يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة ، الانتقال ، وثقافة الخلايا البشرية الاوليه

13.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59967

⸱

ديسمبر 16, 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, Louisiana State University Health Sciences Center, 2Department of Microbiology, Immunology, and Parasitology, Louisiana State University Health Sciences Center, 3Department of Biomedical and Clinical Sciences L. Sacco, University of Milan

في هذه المقالة

ملخص

المعروض هنا هو بروتوكول الأمثل لعزل ، والزراعة ، ونقل ، والتفريق بين الخلايا الاساسيه البشرية من الافراد المصابين بالفيروس والضوابط الصحية.

الملخص

ولا يزال فيروس نقص المناعة البشرية أحد الشواغل الصحية الرئيسية علي الرغم من إدخال العلاج المضاد للفيروسات العكوسه في منتصف التسعينيات من القرن العشرين. في حين ان العلاج المضاد للفيروسات الرجعية يخفض بكفاءة الحمل الفيروسي الجهازي ويستعيد العد الطبيعي للخلاياالتائية ، فانه لا يعيد تشكيل جهاز مناعي وظيفي تماما. يمكن ان يتميز جهاز المناعة المختل في الافراد المصابين بفيروس نقص المناعة الذين يخضعون لعربه التسوق بالتنشيط المناعي ، والشيخوخة المبكرة للخلايا المناعية ، أو التهاب المستمر. وتضيف هذه الشروط ، إلى جانب العوامل المصاحبة للاصابه بالفيروس ، تعقيدا إلى المرض ، الذي لا يمكن استنساخه بسهوله في النماذج الخلوية والحيوانية. للتحقيق في الاحداث الجزيئية الكامنة وراء الخلل المناعي في هؤلاء المرضي ، يتم عرض نظام للثقافة والتلاعب بالخلايا الوحيدة الاساسيه البشرية في المختبر هنا. وعلي وجه التحديد ، يسمح البروتوكول للثقافة والانتقال من CD14 الابتدائية + مونوسيدات التي تم الحصول عليها من الافراد المصابين بفيروس نقص المناعة المكتسب الذين يخضعون لعربه التسوق وكذلك من الضوابط السلبية لفيروس نقص المناعة المكتسب. وتشمل هذه الطريقة العزلة والثقافة والانتقال من الخلايا الاحاديه والضامة المشتقة من البويضات. في حين يتم استخدام مجموعات المتاحة تجاريا والكواشف, البروتوكول يوفر نصائح هامه والظروف المثلي للانضمام الناجحة والانتقال من الخلايا الاحاديه مع محاكاة ميرنا ومثبطات وكذلك مع siRNAs.

المقدمة

تسبب عدوي فيروس نقص المناعة البشرية-1 (HIV-1) خللا مناعيا شديدا ، وهو ما يمكن ان يؤدي إلى الاصابه بالعدوى الانتهازية ومتلازمة عوز المناعة المكتسب (الإيدز). علي الرغم من ان المرضي المصابين بفيروس نقص المناعة التي تمر بالعربة تتميز الأحمال الفيروسية المنخفضة والعد العادية الخلايا التائية + T ، ويمكن المساس بأداء الجهاز المناعي في هؤلاء الافراد ، مما يؤدي إلى استجابه مناعية مختلة التي ارتبطت بزيادة خطر الاصابه بالسرطان1 أليات الخلل المناعي في مرضي فيروس نقص المناعة الذاتية علي السلة لا تزال غير معروفه إلى حد كبير. ولذلك ، فان توصيف الخلايا المناعية المستمدة من المريض والتحقيق في علم الاحياء والوظيفة عنصر حاسم في البحوث الحالية بفيروس نقص المناعة المكتسب.

