Summary
מודלים של בעלי חיים לדלקת לבלב חריפה חמורה מאפשרים לחקור שינויים פתופיציולוגיים בשלב הראשוני, ומאפשרים התבוננות בהתפתחות של אירועים דלקתיים. כאן אנו מספקים פרוטוקול עבור אינדוקציה של דלקת לבלב מרה חריפה חמורה על ידי עירוי מדרדר של נתרן taurocholate לתוך צינור הלבלב של עכברי C57BL/6 מרדים.
Abstract
אינדוקציה דלקת לבלב חריפה מרה על ידי עירוי נתרן taurocholate כבר בשימוש נרחב על ידי הקהילה המדעית בשל ייצוג של המצב הקליני האנושי רבייה של אירועים דלקתיים המתאימים לתחלת דלקת הלבלב המרה קלינית. ניתן להעריך את חומרת הנזק בלבלב על ידי מדידת הריכוז, המהירות והנפח של חומצת המרה המושרשת. מחקר זה מספק רשימת פעולות לביצוע מעודכנת של החומרים והשיטות המשמשים ברביית הפרוטוקול ומראה את התוצאות העיקריות ממודל דלקת הלבלב החריפה (AP). רוב הפרסומים הקודמים הגבילו את עצמם לשחזור מודל זה בחולדות. יישמנו שיטה זו בעכברים, המספקת יתרונות נוספים (כלומר, הזמינות של ארסנל של ריאגנטים ונוגדנים עבור בעלי חיים אלה יחד עם האפשרות לעבוד עם זנים מהונדסים גנטית של עכברים) שעשויים להיות רלוונטיים למחקר. עבור אינדוקציה דלקת לבלב חריפה בעכברים, אנו מציגים פרוטוקול שיטתי, עם מנה מוגדרת של 2.5% נתרן taurocholate במהירות עירוי 10 μL / min במשך 3 דקות C57BL / 6 עכברים שמגיע לרמה המקסימלית של חומרה בתוך 12 שעות של אינדוקציה ולהדגיש תוצאות עם תוצאות המאמתות את השיטה. עם תרגול וטכניקה, הזמן המשוער הכולל, מן האינדוקציה של הרדמה עד השלמת עירוי, הוא 25 דקות לכל חיה.
Introduction
אצל בני אדם, נוכחות של אבני מרה היא הגורם הנפוץ ביותר לדלקת הלבלב עקב חסימת החלק הסופי של choledochal, הפרעה לזרימה של הפרשות הלבלב וגרימת תהליך דלקתי אינטנסיבי בלבלב, עם עלייה בריכוז אנזימי העיכול בסרום ומתווכים דלקתיים1,2.
שתי תיאוריות שונות הוצעו כדי להסביר את ההתפתחות של דלקת לבלב חריפה (AP). תיאוריית "הערוץ המשותף" מציעה כי האבנים הנמצאות בכיס המרה חוסמות את מערכת צינור המרה הנפוצה הדיסטלית, ומאפשרות להפרשת מרה לזרום מדרדרות לתוך צינור הלבלב. התיאוריה השנייה (תיאוריית "חסימת צינור") מציעה כי חסימת צינור הלבלב על ידי אבני מרה עודפות גורמת לחסימה בזרימת הפרשת הלבלב לתריסריון, וגורמת ליתר לחץ דם דביק3. למרות המנגנונים המובילים דלקת לבלב מרה חריפה אינם מובנים במלואם, התוצאה היא תהליך דלקתי אינטנסיבי. התפרצות אנזימי עיכול ועיכול עצמי בלבלב מובילים לשינויים היסטופתולוגיים, לעלייה בציטוקינים דלקתיים (IL-1β, IL-6, TNF-α) בנוזל אסיטי ובנסיוב, ולעלייה בחלבוני פאזה חריפים4,5,6.
דלקת לבלב חריפה חמורה היא מצב שראוי לתשומת לב קלינית בשל מעורבות של איברים מרובים וסיכון תמותה גבוה. מודלים בעלי חיים להתרבות של דלקת לבלב חריפה (AP) חשובים כמו אלה להסביר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים של המחלה ולעזור ניטור האבולוציה של אירועים דלקתיים, החל מהשלבים הראשונים של המחלה. זה בדרך כלל לא אפשרי במרפאות2,7. בנוסף, גישה לרקמות הלבלב קלה במחקרים פרה-קליניים, לטובת ההבהרה של שינויים הקשורים לתנאים קליניים8 יחד עם האפשרות לעבוד עם מינים איזוגניים, ביטול משתנים לא רצויים, ושיקוף דמיון קליני עם התוצאות שנצפו במצב האנושי9.
