Konfokale Mikroskopie zeigt Zelle Oberfläche Rezeptor Aggregation über Bild Korrelation Spektroskopie

Adam C. Parslow; Andrew H.A. Clayton; Peter Lock; Andrew M. Scott

doi:10.3791/57164

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Methodenartikel

Konfokale Mikroskopie zeigt Zelle Oberfläche Rezeptor Aggregation über Bild Korrelation Spektroskopie

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DOI:

10.3791/57164

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2. August 2018

Adam C. Parslow¹^,² , Andrew H.A. Clayton³ , Peter Lock⁴ , Andrew M. Scott¹^,²^,⁵^,⁶^,⁷

¹Tumour Targeting Laboratory, Olivia Newton-John Cancer Research Institute, ²School of Cancer Medicine, La Trobe University, ³Centre for Micro-Photonics, Faculty of Science, Engineering and Technology, Swinburne University of Technology, ⁴LIMS Bioimaging Facility, La Trobe Institute for Molecular Science, La Trobe University, ⁵Department of Medical Oncology, Olivia Newton-John Cancer and Wellnes Centre, Austin Health, ⁶Department of Medicine, University of Melbourne, ⁷Department of Molecular Imaging and Therapy, Austin Health

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Antikörper, die Ziel-Rezeptoren auf der Zelloberfläche binden können Konformation und clustering Veränderungen verleihen. Diese dynamischen Veränderungen haben Auswirkungen für die Charakterisierung von Arzneimittelentwicklung in Zielzellen. Dieses Protokoll nutzt konfokalen Mikroskopie und Bild Korrelation Spektroskopie durch ImageJ/Fidschi, das Ausmaß des Rezeptors auf der Zelloberfläche clustering zu quantifizieren.

Zusammenfassung

Konfokale Mikroskopie bietet eine zugängliche Methode zur subzelluläre Interaktionen entscheidend für die Charakterisierung und Weiterentwicklung der präklinischen Agenten beschriftet mit fluoreszierenden Sonden zu erfassen. Mit neuen Zuführungen in Antikörper-basierte zytotoxischen Droge ist Trägersysteme, Verständnis der Veränderungen induziert durch diese Mittel im Bereich der Rezeptor-Aggregation und Internalisierung von entscheidender Bedeutung. Dieses Protokoll nutzt die etablierten Verfahren der fluoreszierenden Immunocytochemistry und die open-Source Fidschi Verteilung von ImageJ, mit seinen eingebauten Autokorrelation und Bild mathematische Funktionen, räumliche Bildkorrelation durchführen Spektroskopie (ICS). Dieses Protokoll quantitates die fluoreszente Intensität der beschrifteten Rezeptoren als Funktion des Gebiets Strahl confocal Mikroskop. Dies bietet ein quantitatives Maß für den Zustand der Ziel-Molekül Aggregation auf der Zelloberfläche. Diese Methode konzentriert sich auf die Charakterisierung der statischen Zellen mit Potenzial in zeitlichen Untersuchungen der Rezeptor Aggregation zu expandieren. Dieses Protokoll stellt eine zugänglich Methode zur Quantifizierung der clustering-Ereignisse an der Zelloberfläche gut nutzen Techniken und nicht-spezialisierten bildgebenden Geräte eingerichtet bieten.

Einleitung

Die Entwicklung von therapeutischen Antikörpern hat bemerkenswerte Erfolge bei der Behandlung von mehreren Tumor Arten¹gezeigt. Die jüngsten Fortschritte der Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADC) Oberfläche als Bereitstellungsmechanismen für Zytotoxische Substanzen erweitert die Anforderungen für das Verständnis der Dynamik der Antikörper: Rezeptor-Wechselwirkungen auf der Zelle². Im Anschluss an die erfolgreiche Ausrichtung eines Antikörpers an die Zelle Oberfläche Rezeptor können diese komplexe ähnliche Aggregation Muster bei Ligand: Antikörper Interaktionen³induzieren. Veränderungen im Rezeptor ....