Summary
Hier presenteren we een protocol voor de beoordeling van de bloed-testis barrière integriteit door het injecteren van inuline-FITC in teelballen. Dit is een efficiënte in-vivo -methode om te studeren bloed-testis barrière integriteit die kan worden aangetast door genetische en omgevingsfactoren elementen.
Abstract
Spermatogenese is de ontwikkeling van de testis tot volwassen spermacellen in de seminiferous tubuli van de testis. Dit proces wordt ondersteund door de Sertoli cell kruispunten op de bloed-testis barrière (BTB), die is de strakste barrière van het weefsel in het lichaam van zoogdieren en beveiligingsmethode de seminiferous epitheel in twee compartimenten, een basale en een adluminal. De BTB creëert een unieke communicatie voor kiemcellen in meiose I / II en voor de ontwikkeling van postmeiotic spermatids in spermacellen via spermiogenesis. Hier beschrijven we een betrouwbare test om te controleren van de integriteit van het BTB van muis testis in vivo. Een intact BTB blokkeert de verspreiding van FITC-geconjugeerd inuline uit de basale tot het apicale compartiment van de seminiferous buisjes. Deze techniek is geschikt voor de studie van gene kandidaten, virussen of milieu toxische stoffen die BTB functionaliteit of integriteit, met een eenvoudige procedure en een minimale vereiste voor chirurgische vaardigheden in vergelijking met alternatieve methoden kunnen beïnvloeden.
Introduction
Zoogdieren spermatogenese wordt beschouwd als een zeer gestructureerde proces dat spermatogonia zelf-vernieuwing en differentiatie via spermatocyten in de haploïde spermacellen via mitose, meiose, en spermiogenesis, gedurende welke dramatische omvat biochemische en morfologische veranderingen optreden. Ontwikkelende geslachtscellen worden geleidelijk vervoerd vanaf de basis van de seminiferous zaadvormende richting de lumen. Dit proces wordt gereguleerd door cel contacten tussen kiemcellen en Sertoli cellen1,2. Aangrenzende Sertoli cellen vormen de BTB die zich in de buurt van de basis van de seminiferous zaadvormende bevindt. De BTB verdeelt fysiek het epithelium in een basale en een adluminal-compartiment. Tijdens fase VIII - IX van de epitheliale cyclus, migreren preleptotene/leptotene spermatocyten van de basale compartimenten over het BTB, de adluminal compartimenten3invoeren. Daarom wil de functie van het BTB bieden een immunoprivileged communicatie voor de voltooiing van de meiose en spermiogenesis4,5,6. In tegenstelling tot andere bloed-weefsel-barrières die (b.v., bloed - hersenbarrière) en dat alleen uit strakke kruispunten (TJs bestaat), wordt de BTB gevormd door vier verschillende kruispunten (TJs, ectoplasmic specialisaties kloof kruispunten en intermediair gloeidraad gebaseerde desmosomes) tussen Sertoli cellen1,7.
Vele studies hebben gebruikt genetisch gemodificeerde muizen, virusinfecties en toxische stoffen in het milieu te onderzoeken van de mechanismen van BTB integriteit7,8,9. De verstoring van de BTB induceert verminderde spermatogenese en subfertility of onvruchtbaarheid. Aangezien de BTB vorming en integriteit zijn bevestigd te worden beïnvloed door contacten tussen Sertoli cellen8, een in vitro model gebaseerd op de primaire cultuur van geïsoleerde Sertoli cellen is gebruikt voor BTB studie. Echter dit model kan niet nauwkeurig na te bootsen BTB dynamiek in vivo. Bovendien is geen dergelijke co cultuur van kiemcellen met Sertoli cellen opgezet als staat als gevolg van alle relevante structurele en functionele onderdelen van het BTB10,11.
In het algemeen, zijn in vivo de tests van de integriteit van het BTB meestal gebaseerd op kleine molecules, zoals EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotine en FITC-geconjugeerd inuline (inuline-FITC). Normaal gesproken, wordt de verspreiding van biotine of inuline-FITC van de basale compartiment geblokkeerd door BTB structuur. Daarom kunnen wij deze methode gebruiken om te beoordelen in welke mate van BTB schade in vergelijking met controlegroepen. Terwijl BTB kan worden aangetast met bepaalde soorten stimuli, zoals behandeling met cadmium chloride (CdCl2)12, wordt BTB toegankelijk voor kleine molecules, die uiteindelijk het compartiment van de adluminal als indicatoren invoeren.
