Summary
Точная оценка болевой реакции в нейропатической животной модели имеет решающее значение для изучения патофизиологии боли заболеваний и разработки новых анальгетиков. Мы представляем чувствительных и объективный метод определения сенсорные функции грызунов, которые задние лапы системой автоматизированной походка анализа.
Abstract
Фон Frey тест является классическим методом, который широко использовался для изучения сенсорные функции невропатической боли животных. Однако она имеет некоторые недостатки, такие как субъективных данных и требование о квалифицированных, опытных экспериментатора. На сегодняшний день, различные изменения улучшили фон Frey метод, но он все еще имеет несколько ограничений. Недавние сообщения предложили, что походка анализа производит более точных и объективных данных от нейропатической животных. Этот протокол демонстрирует выполнение автоматизированных походка анализа для определения степени невропатической боли у мышей. После нескольких дней acclimation мышей разрешалось свободно ходить на стеклянный пол, чтобы осветить следы. Затем количественного определения следы и походка выполнялись через видео-клипы с автоматическим анализом различных пешеходных параметров, как площадь лапу печати, свинг времени, угол лапы и т.д.
Основная цель этого исследования заключается в описания методологии анализа автоматизированных походки и кратко сравнить его с данными из классических сенсорный тест, с помощью фон Frey накаливания.
Introduction
Патологические изменения нервной системы, вызванного ишемии, травмы, воспаления, инфекции, метаболической дисфункцией, или аутоиммунное заболевание иногда приводят к невропатической боли, которая определяется как боли, возникающие как прямое следствие поражения или болезни затрагивающих Соматосенсорная система1. Невропатическая боль обычно невыносимой и к сожалению, обычные анальгетики обычно не производят достаточно боль помощи2. Главной особенностью невропатической боли содержит спонтанное и evoked стимуляции (то есть, аллодиния и Гипералгезия) боли. Аллодиния — ноцицептивных ответ, что происходит обычно болезненные стимулы, например легкого прикосновения или теплый стимуляции. Гипералгезия указывает расширение боль ответ на раздражители вредных механических и/или тепловой3. Хотя эти два симптомы критически ухудшить качество жизни пациента, механические аллодиния, вызываемые нежный тактильной стимуляции является наиболее отягчающих симптомов, потому что мягкий контакт трудно избежать в повседневной жизни.
Основной механизм и расследовать новые анальгетиков для лечения нейропатической боли, точное измерение болевой реакции имеет важное значение. Были разработаны многочисленные невропатической боли животных моделей ноцицептивных реакций на задние лапы области из-за его высокой доступности4,5,6,7. Таким образом большинство боли ответ оценки были проведены на подошвенной или дорсальной поверхности задние лапы путем применения механических раздражителей, с помощью специальных инструментов, таких как фон Frey нитей. Одним из наиболее часто используемым методом является вверх и вниз, описанный Диксон8 и более поздних изменение версии9,10. Однако очень квалифицированные, опытные экспериментаторы требуются для выполнения теста фон Frey, и результаты могут быть субъективным.
Система автоматизированного походка анализа может расследовать неврологические и нервно-мышечных расстройств путем измерения различных параметров ходьбы в свободно перемещающихся грызунов. В различные нервные травмы животных моделей степень Ноцицепция и антиноцицептивной эффект несколько методов лечения может быть оценена без добавления боль стимуляции11,12,13, 14. Эта система анализа может обнаружить походка статических и динамических параметров, таких как: лапу печати площадь (площадь полной лапу печати, что контакты с полом), лапа интенсивности (средняя интенсивность области контактирующих лапу), длина (шага Расстояние между последовательными размещения же лапу), позицию фазы (продолжительность контакта земли для одного задние лапы), шаг последовательности (порядок, в котором четыре лапы размещены на полу), качели (продолжительность фазой) и качели скорость (вычисляется от длина шага и качели продолжительность и выраженный пикселей в секунду). Этот документ демонстрирует использование системы анализа и предоставляет краткое сравнение данных с фон Frey тест, с помощью сужения хронической травмы (CCI) нейропатической мышей.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
все эксперименты были проведены в соответствии с руководящими принципами этики Международной ассоциации для изучения боли и были одобрены институциональный уход животных и использования Комитетом на Чхуннам национального университета ( Тэджон, Южная Корея).
