها على نطاق واسع بنظم المعيشة. ومع ذلك، تقتصر دراسات منهجية في البوليمرات البيولوجية نظراً لخصائص مثل صلابة البوليمر غير قابل للوصول. هذه المخطوطة يصف كيف يتم التحايل على هذا القيد بالأنابيب النانوية الحمض النووي للبرمجة، تمكين دراسات تجريبية عن أثر صلابة خيوط.

الملخص

ويمكن فهم الخواص الميكانيكية لهذه المسألة لينة معقدة، والمستندة إلى البوليمر، مثل الخلايا أو الشبكات بيوبوليمير، لا الإطار الكلاسيكي للبوليمرات المرنة ولا قضبان جامدة. خيوط الأساسية تظل ممدودة بسبب ما تيبس العمود الفقري غير التلاشي، الذي هو كمياً عن طريق طول استمرار (lp) وإنما أيضا عرضه للتقلبات الحرارية القوية. صلابة الانحناء محدود يؤدي إلى ميكانيكا الجماعية فريدة وغير عادية للشبكات الأكبر، مما يتيح تشكيل السقالات مستقرة في انخفاض حجم الكسور مع توفير أحجام كبيرة مش. هذا المبدأ الأساسي السائد في الطبيعة (مثلاً في الخلايا أو الأنسجة)، تقليل محتوى الجزيئي عالية ومما ييسر انتشارية أو النقل النشط. نظراً للآثار البيولوجية والتطبيقات التكنولوجية المحتملة في الهلاميات المائية متوافق حيويا، خضعت البوليمرات سيميفليكسيبلي دراسة كبيرة. بيد أن التحقيقات مفهومة ظلت صعبة نظراً لأنها تعتمد على البوليمرات الطبيعية، مثل خيوط الأكتين، التي غير الانضباطي بحرية. وعلى الرغم من هذه القيود، ونظرا لعدم وجود البوليمرات الاصطناعية وميكانيكيا الانضباطي، وسيميفليكسيبلي، وخيوط أكتين أنشئت كالنظام النموذجي الموحد. حد رئيسية أن الكمية الوسطى لف لا يمكن ضبطها بحرية لدراسة تأثيرها على هياكل السائبة العيانية. وتم حل هذا القيد باستخدام الأنابيب النانوية هيكلياً للبرمجة في الحمض النووي، تمكين التحكم تغيير صلابة خيوط. أنها تتشكل من خلال النماذج المستندة إلى البلاط، حيث هجن مجموعة منفصلة من خيوط مكملة جزئيا في بنية حلقة مع محيط منفصلة. نهايات لزجة، تمكين البلمرة فعالة إلى خيوط عدة ميكرون في الطول، وتتميز هذه الحلقات وعرض مماثل البلمرة حركية البوليمرات البيولوجية الطبيعية. سبب الميكانيكا القابلة للبرمجة، وهذه الأنابيب أدوات تنوعاً، رواية دراسة أثر لف في جزيء الواحد فضلا عن حجم الجزء الأكبر. وعلى النقيض من خيوط الأكتين، تظل مستقرة على مدى أسابيع، دون انحطاط ملحوظ، وتعاملها مع بسيط نسبيا.

المقدمة

بسبب السلوكيات المعقدة خصائصها الميكانيكية الفريدة التي يوفرها، البوليمرات سيميفليكسيبلي هي اللبنات الأساسية لمعيشة هذه المسألة. خلافا للبوليمرات المرنة، البوليمرات سيميفليكسيبلي تعتمد على تكوين ممدودة بسبب تصلب العمود الفقري غير التلاشي على حين لا تزال تبقى خاضعة للتقلبات الحرارية قوية1. وهكذا، لا يمكن تطبيق النماذج العشوائية البحتة على سلوكهم، كما هو الحال مع النقيض إلى النقيض تماما مرنة أو جامدة البوليمرات. ووضعت ما يسمى دودة مثل سلسلة طراز2،3،4 لقياس صلابة هذا عن طريق لف، الذي هو ثابت الانحلال في العلاقة الظل الظل على طول الشعير....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-إعداد n HTs

ملاحظة: هنا، تشير n إلى عدد مختلف خيوط الحمض النووي واحد يشارك في تشكيل أنابيب الحلزون من حجم معين. قيم n = 8، ثمانية مختلف خيوط الحمض النووي واحد يشكلون عصابة وحدة.

