Summary
בהקשר הקליני, חולים עם סרטן הלבלב מקומי יעברו כריתת לבלב ואחריו טיפול אדג'ובנטי. פרוטוקול זה שדווח כאן נועד לבסס שיטה בטוחה ויעילה של מידול תרחיש קליני זה בעכברים עירומים, באמצעות השתלה אורתוטופית של סרטן הלבלב ואחריו כריתת לבלב דיסטלית וכריתת טבור.
Abstract
קיים מחסור במודלים משביעי רצון של בעלי חיים לחקר טיפול אדג'ובנטי ו/או ניאו-ג'ובנטי בחולים הנחשבים לניתוח של סרטן הלבלב (PC). כדי לטפל במחסור זה, אנו מתארים מודל העכבר מעורבים השתלה אורתוטופית של המחשב ואחריו כריתת לבלב דיסטלי ו splenectomy. המודל הוכח כבטוח וגמיש כראוי לחקר גישות טיפוליות שונות בהגדרות אדג'ובנטיות וניאו-אדג'ובנטיות.
במודל זה, גידול בלבלב נוצר לראשונה על ידי השתלת תערובת של תאים סרטניים בלבלב האנושי (לוציפראז מתויג AsPC-1) וסרטן האדם הקשורים תאים כוכבי הלבלב לתוך הלבלב הדיסטלי של עכברי עירום Balb/c אתימי. לאחר שלושה שבועות, הסרטן הוא resected על ידי לפרוטומיה מחדש, כריתת לבלב דיסטלי ו splenectomy. במודל זה, הדמיה bioluminescence ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר ההתקדמות של התפתחות סרטן והשפעות של כריתה / טיפולים. לאחר כריתה, ניתן לתת טיפול אדג'ובנטי. לחלופין, ניתן לתת טיפול ניאואדג'ובנטי לפני כריתה.
מוצגים נתונים מייצגים מ-45 עכברים. כל העכברים עברו כריתת לבלב דיסטלית מוצלחת / כריתת טבור ללא בעיות של עצירת דימום. שולי לבלב פרוקסימליים מקרוסקופיים הגדולים מ- 5 מ"מ הושגו ב- 43 (96%) עכברים. שיעור ההצלחה הטכנית של כריתת הלבלב היה 100%, עם 0% תמותה מוקדמת ותחלואה. אף אחת מהחיות לא מתה במהלך השבוע שלאחר כריתה.
לסיכום, אנו מתארים טכניקה חזקה הניתנת לשחזור עבור מודל כריתה כירורגית של סרטן הלבלב בעכברים המחקה את התרחיש הקליני. המודל עשוי להיות שימושי עבור בדיקות של טיפולים אדג'ובנטיים ו neoadjuvant.
Introduction
אדנוקרצינומה צינורית הלבלב (סרטן הלבלב [PC]) קשורה פרוגנוזה עניים1. כריתה כירורגית נשאר הטיפול רק פוטנציאל מרפא עבור PC ויש לשקול עבור חולים המציגים עם מחלה בשלב מוקדם. למרבה הצער, אפילו עם כריתת R0 (כלומר, שולי כריתה ללא גידול), שיעור הישנות (מקומי או ממחלה גרורתית שלא זוהתה) הוא גבוה2,3. לכן, טיפול אדג'ובנטי מערכתי מצוין כמעט בכל החולים שעוברים כריתה4. יתר על כן, בעוד טיפול neoadjuvant מומלץ כעת רק עבור סרטן גבולי resectable, האינדיקציות שלה מתרחבים כך השימוש השגרתי שלה הוא המוקד של מחקר קליני רב5,6,7,8. על מנת לפתח גישות טיפוליות חדשניות עבור מחשב מעורב כריתה, גישות אלה צריך להיות מוערך תחילה במודלים פרה קליניים כי במדויק recapitulate הגדרות קליניות.
