Method Article

استكشاف بنية الأنسجة الدهنية من ميثيل ساليسيلات المقاصة والتصوير ثلاثي الأبعاد

DOI:

10.3791/61640

⸱

August 19th, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Université Côte d'Azur, Inserm UMR1065, C3M, Team "Cellular and Molecular Pathophysiology of Obesity", Nice, France, 2Integrated Cardio Metabolic Center, Department of Medicine, Karolinska Institutet, Stockholm, Sweden, 3Université Côte d'Azur, Inserm UMR1065, C3M, Team "Haematometabolism in Diseases", Nice, France, 4Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale (IPBS), Université de Toulouse, CNRS, UPS, Toulouse, France

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، ونحن وصف طريقة بسيطة وغير مكلفة وسريعة المقاصة لحل هيكل 3D من كل من الماوس والبشر الأبيض الدهني باستخدام مزيج من علامات لتصور الأوعية الدموية، والنوى، والخلايا المناعية، والخلايا العصبية، والبروتينات معطف قطرات الدهون عن طريق التصوير الفلورسنت.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

السمنة هي قضية الصحة العامة الرئيسية في جميع أنحاء العالم التي تزيد من خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية، والسكري من النوع 2، وأمراض الكبد. تتميز السمنة بزيادة في الأنسجة الدهنية (AT) كتلة بسبب فرط التنسج الدهني و / أو الفرط في التروبيه، مما يؤدي إلى إعادة عرض عميقة لهيكلها ثلاثي الأبعاد. في الواقع ، فإن القدرة القصوى لـ AT على التوسع أثناء السمنة أمر محوري لتطوير الأمراض المرتبطة بالسمنة. هذا التوسع AT هو آلية هامة المثلية لتمكين التكيف مع زيادة كمية الطاقة وتجنب الآثار الضارة للدهون إلى الأجهزة الأيضية الأخرى, مثل العضلات والكبد. ولذلك، فهم إعادة البناء الهيكلية التي تؤدي إلى فشل التوسع AT هو مسألة أساسية مع تطبيق السريرية عالية. في هذه المقالة، نحن وصف طريقة بسيطة وسريعة المقاصة التي تستخدم بشكل روتيني في مختبرنا لاستكشاف مورفولوجيا الماوس والبشر الأبيض الدهني الأنسجة عن طريق التصوير الفلورسنت. يتم تنفيذ طريقة إزالة AT المحسنة هذه بسهولة في أي مختبر قياسي مجهز بغطاء كيميائي، وشاكر مداري يتم التحكم فيه بدرجة الحرارة ومجهر فلوري. وعلاوة على ذلك، فإن المركبات الكيميائية المستخدمة متاحة بسهولة. الأهم من ذلك، هذه الطريقة تسمح لأحد لحل هيكل AT 3D عن طريق تلطيخ علامات مختلفة لتصور على وجه التحديد adipocytes، والشبكات العصبية والأوعية الدموية، وتوزيع الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتتميز السمنة بزيادة في كتلة الأنسجة الدهنية وأصبحت قضية رئيسية في مجال الصحة العامة في جميع أنحاء العالم، بالنظر إلى أن الأشخاص الذين يعانون من السمنة لديهم خطر متزايد للإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية، والسكري من النوع 2، وأمراض الكبد وبعض أنواع السرطان.

وظيفة فسيولوجية أساسية من الأنسجة الدهنية هو تعديل الجلوكوز في الجسم كله والدهون التوازن1,2. خلال فترة التغذية، يخزن الخلايا الشحمية (أي الخلايا الرئيسية للأنسجة الدهنية) الفائض من الجلوكوز والدهون التي توفرها وجبة في الدهون الثلاثية. أثناء الصيام ، تقوم الخلايا الشحمية بتكسير الدهون الثلاثية إلى أحماض دهنية غير مُهجنة وغليسير....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم اختبار هذا البروتوكول ويتم التحقق من صحة جميع الماوس ومستودعات الأنسجة الدهنية البيضاء البيضاء البشرية. تم جمع الأنسجة الدهنية البشرية والفأر وفقا للقوانين الأوروبية ووافقت عليها اللجان الأخلاقية الفرنسية والسويدية.