מודלים מרה ולא מרה עבור אינדוקציה של דלקת לבלב חריפה בחולדות ומינים של עכברים נחקרו לעתים קרובות בספרות המדעית. שיטות אינדוקציה שאינן מרה כוללות מתן מינונים מגרה סופרמקימליים של סודהוג cholecystokinin או cerulein אנלוגי שלה10; ניהול של מינונים כמעט קטלניים של L-ארגנין; או ניהול של דיאטה כולין לקוי בתוספת אתionine11. למרות שיטות אלה קל להתרבות ולגרום דלקת הלבלב, הם אינם לשכפל את המנגנונים כי בתיאוריה לעורר AP (כלומר, ריפלוקס של הפרשת מרה לתוך צינור הלבלב). הטכניקה המטפלת במודל המרה מבוססת על עירוי מדרדר של חומצות מרה לתוך צינור הלבלב ודורש חוקרים מאומנים היטב לבצע פרוטוקול זה. מספר מחקרים פורסמו בשיטה זו בחולדות (ככל הנראה מסיבות טכניות מאז ניסויים אלה כרוכים בהליכים כירורגיים)12,13. עם זאת, הגישה בעכברים עשויה להציע תוצאות מעניינות יותר בחקר דלקת3,14,15. במחקר זה, אנו מראים רשימה של השלבים שיש לעקוב אחר להתרבות של דלקת לבלב חריפה חמורה על ידי עירוי של נתרן taurocholate ב C57BL / 6 עכברים מרדים.
עבור עבודות הכרוכות בצורך בניסויים בנוגדנים וניתוח של ביטוי הגן והחלבון, השימוש בעכברים עדיף בגלל הארסנל הגדול יותר של חומרים עבור בעלי חיים אלה והאפשרות לעבוד עם מינים איזוגניים ונוקאאוט, בין היתר שניתן להשתמש בהם רלוונטיים למחקרים16. עכברים C57BL/6 הוא זן לידה של עכברים שפותח במקור לחקר פעילות אנטי-טמור ואימונולוגיה. זן זה מועדף יותר ויותר על ידי החוקרים על היותו איזוגני, ומאפשר רבייה גדולה יותר של תוצאות, אשר עשוי לרמוז על שימוש במספר קטן יותר של בעלי חיים בניסוי ופחות שונות של תוצאות בין אותה קבוצה17,18.
Perides et al. (2010)14 פרסם פרוטוקול עבור אינדוקציה AP בעכברים על ידי עירוי נתרן taurocholate. כאן אנו מעדכנים את המודל הזה בריכוז נתרן טאורוכולאט גבוה יותר (2.5%) בעכברים C57BL/6, עם נפח ומהירות מוגדרים של עירוי (איור 1). הרמה המקסימלית של חומרה מגיעה בתוך 12 שעות של אינדוקציה בעכברים. העלאת הריכוז של IL-6 הן בסרום והן בחלל הצפק מתואמת עם ההתקדמות של AP. עם תרגול, הזמן המשוער הכולל מן אינדוקציה של הרדמה עד השלמת עירוי, הוא 25 דקות לכל חיה. זה חיוני כי חוקר מיומן מבצע את הניסוי הזה. כדי להבטיח כי הפתרון מוזרק כראוי לתוך צינור המרה המשותף, לבצע מספר אימונים פיילוט באמצעות מתילן כחול במקום נתרן taurocholate.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
פרוטוקול זה אושר על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים של בית הספר לרפואה USP, מספר פרויקט: 1343/2019-CEUA: FMUSP. עבור פרוטוקול זה, עכברי C57BL/6, בגילאי 6 שבועות, במשקל 20 ± 2 גרם שימשו (n = 9/קבוצה).
