Summary
في السياق السريري، سيخضع المرضى الذين يعانون من سرطان البنكرياس الموضعي لاستئصال البنكرياس يليه العلاج المساعد. يهدف هذا البروتوكول المبلغ عنه هنا إلى إنشاء طريقة آمنة وفعالة لنمذجة هذا السيناريو السريري في الفئران العارية ، من خلال زرع العظام لسرطان البنكرياس يليه استئصال البنكرياس واستئصال الطحال.
Abstract
هناك نقص في نماذج الحيوانات مرضية لدراسة العلاج المساعد و / أو neoadjuvant في المرضى الذين يجري النظر لعملية جراحية لسرطان البنكرياس (PC). لمعالجة هذا النقص، ونحن نصف نموذج الماوس التي تنطوي على زرع العظام من جهاز الكمبيوتر تليها استئصال البنكرياس البعيدة واستئصال الطحال. وقد ثبت أن النموذج آمن ومرن بشكل مناسب لدراسة مختلف النهج العلاجية في البيئات المساعد و المساعد الجديد.
في هذا النموذج, يتم إنشاء ورم البنكرياس لأول مرة عن طريق زرع خليط من خلايا سرطان البنكرياس البشري (لوسيفيراز الموسومة AsPC-1) وسرطان الإنسان المرتبطة خلايا البنكرياس ستيلاتي في البنكرياس البعيدة من الفئران العارية بالب / ج اللاهية. بعد ثلاثة أسابيع ، يتم استئصال السرطان عن طريق إعادة استئصال البطن ، واستئصال البنكرياس البعيدة واستئصال الطحال. في هذا النموذج، يمكن استخدام التصوير الإضاءة الحيوية لمتابعة التقدم المحرز في تطور السرطان وآثار استئصال / العلاجات. بعد استئصال, يمكن إعطاء العلاج المساعد. بدلا من ذلك، يمكن إعطاء العلاج النيواديفانت قبل استئصال.
يتم تقديم بيانات تمثيلية من 45 فأرا. خضعت جميع الفئران لاستئصال البنكرياس /استئصال الطحال بنجاح دون أي مشاكل في الهموستاسي. تم تحقيق هامش البنكرياس القريب الكلي أكبر من 5 مم في 43 (96٪) في 100000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 فئران. وكان معدل النجاح التقني لاستئصال البنكرياس 100٪، مع 0٪ من الوفيات المبكرة والمراضة. لم يمت أي من الحيوانات خلال الأسبوع التالي لاستئصالها.
باختصار، نحن نصف تقنية قوية وقابلة للاستنساخ لنموذج استئصال جراحي لسرطان البنكرياس في الفئران الذي يحاكي السيناريو السريري. قد يكون النموذج مفيدا لاختبار كل من العلاجات المساعد والعلاج المساعد الجديد.
Introduction
ويرتبط سرطان الغدة القنوات البنكرياسية (سرطان البنكرياس [PC]) مع سوء التكهن1. يبقى الاستئصال الجراحي العلاج العلاجي الوحيد المحتمل للكمبيوتر الشخصي وينبغي النظر فيه للمرضى الذين يعانون من مرض المرحلة المبكرة. لسوء الحظ ، حتى مع استئصال R0 (أي هوامش استئصال خالية من الورم) ، فإن معدل التكرار (المحلي أو من مرض النقيلي غير المكتشف) مرتفع2،3. لذلك ، يشار إلى العلاج المساعد الجهازي في جميع المرضى تقريبا الذين يخضعون لاستئصال4. وعلاوة على ذلك، في حين يوصى الآن العلاج neoadjuvant فقط للسرطانات الحدية resectable، مؤشراتها آخذة في التوسع بحيث استخدامه الروتيني هو محور الكثير من البحوث السريرية5،6،7،8. من أجل تطوير نهج علاجية جديدة للكمبيوتر تنطوي على استئصال، وهذه النهج تحتاج إلى تقييم لأول مرة في النماذج ما قبل السريرية التي تلخص بدقة البيئات السريرية.
وقد استخدمت نماذج الماوس Orthotopic من جهاز الكمبيوتر في كثير من الأحيان في الماضي لاختبار العلاجات الدوائية9،10. تم إنتاج العديد من هذه عن طريق حقن الخلايا السرطانية وحدها في البنكرياس الماوس، مما أدى إلى الأورام التي تفتقر إلى ستروما البارزة التي هي سمة من سمات جهاز الكمبيوتر. في الآونة الأخيرة، نماذج تقويم العظام المشاركة في الحقن، مثل تلك التي قمنا بتطويرها لأول مرة عن طريق حقن خليط من جهاز الكمبيوتر البشري والخلايا النجمية البنكرياس الإنسان (PSCs، المنتجين الرئيسيين للستروما الكولاجين في PC)، قد حان للاستخدام المنتظم11،12. الأورام التي تنتجها مثل هذه الحقن المشترك للسرطان والخلايا السترومية تظهر (1) كل من عناصر السرطان وعنصر سترومال مميزة (desmoplastic) من جهاز الكمبيوتر، و (2) تعزيز انتشار الخلايا السرطانية والانبثاث11. وهكذا، فإن هذا النموذج يشبه إلى حد كبير الكمبيوتر البشري. في حين تم وصف عدد من النماذج استئصالي من جهاز الكمبيوتر التقويمي13,14,15,16, لا شيء قد عكست الحقائق السريرية لاستئصال البنكرياس في البشر دقيقة مثل هذا النموذج, وبالتالي كانت دون المستوى الأمثل لاختبار العلاجات المساعد أو neoadjuvant.
وكانت أهداف نموذج الماوس المقدمة هي توضيح كيفية: (1) زرع سرطان البنكرياس التقويمي بنجاح مع تقليل الانتشار البريتوني غير المقصود و(2) في وقت لاحق استئصال السرطان تماما. تسلط الورقة الضوء على النصائح والمزالق المحتملة لهذه التقنية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد وافقت لجنة رعاية الحيوان والأخلاق في جامعة نيو ساوث ويلز (17/109A) على جميع الإجراءات. واستخدمت أنثى الفئران العارية Balb/c، التي تتراوح أعمارهم بين 8 و 10 أسابيع وتزن 16-19 غرام، لهذا البروتوكول. تم إيواء الفئران في أقفاص معزولة صغيرة وتغذية المواد الغذائية المتاحة تجاريا بيليه والمياه الإعلانية libitum.
