We beschrijven een in-house ontworpen in vitro flow kamer model, waardoor het onderzoek naar bacteriële aanhankelijkheid aan het enten van de weefsels.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een In Vitro Model van een Parallel-plaat perfusie-systeem te bestuderen van de naleving van de bacteriële om te enten van weefsels
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Verschillende ventielen leidingen en kleppen stent gemonteerde worden gebruikt voor de vervanging van de klep van rechts-ventriculaire uitstroom tractus (RVOT) bij patiënten met aangeboren hartafwijkingen. Wanneer using prothetische materialen toch, zijn deze protheses gevoelig voor bacteriële infecties en verschillende antwoorden van de gastheer.
Identificatie van bacteriële en gastheer factoren die een vitale rol in de endovasculaire hechting van micro-organismen spelen is van belang om de pathofysiologie van het intreden van infecties zoals infectieuze endocarditis (IE) beter te begrijpen en om preventieve strategieën. Daarom is de ontwikkeling van bevoegde modellen te onderzoeken van bacteriële hechting fysiologische schuintrekken omstandigheden noodzakelijk. Hier beschrijven we het gebruik van een nieuw ontworpen in vitro perfusie kamer op basis van parallelle platen waarmee dat de studie van bacteriële aanhankelijkheid aan verschillende onderdelen van graft weefsels zoals blootgesteld extracellulaire matrix, endotheliale cellen en inerte gebieden . Deze methode in combinatie met de kolonie-vormende eenheid (CFU) tellen is voldoende om te evalueren van de neiging van graft materialen naar bacteriële hechting onder stroom. Verder kan, de stroomsysteem van de kamer worden gebruikt om te onderzoeken van de rol van bloedbestanddelen in bacteriële hechting schuintrekken omstandigheden. We toonden aan dat de bron van weefsel, hun bovengrondse morfologie en bacteriesoorten specificiteit zijn niet de belangrijkste bepalende factoren in bacteriële aanhankelijkheid aan weefsels met behulp van onze in-house ontworpen in vitro perfusie model enten.
Inleiding
Staphylococcus aureus (S. aureus) maakt gebruik van een verscheidenheid van virulentie strategieën te omzeilen het immuunsysteem verdediging hostsysteem koloniseren van biologische of niet-biologische oppervlakken geïmplanteerd in de menselijke circulatie, hetgeen tot ernstige intravasculaire infecties zoals sepsis leidt en IE1,2,3,4,5. IE blijft een belangrijke behandeling verbonden complicatie bij patiënten na implantatie van prothetische hartkleppen terwijl individuele factoren die bijd....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. voorbereiding Graft weefsels van In Vitro Studies
Opmerking: Drie soorten weefsels werden gebruikt: boviene hartzakje patch (BP), Cryopreserved Homograft (CH) en boviene halsslagader transplantaties (BJV). In het geval van BJV conduit en CH (weefsel door de Europese Bank voor Homograft (EHB) verwerkt en opgeslagen in vloeibare stikstof voorafgaand aan het gebruiken), werden zowel de muur en de terugstroming folders gebruikt. BP patch en BJV conduit werden gekocht van de fabrikanten. Ontdooi de CH na de EHB instructies12vóór gebruik.
- Spoel alle weefsels met 0,9% NaCl vóór gebruik.
- Berei....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Om beter inzicht in de mechanismen achter IE ontwikkeling, dit model in staat stelt de evaluatie van bacteriële en weefsel verbonden factoren aanwezig is in de situatie in vivo van begin van de infectie.
In detail, de aanpak van nieuwe in vitro toestaat te kwantificeren van bacteriële hechting in stromingscondities aan verschillende graft weefsels door zoogdierlevercellen fluorescently geëtiketteerde b.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Recente klinische waarnemingen geven speciale alertheid IE als een complicatie bij patiënten die klep vervanging van de RVOT6,13heeft ondergaan. Dysfunctie van de geïmplanteerde klep in IE is het gevolg van bacteriële interactie met de endovasculaire prothese leidt tot uitgebreide inflammatoire en procoagulatie reacties1,14. De gepresenteerde nieuwe in vitro model konden we onderzoeken als versch.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
Deze studie werd gesponsord door een subsidie van het onderzoek Fonds KU Leuven (OT/14/097) gegeven aan RH. TRV was Postdoctoral Fellow van de onderzoeksstichting FWO - Vlaanderen (België; Verlenen van nummer - 12K0916N) en RH wordt ondersteund door het klinische onderzoek Fonds van UZ Leuven.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Bovine Pericardium (BP) patch, Supple Peri-Guard Pericardium | Synovis Surgical Innovations, USA | PC-0404SN | |
| Bovine Jugular Vein conduits (BJV) | Contegra conduit; Medtronic Inc, USA | M333105D001 | |
| CH cryopreserved homograft | European Homograft Bank (EHB) | - | |
| Acu-Punch | Acuderm Inc, USA | P850 (8 mm); P1050 (10 mm) | |
| human Albumin | Flexbumin; Baxter, Belgium | BE171464 LOT:16G12C | |
| Tryptic soy broth (TSB) | Fluka, Steinheim, Germany | 22092-500G | |
| Heart infusion broth (BHI) | Fluka | 53286-500G | |
| Phosphate buffered saline (PBS). | Gibco | 14190-094 | |
| 5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester (CF) | Sigma-Aldrich, Germany | 21878-100MG-F | |
| Peristaltic pump (MODEL ISM444B) | Ismatec BVP-Z Standard; Cole Parmer, Wertheim, Germany | 631942-2 | |
| Sonication bath | VWR Ultrasonic Cleaner; VWR, Radnor, Pa | 142-6044 | 230V/50 -60Hz 60VA; HF45kHz, 30W |
| ProLong Gold Antifade Mountant | Invitrogen by ThermoFisher | P36930 | |
| InCell Analyzer 2000 (fluorescence scanner) | GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, Pa | 29027886 | |
| Arium Pro VF - ultrapure water - H2O MilliQ | Millipore | 87206462 | |
| Microscopic slides - Tissue Culture Chambers (1-well) | Sarstedt | 94.6140.102 | |
| 1-well on Lumox detachable | Sarstedt | 94.6150.101 | |
| Stainless Steel - surgical Blades | Swann-Morton | 311 | |
| Tygon Silicone Tubing, 1/8"ID x 1/4"OD | Cole-Parmer | EW-95702-06 | Temperature range: –80 to 200°C Sterilize: With ethylene oxide, gamma irradiation, or autoclave for 30 min, 15 psi of pressure |
| PharMed BPT Tubing | Saint-Gobain | AY242012 | Autoclavable 30 min at 121°C |
| Tygon LMT-55 Tubing | Saint Gobain Performance Plastics™ | 15312022 | |
| Thermostat | BMG BIOMEDIZINTECHNIK | 300-0042 | 230V, 90VA, 50Hz |
Referenties
- Que, Y. A., Moreillon, P. Infective endocarditis. Nature Reviews Cardiology. 8 (6), 322-336 (2011).
- Werdan, K., et al. Mechanisms of infective endocarditis: pathogen-host interaction and risk states. Nature Reviews Cardiology. 11 (1), 35-50 (2014).<....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
