Method Article

С помощью роботизированных систем для обработки и внедрить толстой мышиных проб для гистологического анализа

DOI:

10.3791/58654

January 7th, 2019

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Erratum

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses
Posted by JoVE Editors on 2/03/2019. Citeable Link.

An erratum was issued for: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses.  An author affiliation was updated.

The affiliation for Claudia Burrello and Federica Facciotti was updated from:

Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology

to:

Department of Experimental Oncology, IEO, European Institute of Oncology IRCCS

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Отсутствие стандартизации для обработки мышиных ткани уменьшает качество мышиных гистопатологические анализа по сравнению с человеческих особей. Здесь мы представляем протокол для выполнения гистопатологические экспертизы мышиных воспаленной и рифамицин толстой тканей чтобы показать возможности робототехнических систем, обычно используются для обработки и встраивание человеческих образцов.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Понимание человеческих заболеваний были значительно расширены благодаря изучению животных моделей. Тем не менее гистопатологические оценки экспериментальных моделей должен быть жестким, что применяется для человеческих образцов. Действительно надежные и точные выводы критически зависит от качества ткани секции подготовки. Здесь мы описываем протокол для гистопатологические анализа мышиных тканей, который реализует несколько автоматизированных шагов во время процедуры, от первоначальной подготовки для встраивания парафин мышиных образцов. Сокращение методологических переменных путем стандартизации строгий протокол от автоматизированных процедур способствует увеличению общей надежности мышиных патологических анализа. В частности этот протокол описывает использование автоматизированной обработки и внедрение робототехнических систем, обычно используются для обработки тканей и парафин встраивание человеческих образцов, для обработки мышиных образцы кишечные воспаления. Мы делаем вывод, что после внедрения стандартизированных и автоматизированных методов значительно повышена надежность гистопатологические осмотра мышиных тканей.

Introduction

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В последние десятилетия были разработаны несколько экспериментальных моделей вскрыть патогенетических механизмов, ведущих к заболеваний человека1,2. Для того чтобы оценить тяжесть заболевания, исследователи должны оценивать эффект от лечения и исследования цитологического и гистологического архитектурных изменений или количество воспаления3. Для выполнения этих экспериментальных моделей, необходимы подробные анализы гистопатологические, часто сравнивая мышиных и человеческих образцов4,5.

Кроме того лю....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Животных процедуры были одобрены министерством здравоохранения (авт. 127/15, 27/13) Италии и руководящими животных ухода Европейского института онкологии IACUC (институциональный уход за животными и использования Комитета)

1. хронический колит индукции администрацией повторяющихся DSS

  1. Отдельный возраст и пол соответствует мышей в 2 группах (лечение DSS против управления H2O, по крайней мере 5 мышей однопометники в экспериментальной группе).
  2. Администрировать 2,5% DSS (40 кДа) в питьевой воде за 7 дней до группе лечения и воды к группе элементов управления.
    Примечание: Эта модель индуцирует Т....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экспериментальная хронический колит, вызванных повторного отправления DSS в питьевой воде является моделью мышиных кишечного воспаления, напоминающий человека IBD8,9. Рисунок 1 описывает эффекты лечения DSS, включая двоеточие сокращения (Рисунок 1A), широко используется параметр Оценка присутствия DSS-индуцированной воспаления и толстой выражение генов провоспалительных, .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы используем различные автоматизированные действия во время подготовки мышиных тканей для гистопатологические анализа. Этот протокол направлен на обеспечение технического Советы увеличить воспроизводимость и стандартизации процесса в целом, повышая тем самым общее качество окончательной гистопатологические оценки. Мы реализовали автоматизированных инструментов и методов для подготовки и внедрения тканей, обычно используются в патологии основной зал для изучения человеческих особей.

Чтобы прод.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Департамент патологии больницы Поликлинико IRCCS, Милан для технической поддержки и НОО животных фонда для оказания помощи в животноводстве.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Абсолютный этанол безводныйКарло Эрба414605реактив
Абсолют ETOHHoneywell02860-1Lреактив
Сульфат алюминияSIGMAA6435Анилин
BlueSIGMA415049реагент
карбол FuchsinSIGMAC4165реактив
CD11b (клон M1/70)TONBO biosciences35-0112-U100антитело
CD20 IHC (клон SA275A11)Biolegend150403антитело
CD3 (17A2)TONBO biosciences35-0032-U100антитело
CD4 (GK1.5)BD Biosciences552051антитело
CD45.2 (клон 104)BioLegend109837антитело
CD8 (53-6.7)BD Biosciences553031антитела
Цитратный буфер pH 6 10xSIGMAC9999реактив
DabVector LaboratoriesSK-4100реактив
DPBS 1xMicrogemL0615-500реактив
DSSTdB ConsultancyDB001реактив
EDTASIGMAE9884реактив
EnVision Flex Пероксидаза-блокирующий реагентDAKOcompreso в GV80011-2
EnVision Flex SubstrateDAKOcompreso в GV80011-2
EnVision Flex/HRPDAKOcompreso в GV80011-2
EnVision Flex+ Rat LinkerDAKOcompreso в GV80011-2
EosinVWR1.09844реагент
F4/80 (клон BM8)BioLegend123108антитело
ФормалинPanReac2,529,311,215реагент
ледяная уксусная кислотаSIGMA71251реактив
Goat-anti-Rat-HRPAgilentDAKO P0448антитело
гематоксилинDIAPATHC0303реактив
LEICA Rotary microtome (RM2255)LeicaRM2255оборудование
Ly6g (клон 1A8)BD Biosciences551459антитела
Mercury II OxideSIGMA203793реактив
Omnis Clearify Clearing AgentDAKOCACLEGALреактив
Omnis EnVision Flex TRSDAKOGV80011-2реактив
Orange GSIGMAO3756реактив
ПарафинРеактив Sakura7052
PelorisLEICAоборудование
PercollSIGMAP4937реактив
RPMI 1640 без L-глютаминаMicrogemL0501-500реактив
STS020Leicaоборудование
Tissue-Teck Paraform Sectionable CassetteSAKURA7022оборудование
Файенс-Тек Автоматизированный заделщик парафиновСакураоборудование
XyleneJ.T.Baker8080.1000реагент

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gibson-Corley, K. N., et al. Successful Integration of the Histology Core Laboratory in Translational Research. Journal of histotechnology. 35, 17-21 (2012).
  2. Olivier, A. K., et al. Gen....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Robotic Tissue ProcessingMurine Sample EmbeddingHistological Analysis ProtocolAutomated Paraffin EmbeddingColonic Murine TissueIntestinal Inflammation ModelH E Staining ValidationImmunohistochemical StainingTissue Cassette PreparationAutomated Processor Operation

Related Articles