דגמי עכבר אורתוטופיים של PC שימשו לעתיםקרובותבעבר כדי לבדוק טיפולים תרופתיים 9,10. רבים מהם יוצרו על ידי הזרקת תאים סרטניים לבד לתוך הלבלב העכבר, וכתוצאה מכך גידולים חסרים סטרומה בולטת האופיינית למחשב. לאחרונה, מודלים אורתוטופיים בהזרקה משותפת, כגון זה שפיתחנו לראשונה על ידי הזרקת תערובת של מחשב אנושי ותאי כוכבי לבלב אנושיים (PSCs, היצרנים העיקריים של סטרומה קולגנית במחשב), נכנסו לשימוש קבוע11,12. הגידולים המיוצרים על ידי הזרקה משותפת כזו של סרטן ותאי סטרומה מציגים (i) הן את האלמנטים הסרטניים והן את המרכיב הסטרומלי האופייני (desmoplastic) של המחשב, ו - (ii) התפשטות תאים סרטניים משופרת גרורות11. לכן, מודל זה דומה מאוד למחשב אנושי. בעוד מספר מודלים כריתה של מחשב אורתוטופי תוארו13,14,15,16, אף אחד לא שיקף את המציאות הקלינית של כריתת הלבלב בבני אדם מדויק כמו מודל זה, ולכן היו suboptimal לבדיקת טיפולים אדג'ובנטי או neoadjuvant.
המטרות של מודל העכבר שהוצגו היו להדגים כיצד: (i) בהצלחה להשתיל סרטן הלבלב אורתוטופי תוך מזעור הפצה צפק בשוגג ו (ii) לאחר מכן לחלוטין resect הסרטן. הנייר מדגיש טיפים ומלכודות פוטנציאליות של טכניקה זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה והטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת ניו סאות' ויילס (17/109A). עכברי עירום אתמיים נקבה Balb / c, בגילאי 8-10 שבועות במשקל 16-19 גרם, שימשו עבור פרוטוקול זה. עכברים שוכנו בכלובי מיקרו מבודדים והאכילו מזון כדורי זמין מסחרית וליביטום מודעתמים .
1. השתלת סרטן הלבלב אורתוטופי
- הכינו את התאים להשתלה. ראשית, לחשב את מספר התאים הדרושים עבור ההליך (1 x 106 לוציפראז מתויג AsPC-1 תאים ו 1 x 10 6 תאים כוכביהלבלב האנושי הקשורים לסרטן [CAhPSCs] נדרשים עבור כל בעל חיים).
- לשמור על תאים אלה באינקובטור CO2 מבוקר טמפרטורה לחות ולבצע בדיקות מיקופלסמה שגרתיות. מדיום התרבות המשמש עבור AsPC-1 ו- CAhPSCs הם RPMI 1640 (עם 300 מ"ג / L-גלוטמין, סרום שור עוברי 20% v/v, 1% v/v פניצילין/סטרפטומיצין) ו- IMDM (עם 4 מ"מ L-גלוטמין, סרום שור עוברי 10% v/v, 1% v/v פניצילין/סטרפטומיצין).
- השתמש בטכניקות סטנדרטיות של תרבית תאים כדי לנסות להפוך את התאים להשעיית תאים. לנטרל את טריפסין באמצעות מדיום התרבות המלאה בהתאמה בנפח כפול מזה של פתרון טריפסין בשימוש.
- לשטוף תאים אלה פעמיים עם מלוחים אגירה פוספט (PBS) ו resuspend לתוך תערובת המכילה 1 x 106 AsPC-1 תאים ו 1 x 106 CAhPSCs בהשעיית תא 50 μL.
- שמור את ההשעיה על הקרח עד לשימוש.
- הכינו ארון ביו-רווי מדרגה 2 להליך. השתמש מחצלת חימום מכוסה וילון פלסטיק סטרילי. להגדלה במהלך ההליך, השתמש בזוג זכוכית מגדלת כירורגית 2.5x עד 3.5x.
