Methylene 청색 염료 주입 신장 골반으로 마우스 배아 요로 개발 하는 동안 요로 분기점 방해 결함의 평가 촉진 한다. 여기, 신장 골반에 methylene 청색 염료 주입에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
요로 분기점 방해 결함은 선천적인 변형을 유도 hydronephrosis 및 hydroureter. Murine 요로 분기점 방해 결함 비뇨 기 시스템 내에서 메 틸 렌 블루 염색 흐름을 추적 하 여 평가 될 수 있다. Methylene 청색 염료 perinatal 배아 신장의 신장 골반에 주입 하 고 염료 흐름은 액체 정역학 압력을 적용 한 후 신장 ureter 통해 및 방광 루멘에의 신장 골반에서 모니터링 합니다. 염료 축적 정상적인 perinatal 요로, 방광 루멘에 분명 있을 것입니다 하지만 요로 문제 발생 하는 경우 신장 골반 사이 비정상적인 ureter의 강요 될 것 이다. 이 방법은 요로 분기점 장애물 확인 및 hydronephrosis 및 hydroureter의 시각화를 촉진 한다. 이 원고는 요로 분기점 장애물을 확인 하 신 골반에 methylene 청색 염료 주입에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.
서론
비뇨 기 시스템은 신장, ureters 및 일반적인 방광과 요도의 한 쌍의 구성 됩니다. 비뇨 기 시스템의 주요 기능은 혈액의 물과 전해질 균형을 관리 하 여 신체의 항상성 유지 하는 것입니다. 신장 혈액 제어 전해질 농도 산 성-기본 균형을 필터링 하 고 초과 물과 용액 및 대사 산물 등 폐기물을 배설 하는 소변 생산. 소변은 신장 신장 골반에서 ureter 그것 저장 되 고 궁극적으로 요도1통해 제거 단방향 방식으로 bladderin 통해 다음 수송 된다.
ureters는 직선 튜브 nephric 덕트에서 발생. 마우스에서 배아 일 10.5 (E10.5)에서 nephric 덕트에서 신진, 후 ureter 스토킹 elongates 및 E12.5 및 E16.5 라는 마우스 사이 침투성은 urothelium 다층 구조로 차별화. Ureter 줄기 주변 중간 엽 세포 또한 내부 stromal 세포, 중간 두께 평활 근 세포, 그리고 외부 adventitial 섬유 아 세포로 구성 된 3 개의 층으로 구분 됩니다. 신장 골반에서 시작 ureteral 연동 파도 ureter 소변2,3, E16.5 마우스....
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프로토콜
쥐 (Wnt5a flox / flox 마우스 (Wnt5a tm1.1Tpy) 및 Dll1Cre 선, UVJO 마우스 모델) 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 NIH 지침에 따라 관리 7 NCI 프레드릭 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 프로토콜 아래에서 공부 하는 고.
1. 메 틸 렌 블루 염색 솔루션의 준비
- 측정 0.1 g 메 틸 렌 블루 가루.
- 10 mL 정상적인 염 분 또는 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 1에서 메 틸 렌 블루를 vortexing에 의해 완전히 분해.
- 주입 동안 막힘 제거 주사기 필터 (막 기 공 크기 0.45µm) 10 mg/mL 메 틸 렌 블루 솔루션 필터.
- 어셈블 메 마른 두 피 정 맥 세트 (27GX3/4 ″) 3 mL 일회용 주사기와 채우기 3 mL을 주사기 메 틸 렌 블루 솔루션 필터링.
참고: 수압 및 후속 염료 흐름을 방지 하려면 배치 메 틸 렌 블루 솔루션으로 채워진 주사기 위에 바늘 팁.
2. 출생 전 태아의 해 부
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결과
신장과 더 낮은 오 줌 시스템 등 간, 대 장 등 대부분의 다른 내부 장기에 있습니다. 제거한 후에 이러한 다른 내부 장기, 신장, ureters과 단일 방광의 쌍 표시 (그림 1A)는. 성공 해 부에 신장 골반에 주입 하는 염료 ureter 통해 방광으로 신장에서 흐름 것입니다. 신장 골반 ureter는 신장에서의 깔때기 모양의 동 공이 확장 되어 근 위 부분 이다. 따라서, 염료 주입 포인트 검은 화살표 (그림 1B-1 C) 표시는 신장과 연결 표시 인접 ureter 근처입니다. 후 한 신장에 메 틸 렌 블루 염색 솔루션 주입, 염료 ureter 통해 및 방광 요로 장애물이 존재 하지 않는 경우 ureter, 방광 루멘에서 보이는 블루 색상의 결과로 (그림 1B에 신장 골반에서 흐르는
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토론
마우스 신장 E16.5 기능 시작 되며 염료 주입 테스트가 시간 포인트에서 이론적으로 가능 하다. 그러나, 신장이 너무 작아 염료 솔루션 주입 및 이후이 고기 때문에 비정상적인 소변 전송 쌓아 소변의 보조 효과 hydronephrosis 및 hydroureter 같은 고기 명확 하 게 관찰 하지는. UPJO 또는 UVJO, 같은 장애물에서이 고기 발포 신장, ureters, E18.5에서 분명 하다. E19.5 또는 신생아 강아지에 태아의 큰 신장은 E18.5에서 배아의 보다 조작 하기가 또는 더 젊은. 그러나, 양측 요로 방해 된 출산 후 새끼. 따라서, CAKUT 고기 perinatal 배아 또는 새끼 실험 마우스 특성에 따라 적절 하 게 선택 하 여 유효성을 검사 하는 실험을 수행 합니다.
염료 주입을 잠재적인 결함을 검사를 수행 하기 전에 그대로 비뇨 기 시스템을 유지 하기 위해 신중 하 게 해 부. 이것은 본질적으로 비정상적인 hydronephrotic 신장, urete.......
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공개 사항
저자는 공개 상관이 있다.
감사의 글
나는이 원고를 제출 하 여 지원 박사 앨런 O. Perantoni (CDBL/NCI/NIH) 감사 합니다. 나 또한이 원고 편집에 대 한 박사 마이클 홀 (CDBL/NCI/NIH) 및 Nirmala Sharma (CDBL/NCI/NIH)을 감사 합니다. 감사 해요 라 Thang (SAIC)에 그의 뛰어난 마우스 축산에 대 한. 이 작품은 암 연구에 대 한 건강, 국립 암 연구소 및 센터의 국가 학회에 의해 지원 되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 메틸렌 블루 | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL 일회용 주사기와 BD Luer-Lok 팁 | BD | 309657 | |
| Acrodisc 주사기 필터 Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel 두피 정맥 (나비) 세트; 27G x 3/4 " 12" | EXELINT | 26709 | |
| 섬세한 수술 가위 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| 마이크로 해부 겸자 | Roboz 수술 기구 Co. | RS-5135 | |
| 듀몬트 핀셋; 패턴 #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD 프리시전글라이드 니들 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
참고문헌
- Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
- Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
- Bohnenpoll, T., Kispert, A.
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재인쇄 및 허가