الخلايا الاحاديه والضامة هي المنظمين الرئيسيين للاستجابات المناعية وتلعب أدوارا أساسيه في الاصابه بفيروس نقص المناعة الذاتية2,3,4,5. غير متجانسة والبلاستيك في الطبيعة ، ويمكن تصنيف الضامة علي نطاق واسع في تنشيط كلاسيكي (M1) أو بدلا من ذلك تنشيط (M2). في حين ان هذا التصنيف العام ضروري عند اعداد الشروط التجريبية ، قد يتم عكس حاله الاستقطاب من الضامة من قبل مجموعه متنوعة من السايتوكينات6،7،8،9. علي الرغم من ان العديد من الدراسات قد حققت في اثار الاصابه بفيروس نقص المناعة الذاتية علي الخلايا الاحاديه والجذعية ، والتفاصيل الجزيئية للاستجابات بوساطة البويضات غير معروفه إلى حد كبير6،7،10،11،12،13،14،15،16،17،18،19 من بين العوامل التي تنطوي عليها تنظيم الخلايا المناعية ووظيفتها ، ميكرورناس (miRNAs) ، قصيرة غير الترميز RNAs ان ما بعد الهيستونات تنظيم التعبير الجيني ، وقد ثبت ان تلعب دورا هاما في سياق المسارات الخلوية الرئيسية (اي النمو ، والتمايز ، والتنمية ، والمبرمج)20. وقد وصفت هذه الجزيئات بأنها منظمات هامه من عوامل النسخ الاساسيه لإملاء الاستقطاب وظيفية من الضامة21. وقد تم التحقيق في الدور المحتمل لmirnas في الخلايا الاحاديه من الافراد المصابين بفيروس نقص المناعة الذين يخضعون لعربه التسوق ، ولكن التقدم في هذا المجال يتطلب المزيد من العمل22،23،24،25،26. تناقش هذه الورقة طريقه محسنه لتحويل miRNAs و siRNAs إلى خلايا بشريه أساسيه من المرضي المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية والضوابط.

يعتمد هذا البروتوكول علي الكواشف ومجموعات المواد المتاحة تجاريا ، لان الاستمرارية في الإجراءات التقنية تساعد علي أزاله المتغيرات التجريبية غير الضرورية عند العمل مع العينات السريرية. ومع ذلك ، فان الطريقة توفر نصائح هامه (اي عدد الخلايا المطلية أو الحاضنة القصيرة مع وسائل الاعلام الخالية من المصل لتعزيز التصاق الخلايا بالصفيحة). الاضافه إلى ذلك ، فان شروط الاستقطاب المستخدمة في هذا البروتوكول مستمده من الاعمال المنشورة27و28و29.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة علي جميع الطرق الموضحة أدناه من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لمركز نيو اورليانز للعلوم الصحية بجامعه ولاية لويزيانا. تم جمع جميع الدم بعد الحصول علي موافقه مستنيرة.

ملاحظه: يتم تنفيذ الاجراء بأكمله في ظل ظروف معقمه في مرفق مستوي السلامة الاحيائيه 2 (BSL2) بحيث يتم استخدام الحذر للتعامل مع المواد البيولوجية. علي وجه الخصوص ، يتم تنفيذ كل خطوه باستخدام تقنيات معقمه في اطار مجلس السلامة البيولوجية. بعد كل خطوه تنطوي علي الدم أو منتجات الدم أو الخلايا أو المنتجات الخلوية ، من المهم شطف جميع المواد البلاستيكية (مثل الماصات المصلية والماصة والأنابيب) مع 10 ٪ من المبيض من حاويه نفايات داخل غطاء المحرك قبل التخلص السليم.