- הכן ספוגיות ארנק-מחרוזת על ידי חיתוך חור, 1 ס"מ קוטר, לתוך ספוגית גזה. אבטחו את החור הזה עם תפר ארנק-מחרוזת. כל תפר קלוע עדין יכול לשמש לכך (למשל, 5/0 תפר חומצה פוליגליקולית). חומר תפר קלוע מומלץ כפי שהוא מאפשר את הקשר רופף להישאר במקום לאחר הידוק. כך מתואר באיור 1א.
- הרדמה את העכבר עם 80 מ"ג/ק"ג קטמין ו 10 מ"ג/ קילוגרם של xylazine על ידי הזרקה תוך-אישית.
- ניהול 5 מ"ג/ק"ג טיפול מונע אנטיביוטי enrofloxacin, 2.5 מ"ג /ק"ג משככי כאבים flunixin ו 1 מ"ל של 0.9% מלוחים תת עורית.
- לאחר הרדמה, מניחים את העכבר על השדה סטרילי במצב סופי ולהחיל povidone-יוד ואחריו 70% אתנול להכנת העור.
- בצע חתך אורך בעור של הרביע הגולגולתי השמאלי של הבטן, ולאחר מכן להיכנס לבטן על ידי חרפה של שכבת השרירים בין מלקחיים.
- טען מזרק אינסולין 29 G עם 50 μL של השעיית תאים–זה משווה 1 x 106 CAhPSCs ו 1 x 106 לוציפראז מתויג AsPC-1 תאים לכל הזרקה. תארגן את זה על מכשיר ההזרקה. העיצוב והתפקוד של התקן הזרקה זה מוסברים בפירוט באיור 1b ובמקרא שלו.
- מניחים את ספוגית ארנק מחרוזת מעל החתך לפרוטומי ולאחר מכן החיצוניים את הטחול וזנב הלבלב דרך הפתיחה של ספוגית זו. הדקו את מחרוזת הארנק כדי להקיף בעדינות את גוף הלבלב, וחשפו את זנב הלבלב להזרקה. חשוב להיות הדוק מספיק כי גזה יוצר קשר עם הלבלב בהיקף בעת ובעונה אחת לא מכווץ אותו.
- באמצעות זוג מלקחיים, לתפוס את הזנב של הלבלב בעדינות למקם מתח לרוחב על זה. לנקב את פני השטח הצפק הגחוני עם המחט בזווית רדודה ולאחר מכן להזריק את המתלה התא לתוך הלבלב בצורה איטית ומבוקרת (מעל 10-15 s) עם מכשיר ההזרקה.
- במהלך תהליך ההזרקה, יש להקפיד על דליפה – הן סביב אתר ההזרקה (מרפלוקס) והן בצד השני של הלבלב (במקרה של חדירה דרך ודרך). אם מתרחשת דליפה גלויה, לעצור את ההזרקה ולשים לב לנפח הדליפה על ידי בדיקת נפח של הזרקה שנותרה במזרק. אם הדליפה היא של נפח קטן (<10 μL), ולאחר מכן לספוג כל דליפה עם גזה למקם מחדש את המחט לתוך lobule הלבלב שונה כדי להשלים את הזריקה.
- החלף את הטחול והלבלב וסגור את דופן הבטן בתפר חומצה פוליגליקולית 5/0 באופן רציף. סגור את העור עם קליפים.
- לפקח על העכבר בכלוב מחומם עד התאושש מן ההרדמה. ברגע ער וערני, להזיז את העכבר בחזרה לכלוב שלה.
2. ניתוח כריתת סרטן: כריתת לבלב דיסטלית וכריתת טבור
- עיתוי כריתה ביחס להשתלה יכול להשתנות בהתאם לפרוטוקול הניסוי. באופן כללי, לאפשר את הגידולים לגדול לפחות במשך 3 שבועות לפני כריתה, אבל לייעל את זה באופן אמפירי עבור קו תאים סרטניים מושתלים מסוימים.