1. לפרוסטומיה
- בעלי חיים מרדים עם קסילאצין (10 מ"ג/ק"ג) ופתרון קטמין (80 מ"ג/ק"ג), באופן תת עורי (0.1 מ"ל / 10 גרם של משקל גוף) באמצעות מזרק 1 מ"ל ומחט 13x0.45 מ"מ 26G 1/2. בדוק עומק הרדמה מספיק על ידי צביטת בוהן. שלטו בטמפרטורת הגוף באמצעות רפידות מחוממות. ודא כי כל החומרים הכירורגיים הם סטריליים.
- נקו את אזור הבטן עם תמיסה של 5% פוידון-יוד והשתמשו בגוזם להסרת השיער בין החזה לבטן התחתונה (כ-2 ס"מ2). נקה את האזור הכירורגי עם 70% אלכוהול.
- לשתק את החיה על הלוח הכירורגי באמצעות סרט ניתוחי. השתמש במספריים כדי לחתוך 5 מ"מ של העור אופקית, על החלק העליון של הבטן ו 1 ס"מ מתחת לתהליך xiphoid. חזור על החתך על צפק. התוצאה תהיה לפרוסטומיה עם חשיפה מינימלית של החלל.
2. איתור וחשיפת הלבלב
- בעזרת מפסק, למשוך את הכבד לכיוון ראשו של העכבר, ~ 1 ס"מ מן המעי.
- אתר את אזור הלבלב שיוזרק עם נתרן taurocholate (ראש הלבלב). אתר את התריסריון עם התייחסות לכבד - מתחת לכבד, בצד ימין (בצד שמאל כמו העכבר הוא צפה). התריסריון הוא החלק הראשון של המעי הדק ומחובר לחלק האחרון של הקיבה.
- בעזרת מלקחיים, הרם את הכבד לכיוון ראש החיה, ומשוך בעדינות את חלק המעי הדק. תקן את שני הקצוות לרוחב של המעי הדק עם תפירת פוליפרופילן 6-0 כדי להציג טוב יותר את החלק הדיסטלי של צינור המרה המשותף.
3. אינדוקציה חמורה של דלקת לבלב חריפה
- סוחם באופן זמני את צינור המרה המשותף הפרוקסימלי עם קליפ microvessel כדי למנוע עירוי מדרדר מדליף לתוך הכבד. צינור המרה המשותף ניתן לראות בצד הכבד של התריסריון ואת הצומת שלה עם התריסריון ייראה לבן. לחשוף את האיבר מתוך חלל הבטן.
- לנקב את האזור periampullary (חלק לבנבן של הקיר של המעי הדק) כדי לגשת צינור המרה המשותף עם מחט 0.4 מ"מ מחובר צינור פוליאתילן 0.54 מ"מ.
- הפוך חסם זמני של צינור המרה המשותף דיסטלי עם 8-0 תפילה כדי למנוע את פתרון נתרן taurocholate מדליף לתוך התריסריון.
- התחל את משאבת עירוי ולתכנת פתרון נתרן taurocholate 2.5% (מדולל 0.9% מלוחים) עירוי במהירות קבועה של 10 μL / 10 גרם משקל גוף במשך 3 דקות.
- לאחר עירוי, להסיר את קליפ microvessel, זמני 8-0 תפירה, ומחט ההזרקה מצינור הלבלב המרה כדי לשחזר את הזרימה הפיזיולוגית של המרה.
- בסוף, לתפר את הבטן עם 6-0 פוליפרופילן מונופילן לאabsorbent. הזמן בין תפר הלפרוטומיה לתפר הקצה צריך להיות 30 דקות לכל היותר (ראו איור 1).
- לאחר הניתוח, לשכן את בעלי החיים בקופסאות פוליאתילן מרופדים שבבי עץ ומים ומזון ad libitum.
- לטפל בעכברים שליטה באותו אופן כמו העכברים הניסיוניים אבל להבטיח כי infusate מורכב מלוחים בלבד. בצע את ההליך הכירורגי ואת עירוי של תמיסת מלח (10 מ"ל / דקה, במשך 3 דקות) בקבוצת ביקורת (SHAM) כדי לחסל את ההטיה הדלקתית הנגרמת על ידי ניתוח ו cannulation.
- השתמש tramadol 12.5 מ"ג/ ק"ג תת עורית כל 8 שעות, החל לאחר התאוששות לאחר הניתוח.