1. زرع سرطان البنكرياس العظام
- إعداد الخلايا لزرع. أولا، حساب عدد الخلايا المطلوبة لهذا الإجراء (1 × 106 خلايا AsPC-1 الموسومة باللوسيفيراز و1 × 106 خلايا برج البنكرياس البشرية المرتبطة بالسرطان [CAhPSCs] مطلوبة لكل حيوان).
- حافظ على هذه الخلايا في حاضنة CO2 التي يتم التحكم فيها بدرجة حرارة رطبة واجر اختبار الميكوبلازما الروتيني. الثقافة المتوسطة المستخدمة ل ASPC-1 و CAhPSCs هي RPMI 1640 (مع 300 ملغم / لتر L-الجلوتامين، 20٪ v/v مصل الأبقار الجنيني، 1٪ v/v البنسلين / الستربتوميسين) وIMDM (مع 4 MM L-glutamine، 10٪ v/v مصل الأبقار الجنيني، 1٪ v/v البنسلين / الستربتومايسين).
- استخدام تقنيات ثقافة الخلية القياسية لمحاولة إدخال الخلايا في تعليق الخلية. تحييد التريبسين باستخدام وسيط الثقافة الكاملة المعنية في وحدة تخزين ضعف حجم الحل التريبسين المستخدمة.
- اغسل هذه الخلايا مرتين باستخدام محلول ملحي عازل للفوسفات (PBS) وأعيد إنفاقه في خليط يحتوي على 1 × 106 خلايا AsPC-1 و1 × 106 CAhPSCs في تعليق خلية 50 ميكرولتر.
- الحفاظ على هذا التعليق على الجليد حتى الاستخدام.
- إعداد خزانة السلامة الحيوية من الدرجة الثانية لهذا الإجراء. استخدام حصيرة التدفئة مضافا إليها ستارة بلاستيكية معقمة. للتكبير أثناء العملية، استخدم زوجا من اللؤم الجراحي من 2.5x إلى 3.5x.
- إعداد مسحات سلسلة محفظة عن طريق قطع حفرة، 1 سم في القطر، في مسحة شاش. تأمين هذه الحفرة مع خياطة سلسلة محفظة. يمكن استخدام أي خياطة مضفرة دقيقة لهذا (على سبيل المثال، 5/0 خياطة حمض البولي جليكوليك). يوصى بمواد خياطة مضفرة لأنها تسمح للعقدة الفضفاضة بالبقاء في مكانها بعد التشديد. ويتضح هذا في الشكل 1a.
- تخدير الماوس مع 80 ملغم/كغ من الكيتامين و 10 ملغم/كغ من الإكسيلازين عن طريق الحقن داخل الصفاق.
- إعطاء 5 ملغم/كغ انروفلوكساسين مضاد حيوي وقائي, 2.5 ملغم/كغ فونيكسين مسكن و1 مل من 0.9٪ ملحي تحت الجلد.
- مرة واحدة تخدير، ضع الماوس على الحقل العقيم في موقف سوبين وتطبيق بوفيدوني اليود تليها الإيثانول 70٪ لإعداد الجلد.
- إجراء شق طولي في الجلد من الربع الجمجمة اليسرى من البطن، ومن ثم أدخل البطن عن طريق قطع طبقة العضلات بين ملقط.
- تحميل حقنة الأنسولين 29 G مع 50 ميكرولتر من تعليق الخلية-وهذا يعادل 1 × 106 CAhPSCs و 1 × 106 لوسيفيراز الموسومة AsPC-1 الخلايا لكل حقن. قم بتركيبه على جهاز الحقن. يتم شرح تصميم ووظيفة هذا الجهاز الحقن بالتفصيل في الشكل 1ب وأسطورته.
- ضع مسحة سلسلة المحفظة على شق استئصال البطن ثم قم بتهيئة ذيل الطحال والبنكرياس من خلال فتح هذه المسحة. تشديد سلسلة محفظة لتطويق بلطف الجسم من البنكرياس, تعريض ذيل البنكرياس للحقن. من المهم أن تكون ضيقا بما فيه الكفاية بحيث يتصل الشاش محيط البنكرياس بينما في الوقت نفسه لا يضيقه.
- باستخدام زوج من ملقط، فهم ذيل البنكرياس ووضع بلطف التوتر الجانبي على ذلك. ثقب السطح الصفاق البطني مع الإبرة في زاوية ضحلة ومن ثم حقن تعليق الخلية في البنكرياس بطريقة بطيئة وتسيطر عليها (أكثر من 10−15 ق) مع جهاز الحقن.
- أثناء عملية الحقن، لاحظ بعناية للتسرب — سواء حول موقع الحقن (من الجزر) وعلى الجانب الآخر من فصوص البنكرياس (في حالة اختراق من خلال وعبر). إذا حدث تسرب مرئي، أوقف الحقن ولاحظ حجم التسرب عن طريق التحقق من حجم الحقن المتبقي في الحقنة. إذا كان التسرب هو من حجم صغير (<10 ميكرولتر)، ومن ثم امتصاص أي تسرب مع الشاش وإعادة وضع الإبرة في فصوص البنكرياس مختلفة لإكمال الحقن.
- استبدال الطحال والبنكرياس وإغلاق جدار البطن مع 5/0 خياطة حمض البوليجليكوليك بطريقة مستمرة. أغلق الجلد بمقاطع.
- رصد الماوس في قفص دافئ حتى تعافى من التخدير. مرة واحدة مستيقظا والتنبيه، ونقل الماوس مرة أخرى إلى قفصه.
2. جراحة استئصال السرطان: استئصال المعدة البعيدة واستئصال الطحال
- يمكن أن يختلف توقيت استئصال الأسنان فيما يتعلق بالزرع وفقا للبروتوكول التجريبي. بشكل عام، تسمح للأورام تنمو على الأقل لمدة 3 أسابيع قبل استئصال، ولكن تحسين هذا تجريبيا لخط الخلية السرطانية المزروعة خاصة.