- ביום שלפני ניתוח כריתה, לבצע הדמיה bioluminescence על בעלי החיים כדי לאשר את נוכחותו של גידול ראשוני מקומי. שים לב כי מחקר הדמיה זה משמש פשוט כדי לא לכלול עכברים עם מחלת חוץ לבלב ברורה כריתה. אין להשתמש בגודל או בשטף קורן כסף לקביעת הזכאות לכריתה.
- שוקלים עכברים ומזריקים D-לוציפרין תוך-פיטריטוני (150 מ"ג/ק"ג).
- לקבוע את התזמון של שלב ההדמיה ביחס להזרקת לוציפרין עבור כל ניסוי על ידי ביצועים של עקומה קינטית לוציפרין. פרק הזמן שבו השטף הקורן הוא מעל 90% מהמקסימום שלו מייצג את הזמן האופטימלי להדמיית ביולומינציה (בניסוי זה, 18 עד 26 דקות לאחר ההזרקה)
- לגרום להרדמה ולשמור באמצעות isoflurane (4% ו 3% עם חמצן, בהתאמה) ולבצע הדמיה באמצעות מכשיר הדמיה bioluminescent (למשל, IVIS Lumina II). השתמש בהגדרות חשיפה ואיתור אוטומטיות (עם זאת, ניתן למטב זאת עבור השטף הקורן הצפוי).
- הכינו את ארון הביו-רוויה מדרגה 2 להליך. השתמש מחצלת חימום מכוסה וילון פלסטיק סטרילי. להגדלה במהלך הניתוח, יש להשתמש בזוג זכוכית מגדלת של 2.5 עד 3.5x.
- הרדמה את העכבר עם 80 מ"ג/ק"ג קטמין ו 10 מ"ג/ קילוגרם של xylazine על ידי הזרקה תוך-אישית.
- ניהול 5 מ"ג/ק"ג טיפול מונע אנטיביוטי enrofloxacin, 2.5 מ"ג /ק"ג משככי כאבים flunixin ו 1 מ"ל של 0.9% מלוחים תת עורית.
- מניחים את העכבר על השדה סטרילי בתנוחה סופית ולהחיל povidone-יוד ואחריו 70% אתנול להכנת העור.
- בצע חתך אורך בעור של הרבע הגולגולתי השמאלי של הבטן, רצוי דרך אתר החתך הקודם.
- לנתח בבוטות את העור את דופן הבטן השרירית הבסיסית, ולאחר מכן למקם רקטור שמירה עצמית Alm להחזיק את פצע העור פתוח.
- להסית את שכבת השרירים בין מלקחיים רק לצד אחד של קו התפר של הפעולה הקודמת, ולאחר מכן להאריך את החתך כדי excise את קו התפירה הקודם כולו.
- החיצוניים את הטחול ואת הלבלב דיסטלי ולחזור בו בגולגולת. בהיבט הקאודאלי של הלבלב, המעי הגס עשוי להימצא מחובר על ידי הידבקויות פילם. אם זה נמצא, לנתח בבוטות את המעי הגס.
- בזהירות להעביר זוג מלקחיים הגב לגוף הלבלב וכלי טחול ולפתוח את החלל הזה. פעולה זו מפנה קטע של הלבלב עבור קשירה לאחר מכן.
- Ligate הגוף של הלבלב proximal לגידול עם קליפ קשירה טיטניום, ולאחר מכן לחתוך את הלבלב distal לזה עם צריבה. דרך חלופית לשלוט על גדם הלבלב היא ligate אותו בהמשכיות עם 5/0 תפר חומצה פוליגליקולית לפני transection.
- לסגת הלבלב caudally לצרוב את כלי gastrosplenic בין מוט הגולגולת של הטחול ואת הבטן.
- הסר את הדגימה ולאשר haemostasis.
- סגור את דופן הבטן עם תפר חומצה פוליגליקולית 5/0 באופן רציף. סגור את העור עם קליפים.