Een vroege in vivo BTB integriteit bepaling houdt injecteren van biotine of inuline-FITC in de halsslagader, die houdt van chirurgie, en invasieve, ingewikkeld en tijdrovend. Bovendien, als de verslaggever stoffen door het hele lichaam via het verkeer verspreiden, de plaatselijke concentratie van biotine of inuline-FITC in de seminiferous buisjes is beperkt. Systemische blootstelling kan bovendien immuunreacties veroorzaken. Hier presenteren we een eenvoudige en effectieve in-vivo BTB integriteit assay directe injectie van een kleine hoeveelheid van de inuline-FITC in het interstitium van een testis inschakelen. Met behulp van de TL labeling methode, is de kleuring proces handig, als secundaire antilichamen niet vereist zijn. Hier is het proces van fluorescente kleurstof invoeren van de testis gevisualiseerd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle uitgevoerde dierproeven zijn goedgekeurd door het Comité van de Nanjing Medizinische Universität. Mannelijke C57BL/6 muizen werden gehouden onder omstandigheden van de gecontroleerde fotoperiode en werden bevoorraad met voedsel en water.
1. voorbereiding
-
Microinjection haarvaten
- Gebruik van microinjection haarvaten met een buitendiameter, innerlijke dimeter en lengte van 1,0 mm, 0,8 mm en 10,0 cm, respectievelijk.
- Trek glas haarvaten met een capillaire trekker (figuur 1A). Testen en aanpassen van de instellingen afhankelijk van de capillaire trekker-machine die wordt gebruikt.
- Breek de uiteinden van de pipet met een tang te gebruiken om te verkrijgen van de haarvaten met een diameter van 50-µm op het puntje.
Opmerking: De tips is mogelijk te lang door te dringen de testis. - Verscherp de tip in een hoek van 30° met behulp van een micropipet beveler (Figuur 1 c).
-
Reagentia
- 1% pentobarbital natrium bereiden: Los pentobarbital natrium 100 mg 10 ml-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) (stap 2.3.3).
- 10 mg/mL inuline-FITC bereiden: los van de inuline-FITC 1 mg in 100 μl van PBS (stap 2.1.6).
- 4% paraformaldehyde bereiden: Los paraformaldehyde (PFA) 4 g in 100 mL PBS (stap 2.3.3).
- 30% sacharose bereiden: los van sacharose 3 g in 10 mL PBS (stap 2.3.4).
- 0,1% cadmium chloride bereiden: Los cadmium chloride 10 mg in 10 mL PBS (stap 2.1.1).
2. methoden
-
Narcose en presurgery voorbereiding
- Weeg 8-week-oude C57BL/6 mannelijke muizen en berekenen van de vereiste dosis voor CdCl2. Behandelen van een groep van muizen (n = 3) met CdCl2 (5 mg/kg b.w., i.p.) voor 3 d voor de operatie. Behandelen van een andere groep 8-week-oude C57BL/6 mannelijke muizen (n = 3) met PBS als besturingselement.
- Chirurgie onder aseptische condities uitvoeren met behulp van steriele injectiespuit, naald, schaar en pincet.
- Anesthesie werkoplossing vers bereiden. De vereiste dosis van anesthesie is 70 mg pentobarbital natrium/kg lichaamsgewicht. Een volwassen muis van het C57BL/6 op 8 weken leeftijd weegt gemiddeld ~ 25 g, die correspondeert met 175 μL van 1% pentobarbital natrium (1,75 mg per muis).
Opmerking: De pentobarbital natrium wordt ontbonden in steriele-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). De oplossing wordt gefiltreerd door 0.22 um filter eenheid alvorens te worden gebruikt. - Reinig het gebied voor chirurgie met 75% ethanol en bestrijken het gebied met een schone tissue handdoek.
- Zet de thermostaat van de kachel en aanpassen van de temperatuur tot 37 ° C.
- Inuline-FITC werkoplossing (10 mg/mL) voor te bereiden op de dag van de operatie.
-
Chirurgische ingreep
- Weeg 8-week-oude C57BL/6 mannelijke muizen en berekenen van de vereiste dosis van de verdoving.
- Een intraperitoneale injectie van pentobarbital natrium met behulp van de 1 mL steriele injectiespuit uit te voeren. Houd de muis in een schone kooi.