- في اليوم السابق لجراحة الاستئصال، قم بإجراء التصوير بالإضاءة الحيوية على الحيوانات لتأكيد وجود ورم أولي موضعي. لاحظ أن دراسة التصوير هذه تستخدم ببساطة لاستبعاد الفئران المصابة بمرض واضح خارج البنكرياس من استئصالها. ولا ينبغي استخدام الحجم أو التدفق المشع كعتبات لتحديد الأهلية لاستئصال النبتة.
- وزن الفئران وحقن مع D-لوسيفيرين intraperitoneally (150 ملغ / كغ).
- تحديد توقيت خطوة التصوير فيما يتعلق حقن لوسيفيرين لكل تجربة من خلال أداء منحنى الحركية لوسيفيرين. الفترة الزمنية التي يكون فيها التدفق المشع أعلى من 90٪ من الحد الأقصى يمثل الوقت الأمثل للتصوير الإضاءة الحيوية (في هذه التجربة، 18 إلى 26 دقيقة بعد الحقن)
- حث التخدير والحفاظ على استخدام ايزوفلوران (4٪ و 3٪ مع الأكسجين، على التوالي) وإجراء التصوير باستخدام جهاز التصوير الإنارة الحيوية (على سبيل المثال، IVIS Lumina II). استخدم إعدادات التعريض الضوئي التلقائي و binning (ومع ذلك ، يمكن تحسين هذا للتدفق المشع المتوقع).
- إعداد خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية للإجراءات. استخدام حصيرة التدفئة مضافا إليها ستارة بلاستيكية معقمة. للتكبير أثناء التشريح، استخدم زوجا من اللؤم الجراحي من 2.5x إلى 3.5x.
- تخدير الماوس مع 80 ملغم/كغ من الكيتامين و 10 ملغم/كغ من الإكسيلازين عن طريق الحقن داخل الصفاق.
- إعطاء 5 ملغم/كغ انروفلوكساسين مضاد حيوي وقائي, 2.5 ملغم/كغ فونيكسين مسكن و1 مل من 0.9٪ ملحي تحت الجلد.
- ضع الماوس على الحقل العقيم في وضعية السطخة وطبق povidone-iodine متبوعا بالإيثانول بنسبة 70٪ لإعداد البشرة.
- إجراء شق طولي في الجلد من الربع الجمجمة اليسرى من البطن، ويفضل من خلال موقع شق السابقة.
- تشريح الجلد بصراحة قبالة جدار البطن العضلي الكامنة، ومن ثم وضع المتراجع Alm الذاتي الاحتفاظ لعقد الجرح الجلد مفتوحة.
- انسي الطبقة العضلية بين ملقط فقط إلى جانب واحد من خط خياطة العملية السابقة، ومن ثم تمديد شق لاستئصال خط خياطة السابقة بأكملها.
- إضفاء الطابع الخارجي على الطحال والبنكرياس البعيدة وسحبه بشكل الجمجمة. في الجانب caudal من البنكرياس، يمكن العثور على القولون المرفقة الالتصاقات السينمائية. إذا تم العثور على هذا، تشريح بصراحة القولون قبالة.
- تمرير بعناية زوج من الظهر ملقط إلى الجسم من البنكرياس والأوعية الجنبية وفتح هذه المساحة. هذا يحرر جزء من البنكرياس للربط اللاحقة.
- Ligate الجسم من البنكرياس قريبة من الورم مع مقطع ربط التيتانيوم، ومن ثم تحويل البنكرياس distal لهذا مع الكي. طريقة بديلة للسيطرة على جذع البنكرياس هو ligate في الاستمرارية مع 5/0 خياطة حمض البوليجليكوليك قبل الشفط.
- تراجع البنكرياس caudally وكى الأوعية المعدة بين القطب الجمجمة من الطحال والمعدة.
- إزالة العينة وتأكيد haemostasis.
- أغلق جدار البطن مع خياطة حمض البوليجليكوليك 5/0 بطريقة مستمرة. أغلق الجلد بمقاطع.
3. إدارة ما بعد الجراحة
- في فترة ما بعد التخدير مباشرة (لكلا الإجراءين أعلاه) ، راقب الماوس في قفص دافئ حتى يتعافى من التخدير. مرة واحدة مستيقظا والتنبيه، ونقل الماوس مرة أخرى إلى قفصه. في فترة ما بعد الجراحة ، راقب الحيوانات بحثا عن الألم وعلامات الضيق. إدارة 0.05 ملغم/ كغ البوبرينورفين عن طريق الحقن تحت الجلد ومراقبة الحيوانات عن كثب لمدة 12 ساعة.
- بعد ذلك، مراقبة الفئران يوميا للوزن وتناول الطعام والنشاط. فحص مواقع شق وبالبات لحجم الورم. إزالة قصاصات الجلد في اليوم السابع بعد الجراحة.
- قتل الفأرة إذا تم الوصول إلى نقاط النهاية الإنسانية. وتشمل هذه النقاط النهائية الإنسانية: فقدان وزن الجسم >20٪، وملامح الضيق غير قابل للعلاج (بما في ذلك الموقف حدب، وعدم وجود حركة أو الاستمالة) وحجم الورم أكبر من 1 سم3 كما يقدر من قبل الجس الخارجي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
خضع 59 فأرا متتاليا لعملية زرع. وحدث تسرب إجمالي في ثمانية (14 في المائة) من النسبة المئوية للتسرب في 10 حالات (14 في المائة) من إجمالي التسربات فئران. وتقدر درجة التسرب في وقت الحقن كما هو موضح أعلاه في قسم البروتوكول. بعد ثلاثة أسابيع للسماح لهذه الأورام المزروعة بالنمو، تم إجراء التصوير قبل الاستئصال الحيوي لاستبعاد الفئران المصابة بمرض النقيلي الإجمالي قبل استئصالها. خمسة وأربعون (76٪) الفئران خضعت لاستئصال جراحي.