3. ניהול לאחר הניתוח
- בתקופה המיידית שלאחר ההרדמה (עבור שני ההליכים לעיל), לפקח על העכבר בכלוב מחומם עד התאושש מן ההרדמה. ברגע ער וערני, להזיז את העכבר בחזרה לכלוב שלה. בתקופה שלאחר הניתוח, לפקח על בעלי החיים עבור כאב וסימני מצוקה. לנהל 0.05 מ"ג /ק"ג buprenorphine על ידי הזרקה תת עורית מקרוב לצפות בבעלי החיים במשך 12 שעות.
- לאחר מכן, לפקח על עכברים מדי יום עבור משקל, צריכת מזון ופעילות. בדוק אתרי חתך ומ מוחשי לגודל הגידול. הסר קליפי עור ביום שלאחר הניתוח השביעי.
- המתת חסד לעכבר אם מגיעים לנקודות קצה אנושיות. נקודות קצה אנושיות אלה כוללות: אובדן משקל גוף >20%, תכונות של מצוקה בלתי ניתנת לטיפול (כולל יציבה רכון, חוסר תנועה או טיפוח) וגודל הגידול גדול מ 1 ס"מ3 כפי שהוערך על ידי מישוש חיצוני.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
חמישים ותשעה עכברים רצופים עברו ניתוח השתלה. דליפת ברוטו התרחשה בשמונה (14%) עכברים. מידת הדליפה בזמן ההזרקה מוערכת כמתואר לעיל בסעיף הפרוטוקול. לאחר שלושה שבועות כדי לאפשר לגידולים מושתלים אלה לגדול, הדמיה ביולומינציה לפני כריתה בוצעה כדי לא לכלול עכברים עם מחלה גרורתית ברוטו לפני כריתה. ארבעים וחמש (76%) עכברים עברו כריתה כירורגית.
כל ה-45 (100%) עכברים עברו כריתת לבלב דיסטלית מוצלחת / כריתת טבור ללא בעיות של haemostasis. שולי לבלב פרוקסימליים מקרוסקופיים הגדולים מ- 5 מ"מ הושגו ב- 43 (96%) עכברים.
בזמן כריתה, גרורות מקומיות נמצאו ב 9/45 (20%) עכברים – בעיקר בקו התפר (לא רציף עם הגידול העיקרי) עם שלושה מתוך תשעה מראה גושים מבודדים נוספים על עקומת הבטן גדול יותר ואחד מראה גולם subcapsular על הכבד. הגידול העיקרי בלבלב היה דבק בקו התפר בחמישה (11%) עכברים ולכבד באחד (2%) עכבר. מבנים חסידיים אלה נכרתו בגוש.
זמן הניתוח הממוצע (SEM) (אינדוקציה לסגירה) היה 22 (0.9) דקות. אף אחת מהחיות לא מתה תוך שבוע לאחר כריתה.
שבוע לאחר כריתה, עכברים עברו הדמיה ביולומינציה כדי לזהות שאריות מחלה. היחס בין הזוהר המרבי על פני השטח הגחוני של העכבר הושווה לזה של הרקע. שלושים ושתיים (71%) לעכברים היה יחס זוהר מרבי (עכבר:רקע) של <10, המציין מחלה מינימלית או ללא שאריות.