4. שיטות לניתוח
- ב 12 שעות לאחר אינדוקציה AP, מרדים את בעלי החיים עם קסילאצין (10 מ"ג/ קילוגרם) וקטמין (80 מ"ג / קילוגרם) כדי לאסוף כ 250 μL של דם דרך מקלעת מסלולית.
- יש להחזיק בעדינות את העור על הגב, לקדם בלייה קלה של גלגל העין, ולמקם אותו כשהעין פונה כלפי מעלה.
- להחדיר טיפה של משחת עיניים המכילה הרדמה מקומית בעין החיה.
- מקם את קצה הצינור הנימי בפינה המהוכלת של העין והכנס אותו בעדינות מתחת לגלגל העין, עם זווית של ~ 30 ° - 45 °. סובב את הצינור הנימי עד שזרימת הדם תתחיל. זכור כי אין צורך להשתמש בכוח עבור ההליך.
- לאחר שהאוסף נגמר, ודא הומאוסטזיס על ידי שמירה על העפעפיים סגורים על ידי דחיסת אור עם גזה. להשליך את הצינור נימי במיכל חדה19.
- צנטריפוגה הסרום (700 x g, 15 דקות) ומלא את supernatant עבור עמילאז IL-6 מנונים (שלב 4.7 ו 4.8).
- המתת חסד עכברים על ידי חנק CO2 .
- השתמש במחט 27 G כדי להזריק 4 מ"ל של PBS קר כקרח 1x לתוך חלל הצפק. Tened עור הבטן ולוודא כי המחט נדחפת לאט בצפק כדי לא לנקב את כל האיברים. לאחר ההזרקה, לעסות בעדינות את הצפק במשך 10 s כדי להסיר תאים דבק צפק.
- באמצעות מספריים ופינצטה, לעשות חתך קטן (0.5 ס"מ) על העור הפנימי והשרירים כדי לחשוף את חלל הבטן. הכנס פיפטת נורה בצפק ולאסוף את הנוזל. היזהר לא לשאוף רקמת שומן או איברים אחרים.
- לאסוף נוזלים רבים ככל האפשר ולהפקיד את השעיית התא שנאסף בצינורות נשמר על קרח. השלך את פיפטת הנורה במיכל החדות20. צנטריפוגה של נוזל הצפק (250 x g, 5 דקות) ומלא את supernatant עבור IL-6 מינון (שלב 4.9).
- לאסוף את אזור הלבלב הסמוך לתריסריון (<5 מ"מ).
- לעבד את הלבלב על ידי תיקון 10% פורמלין ולשלב אותו לתוך פרפין.
- להכתים את השקופיות עם המטוקסילין ואוסין לניתוחים היסטופתולוגיים תחת מיקרוסקופיה קלה. השתמש בפרוטוקול של שמידט21 (בצקת בלבלב, תא אנסינאר, פציעה/נמק, דלקת בלבלב) כדי להעריך את היקף AP.
- מדוד עמילאז (U/dL) באמצעות ערכות זמינות מסחרית בהתאם להמלצות היצרן.
- מדד IL-6 על ידי בדיקות Luminex באמצעות ערכות מסחריות בהתאם להמלצות היצרן.
- יש לאחסן את הסרום ואת נוזל צפק supernatant המתקבל בשלבים 4.1 ו 4.4 במקפיא ב -80 °C (80 °F) במידת הצורך.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
חומרת דלקת הלבלב קיבלה ציון בין 0-3 על פי סולם שמידט21 שבו אפס מתאים להיעדרות, 1 מתאים לנוכחות קלה (<25%), 2 מתאים לנוכחות מתונה (בין 25 ל -50%) ו -3 תואמת לנוכחות אינטנסיבית (> 50%) (טבלה 1). המדידות שבוצעו היו פעילות עמילאז פלזמה, בצקת הלבלב, תא acinar, פציעה / נמק, דלקת בלבלב (על ידי ניתוח היסטולוגיה של חלקים מוכתמים H&E) וריכוז ציטוקינים IL-6 בסרום ונוזל PerC. לאחר 12 שעות של AP חמור, קבוצת APTA הראתה עלייה בריכוז עמילאז בסרום (6194 ± 336.7 U/dL), בהשוואה לקבוצת ה- Sham (3845 ± 135.7 U/dL). במקביל, קבוצת APTA הראתה ריכוז ציטוקינים מוגבר IL-6 בסרום ונוזל PerC (איור 2). איור 3 מראה כתמי המטוקסילין-אאוזין מייצגים של קבוצת זיוף ו-APTA .