جميع ال 45 (100٪) الفئران خضع لاستئصال البنكرياس القاصي الناجح / استئصال الطحال مع عدم وجود قضايا haemostasis. تم تحقيق هامش البنكرياس القريب الكلي أكبر من 5 مم في 43 (96٪) في 100000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 فئران.
في وقت استئصال الورم، تم العثور على الانبثاث المحلي في 9/45 (20٪) الفئران – معظمها في خط خياطة (متقطعة مع الورم الأساسي) مع ثلاثة من تسعة تظهر العقيدات معزولة إضافية على منحنى أكبر من المعدة واحد يظهر عقيدات تحت الغطاء على الكبد. كان ورم البنكرياس الأساسي ملتزما بخط الغرز في خمسة (11٪) الفئران والكبد في واحد (2٪) فأر. تم استئصال هذه الهياكل المنضمة في الكتلة.
متوسط (SEM) وقت الجراحة (التعريفي إلى الإغلاق) كان 22 (0.9) دقيقة. لم يمت أي من الحيوانات في غضون أسبوع واحد بعد استئصالها.
بعد أسبوع واحد من استئصال، خضعت الفئران لتصوير الإضاءة الحيوية للكشف عن الأمراض المتبقية. تمت مقارنة نسبة التألق الأقصى على السطح البطني للفأرة بنسبة الخلفية. و23 (71٪) الفئران لديها نسبة التألق القصوى (الماوس: الخلفية) من <10، مما يشير إلى الحد الأدنى أو أي مرض المتبقية.
الشكل 1: أجهزة مصنوعة خصيصا لتسهيل زرع الورم. (أ)مسحة شاش سلسلة محفظة: (1) ثقب مركزي، ما يقرب من 1 سم في القطر، والتي من خلالها سيتم وضع ذيل البنكرياس في وقت الحقن. '2' خياطة سلسلة المحفظة حول الحفرة؛ '3' شاش مزدوج الطبقات؛ '4' عقدة رمي واحدة؛ '5' يتم تأمين طرف واحد من مادة الغرز على الشاش بشريط مؤشر التعقيم؛ '6' يتم تصميم مقبض مصنوع من شريط المؤشر على الطرف الآخر من مادة الغرز. (ب) جهاز الحقن: (I) حقنة المحرك. فتحات قطع من خلال الجسم من هذه الحقنة يسمح حقنة الحقن (مع حقن تعليق الخلية; لا يظهر) ليتم تركيبها على هذا الجسم حقنة; (II) حقنة المراقب المالي. هذا مملوء بالماء الاكتئاب من المكبس على حقنة وحدة تحكم أصغر من قبل مساعد الجراحية يسبب تشريد المكبس حقنة المحرك أكبر. إزاحة المكبس المحرك أصغر ، ولكن مع ميزة ميكانيكية تسمح للحقن بالتغلب على المقاومة المرتبطة بآلية حقن الحقن وكذلك مقاومة الأنسجة للتوسع عن طريق الحقن. وهذا يسمح لحقن دقيق وسلس من 50 ميكرولتر على مدى 10-15 ثانية; (III) أنابيب اتصال البوليتيترافلوروإيثيلين (PTFE) بقطر داخلي يبلغ 0.5 مم. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نموذج الماوس التقويمي استئصال سرطان البنكرياس مهم لأنه يسمح لاختبار العلاجات المساعد وneadjuvant. وهذا مهم بشكل خاص في سرطان البنكرياس حيث الجراحة لا تزال العلاج الأكثر فعالية ولكن يرتبط مع ارتفاع خطر تكرار. تصف هذه الورقة طريقة من شأنها أن تنتج بشكل موثوق سرطان البنكرياس الذي يحتمل أن يكون قابلا للشفاء مع استئصال، وتكرار السيناريو السريري حيث مطلوب العلاج المساعد/ المساعد.
الأهمية فيما يتعلق بالأساليب القائمة
على الرغم من أهمية العلاجات المساعد والنيواديفانت في سرطان البنكرياس، وهناك عدد قليل من نماذج الماوس استئصال العظام وصفت جيدا في الأدب. هذه النماذج الموصوفة resectional تختلف في إخلاصها لتكرار الوضع السريري في البشر. ويمكن تصنيف هذه النماذج السابقة على نطاق واسع إلى: '1' استئصال الورم فقط، مع توجيه مضان؛ '2' استئصال الورم فقط، مع توجيه مضان؛ '2' الإصابة بالورم؛ '2' الإصابة بالورم؛ '2' الإصابة بالورم؛ '2' الإصابة بالورم؛ '2' ال '2' استئصال البنكرياس تحت الكلي دون استئصال الطحال؛ '3' استئصال المعدة/استئصال الطحال.
وقد وصف استئصال الورم مع التوجيه مضان في أكبر عدد من التقارير15،17،18،19،20،21. وقد نشأ العديد من هذه الأوراق من نفس المجموعة البحثية. لسوء الحظ ، في البشر ، لا يتم إجراء الختان الموضعي للورم وحده (التلقيح) لسرطان الغدة الغدية البنكرياسي (PC) بسبب الاحتمال الكبير لتكراره محليا ، بالإضافة إلى عدم القدرة على تقييم حالة العقدة الليمفاوية22،23. لذلك ، فإن استخدام مجموعة مقارنة غير ذات صلة سريريا (التعليم الموجه غير الفلوري) يحجب الإبلاغ عن نتائج الأورام في الأوراق التي تصف هذه التقنية. ليس من المستغرب أن مجموعات التلقيح غير الفلورية كان لديها دائما معدلات مفرطة من التكرار المحلي15و20و21. وعلى النقيض من ذلك، وصف تارجنتسون وآخرون14 تقنية استئصال مماثلة موجهة بالفلور، وأبلغوا عن معدل تكرار منخفض إلى حد معقول قدره 58٪ (في ثمانية أسابيع بعد استئصال). وعموما، يبدو أن هذه الدراسات تثبت فائدة التوجيه الفلوري لتصور الأمراض المتبقية أثناء الجراحة. ومع ذلك ، فإن هذا ليس بعد معيار الرعاية في البشر ، وهو قيد من حيث استخدامه في نموذج الماوس الذي يهدف إلى تكرار السيناريو السريري. وبطبيعة الحال، قد يتغير هذا إذا تم اعتماد الجراحة الموجهة بالفلورسينس على نطاق واسع في الممارسة السريرية.