1. индукция ТПП на седалищный нерв
- дом самцов ICR мышей весом 20-25 g под свет/темно цикла 12 ч при контролируемой комнатной температуре (на уровне 20-25 ° C) и влажности (40-60%), с свободный доступ к продовольствию и воды. Разрешить адаптационного периода для мышей в зале животных ухода по крайней мере за 1 неделю до операции.
- Во время жилищного строительства, наблюдать за внешний вид и поведение мышей и не использовать мышей, показаны ненормальной двигательной активности.
Примечание: Один день до операции CCI, измерения механических чувствительность задние лапы, применяя фон Frey нитей и выполнять анализ автоматизированной походки для получения нормальных исходных значений. Затем, мышей случайным образом назначать управления и экспериментальных групп.
- Во время жилищного строительства, наблюдать за внешний вид и поведение мышей и не использовать мышей, показаны ненормальной двигательной активности.
- В день операции, анестезировать мышей путем инъекций 2,2,2-tribromoethanol (250 мг/кг, внутрибрюшинного (ИС)).
Примечание: Носить личного защитного снаряжения, например хирургические платье, перчатки и маски.- Весят 2,5 g 2,2,2-tribromoethanol и добавить 2-метил-2-бутанол окончательный объем 5 мл. Держите решение от света (например, используйте контейнер темные или заверните в фольгу).
- Разрешить реагенты раствориться полностью путем нагрева при 40 ° C и перемешивания на 10-30 мин
- Добавить дистиллированной воды на окончательный объем 200 мл и перемешать, пока хорошо не смешано.
- Хранить аликвоты на 4 ° C и хранить в темноте. После двух недель, анестезии должны быть заменены новым аликвоты.
- Придать объем 20 мкл на 1 g массы тела. Например если вес тела мыши 25 g, дают 500 мкл раствора. Типичная продолжительность этой анестезии-1 ч.
Примечание: Это решение станет токсичных при воздействии света или тепла, так что будьте осторожны избежать воздействия тепла и света. Настоятельно рекомендуется использовать IP-инъекции маршрут.
- Когда указатель мыши попадает в глубокий наркоз, поместите его на операционном столе с спинной стороне вверх (то есть, лёжа) и стерилизовать внешней области середины бедра с правой стороны с 70% спиртом.
Примечание: Подтвердить глубокую анестезии, установив отсутствие реакции на щепотку или давления стимул на задние лапы или хвост. - Побудить ТПП на седалищный нерв правый мыши.
- Сделать надрез на коже вокруг области середины бедра 1,0-1,5 см длины с лезвием скальпеля.
- Тупо рассечь мышцы бедра с микро комаров кровоостанавливающий подвергать седалищного нерва.
- Перевязать подвергаются седалищного нерва 3 раза с промежутками 1,0-1,5 мм, с помощью швов Хромовой Кетгуд 4-0.
Примечание: Сделать свободные перешнуровок, связывая от седалищного нерва до мягкий встряхивания появляется на ипсилатеральной задние лапы. Шам группе мышей получил же хирургическое открытие в аналогичных условиях за исключением без перевязки нерва.
- Закрыть хирургическое открытие с 3-4 простых Прерванный швы с помощью 5-0 шелк и стерилизовать с повидон-йода для дезинфекции наружной области хирургии.
- После операции, поместите курсор мыши в чистой клетке на грелку. Когда животные оправился от наркоза, их возвращения в их дома Кейдж.
Примечание: В этом исследовании, антибиотики не использовались. Габапентин IP группа получила CCI + GBP (GBP), в дозе 50 мг/кг один раз в день как позитивный элемент.
2. Измерение механических аллодиния (тест фон Frey)
Примечание: оценить частоту вывода ответа на механические раздражители, используя 1 g фон Frey нити на подошвенной поверхности ипсилатеральные задние лапы.