1-عزل الخلايا البشرية الاوليه عن طريق الاختيار السلبي المناعي

  1. جمع 40 مل من الدم الطازج ، الإنسان كله (من اما فيروس نقص المناعة البشرية + المريض أو السيطرة الصحية) في 4 10 ml ايثيل الصوديوم حمض (أدتا) فراغ أنابيب (10 مل من الدم في أنبوب). باستخدام تقنيات معقمه تحت خزانه السلامة الاحيائيه ، نقل جميع 40 مل من الدم إلى 1 50 مل أنابيب البروبيلين المخروطية.
  2. بعد البروتوكول الخاص بالشركة المصنعة لمجموعه عزل البويضات البشرية المحددة (جدول المواد) ، أضف 2 مل من كوكتيل العزلة الاحاديه الخلية ، المقدم في الطقم ، إلى أنبوب الدم. الخرز المغناطيسي دوامه ، كما قدمت في عده ، ل 30 ثانيه ، وأضافه 2 مل إلى أنبوب من الدم.
    1. إذا كان اقل من 40 مل من الدم هو متاح ، وتوسيع نطاق الكاشفات المضافة. لمزج المحلول ، ماصه للأعلى وللاسفل مع ماصه بلاستيكية 25 مل من البلاستيك واحتضان لمده 5 دقائق في درجه حرارة الغرفة (RT).
  3. فصل خليط الدم علي قدم المساواة في أنابيب 4 50 mL وأضافه 30 مل من الفوسفات معقمه-مخزنه المالحة (تلفزيوني) التي تحتوي علي 1 مم أدتا لكل أنبوب. امزجها بواسطة الأنابيب لاعلي ولأسفل مع ماصه بلاستيكية 25 مل.
  4. وضع الأنابيب في أصحاب المغناطيس لمده 10 دقيقه لأزاله الأجسام المضادة-الخرز المغناطيسي مترافق. استخدم أربعه حاملي مغناطيس في نفس الوقت ، واحد لكل أنبوب ، للسماح بأوقات الحضانة والعزل المتناسقة لكل عينه دم.
  5. وضع محتويات من مركز كل أنبوب ، وذلك باستخدام ماصه ، في حين انها لا تزال في أصحاب المغناطيس. يجب الحرص علي عدم وضع خلايا الدم الحمراء (لا يزيد عن 10 ٪ من حجم البداية 10 مل) ، ووضع محتويات في واحده من أربعه أنابيب جديده 50 mL.
  6. أضافه 500 μl من الخرز المغناطيسي فورتيكسد إلى كل أنبوب 50 mL. ماصه للأعلى والأسفل مع ماصه 25 مل واحتضان في RT لمده 5 دقائق. ثم ، وضع الأنابيب في أصحاب المغناطيس لمده 5 دقائق.
  7. نقل بعناية محتويات من مركز كل أنبوب في حين لا يزال في أصحاب المغناطيس في واحده من أربعه أنابيب جديده 50 mL. وضع مباشره كل أنبوب 50 mL جديده في أصحاب المغناطيس لمده 5 دقائق.
  8. نقل المحتويات بعناية من مركز كل أنبوب إلى واحده من أربعه أنابيب 50 mL جديده. تدور جميع أنابيب 50 ml الجديدة في 300 x g لمده 5 دقيقه. يستنشق ماده طافي وأعاده تعليق جميع الكريات الخلية الأربع في ما مجموعه 10 مل من العقيمة تلفزيوني.
  9. عد الخلايا بالاستبعاد الأزرق التريبين باستخدام مقياس الكريات الدموية.
    ملاحظه: 8-20x 10 يتم الحصول علي الخلايا عاده من 40 مل من الدم كله.

2-زراعه البويضات البشرية الاوليه

  1. باستخدام حمام مياه 37 درجه مئوية ، الدافئة المصل الحرة RPMI 1640 وسائل الاعلام تستكمل مع 1 ٪ البنسلين-ستربتوميسين (القلم/بكتيريا) ، و (مع الاستمرار في استخدام تقنيات معقمه تحت مجلس السلامة البيولوجية) أعاده تعليق الخلايا الوحيدة المعزولة في هذه الوسائط بتركيز 1 × 106 خليه/مل.
  2. أضافه 1 مل من الخلايا المعاد تعليقها إلى كل بئر من 6 لوحه جيدا أو في صحن 35 مم (يجب ان يكون العدد النهائي من الخلايا 1 × 106 خلايا/لوحه) ، ووضع في 37 درجه مئوية حاضنه مع 5 ٪ CO2. انتظر 0.5-1.0 h للخلايا للانضمام.
  3. باستخدام حمام المياه 37 درجه مئوية ، الساخنة الحرارة المعطلة (HI) الجنين البقري المصل (...). أضافه 100 μL (10 ٪ التركيز النهائي) لكل لوحه. أضافه عوامل النمو إلى الخلايا لتعزيز التمايز الضام.
    1. الضامة الرئيسية لنمط الظاهري M1 مثل عن طريق أضافه 25 نانوغرام/مل من الحبيبية-الضامة عامل تحفيز مستعمره (GM-السائل الدماغي الشوكي) لوسائل الاعلام. الضامة الرئيسية لنمط الظاهري M2 مثل باضافه 50 ng/mL من عامل تحفيز مستعمره الضامة (M-السائل الدماغي الشوكي) إلى وسائل الاعلام28.
      ملاحظه: كل من GM-السائل الدماغي الشوكي و M-السائل الدماغي الشوكي تسمح التمايز أحاديه الخلية إلى النمط الظاهري الضام العام (M0) في حين فتيله الخلايا ل M1 أو M2 ، علي التوالي7،28،30.