- Observeer het oog reflex reactie en ademhaling patroon van de muis om te bevestigen dat er onder volledige verdoving.
Opmerking: Gewoonlijk 10-15 min nodig zijn totdat de muis is diep verdoofd, met een totaal gebrek aan teen snuifje respons en het onderhoud van langzame, gestage ademhaling. - Verplaats de muis naar het operatie gebied en bestrijken haar oog gebied met een vochtig tissue papier om te voorkomen dat droogte tijdens anesthesie (figuur 2A).
- Het buikhaar scheren met een scheerapparaat en Desinfecteer het operatie gebied met 75% ethanol.
- Maken met een scherpe schaar, een 1-cm huid incisie boven de preputiale klieren bloot van de buikwand. Til de buikwand met een kleine Tang en maak een incisie van 0,5-cm bloot de peritoneale Holte (figuur 2B).
- Pincet gebruiken om te zoeken naar vet pads rond de bijbal en de testis. Trek voorzichtig de dikke pads uit de bijgevoegde testis duidelijk bloot (figuur 2C en 2D). Meestal werken op één testis tegelijk.
Opmerking: Raak de dikke pads en de testis met handen. - Plaats een papier (9 cm in diameter) onder de dikke pads en de testis (figuur 2C).
- Inuline-FITC injecteren een microinjection pipet en sluit deze aan op de micromanipulator eenheid (Figuur 1 d). Zachtjes de microinjection pipet onder de tunica albuginea invoegen en laadt een totaal van 20 μL van de inuline-FITC in het interstitium van de testis (figuur 2E en 2F).
Opmerking: Druk zorgvuldig de microinjection pipet om te voorkomen dat het wordt verplaatst. - Toezicht op het verkeer van inuline-FITC in de testis (Figuur 2 g).
- Onmiddellijk zet de testis terug in de buikholte na de voltooiing van de injectie.
- Herhaal de procedure voor de contralaterale testis. Deze testis wordt geïnjecteerd met 20 μL van PBS als een besturingselement.
- Sluit de huid met een chirurgische hechtdraad en verplaats de muis naar een pad van de warmte van een thermostatische kachel (figuur 1B). Het beheren van een dosis van 1 mg van pijnstiller (buprenorfine) per 1 kg lichaamsgewicht via subcutane injectie.
-
Oogsten van de teelballen en de voorbereiding van de bevroren secties
- 40 minuten na de injectie, euthanaseren van de ontvangende muis door cervicale dislocatie volgens dierenverzorgers en gebruiken van richtsnoeren.
- Gebruik een paar scherpe schaar voor het verzamelen van de teelballen. Plaats de teelballen in 1 mL ijskoud PBS te verwijderen elke besmetting van bloed.
- Bevestigen van de teelballen in 4% paraformaldehyde (PFA) bij 4 ° C voor 12-24 h. negeren de 4% PFA en wassen het weefsel 3 x met 1,5 mL 1% PBS bij kamertemperatuur.
- Uitdrogen van het weefsel in 30 gewichtspercenten sacharose 's nachts. Zet de testis in het verzonken frame en dekking van het weefsel met optimale scherpe temperatuur samengestelde (OCT). Nadat de LGO is bevroren, moet u het insluiten frame vult met LGO zodat de hele testis kan worden gedekt met LGO.
- Knip 5 μm-dik, bevroren cross-secties van de teelballen in een cryostaat bij-20 ° C en laat ze zich houden aan Microscoop dia's.
Opmerking: Refreezing ingesloten weefsels in droog ijs kan verhogen de stijfheid voor het snijden.
-
Afbeelding inkoopvoorstel
- Plaats de dia's in een bevochtigde doos. Warm de dia's bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten.
- Wassen van de secties 3 x met Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS) bij kamertemperatuur.
- Luchtdroog gedurende 5 min. in het donker. Veeg eventuele resterende TBS met stofvrije papier.
- Dekking van de doorsneden met 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Plaats de omgekeerde dekglaasje aan op een microscoopglaasje.
- Verwerven van beelden met behulp van een confocal microscoop. Een totaal van 20 X vergroting is over het algemeen voldoende zijn voor het opsporen van het helder fluorescerende signaal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De experimentele opstelling voor het uitvoeren van de bepaling van BTB integriteit is afgebeeld in Figuur 1. Trek en verscherpen microinjection haarvaten met een capillaire trekker en micropipet beveler, respectievelijk (figuur 1A en 1 C). De thermostaat van de kachel en de apparatuur van microinjection worden geïllustreerd in figuur 1B en 1 D.