واستند نموذج آخر لاستئصال الثدي على استئصال البنكرياس دون استئصال الطحال لورم مزروع في جسم البنكرياس13،24. كما أن الأهمية السريرية لهذا الأمر موضع تساؤل لأن العملية الموصوفة لم تكن استئصال البنكرياس ولا استئصال البنكرياس البعيدة كما يتم إجراؤها في البشر. ليس من المستغرب أن هذه الفئران عانت أيضا من ارتفاع معدلات تكرار الورم ، سواء البعيدة والمحلية. وتجدر الإشارة بشكل خاص إلى أن تكرار الجنب كان شائعا ، مما يشير إما إلى استئصال غير كاف أو بذر ورم الصفاق المحتمل عند الزرع24.
ني وآخرون.16 وصف نموذج استئصال البنكرياس / استئصال الطحال التي أجريت مع التوجيه التصوير الفلوري. ومن المخيب للآمال، على الرغم من استخدام عملية ذات صلة سريريا (مع توجيه مضان)، كان البقاء على قيد الحياة قصيرة جدا (متوسط البقاء على قيد الحياة من 18 يوما)، حتى في مجموعة استئصال البنكرياس البعيدة. ويبدو أن هذه الدرجة من المرض التدريجي لتكون أسوأ من نماذج العلاج التلطيفي25,26,27, مما يشير إلى احتمال وجود المرض المتبقي الإجمالي بعد استئصال. وفي الآونة الأخيرة، أبلغ جيري وآخرون28 عن استئصال عموم الجنين ونموذج فأرة استئصال الطحال الجزئي. هذه الدراسة ملحوظة من حيث أنها تمثل نموذج الماوس المناعي للسرطان. ومع ذلك ، ذكرت هذه الدراسة تكرار الورم المحلي وغيرها من الأورام داخل الصفاق ، مما يشير إلى الانبثاث الياتروجيني الغامض عند الزرع.
قد يكون استخدام نماذج الماوس حيث يوجد إجمالي الأمراض المتبقية بعد استئصال لاختبار العلاجات المساعد غير مناسب. والمسألة هي أن علاج الأمراض المتبقية الجسيمة لا يمكن تصنيفه حقا كعلاج المساعد بل ينبغي اعتباره علاجا بقصد ملطف. في هذه الحالة، مثل هذه النماذج الماوس لا تقدم أي ميزة بالمقارنة مع النماذج غير استئصالي مع مرض انخفاض حجم.
نصائح ومزالق الخطوات الحاسمة
إجراء زرع الورم
من أجل تكرار السيناريو السريري ، هناك تحديات متميزة في هذا النموذج تتعلق بإجراءات الزرع واستئصال. بالنسبة لإجراء الزرع ، فإن التحديات الرئيسية التي تحتاج إلى التغلب عليها هي الزرع الناجح ومنع التسرب. ترتبط هاتان المسألتان لأن فشل الحقن سيؤدي إلى تسرب إجمالي لتعليق الخلايا السرطانية في تجويف البطن. وهذا من شأنه أن ينتج نموذج الماوس مع الانبثاث البريتوني، والتي سوف تقدم بغض النظر عن استئصال البنكرياس. وهذا يعكس السيناريو السريري المعروف في البشر حيث استئصال البنكرياس في جهاز الكمبيوتر النقيلي لا يؤثر على نتيجة المريض. هذا هو أساس التنظير البطني التدريج في البشر29.
يمكن رؤية نجاح زرع الورم أثناء العملية الجراحية على أنه الجيل الناجح من "فقاعة" تعليق الخلية دون تسرب واضح. من أهم في تحقيق نتيجة جيدة هو وضع دقيق للإبرة داخل فترة رق البنكرياس. ولا يمكن تحقيق ذلك إلا عن طريق "تمدد" البنكرياس بحيث يكون السطح البريتوني مشدودا. يجب أن يحدث ثقب مع شطبة إبرة تواجه صعودا (البطني). بمجرد أن تثقب الإبرة السطح البريتوني ، يجب أن تكون متقدمة أثناء رفع طرف الإبرة قليلا بحيث ينزلق السطح الم مشطوف أسفل الصفاق. وهذا سوف يمنع غير مقصود من خلال ومن خلال ثقب البنكرياس, عثرة مشتركة بسبب أبعاد صغيرة من فص البنكرياس الماوس. مرة واحدة في شطبة كامل داخل جوهر البنكرياس, يتم حقن تعليق الخلية. تكبير الرؤية مع loupes الجراحية هو مرغوب فيه للغاية لتصور بدقة عمق اختراق الإبرة.
ويمكن استخدام عدد من التقنيات لزيادة تقليل خطر التسرب غير المقصود.
اختيار فصوص كبيرة للحقن. تتطلب المصابيح الصغيرة ضغوطا أعلى للنفخ (وفقا لقانون لابلاس) ، مما يزيد من خطر التسرب حول الإبرة في موقع الثقب.
تحسين سرعة الحقن. استخدام جهاز الحقن(الشكل 1ب)الذي يسمح تعليق الخلية ليتم حقنها أكثر من 10-15 ثانية يخدم ثلاثة أغراض. أولا، فإنه يقلل من معدل تغير الضغط في البنكرياس، وإعطاء الأنسجة الوقت للتشوه ويقلل من خطر ارتجاع التعليق. ثانيا، فإنه يسمح لعملية الحقن أن تكون رصدها، وإذا لزم الأمر، توقفت وإعادة وضع إبرة. يمكن مسح أي تسرب بواسطة شاش مبلل باليود. ثالثا، يحرر المشغل من الحاجة إلى كساد المكبس، مما يسمح للمشغل بالتركيز على الحفاظ على طرف الإبرة داخل البنكرياس بينما يحقن المساعد تعليق الخلية.