איור 1: שרטוטים של אינדוקציה חמורה של דלקת לבלב חריפה ב-2.5% נתרן טאורוכולאט בעכברים C57BL/6. (A) כיס המרה; (B) צינור מרה משותף; (ג) צינור הלבלב; (D) וריד פורטל; (ה) קליפ מיקרווסל; (ו) אתר ניקוב (מחט מחובר צינור פוליאתילן ומחובר משאבת עירוי); (G) קיבוע מחט זמני בצינור המרה המשותף. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: תוצאות מייצגות לאחר 12 שעות של דלקת לבלב חריפה חמורה. (A) ריכוז עמילאז בסרום של בעלי חיים (U/dL). (B) ריכוז ציטוקינים IL-6 בסרום ונוזל PerC. ההבדלים בין הקבוצות הוערכו על ידי ניתוח t-test לא משוער * p <0.05 אם APTA ≠ זיוף (n = 9 / קבוצה). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
| בינגמה ביניים | חדירה דלקתית | נמק פרנכימה | דימום בפרנצ'יימה | |
| שאם | 1±0* | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| APTA | 3±0* | 3±0 | 3±0 | 3±0 |
| *P<0,05 אם שיים≠APTA. |
טבלה 1: שינויים היסתולוגיים ברקמת הלבלב לאחר 12 שעות של AP חמור. הלבלב עובד ונותח על פי קנה המידה של שמידט21. התוצאות התבטאו כממוצע ± SEM וההבדלים בין הקבוצות הוערכו על ידי מבחן הסטודנט t. * עמ' <0.05 אם APTA ≠ שאם; (n=9/קבוצה).
איור 3: כתמי נציגות-אאוזין ברקמת הלבלב לאחר 12 שעות של AP חמור. שינויים היסטולוגיים (A) SHAM ו-(B) רקמת הלבלב של APTA (מכתם המטוקסילין-אאוזין- הגדלה פי 40). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
השיטה של גרימת דלקת לבלב חריפה על ידי עירוי נתרן taurocholate מדרדר כבר הוצג חולדות22,23,24. שלוש יצירות דומות, שפורסמו בשנים 2008, 2010 ו-2015, שימשו התייחסות לפרוטוקול3,14,15. בעבודה זו, אנו מפרטים את כל השלבים הקריטיים לשחזור שיטה זו בעכברים C57BL/6 וכמה אפשרויות לאימותה.
צעד קריטי במבחן זה הוא חסימת צינור המרה ברמה של hilum עם קליפ microvessel (שלב 3.1) כדי למנוע נתרן taurocholate reflux לתוך הכבד. שלב זה דורש תשומת לב רבה, מכיוון שהווריד של הפורטל נמצא ליד הצינור (איור 1D), לכן יש להקפיד לא לחסום אותו יחד. המחט צריכה להיות מוכנסת רק לחלק צינור הדיסטלי ביותר. אם הוא הוכנס עמוק לתוך הצינור, זה יכול לגרום לקרע עם חומצה עולה על גדותיו parenchyma הבלוטות ו / או צינורות אחרים14. בדוק כי צינור פוליאתילן יש אוויר בפנים כדי למנוע את החסימה של צינור המרה הנפוצה.
מודל זה דורש חבטה בבטן העכבר. החדרת הצינורית דרך פתח צינור הלבלב דורשת ניסיון אבל זה יכול להיות מושגת עם אימון15,25. חשוב להדגיש כי חומרת דלקת הלבלב במודל זה תלויה באופן יחסי בריכוז, נפח העירוי, הלחץ של העירוי, ואת הזמן של אינדוקציה AP. לכן, מכונת עירוי קבוע עם נפח מבוקר ולחץ חייב לשמש.
עבור מחקר זה, אנחנו סטנדרטי ריכוז של 2.5%, עם מהירות עירוי של 10 μL / min, במשך 3 דקות ולחץ מתמיד. ב 12 שעות של AP, פרמטרים דלקתיים מוגברת ונמק של רקמות הלבלב נצפו, עם בעלי חיים למות בתוך 16 שעות לאחר אינדוקציה AP.