Figuur 2 toont een aantal van de belangrijkste stappen voor de injectie van inuline-FITC. Gebruik schaar om een kleine incisie nadat de muis heeft ondergaan volledige verdoving (figuur 2A en 2B). De muis testis is blootgesteld en ingespoten met fluorescente kleurstof met behulp van een precisiepipet microinjection (figuur 2C - 2 G).
Typische afbeeldingen van een studie ter beoordeling van de integriteit van de BTB op basis van een in vivo test worden weergegeven in Figuur 3 . De muizen in de CdCl2-behandelde groep worden geïnjecteerd met een acute dosis CdCl2 (5 mg/kg b.w., i.p.) voor 3 dagen. De verspreiding van de inuline-FITC van de basale compartiment wordt geblokkeerd door BTB-structuur in de controlegroep, terwijl de bouw van BTB is beschadigd en inuline (groene fluorescentie) passages in de apicale compartiment van de seminiferous epitheel in de CdCl2 -behandelde groep. Witte lijnsegmenten geven de afstand die is afgelegd door de inuline uit de kelder membraan (figuur 3A). De omvang van BTB schade wordt bepaald door de afstand. Voor een elliptische lumen is de straal het gemiddelde van de kortste en de langste afstand van de basale compartiment naar het midden van de zaadvormende. Als een index van de omvang van de schade van BTB gebruiken we een dergelijke verhouding:
Hier, Dinuline is de afstand reiste door inuline van basale compartiment en DRadius is de straal van de dezelfde seminiferous zaadvormende (figuur 3B). De intact BTB in Rictorfl / + muizen blokkeert de verspreiding van inuline over de belemmering voor het invoeren van de apicale compartiment. In tegenstelling, hebben Rictorcko muizen een gecompromitteerde BTB toelaat inuline diffusie (Figuur 3 c).
Figuur 1: apparatuur voor muis testiculaire interstitiële microinjection. (A) Pull glazen capillairen met een verticale capillaire trekker. ()B) dit paneel toont de thermostatische kachel. (C) de tips zijn gescherpt met behulp van de micropipet beveler. (D) de eenheid van microinjection omvat een microinjection pomp en een stereomicroscoop. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2: Representatieve beelden van een in vivo testiculaire interstitiële microinjection procedure in een muis. (A) dit paneel toont de verwijdering van buikhaar door een scheerapparaat. (B) dit paneel toont de incisie 0,5 cm buikwand de peritoneale holte bloot te stellen. (C) Pull het vet pads uit de bijgevoegde testis duidelijk bloot te stellen. (D) dit paneel toont de positie van de testis en de bijbal. (E) dit paneel toont de positie van de microinjection pipet. (F) invoegen de microinjection pipet in het interstitium van de testis. (G) dit paneel toont een testis met een succesvolle injectie in het interstitium van de testis. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3: Een studie ter beoordeling van de BTB integriteit gebaseerd op een in vivo functionele assay. Volwassen mannelijke muizen (n = 3 in zowel de behandelde groep en de controlegroep) behandeld worden met CdCl2 (5 mg/kg b.w., i.p.) voor 3 dagen (behandelde groep) of gedurende 3 dagen (controlegroep) behandeld met PBS. Inuline-FITC (groene fluorescentie) ligt in de buurt van de basis van de seminiferous zaadvormende in de controlegroep, terwijl inuline-FITC een passage over de BTB in de groep CdCl2-behandeling initieert. (A) In dit paneel, witte lijnsegmenten geven de afstand inuline-FITC binnenvalt. De schaal bars zijn 20 μm. (B) gegevens uit de BTB integriteit testen staan in dit histogram, waaruit de afgelegde door inuline (Dinuline) vs. de straal van de dezelfde zaadvormende D (Radius). Tachtig tubuli worden willekeurig geselecteerd. P < 0,001 (Student t-test). (C) de BTB integriteit is aangetast in de teelballen van Rictorcko muizen. In Rictorcko muis tubuli dringt de inuline diep in de seminiferous epitheel, bereiken de zaadvormende lumen. De schaal bars zijn 50 μm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Spermatogenese vindt plaats in de seminiferous epitheel en is een zeer geordende en dynamisch proces, dat wordt beheerst door kiemcellen en somatische cellen (bijvoorbeeld, Sertoli cellen)13. De BTB-structuur, die is gebouwd door de Sertoli-cellen, verdeelt de seminiferous epitheel in een basale en een apicaal compartiment. De ontwikkeling van Meiotische en haploïde geslachtscellen treedt op in de apicale compartiment dat een immunologische barrière14 vormt.