איור 1: מכשירים בהתאמה אישית כדי להקל על השתלת הגידול. (a) ספוגיתגזהארנק-מחרוזת: (i) חור מרכזי, כ 1 ס"מ קוטר, שדרכו זנב הלבלב יוצב בזמן ההזרקה; (ii) תפר ארנק-מחרוזת סביב החור; (iii) גזה דו-שכבתית; (iv) קשר זריקה אחת; (v) איבר אחד של חומר התפר מאובטח גזה עם סרט מחוון חיטוי; (ו) ידית, העשויה מסרט מחוון, מעוצבת בקצה השני של חומר התפר. (ב)התקן הזרקה: (I) מזרק מפעיל. חריצים לחתוך דרך הגוף של מזרק זה מאפשר מזרק הזרקה (עם הזרקת ההשעיה התא; לא מוצג) להיות מותקן על גוף מזרק זה; (II) מזרק בקר. זה מלא במים. דיכאון של הכוען על מזרק בקר קטן יותר על ידי עוזר כירורגי גורם עקירה של בוכנה מפעילה גדולה יותר. התזוזה של הכובע מפעיל הוא קטן יותר, אבל עם יתרון מכני המאפשר את הזריקה כדי להתגבר על ההתנגדות הקשורים מנגנון מזרק הזרקה, כמו גם ההתנגדות של הרקמה להתפשטות על ידי הזרקה. זה מאפשר הזרקה מדויקת וחלקה של 50 μL על פני 10-15 שניות; (III) צינורות חיבור פוליטרה-פלואורותילן (PTFE) בקוטר פנימי של 0.5 מ"מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
דגם עכבר אורתוטופי כריתה של סרטן הלבלב חשוב כי זה מאפשר בדיקה של טיפולים אדג'ובנטיים neoadjuvant. זה חשוב במיוחד בסרטן הלבלב שבו הניתוח נשאר הטיפול היעיל ביותר, אבל קשורה לסיכון גבוה להישנות. מאמר זה מתאר שיטה אשר תייצר באופן אמין סרטן הלבלב אשר פוטנציאל לריפוי עם כריתה, שכפול התרחיש הקליני שבו neoadjuvant / טיפול אדג'ובנטי נדרש.
משמעות ביחס לשיטות קיימות
למרות החשיבות של טיפולים אדג'ובנטיים ניאו-ג'ובנטיים בסרטן הלבלב, יש מעט מודלים של עכברים אורתוטופיים מתוארים היטב בספרות. אלה תיארו מודלים כריתה מגוונים בנאמנותם של שכפול של המצב הקליני בבני אדם. מודלים קודמים אלה ניתן לסווג באופן נרחב לתוך: (i) כריתת גידול בלבד, עם הדרכה פלואורסצנטית; (ii) כריתת לבלב סכום ביניים ללא כריתת טבור; (iii) כריתת לבלב דיסטלית/כריתת טבור.
כריתת גידול עם הדרכה פלואורסצנטית תוארה במספר הגדול ביותר של דוחות15,17,18,19,20,21. רבים ממאמרים אלה מקורם באותה קבוצת מחקר. למרבה הצער, בבני אדם, כריתה מקומית של הגידול לבד (enucleation) אינו מבוצע עבור אדנוקרצינומה הלבלב (PC) בשל הסבירות הגבוהה של הישנות מקומית, כמו גם את חוסר היכולת להעריך מצב בלוטות הלימפה22,23. לכן, השימוש בקבוצת השוואות לא רלוונטית קלינית (לא פלואורסצנטית מונחית) מעיב על הדיווח על התוצאות האונקולוגיות בניירות המתארים טכניקה זו. באופן לא מפתיע, בקבוצות ההישנות שאינן פלואורסצנטיות תמיד היו שיעורים מופרזים של הישנות מקומית15,20,21. לעומת זאת, Torgenson et al.14 תיאר טכניקת כריתה מונחית פלואורסצנטית דומה, ודיווח על שיעור הישנות נמוך למדי של 58% (בשמונה שבועות לאחר כריתה). בסך הכל, מחקרים אלה מופיעים כדי להדגים את התועלת של הדרכה פלואורסצנטית להדמיה של שאריות מחלה במהלך הניתוח. עם זאת, זה עדיין לא הסטנדרט של טיפול בבני אדם, המהווה מגבלה מבחינת השימוש בו במודל עכבר שמטרתו לשכפל את התרחיש הקליני. כמובן, זה עשוי להשתנות אם ניתוח מונחה פלואורסצנטי היה להיות מאומץ באופן נרחב בפרקטיקה קלינית.
מודל כריתה נוסף התבסס על כריתת לבלב סכום ביניים ללא כריתת טבור לגידול שהושתל בגוף הלבלב13,24. הרלוונטיות הקלינית של זה נקרא גם בשאלה כמו הניתוח המתואר לא היה כריתת לבלב ולא כריתת לבלב דיסטלית כפי שבוצע בבני אדם. באופן לא מפתיע, עכברים אלה סבלו גם משיעורים גבוהים של הישנות הגידול, הן מרוחקים והן מקומיים. הערה מיוחדת היא כי הישנות טחול היה נפוץ, מציע גם כריתה לקויה או זריעת גידול הצפק אפשרי בהשתלה24.