3. إخراج البويضات البشرية الاساسيه في الثقافة

  1. الخلايا الاحاديه transfect مع المحاكاة ميرنا أو مثبطات أو siRNA باستخدام مجموعه تحتوي علي البوليمر القائم علي كاشف النقل (جدول المواد).
    1. بعد بروتوكول الشركة المصنعة لمجموعه النقل (والاستمرار في استخدام تقنيات معقمه تحت مجلس السلامة البيولوجية) ، أولا تمييع المختارة ميرنا محاكاة/مثبطات أو siRNAs في العازلة إلى تركيز نهائي من 1.83 μM. اعداد 10 μL من المخفف تقليد/المثبط لكل ترانسكشن 1 × 106 خلايا.
  2. اعداد كاشف ترانسكشن عن طريق أضافه 1 μL من البوليمر المقدمة إلى جديد 1.5 mL أنبوب الطرد المركزي الصغير ، تليها علي الفور باضافه 90 μL من المخزن المؤقت المقدمة (لإجمالي 91 μL من كاشف لكل ترانسكشن). دوامه ل 3-5 s.
  3. ماصه 90 μL من محلول التحويل إلى الأنبوب الذي يحتوي علي 10 μL من المخفف ميرنا تقليد/المثبط أو siRNA. اخلطه بواسطة الماصات اللطيفة والاحتضان لمده 15 دقيقه في RT.
  4. أضافه 100 μL من مجمع التحويل إلى بئر واحد (أو طبق) من 1 × 106 الخلايا الاحاديه مطلي. احتضان الخلايا ل 4 ح في 37 درجه مئوية ، ثم استبدال المتوسطة مع 3 مل من وسائل الاعلام الكاملة (RPMI 1640 تستكمل مع 1 ٪ البنسلين-ستربتوميسين و 10 ٪ من الحرارة المعطلة التي تحتوي علي السائل الدماغي الشوكي أو الام السائل الدماغي الشوكي.

4. M1/M2 التمايز والتنشيط

  1. البويضات تبدا علي الفور التفريق إلى M0 واسعه الضامة علي الطلاء في الثقافة. في اليوم الثالث بعد الطلاء ، ومواصله استخدام تقنيات معقمه تحت خزانه السلامة الاحيائيه واستبدال وسائل الاعلام مع 3 مل من وسائل الاعلام الطازجة RMPI 1640 (تستكمل مع 1 ٪ البنسلين-ستربتوميسين ، 10 ٪ من الحرارة المعطلة ، واما 25 نانوغرام/مل GM-السائل الدماغي الشوكي لتعزيز الاستقطاب مثل M1 أو 50 ثقافة الخلايا في هذه الظروف لما مجموعه 6 أيام من الطلاء الاولي في حاضنه في 37 درجه مئوية ، 5 ٪ CO2.
  2. لدفع الاستقطاب من الخلايا تستعد إلى النمط الظاهري M1-الضامة ، وتنشيط الخلايا في اليوم 6 من الحضانة عن طريق استبدال وسائل الاعلام الخلية مع وسائل الاعلام الجديدة التي تحتوي علي 5 ٪ من الحرارة غير المفعلة ، 1 ٪ القلم/بكتيريا ، 100 ng/mL e. القولونيةالمشتقة (lps) ، و
  3. لدفع الاستقطاب من الخلايا تستعد إلى النمط الظاهري M2-الضامة ، وتنشيط الخلايا في اليوم 6 من الحضانة عن طريق استبدال وسائل الاعلام الخلية مع وسائل الاعلام الجديدة التي تحتوي علي 5 ٪ من الحرارة المعطلة ، 1 ٪ القلم/بكتيريا ، 10 نانوغرام/مل M-السائل الدماغي الشوكي ، و 20 نانوغرام/مل انتر
  4. بعد 24 ساعة ، حصاد الخلايا ل RNA ، البروتين ، أو تحليلات التدفق الخلوي.
    1. عندما تكون الخلايا جاهزه للجمع ، اغسل الخلايا في طبق 2x مع التليفزيون (في RT لاستخراج RNA أو مبرده علي الجليد لاستخراج البروتين). لان الضامة متمايزة الآن بشده تعلقت إلى اللوحات, [لرس] الخلايا في لوحات مباشره ان ينال ماده ل [رنا] وبروتين تحاليل.
    2. لجمع المواد لقياس التدفق الخلوي ، أضافه تلفزيوني يحتوي علي 2 مم أدتا إلى الطبق ، احتضان الخلايا لمده 10 دقيقه في 37 درجه مئوية ، كشط بلطف الخلايا من الطبق ، وجمع المحتويات في أنبوب الطرد المركزي الصغير 1.5 mL قبل المضي قدما مع البروتوكولات القياسية.