- На каждый день испытаний, принести мышей в поведенческих экзаменационную комнату и акклиматизироваться мышей в их собственные дома клетке для по крайней мере 30 минут до test.
Примечание: Носить личного защитного снаряжения, например хирургические платье, перчатки и маску. - Поместите мышь в прозрачные акриловые окна на этаже металлической сетки и акклиматизироваться мышь для 30 мин.
- Осторожно применять 1 g фон Frey нити на подошвенной поверхности задние лапы, до тех пор, пока нити изгибов.
- Накаливания стимуляции применить к ипсилатеральной Хинд лапу 10 раз с интервалом по крайней мере 10 s и записывать результат.
Примечание: В этом исследовании, количество ответов вывод лапы от 10 испытаний указаны как процент частоты вывода лапы (PWF, %). Каждые два дня после операции CCI была выполнена проверка фон Frey.
3. Автоматизированный анализ походки
Примечание: система анализа походки визуализирует каждый лапу печати в то время как животное ходит и анализирует автоматически различные походки параметры, такие как лапу печати, лапа интенсивности, длина шага, позиция фазы, шаг последовательности, качели, качели скорость, и т.д. В этом исследовании, мы показали, лапу печати области и одну позицию после преобразования данных в процентах изменения между контралатеральной слева против ипсилатеральные прямо задние лапы. Таким образом результат 50% означает, что размер лапу печати и продолжительность района Лапа контакт с полом, между левой и правой стороны же. Кроме того, более низкие значения данных приближается к 0% указывают, что размер и продолжительность контакта уменьшаются в ипсилатеральные задние лапы по сравнению с контралатеральной стороны (см. Группа B Рисунок 2 и Рисунок 3).
- Для адаптационного, держать мыши внутри устройства анализа походки для 10 мин один раз в день, начиная за 5 дней до операции CCI.
Примечание: Тест анализа походки, включая адаптационного должна быть выполнена в темноте. - Принесите мышей в экзаменационную комнату для анализа походки и акклиматизироваться в их дома клетке для по крайней мере 30 минут до test.
- На вкладке Настройка меню программы, установите " длина аллея " до 30 см и набор " максимальная длительность выполнения " до 5 s и " максимального выполнения вариации " до 50%.
- Выберите зарегистрированные камеру от ' установки ' на вкладке ' программа ' меню.
- Выберите " открыть приобретение " от ' приобрести ' закладка ' программа ' меню.
- После сообщения о состоянии, нажмите кнопку ' оснастки фон ' кнопку, чтобы сфотографировать фон пустым (т.е., пустой) дорожка.
- Нажмите ' начать приобретение ' кнопку и поместите мышь на дорожку; запись начинается автоматически согласно движения мыши.
Примечание: Когда мышь явно прогулки по дорожке, программа автоматически классифицирует этот шаг как " запустить совместимый " с зеленым значком. Если программное обеспечение не удалось обнаружить печать ноги, экспериментатор увидите значок красного цвета и необходимо повторить запись. Для анализа необходимы по крайней мере пять успешных совместимый работает. - После теста, выберите ' классифицировать бежит ' из вкладки приобретать ' программа ' меню.
- Выбор запусков для анализа и нажмите кнопку ' auto классифицировать ' кнопку.
Примечание: После классификации, все параметры статистики автоматически сохраняются и экспериментатор можно найти результаты, нажав " вид запуска статистики " на меню analyze.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Мы провели тест фон Frey и автоматизированный анализ походки в ТПП мышей до 10 дней после операции ТПП. Для статистического анализа неоднократные меры двустороннего дисперсионный анализ (ANOVA) определяет общее воздействие, и был проведен анализ столб hoc Дуннетт чтобы определить p значение среди экспериментальных групп.