Ni et al.16 תיאר מודל כריתת לבלב/כריתת פלורלנטיה דיסטלי המבוצע בהנחיית הדמיית פלואורסצנטיות. למרבה האכזבה, למרות השימוש במבצע רלוונטי מבחינה קלינית (בהנחיית פלואורסצנטיות), ההישרדות הייתה קצרה מאוד (ממוצע הישרדות של 18 ימים), אפילו בקבוצת כריתת הלבלב הדיסטלית. דרגה זו של מחלה מתקדמת נראית אפילו גרועה יותר מאשר מודלים טיפול פליאטיבי25,26,27, מה שמרמז על נוכחות אפשרית של מחלה שיורית ברוטו לאחר כריתה. לאחרונה, Giri et al.28 דיווחו על כריתת לבלב דיסטלית ומודל עכבר כריתת טבור חלקית. מחקר זה בולט בכך שהוא מייצג מודל עכבר immunocompetent של סרטן. עם זאת, מחקר זה דיווח על הישנות גידולים מקומיים ואחרים תוך-פיוריטרונליים כמעט אוניברסליים, מה שאולי מצביע על גרורות יאטרוגניות מגיות בהשתלה.
השימוש במודלים של עכבר שבו יש מחלה שיורית ברוטו לאחר כריתה לבדיקת טיפולים אדג'ובנטיים עשוי להיות בלתי הולם. הבעיה היא כי טיפול במחלה שיורית ברוטו לא באמת יכול להיות מסווג כטיפול אדג'ובנטי אלא צריך להיחשב טיפול עם כוונה פליאטיבית. במקרה זה, מודלים כאלה של עכברים אינם מציעים יתרון בהשוואה למודלים שאינם כריתה עם מחלה בנפח נמוך.
טיפים ומלכודות של צעדים קריטיים
הליך השתלת גידול
על מנת לשכפל את התרחיש הקליני, ישנם אתגרים ברורים במודל זה המתייחסים להליכי ההשתלה והניתוב. עבור הליך ההשתלה, האתגרים העיקריים שיש להתגבר עליהם הם השתלה מוצלחת ומניעת דליפה. שני נושאים אלה קשורים זה בזה כמו כישלון של הזרקה יגרום דליפה ברוטו של השעיית תא הגידול לתוך חלל הבטן. זה ייצור מודל עכבר עם גרורות הצפק, אשר יתקדם ללא קשר כריתת הלבלב. זה משקף את התרחיש הקליני הידוע בבני אדם שבו כריתת הלבלב במחשב גרורתי אינה משפיעה על תוצאות המטופל. זהו הבסיס לפרוסקופיה בימוי בבני אדם29.
ההצלחה של השתלת הגידול ניתן לראות תוך ניתוחי כמו הדור המוצלח של "בועה" של השעיית התא ללא דליפה ברורה. החשיבות הגדולה ביותר בהשגת תוצאה טובה היא המיקום המדויק של המחט בתוך parenchyma הלבלב. זה יכול להיות מושגת רק על ידי "מתיחה" הלבלב כך פני השטח הצפק הוא מתוח. לנקב צריך להתרחש עם המחט משופע פונה כלפי מעלה (ventrally). ברגע שהמחט מנקבת את פני השטח הצפק, יש לקדם אותה בזמן שקצה המחט מורם מעט כלפי מעלה, כך שהמשטח המשופע מחליק ממש מתחת הצפק. זה ימנע ניקוב בשוגג דרך ודרך של הלבלב, מכשול נפוץ בשל הממדים הקטנים של lobules הלבלב העכבר. ברגע שהמסגרת כולה נמצאת בתוך מהות הלבלב, ההשעיה של התא מוזרקת. הגדלה של ראייה עם זכוכית מגדלת כירורגית רצוי מאוד לדמיין במדויק את עומק חדירת המחט.
