ويقاس الثبات الحراري لنشاط إنزيم سهولة بمعايرة متحاور القياس (ITC). معظم فحوصات الاستقرار البروتين المستخدمة في قياس البروتين التي تتكشف حاليا، ولكن لا توفر معلومات حول النشاط الأنزيمي. مركز التجارة الدولية يتيح التصميم مباشرة أثر التعديلات الإنزيم على الاستقرار نشاط الإنزيم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قياس الاستقرار الانزيمية بالقياس متحاور المعايرة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ويوضح هذا العمل أسلوب جديد لقياس استقرار نشاط إنزيم بمعايرة متحاور القياس (مركز التجارة الدولية). ذروة الحرارة المعدل الملاحظ بعد حقنه واحدة من الحل الركيزة في حل إنزيم يرتبط بنشاط إنزيم. إظهار حقنات متعددة من الركازة إلى نفس الحل الإنزيم مع مرور الوقت الخسارة في نشاط إنزيم. المقايسة المتمتعة بالحكم الذاتي، التي تتطلب القليل جداً من وقت الموظفين، وهو ينطبق على معظم وسائل الإعلام والأنزيمات.
المقدمة
الإنزيمات بروتينات قادرة على حفز مجموعة واسعة من التفاعلات العضوية. معظم الإنزيمات الدالة في محلول مائي في القرب من الأس الهيدروجيني محايدة وبالتالي تجنب استخدام المذيبات قاسية. وبسبب هذه الانتقائية العالية، إنتاج إنزيم حفزت ردود الفعل أقل (في بعض الحالات لا تركات) تركات من محفزات غير انتقائية مثل الأحماض والقواعد1. وهذا مهم خصوصا في تصنيع الأغذية ويجب أن يتم فيها جميع التفاعلات الكيميائية حتى المنتج النهائي آمنة للاستهلاك البشري. حاليا، والأنزيمات تستخدم لإنتاج ارتفاع سكر الفواكه عصير الذرة2والجبن3، البيرة4، الحليب الخالي من اللاكتوز5، وغيرها من الم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-إعداد العينات
-
1,000 مل مخزن خلات الصوديوم 0.1 M في الأس الهيدروجيني 4.6
- قياس 800 مل ماء المقطر في كوب 1,000 مل تخرج.
- وزن ز 8.2 من خلات الصوديوم اللامائية وإضافته إلى الكأس.
- ضع في الكأس على طبق من إثارة ووضع قضيب إثارة في الكأس، تشغيل لوحة ضجة ويحرك حتى يذوب تماما.
- خلات الصوديوم لا مائي عندما يذوب تماما، وقياس درجة حموضة الحل مع مقياس الأس الهيدروجيني معايرة.
- أضف 1 M HCl أو هيدروكسيد الصوديوم تبعاً لذلك للحصول على درجة الحموضة المطلوبة 4.6.
- أضف الماء المقطر حتى يصل إجمالي حجم مل 1,000.
- تخزين في درجة حرارة الغرفة حتى الاستخدام.
- حل الإ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
النتائج ممثلة في الشكل 1 و الشكل 5 إظهار البيانات من الإنزيمات اثنين، اللاكتاز وإينفيرتاسي. اللاكتاز و invertase تحفيز التحلل المائي ديساكهارايد إلى اثنين من السكريات الأحادية، اندوثيرميكالي واكسوثيرميكالي، على التوالي. تم تشغيل كل التفاعلات الانزيمية في التركيزات التي حالت دون تشبع الإنزيم.
وتظهر البيانات اللاكتاز كيف يمكن استخدام بيانات مركز التجارة الدولية لتقدير الاستقرار الإنزيم. حقن ميليلتر 4 أربعة متتابعة من اللاكتوز 600 مم (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ميزة رئيسية للمقايسة الاستقرار إنزيم المركز الموصوفة هنا هو التشغيل الآلي للمكاتب. حالما يتم إجراء كافة المخازن المؤقتة الملائمة والحلول، وقت الإعداد لكل فحص حوالي 15 دقيقة للشخص الذي يقوم الفحص. على النقيض من ذلك، تتطلب فحوصات التقليدية للنشاط invertase واللاكتاز حوالي 2 ح مع مشاركة مستمرة من الشخص الذي يقوم الفحص وأخذ الكثير من النشاط الأنزيمي فحوصات أكبر بكثير من عدد ساعات العمل الشخصية. في منشور سابق، لقد أظهرنا كيف يقارن البيانات من الأسلوب المركز إلى أسلوب سبيكتروفوتروميتريك تقليدية ل النشاط إينفيرتاسي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| a-اللاكتوز | فيشر العلمية | غير معروف (قديم جدا) | 500 جرام |
| أسيتات الصوديوم ، اللامائي 99٪ دقيقة | ألفا إيسار | A13184-30 | 250 جرام |
| لاكتاز ؛ | MP Bio | 100780 | 5g |
| محلول حمض الهيدروكولريك ، 1N & nbsp ؛ | فيشر العلمية | SA48-500 | 500 مل |
| منضدة - درجة الحموضة | VWR | 89231-622 | |
| الإيثانول 70٪ | فيشر العلمية ؛ | BP8231GAL | 1 جالون |
| Micro-90 | فيشر العلمي ؛ | NC024628 | 1 لتر (محلول تنظيف) |
المراجع
- Anastas, P., Eghbali, N. Green chemistry: principles and practice. Chemical Society Reviews. 39 (1), 301-312 (2010).
- Jin, L. Q., et al. Immobilization of Recombinant Glucose Isomerase for Efficient Production of High Fructose Corn S....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