Результаты, показанные на рисунке 1 показывают время курс классической фон Frey тестовых данных. PWF (%), CCI мышей был более 2 дней после операции ТПП и поддерживается в течение 10 дней по сравнению с фиктивным группы. В группе положительный контроль CCI, GBP (50 мг/кг, IP, один раз в день за 10 дней начинается 1 день после операции) значительно облегчить CCI-расширение PWF. В группе Шам группы A PWF (%) был 8.00 ± 5,83 на timepoint предоперационного (Pre), 6.00 ± 2,45 на 2 день, 4.00 ± 2,45 на день 4, 2.00 ± 2.00 в день 6, 4.00 22.45 на 8 день и 6.00 ± 2,45 на 10 день. В группе CCI PWF (%) был 2.86 ± 1,84 на Pre, 61,43 ± 5.95 в день 2, 68,57 ± 4.59 на 4 день, 72.86 ± 5.22 в день 6, 75.71 6.49 на 8 день и 75,71 ± 3.69 на 10 день. В группе ТПП + GBP, PWF (%) был 2,50 ± 1,43 на Pre, 57.50 ± 5.22 на 2 день, 50.00 ± 4.04 на 4 день, 45.00 ± 4.81 на день 6, 46,25 5.65 в день 8 и 47.50 ± 4.88 на 10 день. В группе B площадь под кривой (AUC) был 23.00 ± 6.00 в Шам, 317.86 ± 17.04 в ТПП и 223.75 ± 17.05 в ТПП + GBP группы.
Результаты, показанные на рисунке 2 указывают время курс изменение области печати лапы после хирургии ТПП. Данные отображаются как процентное изменение области печати лапы между левой и правой задних лап. Если область печати лапки то же самое с левой и правой сторон в нормальном состоянии, данные будет 50%. CCI значительно сократить лапу печати области ипсилатеральные задние лапы 2 дней после операции и сохранялся в течение 10 дней. GBP удивительно восстановить области снижение лапу печати. В группе Шам группы B, области печати лапки (%) был 50.13 ± 2.13 на Pre, 50.30 ± 1.45 на 2 день, 53.24 ± 0,80 на 4 день, 50.30 ± 1.68 в день 6, 52.08 1,79 на 8 день и 49.66 ± 2.24 на 10 день. В группе CCI области печати лапки (%) был 50.71 ± 3.17 на Pre, 0 ± 0 день 2, 0 ± 0 на 4 день, 8.86 ± 3.27 в день 6, 6,6 3,20 на 8 день и 10.30 ± 5,60 на 10 день. В группе CCI + GBP области печати лапки (%) был 55.59 ± 2,01 на Pre, 4.65±4.17 на 2 день, 15.18±5.57 на 4-й день, 20.20 ± 4.00 в день 6, 26.01 5.53 на 8 день и 28.40 ± 6.04 на 10 день.
Результаты, показанные на рисунке 3 указывают время изменения курса одной позиции после хирургии ТПП. Данные были рассчитаны и показано, как изменить процент (похож на лапу печати области данных). CCI сократить одну позицию стороны ипсилатеральные и GBP значительно восстановить его. В группе Шам группы B, одну позицию (%) был 49.31 ± 2.15 на Pre, 50.71 ± 0,67 на 2 день, 50.76 ± 0,44 на 4 день, 50.60 ± 1.11 на день 6, 51.50 0,96 на 8 день и 49,00 ± 2,35 на 10 день. В группе CCI одну позицию (%) был 50.36 ± 3.17 на Pre, 0 ± 0 день 2, 0 ± 0 на 4 день, 11,5 ± 3,25 в день 6, 13.61 5.04 на 8 день и 12,94 ± 6.40 на 10 день. В группе CCI + GBP одну позицию (%) был 52.35 ± 0,91 на Pre, 5.44 ± 4.87 на 2 день, 18.66 ± 4.33 на 4 день, 25,48 ± 4.10 в день 6, 30.26 2.17 на 8 день и 32.24 ± 4.95 на 10 день.