De BTB-functie kan worden aangetast door toxische stoffen of als gevolg van gebreken in genen die betrokken zijn bij de vorming van cel kruispunten, wat leidt tot mannelijke infertiliteit. Om te onderzoeken BTB integriteit, bootst een in vitro Sertoli celcultuur opgezet die geschikt is voor zelftappende functionele epitheel dat nauw de BTB in vivo15. Deze in vitro -systeem biedt een eenvoudig model voor het bestuderen van de structuur en functie van Sertoli cell kruispunten. Echter Sertoli cellen van testis geïsoleerd en gekweekt in vitro zijn beperkt met betrekking tot dierlijke leeftijd en cel dichtheid15,16. Bovendien, de zuiverheid van de cellen van Sertoli en de aanwezigheid van ultrastructures nabootsen BTB functies moeten worden gecontroleerd17. Belangrijker, BTB structuur en integriteit ook vereisen interacties tussen kiemcellen en de Sertoli-cellen, zoals blijkt uit studies van kiem-cel-specifieke null mutant muizen met BTB gebreken10,18,19. Dus, het creëren van een gezamenlijke cultuur van kiemcellen met Sertoli cellen in vitro voor het doel van alle cruciale in vivo functie van BTB Recapitulerend uitdagend11,20 blijft.
Dit protocol beschrijft een methode voor de beoordeling van door het injecteren van inuline-FITC, die werd gewijzigd van een procedure door Chen et al. BTB integriteit in vivo 21. het protocol beschrijft de narcose van mannelijke muizen, de blootstelling van de peritoneale Holte, de microinjection van kleurstof in het interstitium van de testis, oogsten van de teelballen en snijden ze in bevroren secties, en de verwerving van beelden. Voor een succesvolle voltooiing, moeten verschillende stappen worden opgemerkt. Ten eerste, het is belangrijk om een juiste dosis van anesthesie, omdat ernstig diepe verdoving leiden de dood tot kan. Ook mag de lengte van het puntje van de capillaire injectie niet te lang; anders, de pipet niet kan doordringen in de testis.
De procedure die hier gepresenteerd kan worden gebruikt voor het analyseren van de rol van virussen, chemische toxische stoffen of kandidaat-eiwitten die betrokken zijn bij de regulering van BTB. Deze bepaling is de gevoelig, betrouwbaar en toegankelijk zijn voor het controleren van BTB integriteit in vivo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd gesteund door de nationale toets R & D programma van China (2016YFA0500902), de nationale Natural Science Foundation van China (31471228, 31771653), de Jiangsu Science Foundation voor DN jonge geleerden (BK20150047), de natuurwetenschappen Stichting van de provincie Jiangsu (BK20140897, 14KJA180005) en het innovatieve en ondernemende programma van de oostelijke provincie Jiangsu te K.Z.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Capillary puller | SUTTER INSTRUMENT (USA) | P-97 | |
| 10x PBS | Hyclone (USA) | SH30258.01 | dilution to 1× in ddH2O |
| 4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) | Sigma (USA) | F6057 | |
| Adhesion microscope slides | CITOGLAS (China) | 80312-3161 | |
| Cadmium chloride | Sigma (USA) | 655198-5G | |
| Confocal microscope | Zeiss (Germany) | LSM700 | |
| Dust-free paper | Kimberly-Clark (USA) | 34120 | |
| Inulin-FITC | Sigma (USA) | F3272 | |
| Microinjection capillaries | Zhengtianyi (China) | BJ-40 | 1.0 mm × 0.8 mm × 100 mm |
| Micropipette beveler | NARISHIGE (JAPAN) | EG-400 | |
| OCT | SAKURA (JAPAN) | 4583 | |
| Paraformaldehyde | Sigma (USA) | P6148 | |
| Pentobarbital sodium | Merck (Germany) | P11011 | |
| Shaver | Yashen (China) | ||
| Stereo microscope | Nikon (JAPAN) | SMZ1000 | |
| Sucrose | Sangon Biotech (China) | A610498 | |
| Surgical instruments | Stronger (China) | scissors, forceps, needle holder | |
| Syringe | KDL (China) | 20163150518 | 0.45 mm × 0.16 mm RW LB |
| thermostatic heater | KELL (Nanjing, China) | KEL-2010 | |
| 10x TBS, pH 7.6 | |||
| 0.2 M Tris | Sangon Biotech (China) | A600194 | |
| 1.37 M Nacl | Sangon Biotech (China) | A610476 |
References
- Mruk, D. D., Cheng, C. Y. Sertoli-Sertoli and Sertoli-germ cell interactions and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Endocrine Reviews. 25 (5), 747-806 (2004).
