מטרת מחקר זה היא להקים ולאמת מודל בעלי חיים עבור מחקר בשלבים שחזור והצלה של איסכמיה של המוח על ידי בדיקת אוטם המוח ואת הפונקציה sensorimotor לאחר חסימה באמצע עורק מוחין/reperfusion (MCAO/R) לאחר 1-90 ימים בחולדות
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
מטרת מחקר זה היא להקים ולאמת מודל בעלי חיים עבור מחקר בשלבים שחזור והצלה של איסכמיה של המוח על ידי בדיקת אוטם המוח ואת הפונקציה sensorimotor לאחר חסימה באמצע עורק מוחין/reperfusion (MCAO/R) לאחר 1-90 ימים בחולדות
מטרת מחקר זה היתה להקים ולאמת מודל איסכמיה של המוח בעלי חיים בשלבי ההחלמה והסקוולה. עורק המוח האמצעי סגר/reperfusion (MCAO/R) מודל בחולדות ממין זכר-דאולי נבחר. על ידי שינוי משקל העכברוש (260-330 גרם), את סוג הברק חוט (2636/2838/3040/3043) ואת המוח סיכונים זמן (2-3 h), הציון של Longa גבוה יותר, נפח סיכונים גדול יותר יחס הצלחה מודל גדול הוקרן באמצעות הציון של Longa ו TTC כתמים. מצב מודל אופטימלי (300 g, 3040 בורג חוט, 3 h סיכונים זמן המוח) נרכש והשתמשו בתקופת התצפית 1-90 יום לאחר reperfusion באמצעות הערכה של sensorimotor פונקציות ונפח סיכונים. בתנאים אלה, מבחן ה-סימטריה הדו היה הבדל משמעותי בין 1 ל 90 ימים, ואת מבחן רשת הליכה היה הבדל משמעותי בין 1 ל 60 ימים; שני ההבדלים יכולים להיות מבחן פונקציונלי sensorimotor מתאים. כך, המצב המתאים ביותר של מודל עכברוש הרומן בשלבי ההתאוששות ובשלבים של איסכמיה המוח נמצא: 300 g חולדות שעברו MCAO עם בורג 3040 המוח סיכונים ולאחר מכן מחדש. המבחנים הsensorimotor פונקציונליים המתאימים היו בדיקת סימטריה דו-צדדית ומבחן הליכה ברשת.
איסכמיה של המוח מחולקת לשלושה שלבים עם מחווני שלאחר שבץ שונים: השלב האקוטי (בתוך שבוע), שלב ההחלמה (1 שבוע עד 6 חודשים), ובשלב הסקוויה (יותר מ -6 חודשים). כיום, רוב המחקרים מתמקדים בשלב אקוטי של איסכמיה של המוח בשל השפעתה המשמעותית ומודלים רב יחסיים מחקר1,2,3. עם זאת, לא ניתן להתעלם מההתאוששות ומשלבים הרצף של איסכמיה מוחית עקב סיבוך לטווח ארוך של מוגבלויות. לכן, מטרת מחקר זה היא לחקור מודל יציבה, אמין בעלי חיים פשוטה יחסית כדי לחקור את שלבי ההתאוששות והרצף של איסכמיה של המוח.
בין הדגמים הרבים של איסכמיה של המוח ניסיוני, אנו משתמשים בעורק מוחין באמצע הסגר (MCAO) באמצעות בורג פתיל החדרת לתוך עורק המוח האמצעי הימני (MCA). מודל זה דומה שבץ האדם, אשר יכול לייצר כרכים סיכונים גדולים, התוצאה של הפרעות התנהגותיות רבות הקשורות לקו, והוא יכול לאפשר reperfusion דם (R) על ידי הסרת הברק פתיל4,5,6. MCAO/R נחשב גם מודל החיים תקן זהב של איסכמיה של המוח7. יתר על כן, חומרת הפגיעה במוח תלוי בקוטר ואת אורך הכניסה של בורג פתיל, משך של איסכמיה המוח, ואת משקל בעלי חיים (חולדות גדול יותר יש מוח גדול יותר כלי מוחין עבה)8. לכן, על ידי שינוי סוג הברק פתיל, את הזמן הסיכונים, ואת משקל החולדה, מודל מתאים ניתן למצוא עבור שלבי ההתאוששות והרצף של איסכמיה של המוח בחולדות MCAO/R. כדי לאמת את המודל עכברוש, ביצעו יום אחד, 35 יום, 60 יום, ו 90-יום מחקר של מודל MCAO/R באמצעות כתמים TTC ו sensorimotor פונקציות ניסויים (בדיקת סימטריה דו צדדית, מבחן הליכה הרשת, מבחן rotarod ומבחן חבל הרמה).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הנוהל והשימוש בנושאי בעלי חיים אושרו על ידי המכון הלאומי לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. פרוטוקול זה מותאם במיוחד עבור המבחנים של סגר עורק המוח האמצעי/reperfusion (MCAO/R) ו sensorimotor פונקציה.
1. תכנון וקיבוץ ניסיוניים
2. הקמת מודל MCAO/R חד צדדי בחולדות9
הערה: במהלך המבצע, השתמש במיקרולקחיים בעדינות כדי למנוע שבירת כלי הדם. הימנע נזק לעצבים ולכלי דם אחרים בצוואר החולדה כאשר כלי הקיבול מבודד. טיפול יש לנקוט כדי להציג טכניקה מתאימה אספטי עבור כל ההליכים כירורגי הישרדות. הטכניקה מומחש מאוחר יותר בווידאו יש לתרגל במהלך ההליך כולו.