Рисунок 1: механический аллодиния, оценены фон Frey тест в ТПП мышей. (A) лапы вывода частоты (PWF, %) в фон Frey тест был более 2 дней после операции ТПП и поддерживается в течение 10 дней по сравнению с фиктивным группы. Габапентин (50 мг/кг, GBP, IP) значительно вспять CCI-индуцированных механических аллодиния. (B) накопленной данных PWF показываются как площадь под кривой. ** p < 0,01 и *** p < 0,001 против ТПП группы. Планки погрешностей указывают среднее ± SD. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: лапу печати области путем анализа автоматизированных походки в ТПП мышей. (A) захвачен программного обеспечения для анализа изображений задние лапы от групп Шам, ТПП и ТПП + GBP (габапентин, 50 мг/кг, IP). Задние лапы, обнаруженного системой анализа показатели белых прямоугольников. Обратите внимание на маленький размер лапы ТПП, и это сокращение было частично восстановлено GBP лечения. (B) время курс области печати лапки (%). Данные рассчитываются как процент изменение области печати между левой и правой задних лапы (например, 50% указывает же области лапу печати в левой и правой стороны). * p < 0,05 и ** p < 0.01 против ТПП группы. Планки погрешностей указывают среднее ± SD.
Рисунок 3: одну позицию путем анализа автоматизированных походки в ТПП мышей. (A) захваченный и преобразованных изображений одной позиции выделены разными цветами на каждой лапе. Обратите внимание, что розовый след на ипсилатеральной задние лапы сокращается в группе CCI и габапентина (50 мг/кг, GBP, IP) значительно восстановлены его аналогично уровню Шам. (B) время курс одной позиции (%). Данных в виде графа линии после вычисления процентное изменение одной позиции между левой и правой задних лапы (например, 50% указывает же одну позицию в левой и правой стороны). * p < 0,05, ** p < 0,01 и *** p < 0,001 против ТПП группы. Планки погрешностей указывают среднее ± SD. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В настоящее время измерение механических аллодиния, используя фон Frey нитей является наиболее широко используется метод боли животных моделей для демонстрации тактильная гиперчувствительность. Как животных моделей для невропатической боли продолжали разрабатываться, методологии оценки для сенсорные функции был также более8,9,10,15. В этих докладах было предложено, что эти изменения могут обеспечить более точное, быстрое и удобной заменой старых методов. Однако данные из этих методов по-прежнему может быть ограничена его субъективности и требование навыков или опыта для выполнения метода. Кроме того запретительных животных нельзя избежать при выполнении теста фон Frey, и поэтому сдержанность стресса животных может повлиять на результаты ответа боль.
Система автоматизированного походка анализа автоматически измеряет различные параметры животного ходьба (например, Общая площадь контакта лапу на пол, угол лапу печати, время позицию, и т.д.), и поэтому экспериментатора может использовать более объективных данных для анализ12,13,14,16,17,18. Кроме того этот метод может выполняться без каких-либо стимуляции; Таким образом это менее инвазивный и могут быть получены данные от свободно движущихся грызунов. Как показано в результатах этого исследования, подножия печати размер и позицию время ипсилатеральные задние лапы уменьшена ТПП хирургии и восстановленные GBP лечения; аналогичные результаты также находятся в фон Фрей тест. Соответствии с предыдущие замечания14, результаты анализа походки в животных моделях невропатической боли имеют высокую степень положительная корреляция с этим из теста фон Frey, указав, что измененные параметры, относящиеся к CCI может отражать степень из механических аллодиния, один из самых раздражающих симптомов нейропатической боли.