למרות הגורמים העיקריים של AP הם צריכת אלכוהול או אבני מרה, מודלים אלה אינם ניתנים לשחזור ניסיוני26. נכון לעכשיו, הפרוטוקול הנפוץ ביותר עבור אינדוקציה AP בעכברים כרוך 7 זריקות intraperitoneal של cerulein (50 מיקרוגרם / קילוגרם משקל גוף) ב 1 שעות מרווחים27. Cerulein שימש כדי לגרום דלקת לבלב חריפה קלה או מתונה גם כן. השונות במודל זה מגבילה את השימוש בה בחקר ההשפעות ההרסניות של המחלה, המעניקות תחלואה קלינית ותמותה10. מודלים המפעילים תמותה גבוהה תוך זמן קצר רלוונטיים לחקר AP חמור (נמק), שכן הם יכולים להעריך את האפקטיביות של תרופות או התערבויות חדשות. בין מודלים אלה הם אינדוקציה AP דימומית מכרסמים נקבה צעירה (בין 4 ל 6 שבועות) על ידי דיאטה כולין לקוי28 ו L-ארגנין (למשל, 3 x 3 גרם / קילוגרם או 2 x 4 גרם / קילוגרם) מבוסס אינדוקציה דלקת לבלב חריפה בעכברים אבל המינון הנכון של L-ארגנין כדי לגרום AP צריך להיבדק על ידי כל מעבדה ובכל זן העכבר29. בשנת 2015, מחקר הראה כי עירוי taurocholate תוך דביק ואחריו קשירת צינור המרה נפוצה דיסטלית מוביל מודל חמור, נמק של דלקת הלבלב בעכברים3. עם זאת, מודל זה אינו שימושי לבדיקת יעילות התרופה והתערבויות בשל מצבו הבלתי הפיך.
התוצאות שנמצאו במחקר זה תואמות לספרות עדכנית כגון העלאת ריכוז עמילאז בסרום ו- IL-6 הקשורים להתקדמות המחלה. ייתכן כי בעתיד, מדידת חלבונים כגון TNF-α, IL-1β ו myeloperoxidase יהיה פרמטר פרוגנוסטי קליני עבור דלקת לבלב חריפה חמורה30,31,32.
לסיכום, הפרוטוקול המשמש במחקר הנוכחי כדי לגרום AP בעכברים על ידי עירוי של נתרן taurocholate ישירות לתוך צינור המרה הנפוצה תוצאות דלקת לבלב חריפה חמורה עם נמק של רקמת הלבלב שניתן לראות אפילו בשעה 12 שעות לאחר האינדוקציה עם העלאת IL-6 ציטוקינים בסרום ונוזל צפק ועם קטלניות גבוהה (100% תמותה ב 16 שעות, הנתונים אינם מוצגים).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין מה לחשוף.
Acknowledgments
המחברים הודות לתוכנית לאחר סיום הלימודים במרפאה של אוניברסיטת סאו פאולו; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) ואוניברסיטת סאו פאולו בית הספר לרפואה (FMUSP).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | - |
| Styrofoam block | - | - | - |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | - |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
References
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats. Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).
- T, L., et al. Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice. Pancreas. 44 (3), (2015).
- Botoi, G., Andercou, A. Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis. Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).
- Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis. Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).
- Feng, C., et al. Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis. Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).
- Fang, D. Z., et al. Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats. International Immunopharmacology. 80, (2020).
- Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A.
- Wan, M. H., et al. Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research. HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).
- Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).
- Wang, N., et al. Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1. International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).
- Ma, Z. H., et al. Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis. Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).
- Souza, L. J., et al. Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis. Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).
- Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).
- Wittel, U. A., et al. Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice. Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).
- Tao, L., Reese, T. A. Making mouse models that reflect human immune responses. Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).
- Vandamme, T. F. Use of rodents as models of human diseases. Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).
- Song, H. K., Hwang, D. Y. Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches. Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).
- Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), CRC Press. (2010).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).
- Schmidt, J., et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).
- Liu, D. L., et al. Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis. International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).
- Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. The effects of bile acids on pancreatic ductal cells. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).
- Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).
- Lerch, M. M., Gorelick, F. S. Models of acute and chronic pancreatitis. Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).
- Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice. Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).
- Kui, B., et al. New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis. PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).
- Xue, J., et al. Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis. Nature Communication. 6, 7158 (2015).
- Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas. Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).
- Rao, S. A., Kunte, A. R. Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis. Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).