3. TTC צביעת
הערה: התבנית והלהב ממוח החולדה חייבים להיות מקורר מראש במקרר של 20 ° c לפני השימוש כדי למנוע הדבקה הנגרמת על ידי הבדל טמפרטורה גדול. במהלך הצביעת, למנוע הדבקה בין פרוסות המוח לבין צלחת התרבות, אשר יכול לגרום להכתמים מספיק.
4. הערכה של פונקציה sensorimotor
הערה: חולדות (300 g, 3040 בורג החוט, 3 המוח סיכונים זמן) עם הציון של Longa של 2 לפני 3 נבחרו לבצע ניסויים sensorimotor פונקציה מתוך 1-90 ימים. שמרו על שקט ואל תפריע לבעלי החיים בתקופה זו של הלימודים. הנתונים נותחו על-ידי ANOVA בשתי כיוון. ערכים המוצגים מייצגים את הממוצע ± ש גויטיין P < 0.05 מציינים הפרש.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
באמצעות ההליך הנ ל מודל MCAO/R עם הציון של Longa וצביעת TTC, טיפולים שונים של משקל ממוצע (275/300/320 g), סוגי בריחים (2636/2838/3040/3043; שולחן 1) ושעות האיסכמי (2-3 h) ו 1 יום reperfusion שימשו למסך עבור המודל איסכמיה המוח אופטימלית בחולדות. מודל פרמטרים של 300 גרם משקל, 3040 בורג חוט, ו 3 h המוח סיכונים זמן היו המתאימים ביותר עבור אוטם מוחין הגדול ביותר, הציון של Longa הגבוהה ביותר ויחס הצלחה מודל הגדול ביותר. זה השתפר באופן משמעותי על הטיפול המקובל של 275 גרם משקל, 2...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דגמים רבים הקמת שיטות ואינדיקטורים התנהגותיים כי הם משמשים היטב איסכמיה מוחית חריפה לא יכול להיות שינויים משמעותיים בשלבים ההתאוששות והרצף של איסכמיה של המוח16,17. עם זאת, מספר המטופלים עם הסכמי המוח של שלבי ההתאוששות והרצף הוא הגדול ביותר. זה חיוני כדי לבחור מודל מתאים בעלי חיים עבור שלבי ההתאוששות והרצף של שבץ איסכמיה.
אנו משתמשים מודל MCAO/R בחולדות כדי למסך את המשקל המתאים של חולדות (260-330 g), סוג של בורג החוט (2636/2838/3040/304...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
. למחברים אין מה לגלות
עבודה זו נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (81603315, 81603316), מפתח R & D תוכנית של מחוז ג'יאנגשי בסין (20171ach80001), פרויקטים תעשייתיים ושיתוף פעולה אקדמי במכללות ואוניברסיטאות של מחוז פוג'יין ב סין (2018Y41010011).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ אנטומי | Leica (גרמניה) | S8 | מכשיר הפעלה מיקרוסקופי |
| להב | ג'לט | / | חיתוך קטעי מוח |
| בטמפרטורה קבועה מיטה רועדת | Taicang מפעל ציוד ניסיוני | THZ-C | כדי לשמור על חלקי המוח מוכתמים באופן שווה ובטמפרטורה קבועה |
| מצלמה דיגיטלית | Canon | 700D | לצילום תמונות של TTC מכתים |
| מכונת גילוח חשמלית | שנחאי Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd. | 3000# | הסרת שיער מצוואר חולדות |
| מלקחיים המוסטטי | שנחאי מכשיר רפואי ושות', בע"מ | 14 ס"מ | שימוש להסרת מוח |
| Image Pro Plus תוכנה | מדיה Cybernetics Inc. | 6.0 | נתח את נפח האוטם |
| Isoflurane | RWD מדעי החיים | 217170702 | גז הרדמה |
| מיקרו-מלקחיים | שנחאי Jinzhong Medical Devices Co., Ltd. | 10 ס"מ | מיקרומניפולציה של כלי הדם |
| Microshear | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd. | 10 ס"מ | מיקרומניפולציה של כלי הדם |
| מלקחיים עיניים | שנחאי Jinzhong מכשירים רפואיים ושות', בע"מ | 10 ס"מ | אנטומיה של עור ושרירים עזר |
| מספריים עיניים | שנחאי Jinzhong מכשירים רפואיים ושות', בע"מ | 10 ס"מ | שימוש לחיתוך עור הצוואר |
| עובש פרוסת מוח חולדה | שנחאי Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd. | 400 גרם | לחיתוך סטנדרטי ואחיד של רקמת מוח |
| מנגנון עייפות בר מסתובב עכברוש | Anhui Zhenghua מכשיר וציוד ביולוגי ושות 'בע"מ | ZH-300B | לבדיקת התפקוד הסנסורי-מוטורי |
| מכונת הרדמה לבעלי חיים קטנים | שנחאי Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd. | ABM3000 | מכונת הרדמה בגז |
| תרמוסטט לבעלי חיים קטנים | בייג'ינג Damida Technology Co., Ltd. | DM.7-YLS-20A | כדי לשמור על טמפרטורת גוף בעלי חיים קבועה במהלך הניתוח |
| מספריים כירורגיים | שנחאי מכשיר רפואי ושות', בע"מ | 16 ס"מ | שימוש לעריפת ראש והסרת מוח |
| תפר | שנחאי Jinhuan מכשירים רפואיים ושות', בע"מ | 4-0 / 5-0 | שימוש לתפרי עור ושרירים / שימוש לקשירת כלי דם |
| חוט | בייג'ינג Cinontech Co. Ltd. | 2636/2838/3040/3043-A4 | חסימה של עורק המוח האמצעי בחולדות |
| 5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC) | Sigma | LOT#BCBP3272V | מגיב צביעה בחתך המוח |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.