Здесь мы предоставляем метод о том, как работать с системой анализа автоматизированных походки в деталях и краткое сравнение данных с классической фон Frey теста в ТПП нейропатической мышей. В заключение автоматизированных походка анализа может быть наиболее улучшилось доступным инструментом для изучения невропатической боли из-за его удобным, объективной и чувствительной.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Это исследование было поддержано Чхуннам национального университета, Корейский институт Восточной медицины (KIOM) и Грант R технологии здравоохранения Кореи & D проекта через Корея здравоохранения промышленности развития института (ХИДИ), финансируемая министерством здравоохранения & Благосостояния, Республика Корея (номер гранта: HI15C0007).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Saline | JW Pharmaceutical | N/A | Vehicle for drugs |
| 1ml syringe | BD Plastipak | 300013 | Injecting device |
| 2, 2, 2-tribromoethanol (97% purity) | Sigma | T48402 | Anesthetic |
| 2-methyl-2-buthanol (99% purity) | Sigma | 152463 | Solvent for 2, 2, 2-tribromoethanol |
| Catwalk Automated gait analysis system | Noldus | N/A | Automatic analysis software of aniaml gait |
| Chromic catgut (4-0 thickness) | AILEE | C442 | Ligature to make chronic constriction injury on the sciatic nerve |
| Gabapentin | Sigma | Y0001280 | Analgeisc, Used as a positive control drug in this study |
| Graefe Forceps | F.S.T | 11051-10 | Surgical instrument |
| Heating Pad | DAESHIN ELECTRONICS | M-303AT | Regulation of body temperature |
| ICR Mouse | Samtaco | N/A | Experimental animal |
| Mersilk (3-0 thickness) | ETHICON | W598H | Suture material for surgical closure of skin |
| Micro-Mosquito | F.S.T | 13010-12 | Surgical instrument |
| Micro-scissors | F.S.T | 14090-09 | Surgical instrument |
| Needle holder | F.S.T | 12002-12 | Surgical instrument |
| Povidone Iodine | Firson | N/A | Disinfectant to prevent infection after surgery |
| Scalpel blade | F.S.T | 10010-00 (#10) | Surgical instrument to make an incision |
| Scalpel handle | F.S.T | 10003-12 (#3) | Surgical instrument to make an incision |
| Von-Frey filaments | North Coast | NC12775-99 | Measurement device to test sensory function for mechanical stimulation |
References
- Loeser, J. D., Treede, R. D. The Kyoto protocol of IASP Basic Pain Terminology. Pain. 137 (3), 473-477 (2008).
- Colloca, L., et al.
- Vranken, J. H. Mechanisms and treatment of neuropathic pain. Cent Nerv Syst Agents Med Chem. 9 (1), 71-78 (2009).
- DeLeo, J. A., et al. Characterization of a neuropathic pain model: sciatic cryoneurolysis in the rat. Pain. 56 (1), 9-16 (1994).
- Kim, S. H., Chung, J. M. An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat. Pain. 50 (3), 355-363 (1992).
- Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury. Pain. 43 (2), 205-218 (1990).
- Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33 (1), 87-107 (1988).
- Dixon, W. J. Efficient analysis of experimental observations. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 20, 441-462 (1980).
- Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments. Mol Pain. 10, 26 (2014).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
- Chen, H., Du, J., Zhang, Y., Barnes, K., Jia, X. Establishing a Reliable Gait Evaluation Method for Rodent Studies. J Neurosci Methods. , (2017).
- Kang, D. W., et al. Antinociceptive Profile of Levo-tetrahydropalmatine in Acute and Chronic Pain Mice Models: Role of spinal sigma-1 receptor. Sci Rep. 6, 37850 (2016).
- Huehnchen, P., Boehmerle, W., Endres, M. Assessment of paclitaxel induced sensory polyneuropathy with "Catwalk" automated gait analysis in mice. PLoS One. 8 (10), e76772 (2013).
- Vrinten, D. H., Hamers, F. F. 'CatWalk' automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat; a comparison with von Frey testing. Pain. 102 (1-2), 203-209 (2003).
- Martinov, T., Mack, M., Sykes, A., Chatterjea, D. Measuring changes in tactile sensitivity in the hind paw of mice using an electronic von Frey apparatus. J Vis Exp. (82), e51212 (2013).
- Ferland, C. E., Laverty, S., Beaudry, F., Vachon, P. Gait analysis and pain response of two rodent models of osteoarthritis. Pharmacol Biochem Behav. 97 (3), 603-610 (2011).
- Mogil, J. S., et al. Hypolocomotion, asymmetrically directed behaviors (licking, lifting, flinching, and shaking) and dynamic weight bearing (gait) changes are not measures of neuropathic pain in mice. Mol Pain. 6, 34 (2010).
- Ferreira-Gomes, J., Adaes, S., Castro-Lopes, J. M. Assessment of movement-evoked pain in osteoarthritis by the knee-bend and CatWalk tests: a clinically relevant study. J Pain. 9 (10), 945-954 (2008).