  1. تسلسل "الحمض النووي الشراء" (درجة نقاء [هبلك] أو أعلى) من توليف الحمض النووي مناسبة الخدمة أو إجراء توليف عالية الجودة وتنقية (تسلسل نموذجية في الجدول 1).
  2. الخطوات
  3. النوكليوتيد ريسوسبيند المجففة بالتبريد في تنقية المياه ومتابعة استثارة مزيد النظر في دليل المقابلة من الشركة. ضبط الكمية المياه للحصول على تركيز نهائي من 200 مليميكرون.
  4. تحديد تركيزات الحمض النووي واحد فروع للتحقق من القيم التي يق....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الجمعية العامة للأنابيب النانوية الحمض النووي عن طريق منحدر درجة حرارة (الشكل 2) وسيلة موثوق بها للغاية لتشكيل هذه البوليمرات سيميفليكسيبلي الاصطناعية. هذه البوليمرات لها خصائص مماثلة لنظيراتها التي تحدث بشكل طبيعي، مثل خيوط الأكتين، ولكنها توفر إطارا تجريبية أوسع بكثير نظراً لخواصها الميكانيكية يمكن أن كنترولبلي غيرت9،27 . مثل البوليمرات البيولوجية، أنها يمكن ترتيبها في الشبكات (.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

للحصول على الشبكات بشكل صحيح المشكلة، تجميع الأنابيب النانوية الحمض النووي خطوة حاسمة. الأخطاء التي تحدث أثناء عملية التوليف تأثيراً سلبيا على نوعية الأنبوبة؛ لذلك، من المستحسن أن يستخدم [هبلك] أو عملية أكثر صرامة لتنقية النوكليوتيد. منذ تشكيل منفصلة بدلاً من تجميع الأنابيب النانوية الحمض النووي، فضلا عن توزيعها طول، يعتمد على ستويتشيوميتري اكويمولار من النوكليوتيد ن التأسيسية ضمن المجموعة، من الضروري أن يستحسن تركيزات من الخيوط التي تم شراؤها، منذ نظراً للقيم يمكن أن تختلف إلى حد كبير من تركيز الفعلية. وهذا يمك.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

نعترف بالتمويل عن طريق DFG (1116/17-1) ومدرسة لايبزيغ للعلوم الطبيعية "بويلدمونا" (GSC 185). تم دعم هذا العمل من خلال مشروع اجتذاب فراونهوفر 601 683. ت. ﻫ. تعترف بتمويل من "الصندوق الاجتماعي الأوروبي" (كلية العلوم التربوية-100077106).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AFM الكابولي ACTAAppNano
AFM - NanoWizard 3JPK Instruments
كاميرا CCDAndoriXon DV887
DMSOSigma-AldrichD2650
قليل النوكليوتيدات Biomers.netللحصول على تسلسلات انظر الجدول 1
النوكليوتيدات المسماة DNA Cy3Biomers.netللتسلسل ، انظر الجدول 1
EDTASigma-AldrichE-9884
Epi-fluorescence micro-scopeLeicaDM-IRB
MgCl2< / sub>Sigma-AldrichM-8266
Mica "V1" ، 12 مم دائريPlano GmbH50-12
MicroAmp & reg; لوحة تفاعل بصرية سريعة 96 بئرThermo Fisher Scientific Inc.4346907
Microamp® فيلم لاصق بصريThermo Fisher Scientific Inc.4306311
NanoDrop 1000 مقياس الطيفالضوئي Thermo Fisher Scientific Inc.
100x موضوعيLeica5506168
المياه النقيةMerk Millipore - Milli-Q & amp أنابيب Elix
Sapphire PCRGreiner Bio-One683271
TProfessional Standard PCR ThermocyclerCore Life Sciences Inc.070- معيار
7900HT نظام PCR سريع في الوقت الحقيقيللأنظمة الحيوية التطبيقية4351405
مقياس الريومترTA InstrumentsARES
SYBR & reg ؛ جرين I هلام الحمض النووي وصمة عارThermo Fisher Scientific Inc.S7567
تريسسيجما ألدريتشT4661
تريتون X-100سيجما ألدريتشX-100يمنع تبخر العينة في واجهة الهواء والماء
قليل

المراجع

  1. Huber, F., et al. Emergent complexity of the cytoskeleton: from single filaments to tissue. Adv Phys. 62 (1), 1-112 (2013).
  2. Kratky, O., Porod, G. Röntgenuntersuchung gelöster Fadenmoleküle. Recl Trav Chim Pays-Bas. 68 (12), 1106-1122 (1949).
  3. Saitô, N., Takahashi, K., Yunoki, Y.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

طول الاستمراريةالقياس الريولوجيمقياس الريولوجيا بالقص الديناميكيالكشف الفلوريالتهجين باستخدام الجهاز الدوري الحراريتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقيحركية البلمرةتطبيقات الهيدروجيل