جيل بانكريتويدس التعبير عن الأنسولين خالية من السقالة، ثلاثي الأبعاد من الماوس المتكفل البنكرياس في المختبر

Marissa A. Scavuzzo; Jessica Teaw; Diane Yang; Malgorzata Borowiak

doi:10.3791/57599

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

جيل بانكريتويدس التعبير عن الأنسولين خالية من السقالة، ثلاثي الأبعاد من الماوس المتكفل البنكرياس في المختبر

9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57599

⸱

يونيو 2, 2018

Marissa A. Scavuzzo¹ , Jessica Teaw²^,³^,⁴ , Diane Yang²^,³^,⁴ , Malgorzata Borowiak¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Program in Developmental Biology, Baylor College of Medicine, ²Center for Cell and Gene Therapy, Texas Children's Hospital, and Houston Methodist Hospital, Baylor College of Medicine, ³Molecular and Cellular Biology Department, Baylor College of Medicine, ⁴Stem Cell and Regenerative Medicine Center, Baylor College of Medicine, ⁵McNair Medical Institute, Baylor College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا، بروتوكولا لتوليد الأنسولين معربا عن بانكريتويدس مورين 3D من التعويم الحر e10.5 نات المتكفل البنكرياس و mesenchyme المرتبطة بها.

الملخص

البنكرياس هو جهاز معقد يتألف من العديد من أنواع الخلايا المختلفة التي تعمل معا لتنظيم التوازن جلوكوز الدم والهضم. تتضمن هذه الأنواع خلية إفراز إنزيم الخلايا أسينار، نظام الأقنية أربوريزيد مسؤولة عن نقل الإنزيمات بخلايا الأمعاء، وإنتاج هرمون الغدد الصماء.

خلايا بيتا الغدد الصماء هي نوع الخلايا الوحيدة في الجسم التي تنتج الأنسولين إلى انخفاض مستويات الجلوكوز في الدم. مرض السكري، وهو مرض يتسم بفقدان أو اختلال وظيفي في خلايا بيتا، أبعادا وبائية. وبالتالي، من الضروري وضع بروتوكولات للتحقيق في تطوير خلايا بيتا التي يمكن استخدامها لأغراض الفرز لاشتقاق المخدرات والمداواة يستند إلى الخلية. بينما التحقيق التجريبي لتطوير الماوس أساسي، في فيفو الدراسات شاقة وتستغرق وقتاً طويلاً. الخلايا المستزرعة توفر منصة أكثر ملاءمة للفحص؛ ومع ذلك، فغير قادر على الحفاظ على تنوع الخلوية ومنظمة المعمارية، والتفاعلات الخلوية العثور على في المجراة. ولذلك، من الضروري استحداث أدوات جديدة للتحقيق في أورجانوجينيسيس البنكرياس وعلم وظائف الأعضاء.

تطوير البنكرياس الخلايا الظهارية في ارتباط وثيق مع ميسينتشيمي من بداية أورجانوجينيسيس كخلايا تنظيم وتفرق في الجهاز الكبار المعقدة، والناحية الفسيولوجية المختصة. ميسينتشيمي البنكرياس يوفر إشارات هامة لتنمية الغدد الصماء، كثير منها ليست مفهومة جيدا حتى الآن، وبالتالي يصعب أن الخص خلال الثقافة في المختبر . هنا، نحن تصف وضع بروتوكول للثقافة أورجانويدس الماوس معقدة ثلاثية الأبعاد، والخلوية التي تحتفظ ميسينتشيمي، يسمى بانكريتويدس. برعم البنكرياس مورين e10.5 تشريح، وفصلها، ومثقف في بيئة خالية من السقالة. هذه الخلايا العائمة تجميع ذاتي مع mesenchyme تخيم بانكريتويد النامية وعدد قوية من خلايا بيتا الغدد الصماء النامية جنبا إلى جنب مع خلايا مجرى الهواء وفي أسينار. يمكن استخدام هذا النظام لدراسة التفاعلات خلية خلية خلية تحديد مصير والتنظيم الهيكلي و morphogenesis، أثناء أورجانوجينيسيس، أو للمخدرات أو جزيء صغير، أو الفحص الوراثي.

المقدمة

تحديد آليات التطور الطبيعي والفسيولوجيا أمر بالغ الأهمية لفهم مسببات المرض وغرس أساليب العلاج في نهاية المطاف. حين استزراع والتفريق بين الخلايا الجذعية تمكن التحليل السريع والفائق للتنمية، فإنه مقيد بالهيئة الحالية للمعرفة فيما يتعلق بالآليات التي تنظم مصير الخلية ومصطنع ويجمل التنمية في نسبيا الدولة متجانس، ثنائي الأبعاد¹^،². في فيفو التنمية تتأثر التأثيرات الخارجية، مع أنواع مختلفة من الخلايا في مكانة والوسط تقدم إشارات باراكريني والدعم التنظيمي لتوجيه أورجانوجينيسيس، بل ووظيفة هذه الخلايا يعتمد أيضا على ما المناطق المحيطة بها للإرشاد³^،^،من