Method Article

ايليجانس كاينورهابديتيس السلكية-نموذج تنوعاً في فيفو لدراسة التفاعلات بين الميكروبات والمضيف

DOI:

10.3791/56487

⸱

October 18th, 2017

 ,  , 
1Biology and Biotechnology, Worcester Polytechnic Institute

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا، ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس كنموذج مضيف تنوعاً لدراسة التفاعل الميكروبية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

علينا أن نظهر أسلوب استخدام ايليجانس كاينورهابديتيس كمضيف نموذج لدراسة التفاعل الميكروبية. ويتم إدخال الميكروبات عن طريق النظام الغذائي يجعل الأمعاء الموقع الرئيسي للمرض. الأمعاء السلكية هيكلياً ووظيفيا يقلد أمعاء الثدييات وهو شفاف يجعلها قابلة للدراسة المجهرية للاستعمار. هنا نظهر أن مسببات الأمراض يمكن أن تسبب المرض والموت. نحن قادرون على تحديد طفرات الميكروبية التي تظهر ضراوة غيرت. يجعل استجابتها الفطرية المصانة الإجهادات الأحيائية C. ايليجانس نظاما ممتازا للتحقيق في أوجه التفاعلات المناعية الفطرية المضيف. نظهر أن تستضيف مع الطفرات في الجين أوكسيديز المزدوج لا يمكن أن تنتج الأنواع الأكسجين التفاعلية وغير قادر على مقاومة الميكروبات إهانة. كذلك ندلل على براعة المقايسة بقاء قدم بإظهار أنه يمكن استخدامه لدراسة تأثيرات مثبطات لنمو الميكروبات. كما يمكن استخدام هذا الفحص اكتشاف عوامل الفوعة الفطرية كأهداف لتطوير العوامل المضادة للفطور الرواية، فضلا عن إتاحة فرصة لمواصلة الكشف عن التفاعلات بين الميكروبات والمضيف. تصميم هذا التحليل يفسح المجال أيضا لإنتاجية عالية شاشات كل الجينوم، بينما القدرة على الديدان cryo-المحافظة لاستخدامها في المستقبل يجعل من نموذج حيوان كله جذابة وفعالة من حيث التكلفة لدراسة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C. ايليجانس قد استخدمت ككائن نموذج قوية لأكثر من 50 عاماً. وفي الستينات، رائدة الأحياء جنوب أفريقيا سيدني برينر استخدام C. ايليجانس لدراسة تطوير الخلايا العصبية، يمهد الطريق لنسب طويلة من العلماء لدراسة الجوانب المختلفة لبيولوجيا الخلية والحيوان في الديدان الخيطية. وتشمل هذه النسب الحائزين على جائزة نوبل كريغ ميلو وأندرو النار على العمل [رني]1وروبرت هورفيتز وجون سالستون للعمل على تطوير الجهاز والمبرمج2،،من34، ومارتن تشالفي لعمله على بروتين فلوري أخضر5. على الرغم من أن هذا الكائن الحي النموذجي قد استخدمت تقليديا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-التحضير لديدان أسطوانية النمو المتوسطة (NGM)

  1. ل 1 لتر من وسائط الإعلام، والجمع بين أجار 20 غ ومصدر النيتروجين العضوي 2.5 g (مثلاً، باكتو-ببتون) وكلوريد الصوديوم الجيل الثالث 3g في قارورة 2 ل. إضافة 975 مل الماء المعقم.
    1. إضافة في حانة ضجة عقيمة. في حالة استخدام الوسائط التلقائية برير، وأنابيب اﻷوتوكﻻف ووسائط الإعلام لمدة 15 دقيقة؛ ينبغي أن تكون وسائل الإعلام يعقم لفترة أطول إذا تم زيادة حجم-
  2. تعيين وسائط الإعلام على لوحة إثارة، والسماح لتبرد.
    1. بمجرد وسائل الإعلام الحارة للمس (حوالي 60 درجة مئوية) أسيبتيكالي إضافة 1 مل من 1 م MgSO 4 ● ح 2 س 1 مل كاكل 1 ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قد سبق وصف المرضية مقايسة (الشكل 1) استخدام المبيضة و C. ايليجانس لدينا مختبر17،18 و19،مختبرات أخرى20. نبدي الانقياد لاستخدام C. ايليجانس لدراسة الفوعة المبيضة تبين أن الخلايا المبيضة هي بلعها بسرعة من الديدان، وتتراكم في التجويف المعوي تسبب الحركة أبطأ، مشوهاً الشرج المنطقة (دار) (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن تعديل طرق المعايرة C. ايليجانس العدوى والبقاء على قيد الحياة على مدى التعرض مدى الحياة المبيضة التي وصفناها لاختبار آخر الممرض. قد السائل ثقافات أخرى من البكتيريا أو الفطريات وتتغذى على C. ايليجانس بطريقة مماثلة. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون جزيئي التهابات المسلسل بتعريض اليرقة إلى أحد مسببات المرض أولاً كما هو موضح، ثم قم بنقل الحيوانات إلى لوحة جديدة تحتوي على مسببات المرض منفصلة بعد بلوغ سن الرشد.

أثناء إجراء هذا التحليل، من المهم إيلاء اهتمام دقيق لتوقيت. أولاً.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان هذا العمل المنجز في ويدعمها معهد البوليتكنيك ورسيستر.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أجار (حبيبات ، درجة بكتريولوجية)منتجات Apex BioResearch20-248
أسلاك ألومنيوم (95٪ نقطة ، 32 مقياس)Genesee Scientific59-1M32P
Axiovision Zeiss المجهر المقلوبAxiovision Zeiss
Bacto-PeptoneFisher BioReagantsBP1420-500
C. ايليجانس سلالة Bli-3Caenorhabditis مركز علم الوراثةBli-3 (e767) CB767
كلوريد الكالسيومفيشر العلميBP51-250
الكوليسترول ، درجة سيجما ، 99٪ على الأقلمنها SigmaC8667-25G
(20 × 150 مم)FIsherBrand14-961-33
مجهر التشريح (NI-150 إضاءة عالية الكثافة)نيكون للأدوات
الإشريكية القولونيةCaenorhabditis GeneticsCenter OP50
GraphPad Prism (برنامج تحليل منحنى البقاء على قيد الحياة) برنامجGraphPad
LB Broth (Miller's)Apex BioResearch Products11-120
كبريتات المغنيسيومفيشر Scientific10034-99-8
أطباق بتري متوسطة الحجم (35 × 10 مم)فالكون353001
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدةسيجماP0662-500G
كلوريد الصوديومفيشر العلميBP358-1
فوسفات الصوديومفيشر العلميBP332-500
Wildtype C. albicans SC5314ATCCSC5314
Wildtype C. elegansمركز علم الوراثة CaenorhabditisN2
من أنابيب الاستزراع التي يمكن التخلص شركة مركز

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).
  2. Ellis, H. M., Horvitz, H. R. Genetic control of programmed cell death in the nematode C. elegans. Cell.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Caenorhabditis elegansHost microbe InteractionsFungal Infection AssaySurvival AssayWorm PickingEgg PreparationCandida albicansIntestinal ColonizationVirulence FactorsInnate Immunity

Related Articles