استخدام شاش مزدوج الطبقات سلسلة محفظة. هذا الشاش يشكل طوق حول ذيل البنكرياس الذي سوف تمتص أي تسرب من تعليق الخلية، وبالتالي تقليل التلوث في تجويف البطن.
وقد استخدمت بعض الدراسات في الأدب خليط مصفوفة خارج الخلية (Matrigel) الذي يقوي مع مرور الوقت بعد الحقن13،15،24. وهذا قد يقلل من خطر التسرب بعد الحقن. ومع ذلك ، فإن العيب المحتمل لهذه الاستراتيجية هو أن Matrigel أو غيرها من حلول المصفوفة خارج الخلية المماثلة قد تمارس تأثيرات غير فسيولوجية على PSCs30. على سبيل المثال، وقد تبين Matrigel لجعل PSCs هادئة وبالتالي يحتمل أن ينفي آثار PSCs في نموذج31،32. بديل لحقن الخلايا السرطانية هو زرع الأنسجة السرطانية (إما مباشرة من المرضى أو من نماذج الماوس تحت الجلد). غير أن لهذه النهج مساوئها الخاصة. أولا، قد ينشأ التغايرية من خطأ أخذ العينات أو من الاختلافات في حجم الأنسجة المزروعة. قد يقلل هذا التغايرية من قوة مقارنات العلاج اللاحقة. ثانيا، قد يؤدي تمرير أنسجة الورم بنموذج فأر تحت الجلد إلى اختيار المستنسخين الفرعيين الذين لديهم سلوكيات بيولوجية مختلفة عن ورم المريض الأصلي.
إجراء استئصال الورم
في هذا النموذج، قمنا باستخدام إجراء استئصال البنكرياس/ استئصال الطحال أقرب إلى تلك التي أجريت في البشر. تعتمد التحديات المتعلقة بالجراحة استئصالية على العوامل المرضية والتشريحية.
العامل المرضي الرئيسي هو نشر الورم. يمكن إعادة استئصال الانتشار المحلي منخفض الحجم في وقت استئصال البنكرياس ، على الرغم من أنه قد يشير إلى إمكانية وجود انبثاث الصفاق وغيرها من الانبثاث. نحن بشكل روتيني استئصال خط خياطة من العملية الأولى كما هو مجال ممكن من تكرار المحلية. إذا كان الورم ملتصقا بالهياكل المحيطة، مثل جدار البطن أو الفص الأيسر للكبد، يمكن استئصال هذه الكتل. تشريحيا، والخطوة الرئيسية هي تشريح ظهر الطائرة إلى جسم البنكرياس. يمكن في كثير من الأحيان تصور الوريد الجنبي خلف البنكرياس بمجرد أن يتم تصوير البنكرياس خارجيا. هذا هو معلم رئيسي، كما الطائرة غير دموية الجنينية هو ظهري على الفور لهذا الغرض.
هناك نوعان آخران من المزالق التشريحية المحتملة في النموذج الموصوف هنا. القولون قد يكون متمسكا الجانب caudal من جسم البنكرياس. الفشل في تعبئة هذا الهيكل بعيدا يمكن أن يؤدي إلى إصابة القولون غير مقصودة في وقت انقسام البنكرياس أو الربط. الأوعية المعدية الجنبية صغيرة وقد تنزف بسهولة إذا تم تعقيمها أو الكي بشكل غير كاف. وعلاوة على ذلك، بمجرد أن تتدهور، غالبا ما تتراجع نقطة النزيف في عمق البطن خلف منحنى أكبر من المعدة، مما يجعل السيطرة اللاحقة على النزيف أكثر صعوبة. لذلك ، مطلوب التراجع الدقيق عن الطحال والكي للأوعية المعدية. نهج واحد لنجاح hemostasis هو الكي هذه السفن على الجانب مرح من الطحال الذي يقلل من خطر الإصابة الحرارية غير مقصودة إلى الأحشاء جوفاء المحيطة بها.
لقد وجدنا أن استخدام مقطع ربط التيتانيوم ، المستخدم على نطاق واسع في الجراحة البشرية ربط الأوعية ، هو طريقة سريعة وفعالة للسيطرة على جذع البنكرياس ، مع ما يترتب على ذلك من انخفاض في إجمالي وقت المنطوق مقارنة باستخدام الأربطة. وقد استخدم هذا أيضا من قبل جيريوآخرون.
قيود هذه التقنية
هناك قيود على هذا النموذج استئصال البنكرياس. أحد القيود يتعلق بالوقت المسموح به لإنتاج التكرار / الانبثاث. من ناحية ، يحتاج المرء إلى تعظيم تطور المرض النقيلي ، ولكن من ناحية أخرى ، يحتاج المرء إلى استئصال الورم قبل أن يصبح متقدما محليا. وبالتالي قد تحتاج الفترة بين الزرع والاستئصال إلى تعديل للسيناريو السريري المعين الذي يرغب المرء في تكراره. وهناك قيد آخر يتعلق بالانسكاب غير المقصود والانبثاث البريتوني اللاحق للخلايا السرطانية الذي نوقش أعلاه.
يتمثل أحد التحديات الرئيسية لنماذج العلاج المساعد في تشريح تأثير العلاج المساعد من تأثير العلاج الجراحي. من الواضح أن هناك حاجة إلى دراسة مصممة تصميما جيدا معشاة ، مع مجموعة مراقبة تخضع لجراحة استئصال. لزيادة تحسين تقييم آثار العلاج النسبي، نقترح تقييم عبء الورم في الجسم الحي (على سبيل المثال، باستخدام الخلايا السرطانية الموسومة باللوسيفيراز وإجراء التصوير الحيوي في الجسم الحي). على الرغم من الطبيعة شبه الكمية لهذا التقييم في نماذج تقويم العظام (حيث يتم تخفيف إشارة الإضاءة الحيوية عن طريق المرور عبر الأنسجة الزائدة) ، فإن هذا النهج يسمح بإجراء تقييم طولي لعبء الورم ، بما في ذلك تقييم المرض المتبقي بعد الجراحة.