5. تدفق الخلوي

  1. شطف الخلايا في القناات التلفزيونية لأزاله المتوسطة الخياطة. تدور أسفل 100,000 خلايا (في كل حاله تدفق الخلوية) وأعاده تعليق بيليه في 100 μL من التلفزيونية التي تحتوي علي 2 μL من المانع ملزمه HuFcR. احتضان في RT لمده 15 دقيقه.
  2. أضافه 50 μL من تلطيخ العازلة والأجسام المضادة المطلوبة (هنا ، CD80 ، CD83 ، CD163 ، و CD209 تم استخدامها) في المبالغ الموصي بها.
  3. اخلطي برفق وحضنيه عند درجه حرارة 4 درجات مئوية في الظلام لمده 30 دقيقه.
  4. غسل 2x مع تلفزيوني وأعاده تعليق الخلايا الملونة في 150 μL من النظام التلفزيوني قبل تشغيل العينة علي مقياس السيتوفلوري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وباستخدام الاجراء الموصوف ، تم عزل الخلايا البشرية الاوليه من الافراد المصابين بالفيروس والمتبرعين الأصحاء. تم الحصول علي جميع البيانات المعروضة هنا من فيروس نقص المناعةالمكتسب + الموضوعات التي تخضع لعربه مع منخفضه (< 20 نسخ/مل) أو الأحمال الفيروسية غير قابل للكشف والعادية التهمالخلية + T. مباشره بعد العزلة ، كانت الخلايا ملطخه ، وتم اجراء قياس التدفق الخلوي لتاكيد نقاء الخلايا السكانية. وأظهرت النتائج ان > 97 ٪ من الخلايا الملونة ايجابيه ل CD14 (البيانات لم تظ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويبين البروتوكول المعروض استخدام الخلايا الاوليه من الأشخاص المصابين بفيروس نقص المناعة الذاتية كنموذج لدراسة البويضات والضامات. فيروس نقص المناعة الذاتية + المرضي الذين يخضعون لعربه العيش مع العدوى لسنوات متعددة ، ويمكن أيضا ان يكون لها آخر العدوى المشتركة ذات الصلة جهاز المناعة للخطر. لدراسة المناعة في وجود العدوى المزمنة بالفيروس ، تم حصاد الخلايا من المرضي مباشره. كما أظهرت miRNAs للعب ادوار رئيسيه في تطوير الخلايا والتمايز ، ويركز البروتوكول علي القدرة علي التلاعب التعبير ميرنا في هذه الخلايا الاساسيه (ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