- Wen, Q., et al. Transport of germ cells across the seminiferous epithelium during spermatogenesis-the involvement of both actin- and microtubule-based cytoskeletons. Tissue Barriers. 4 (4), e1265042 (2016).
- Wang, C. Q., Cheng, C. Y. A seamless trespass: germ cell migration across the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Journal of Cell Biology. 178 (4), 549-556 (2007).
- Fijak, M., Meinhardt, A.
- O'Bryan, M. K., Hedger, M. P. Inflammatory Networks in the Control of Spermatogenesis Chronic Inflammation in an Immunologically Privileged Tissue? Molecular Mechanisms In Spermatogenesis. 636, 92-114 (2008).
- Li, N., Wang, T., Han, D. Structural cellular and molecular aspects of immune privilege in the testis. Frontiers in Immunology. 3, 152 (2012).
- Mruk, D. D., Cheng, C. Y. The Mammalian Blood-Testis Barrier: Its Biology and Regulation. Endocrine Review. 36 (5), 564-591 (2015).
- Govero, J., et al. Zika virus infection damages the testes in mice. Nature. 540 (7633), 438-442 (2016).
- Jenabian, M. A., et al. Immune tolerance properties of the testicular tissue as a viral sanctuary site in ART-treated HIV-infected adults. AIDS. 30 (18), 2777-2786 (2016).
- Holembowski, L., et al. TAp73 is essential for germ cell adhesion and maturation in testis. Journal Of Cell Biology. 204 (7), 1173-1190 (2014).
- Legendre, A., et al. An engineered 3D blood-testis barrier model for the assessment of reproductive toxicity potential. Biomaterials. 31 (16), 4492-4505 (2010).
- Setchell, B. P., Waites, G. M. Changes in the permeability of the testicular capillaries and of the 'blood-testis barrier' after injection of cadmium chloride in the rat. Journal of Endocrinology. 47 (1), 81-86 (1970).
- Griswold, M. D. The central role of Sertoli cells in spermatogenesis. Seminars in Cell & Developmental Biology. 9 (4), 411-416 (1998).
- Cheng, C. Y., Mruk, D. D. The blood-testis barrier and its implications for male contraception. Pharmacological Reviews. 64 (1), 16-64 (2012).
- Mruk, D. D., Cheng, C. Y. An in vitro system to study Sertoli cell blood-testis barrier dynamics. Methods Molecular Biology. 763, 237-252 (2011).
- Orth, J. M. Proliferation of Sertoli cells in fetal and postnatal rats: a quantitative autoradiographic study. Anatomical Record. 203 (4), 485-492 (1982).
- Lee, N. P. Y., Mruk, D., Lee, W. M., Cheng, C. Y. Is the cadherin/catenin complex a functional unit of cell-cell actin-based adherens junctions in the rat testis? Biology of Reproduction. 68 (2), 489-508 (2003).
- Bai, S., et al. A Germline-Specific Role for the mTORC2 Component Rictor in Maintaining Spermatogonial Differentiation and Intercellular Adhesion in Mouse Testis. Molecular Human Reproduction. 24 (5), 244-259 (2018).
- Korhonen, H. M., et al. DICER Regulates the Formation and Maintenance of Cell-Cell Junctions in the Mouse Seminiferous Epithelium. Biology of Reproduction. 93 (6), 139 (2015).
- Loir, M. Trout Sertoli cells and germ cells in primary culture: I. Morphological and ultrastructural study. Gamete Research. 24 (2), 151-169 (1989).
- Chen, H., et al. Monitoring the Integrity of the Blood-Testis Barrier (BTB): An In Vivo Assay. Methods in Molecular Biology. 1748, 245-252 (2018).