التعديلات والتطبيقات المستقبلية
يمكن تعديل خط الخلية المزروعة و / أو أرقام الخلايا مع أو بدون خلايا ستيلاتي البنكرياس لتعكس السيناريو السريري المستهدف12. يمكن أيضا تعديل المدة بين الزرع واستئصال الأسنان لتغيير خطر تكوين الانبثاث. ويمكن أن تشمل الاختلافات الأخرى زرع xenografts المريض أو الفئران المشتقة أو organoids33.
يمكن أيضا اختبار العلاج Neoadjuvant ضمن السمات الأساسية للنموذج الموصوف هنا. فإنه يتطلب ببساطة بدء العلاج من المخدرات قبل استئصال الجراحية34. وبالمثل، يمكن دراسة كل من العلاج المساعد الجديد والموازي في نفس الفئران.
وأخيرا، في حين وصفنا استخدام الفئران العارية Balb/c اللاهية التي تمثل نموذجا للمناعة، فإن نموذجا بديلا للمناعة قد ينطوي على خلايا ورم فيلق حماية كوسوفو المزروعة في فئران C57B628. قد يكون هذا بديلا مفيدا لاختبار العلاجات المناعية المساعد / neoadjuvant.
باختصار، نحن نصف تقنية قوية وقابلة للاستنساخ لنموذج استئصال جراحي لسرطان البنكرياس في الفئران التي تحاكي السيناريو السريري ولا تتطلب معدات متخصصة. قد يكون هذا النموذج مفيدا لاختبار كل من العلاجات المساعد والعلاجات الجديدة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه فيما يتعلق بهذا المشروع.
Acknowledgments
وقد تلقى المؤلفون الدعم من مؤسسة أفنر لسرطان البنكرياس.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure | |||
| AsPC-1 human pancreatic cancer cell line, luciferase tagged (luc+ gene from Promega PGL3 Basic plasmid) | American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA | supplied by Professor Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan | |
| Autoclip wound clips, 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia | 500346 | |
| Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | ||
| Cancer associated human pancreatic stellate cells | Pancreatic Research Group cell bank | In house cell bank | |
| Cryogenic tubes, 1.0 mL | Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia | 366656 | |
| Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
| Foetal bovine serum (FBS) | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 16000044 | |
| Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
| Homozygous athymic nude mice: Strain BALB/c-Fox1nu/Ausb, female | Australian Bioresources, Moss Vale, NSW, Australia | ||
| Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM) with 4mM L-glutamine and no phenol red | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 21056023 | |
| Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Penicillin 10,000 U/mL, streptomycin 10,000 μg/mL | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 15140122 | |
| Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
| Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
| Reflex clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 with phenol red and 300 mg/L Lglutamine | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 11875085 | |
| Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Trypsin 0.05%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25300054 | For pancreatic stellate cells |
| Trypsin 0.25%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25200056 | For ASPC-1 cells |
| U-100 insulin syringes, 0.5 mL with 29 G (0.33 mm) × 13 mm needle | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA | ||
| Equipment for Resection Procedure | |||
| Alm self-retaining retractor | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Autoclip wound clips 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW | 500346 | |
| Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | 08-559NP | |
| Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
| Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Hand-held high temperature fine tip cautery | Bovie Medical Corporation, Melville, NY, USA | AA01 | |
| Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
| IVIS Lumina II Bioluminescent Imaging Device | Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA | ||
| Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
| Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
| Reflex wound clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
| Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Titanium “Weck style” Ligaclip, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
| Titanium Ligaclip applier for open surgery, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
| Volatile anaesthetic machine, including vapouriser and induction chamber | Generic | Generic vapouriser and induction chamber | |
| Drugs for Procedures | |||
| 70% w/w ethanol solution | Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia | Applied topically as surgical skin preparation | |
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 0.05 mg/kg s.c. | |
| D-Luciferin (1 U/g) | PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA | 122799 | diluted in PBS to 15 mg/mL. Dose: 150 mg/kg i.p |
| Enrofloxacin 50 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 5 mg/kg s.c. | |
| Flunixin 50 mg/mL | Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia | Dose: 2.5 mg/kg s.c. | |
| Isoflurane | Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia | Dose (vapourised with oxygen): 4% induction, 3% maintenance | |
| Ketamine 100 mg/mL | Maylab, Slacks Creek, QLD, Australia | Dose: 80 mg/kg i.p. | |
| Povidone-Iodine 10% w/v solution | Perrigo Australia, Balcatta, WA, Australia | RIO00802F | Applied topically to the anterior abdomen as surgical skin preparation |
| Refresh eye ointment (liquid paraffin 42.5% w/w, soft white paraffin 57.3% w/w) | Allergan Australia Pty Ltd, Gordon, NSW, Australia | Applied to both eyes | |
| Sodium chloride 0.9% w/v | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | 9481P | Dose: 900 μL s.c. |
| Water for injections BP | Pfizer Australia, Sydney, NSW, Australia | For dilution of drugs | |
| Xylazine 20 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 10 mg/kg i.p. |
References
- Noone, A. M., et al. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2015, National Cancer Institute. , Available from: https://seer.cancer.gov/csr/1975_2015/ (2018).
- Sugiura, T., et al. Margin status, recurrence pattern, and prognosis after resection of pancreatic cancer. Surgery. 154 (5), 1078-1086 (2013).
- Hishinuma, S., et al. Patterns of recurrence after curative resection of pancreatic cancer, based on autopsy findings. Journal of Gastrointestinal Surgery. 10 (4), 511-518 (2006).
- NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology - Pancreatic Adenocarcinoma (Version 3.2019). National Comprehensive Cancer Network. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/pancreatic.pdf (2019).
- Breslin, T. M., et al. Neoadjuvant chemoradiotherapy for adenocarcinoma of the pancreas: treatment variables and survival duration. Annals of Surgical Oncology. 8 (2), 123-132 (2001).
- Mokdad, A. A., et al. Neoadjuvant Therapy Followed by Resection Versus Upfront Resection for Resectable Pancreatic Cancer: A Propensity Score Matched Analysis. Journal of Clinical Oncology. 35 (5), 515-522 (2017).