1. تثبيت الماوس والبشر الأنسجة الدهنية البيضاء

  1. غمر الماوس المحاصَد أو الأنسجة الدهنية البيضاء البشرية في 10 مل على الأقل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 4٪ شبهفورمالدهيد (PFA) في أنبوب بلاستيكي 15 مل.
  2. يهز أنبوب من البلاستيك في درجة حرارة الغرفة على لوحة المتداول لمدة 1 ساعة.
  3. ترك أنبوب من البلاستيك في 4 درجة مئوية على لوحة المتداول بين عشية وضحاها، لإكمال التثبيت.
    ملاحظة: يتم تكييف هذا البروتوكول ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام الإجراء الموصوف هنا وتلخيص في الشكل 1، كنا قادرين على وصمة عار ووضوح بصريا الأنسجة الدهنية البيضاء البشرية والفأر كما هو موضح في الشكل 2A والشكل 2B، على التوالي. تم نقل الأنسجة المُبرّة إلى غرفة التصوير المعدنية لإجراء التصوير confocal (الشكل 3A). المقاصة تحسنت بشكل كبير عمق الصور الأنسجة التي كنا قادرين على الحصول على (الشكل 3B والشكل 3C

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعديلات التي تحدث داخل الأنسجة الدهنية على مدى التقدم المرضي ، مثل السمنة ، أمر أساسي لفهم الآليات وراء علم الأمراض. وقد استندت الدراسات الرائدة التي كشفت عن هذه الآليات في الأنسجة الدهنية على المقاربات العالمية مثل بروتيوميكس الأنسجة الدهنية21، تدفق الخلايا22،23، و24transcriptomics ،25. وبالإضافة إلى ذلك، بذلت جهود لاستكشاف التغيرات الهيكلية التي تحدث في الأنسجة الدهنية باستخدام.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى أصحاب البلاغ أي تنازع للكشف عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعم هذا العمل من قبل INSERM، جامعة كوت دازور، وبمنح من الوكالة الوطنية الفرنسية للبحوث (ANR) من خلال الاستثمارات في المستقبل لابكس SIGNALIFE (ANR-11-LABX-0028-01)، وبرنامج UCA JEDI (ANR-15-IDEX-01) عبر الأكاديمية 2 "مجمعات Systèmes" وأكاديمية 4 "Complexité eté التنوع du vivant", مؤسسة من أجل الـ Recherche Médical (Équipe FRM DEQ20180839587)، وبرنامج المحققين الشباب إلى J.G. (ANR18-CE14-0035-01-GILLERON). كما نشكر مرفق التصوير الأساسي لـ C3M الذي يموله مجلس إدارة ألب- ماريتام و Région PACA، والذي تدعمه أيضًا منصة المجهر والتصوير IBISA Côte d'Azur (MICA). نشكر ماريون دوسوت على المساعدة التقنية في إعداد الأنسجة. نشكر آبي كوتريسس، الرؤية العلمية الدولية في جامعة UCA، ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 مل أنابيب دقيقةأنابيب Eppendorff - Dutscher33528
أنابيب بلاستيكية 15 مل أنابيبFalcon - Dutscher352096
غطاء زجاجي دائري 18 ممMariendfeld0117580 زجاجة زجاجية سعة 20
ملWheaton986546
الأجسام المضادة المترافقة للفأرJackson ImmunoResearch715-605-150التخفيف: 1/100
الأجسام المضادة المضادة للأرانب Alexa647 المترافقةJackson ImmunoResearch711-605-152التخفيف: 1/100
BSASigma-aldrichA6003
CD301-PE الجسم المضادBiolegendBLE145703التخفيف: 1/100
CD31 الجسم المضادAbCamab215912التخفيف: 1/50
برنامج تحليل ثلاثي الأبعاد تجاري - أداةIMARIS Oxfordمع مجهر متحد البؤر لوحدة الخلية
- نيكون A1Rنيكون
دابيثيرموفيشرD1306تركيز المخزون: 5 مجم / مل ؛ التخفيف 1/1000
ديوكسي كولاتسيجما ألدريتشD6750
DMSOسيجما-ألدريتشD8418
Glut4 الجسم المضادسانتا كروزsc-53566التخفيف: 1/50
جلايسينسيجما-ألدريتشG7126
ليكتين-ديلايت 649مختبر ناقلاتDL-1178-1تركيز المخزون: 2 & ميكرو; ز /& مايكرو ؛ L; الحقن الوريدي: 50 وميكرو. L / فئران
غرفة تصوير معدنية مجهزة بقاع زجاجي - AttoFluorChamber ThermofisherA7816
ميثيل ساليسيلاتسيجما-ألدريتشM6752
الجسم المضاد بيريليبين651156التخفيف: 1/50
فالويدين أليكسا 488ثيرموفيشرA12379التخفيف: 1/100
TCR- & beta ؛ -PB الجسمالمضادBiolegendBLE109225التخفيف: 1/100
TH الجسم المضادAbCamab112التخفيف: 1/50
Triton X100Sigma-aldrichX100
Tween-20Sigma-aldrichP416

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pellegrinelli, V., Carobbio, S., Vidal-Puig, A. Adipose tissue plasticity: how fat depots respond differently to pathophysiological cues. Diabetologia. 59 (6), 1075-1088 (2016).
  2. Stern, J. H., Rutkowski, J. M., Scherer, P. E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Adipose Tissue ClearingMethylsalicylate Clearing3D ImagingFluorescent MicroscopyConfocal MicroscopyTissue FixationTriton X 100 PermeabilizationAntibody StainingVascular Network ImagingAdipocyte Morphology

Related Articles