شكر وتقدير

ويود المؤلفون ان يشكروا فيروس نقص المناعة البيولوجية/الأورام الحيوية النواة لتوفير عينات المريض والنواة الأيض المناعة الخلوية لتوفير تحليل تدفق الخلوي. تم تمويل هذا المشروع من قبل المعاهد القومية للصحة P20GM121288 و P30GM114732.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.5M EDTAInvitrogenAM9260G
BD Vacutainer أنابيب جمع الدم البلاستيكية مع K2< / sub>EDTABD Biosciences366643
Brilliant Stain BufferBD Horizon563794Flow Cytometry
CD14 PerCPInvitrogen46-0149-42قياس التدفق الخلوي - الجسم المضاد المترافق
CD163 BV711BD Horizon563889Flow Cellular - الجسم المضاد المترافق
CD209 BV421BD Horizon564127قياس التدفق الخلوي - الجسم المضاد المترافق
CD80 FITCBD Horizon557226قياس التدفق الخلوي - الجسم المضاد المترافق
CD83 APCBD Horizon551073Flow Cellular Cell - الجسم المضاد المترافق
Easy 50 EasySep MagnetStemCell Technologies18002
طقم عزل الخلية الأحادية البشرية المباشرةمن السهل Sep تقنيات الخلايا الجذعية19669
إشارات خلية EIF4EBP1 مللي أمبير9644جسم مضاد وحيد النسيلة للبقعة الغربية
EIF4EBP1 siRNAسانتا كروزsc-29594
مصل بوفين الجنين محدد الحرارةالمعطل HycloneSH30070.03HI
Gallios Flow Cytometerبيكمان CoulterB43618
GAPDH mAbسانتا كروزSC-47724الجسم المضاد أحادي النسيلة لمثبط ربط اللطخة
الغربية HuFcReBiosciences14-9161-73مقياس التدفق الخلوي - حجب المخزن المؤقت
Kaluza برنامجتحليل Beckman CoulterB16406برنامج لتحليل بيانات قياس التدفق
الخلوي عديدات السكاريد الدهنية من الإشريكية القولونية < / em> O55:B5SigmaL4524
miRCURY LNA microRNA Mimic has-miR-146a-5pQiagenYM00472124
MISSION miRNA التحكم السلبيSigmaHMC0002miRNA المخفوق مقترن بصبغة الأشعة تحت الحمراء القريبة
Nunc 35mm طبق ثقافة الخلية150318علمي حراري
PBSGibco20012027
البنسلين ستربتومايسينجيبكو15140122
المؤتلف البشري GM-CSFR & D أنظمة215-GM-050
المؤتلف البشري IFN- & جاما ؛R & أنظمة D285-IF-100
المؤتلف البشري IL-4R & D Systems204-IL-010
المؤتلف البشري M-CSFR & D Systems216-MC-025
RPMI 1640 مع L-GlutamineCorning10040CVMP
التحكم المخفوق siRNASanta Cruzsc-37007
Viromer Blue Transfection KitLipocalyxVB-01LB-01
WST-1 كاشف انتشار الخلاياRoche5015944001الاختبار اللوني لتقييم جدوى الخلية