- Tachezy, M., et al. Sequential neoadjuvant chemoradiotherapy (CRT) followed by curative surgery vs. primary surgery alone for resectable, non-metastasized pancreatic adenocarcinoma: NEOPA- a randomized multicenter phase III study (NCT01900327, DRKS00003893, ISRCTN82191749). BMC Cancer. 14, 411 (2014).
- Barbour, A. P., et al. The AGITG GAP Study: A Phase II Study of Perioperative Gemcitabine and Nab-Paclitaxel for Resectable Pancreas Cancer. Annals of Surgical Oncology. , (2020).
- Fu, X., Guadagni, F., Hoffman, R. M. A metastatic nude-mouse model of human pancreatic cancer constructed orthotopically with histologically intact patient specimens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 89 (12), 5645-5649 (1992).
- Marincola, F., Taylor-Edwards, C., Drucker, B., Holder, W. D. Orthotopic and heterotopic xenotransplantation of human pancreatic cancer in nude mice. Current Surgery. 44 (4), 294-297 (1987).
- Vonlaufen, A., et al. Pancreatic stellate cells: partners in crime with pancreatic cancer cells. Cancer Research. 68 (7), 2085-2093 (2008).
- Xu, Z., et al. Role of pancreatic stellate cells in pancreatic cancer metastasis. American Journal of Pathology. 177 (5), 2585-2596 (2010).
- Tepel, J., et al. Adjuvant treatment of pancreatic carcinoma in a clinically adapted mouse resection model. Pancreatology. 6 (3), 240-247 (2006).
- Torgenson, M. J., et al. Natural history of pancreatic cancer recurrence following "curative" resection in athymic mice. Journal Surgical Research. 149 (1), 57-61 (2008).
- Metildi, C. A., et al. Fluorescence-guided surgery allows for more complete resection of pancreatic cancer, resulting in longer disease-free survival compared with standard surgery in orthotopic mouse models. Journal of the American College of Surgeons. 215 (1), 126-135 (2012).
- Ni, X., Yang, J., Li, M. Imaging-guided curative surgical resection of pancreatic cancer in a xenograft mouse model. Cancer Letters. 324 (2), 179-185 (2012).
- Hiroshima, Y., et al. Hand-held high-resolution fluorescence imaging system for fluorescence-guided surgery of patient and cell-line pancreatic tumors growing orthotopically in nude mice. Journal of Surgical Research. 187 (2), 510-517 (2014).
- Hiroshima, Y., et al. Metastatic recurrence in a pancreatic cancer patient derived orthotopic xenograft (PDOX) nude mouse model is inhibited by neoadjuvant chemotherapy in combination with fluorescence-guided surgery with an anti-CA 19-9-conjugated fluorophore. PLoS One. 9 (12), 114310 (2014).
- Hiroshima, Y., et al. Fluorescence-guided surgery in combination with UVC irradiation cures metastatic human pancreatic cancer in orthotopic mouse models. PLoS One. 9 (6), 99977 (2014).
- Metildi, C. A., et al. Ratiometric activatable cell-penetrating peptides label pancreatic cancer, enabling fluorescence-guided surgery, which reduces metastases and recurrence in orthotopic mouse models. Annals of Surgical Oncology. 22 (6), 2082-2087 (2015).
- Metildi, C. A., et al. Fluorescence-guided surgery with a fluorophore-conjugated antibody to carcinoembryonic antigen (CEA), that highlights the tumor, improves surgical resection and increases survival in orthotopic mouse models of human pancreatic cancer. Annals of Surgical Oncology. 21 (4), 1405-1411 (2014).
- NCCN Guidelines: Pancreatic Adenocarcinoma. National Comprehensive Cancer Network. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/pancreatic.pdf (2019).
- Maithel, S. K., Allen, P. J. Blumgart's Surgery of the Liver, Biliary Tract and Pancreas, 2-Volume Set (Sixth Edition). Jarnagin, W. R. , Content Repository Only 1007-1023 (2017).
- Egberts, J. H., et al. Dexamethasone reduces tumor recurrence and metastasis after pancreatic tumor resection in SCID mice. Cancer Biology & Therapy. 7 (7), 1044-1050 (2008).
- Xu, Z. H., et al. Targeting the HGF/c-MET pathway in advanced pancreatic cancer: a key element of treatment that limits primary tumor growth and eliminates metastasis. British Journal of Cancer. , (2020).
- Pothula, S. P., et al. Targeting the HGF/c-MET pathway: stromal remodelling in pancreatic cancer. Oncotarget. 8 (44), 76722-76739 (2017).
- Pothula, S. P., et al. Hepatocyte growth factor inhibition: a novel therapeutic approach in pancreatic cancer. British Journal of Cancer. 114 (3), 269-280 (2016).
- Giri, B., et al. An Immunocompetent Model of Pancreatic Cancer Resection and Recurrence. Journal of Gastrointestinal Surgery. , (2020).
- Allen, V. B., Gurusamy, K. S., Takwoingi, Y., Kalia, A., Davidson, B. R. Diagnostic accuracy of laparoscopy following computed tomography (CT) scanning for assessing the resectability with curative intent in pancreatic and periampullary cancer. Cochrane Database of Systematic Reviews. (11), 009323 (2013).
- Vaillant, F., Lindeman, G. J., Visvader, J. E. Jekyll or Hyde: does Matrigel provide a more or less physiological environment in mammary repopulating assays. Breast Cancer Research. 13 (3), 108 (2011).
- Jesnowski, R., et al. Immortalization of pancreatic stellate cells as an in vitro model of pancreatic fibrosis: deactivation is induced by matrigel and N-acetylcysteine. Laboratory Investigation. 85 (10), 1276-1291 (2005).
- Phillips, P. A., et al. Cell migration: a novel aspect of pancreatic stellate cell biology. Gut. 52 (5), 677-682 (2003).
- Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).
- Egberts, J. H., et al. Superiority of extended neoadjuvant chemotherapy with gemcitabine in pancreatic cancer: a comparative analysis in a clinically adapted orthotopic xenotransplantation model in SCID beige mice. Cancer Biology & Therapy. 6 (8), 1227-1232 (2007).