المراجع

  1. Slim, J., Saling, C. F. A Review of Management of Inflammation in the HIV Population. Biomedical Research International. 2016, 3420638(2016).
  2. Herskovitz, J., Gendelman, H. E. HIV and the Macrophage: From Cell Reservoirs to Drug Delivery to Viral Eradication. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 52-67 (2019).
  3. Machado Andrade, V., Stevenson, M. Host and Viral Factors Influencing Interplay between the Macrophage and HIV-1. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 33-43 (2019).
  4. Merino, K. M., Allers, C., Didier, E. S., Kuroda, M. J. Role of Monocyte/Macrophages during HIV/SIV Infection in Adult and Pediatric Acquired Immune Deficiency Syndrome. Frontiers in Immunology. 8, 1693(2017).
  5. Wacleche, V. S., Tremblay, C. L., Routy, J. P., Ancuta, P. The Biology of Monocytes and Dendritic Cells: Contribution to HIV Pathogenesis. Viruses. 10 (2), (2018).
  6. Davis, M. J., et al. Macrophage M1/M2 polarization dynamically adapts to changes in cytokine microenvironments in Cryptococcus neoformans infection. MBio. 4 (3), e00264(2013).
  7. Raggi, F., et al. Regulation of Human Macrophage M1-M2 Polarization Balance by Hypoxia and the Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1. Frontiers in Immunology. 8, 1097(2017).
  8. Van Overmeire, E., et al. M-CSF and GM-CSF Receptor Signaling Differentially Regulate Monocyte Maturation and Macrophage Polarization in the Tumor Microenvironment. Cancer Research. 76 (1), 35-42 (2016).
  9. Vogel, D. Y., et al. Human macrophage polarization in vitro: maturation and activation methods compared. Immunobiology. 219 (9), 695-703 (2014).
  10. Almeida, M., Cordero, M., Almeida, J., Orfao, A. Different subsets of peripheral blood dendritic cells show distinct phenotypic and functional abnormalities in HIV-1 infection. AIDS. 19 (3), 261-271 (2005).
  11. Ciesek, S., et al. Impaired TRAIL-dependent cytotoxicity of CD1c-positive dendritic cells in chronic hepatitis C virus infection. Journal of Viral Hepatitis. 15 (3), 200-211 (2008).
  12. Granelli-Piperno, A., Golebiowska, A., Trumpfheller, C., Siegal, F. P., Steinman, R. M. HIV-1-infected monocyte-derived dendritic cells do not undergo maturation but can elicit IL-10 production and T cell regulation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (20), 7669-7674 (2004).
  13. Hearps, A. C., et al. HIV infection induces age-related changes to monocytes and innate immune activation in young men that persist despite combination antiretroviral therapy. AIDS. 26 (7), 843-853 (2012).
  14. Heggelund, L., et al. Stimulation of toll-like receptor 2 in mononuclear cells from HIV-infected patients induces chemokine responses: possible pathogenic consequences. Clinical and Experimental Immunology. 138 (1), 116-121 (2004).
  15. Hernandez, J. C., et al. Up-regulation of TLR2 and TLR4 in dendritic cells in response to HIV type 1 and coinfection with opportunistic pathogens. AIDS Research and Human Retroviruses. 27 (10), 1099-1109 (2011).
  16. Hernandez, J. C., Latz, E., Urcuqui-Inchima, S. HIV-1 induces the first signal to activate the NLRP3 inflammasome in monocyte-derived macrophages. Intervirology. 57 (1), 36-42 (2014).
  17. Low, H. Z., et al. TLR8 regulation of LILRA3 in monocytes is abrogated in human immunodeficiency virus infection and correlates to CD4 counts and virus loads. Retrovirology. 13, 15(2016).
  18. Sachdeva, M., Sharma, A., Arora, S. K. Functional Impairment of Myeloid Dendritic Cells during Advanced Stage of HIV-1 Infection: Role of Factors Regulating Cytokine Signaling. PLoS ONE. 10 (10), e0140852(2015).
  19. Sachdeva, M., Sharma, A., Arora, S. K. Increased expression of negative regulators of cytokine signaling during chronic HIV disease cause functionally exhausted state of dendritic cells. Cytokine. 91, 118-123 (2017).
  20. Bartel, D. P. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell. 116 (2), 281-297 (2004).
  21. Li, H., Jiang, T., Li, M. Q., Zheng, X. L., Zhao, G. J. Transcriptional Regulation of Macrophages Polarization by MicroRNAs. Frontiers in Immunology. 9, 1175(2018).
  22. Hu, X., et al. Genome-Wide Analyses of MicroRNA Profiling in Interleukin-27 Treated Monocyte-Derived Human Dendritic Cells Using Deep Sequencing: A Pilot Study. International Journal of Molecular Sciences. 18 (5), (2017).
  23. Huang, J., et al. MicroRNA miR-126-5p Enhances the Inflammatory Responses of Monocytes to Lipopolysaccharide Stimulation by Suppressing Cylindromatosis in Chronic HIV-1 Infection. Journal of Virology. 91 (10), (2017).
  24. Lodge, R., et al. Host MicroRNAs-221 and -222 Inhibit HIV-1 Entry in Macrophages by Targeting the CD4 Viral Receptor. Cell Reports. 21 (1), 141-153 (2017).
  25. Ma, L., Shen, C. J., Cohen, E. A., Xiong, S. D., Wang, J. H. miRNA-1236 inhibits HIV-1 infection of monocytes by repressing translation of cellular factor VprBP. PLoS ONE. 9 (6), e99535(2014).
  26. Riess, M., et al. Interferons Induce Expression of SAMHD1 in Monocytes through Down-regulation of miR-181a and miR-30a. Journal of Biological Chemistry. 292 (1), 264-277 (2017).
  27. Buchacher, T., Ohradanova-Repic, A., Stockinger, H., Fischer, M. B., Weber, V. M2 Polarization of Human Macrophages Favors Survival of the Intracellular Pathogen Chlamydia pneumoniae. PLoS ONE. 10 (11), e0143593(2015).
  28. Jaguin, M., Houlbert, N., Fardel, O., Lecureur, V. Polarization profiles of human M-CSF-generated macrophages and comparison of M1-markers in classically activated macrophages from GM-CSF and M-CSF origin. Cellular Immunology. 281 (1), 51-61 (2013).
  29. Lacey, D. C., et al. Defining GM-CSF- and macrophage-CSF-dependent macrophage responses by in vitro models. Journal of Immunology. 188 (11), 5752-5765 (2012).
  30. Tarique, A. A., et al. Phenotypic, functional, and plasticity features of classical and alternatively activated human macrophages. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 53 (5), 676-688 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

عزل الخلايا الوحيدةزراعة الخلايا الوحيدةترصيف الخلايا الوحيدةقياس التدفق الخلويالمجهر البؤرياستقطاب البلاعم من النوع M1استقطاب البلاعم من النوع M2الخلايا الوحيدة المصابة بفيروس نقص المناعة البشريةترصيف siRNA
العزلة ، الانتقال ، وثقافة الخلايا البشرية الاوليه
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.