מספר טכניקות ניתן להשתמש כדי למזער עוד יותר את הסיכון של דליפה בשוגג.
מבחר של lobule גדול להזרקה. לובולות קטנות דורשות לחצים גבוהים יותר כדי לנפח (בעקבות החוק של לפלס), ובכך להגדיל את הסיכון של דליפה סביב המחט באתר לנקב.
אופטימיזציה של מהירות ההזרקה. השימוש בהתקן הזרקה (איור 1b) המאפשר הזרקת המתלה של התא במשך 10-15 שניות משרת שלוש מטרות. ראשית, זה מקטין את קצב שינוי הלחץ בלבלב, נותן לרקמות זמן לעוות ומפחית את הסיכון של reflux של ההשעיה. שנית, זה מאפשר את תהליך ההזרקה להיות במעקב, ואם יש צורך, נעצר מחט מיקום מחדש. כל דליפה יכולה להיות מנוקה על ידי גזה ספוגת יוד povidone. שלישית, זה משחרר את המפעיל מהצורך לדכא את הכועף, ומאפשר למפעיל להתמקד בשמירה על קצה המחט בתוך הלבלב בזמן שהעוזר מזריק את השעיית התא.
שימוש בגאזה דו-שכבתית של ארנק. גזה זו יוצרת צווארון סביב זנב הלבלב אשר יספוג כל דליפה של השעיית התא ולכן למזער את הזיהום בחלל הבטן.
מספר מחקרים בספרות השתמשו בתערובת מטריצה חוץ-תאית (Matrigel) המתגבשת עם הזמן לאחר הזרקה13,15,24. זה עשוי להפחית את הסיכון של דליפה לאחר הזרקה. עם זאת, חיסרון פוטנציאלי של אסטרטגיה זו היא כי Matrigel או פתרונות אחרים מטריצה חוץ תאית דומה עשוי להפעיל השפעות לא פיזיולוגיות על PSCs30. לדוגמה, Matrigel הוכח להפוך PSCs רגיעה ובכך פוטנציאל לשלול את ההשפעות של PSCs במודל31,32. חלופה להזרקת תאים סרטניים היא השתלה אורתוטופית של רקמת הגידול (ישירות מחולים או מדגמי עכבר תת עוריים). עם זאת, לגישות אלה יש חסרונות משלהן. ראשית, הטרוגניות עשויה לנבוע מטעות דגימה או מווריאציות בנפח הרקמה המושתלת. הטרוגניות כזו עשויה להפחית את כוחן של השוואות הטיפול הבאות. שנית, מעבר של רקמת הגידול עם מודל עכבר תת עורי עלול להוביל לבחירת תת שיבוטים אשר יש התנהגויות ביולוגיות שונות לגידול המטופל המקורי.
הליך כריתת גידול
במודל זה, השתמשנו הליך כריתת לבלב דיסטלי / splenectomy דומה לזה שבוצע בבני אדם. האתגרים הקשורים לניתוח כריתה תלויים בגורמים פתולוגיים ואנטומיים.
הגורם הפתולוגי העיקרי הוא הפצת הגידול. התפשטות מקומית בנפח נמוך ניתן resected בזמן כריתת הלבלב, למרות שזה עשוי להצביע על האפשרות של הצפק רחוק יותר גרורות אחרות. אנו באופן שגרתי excise קו התפר מהפעולה הראשונה כפי שהוא אזור אפשרי של הישנות מקומית. אם הגידול מחובר למבנים שמסביב, כגון דופן הבטן או האונה השמאלית של הכבד, אלה יכולים להיות resected en bloc. מבחינה אנטומית, צעד המפתח הוא לנתח את גב המטוס לגוף הלבלב. לעתים קרובות ניתן לדמיין את וריד הטחול מאחורי הלבלב ברגע שהלבלב חיצוני. זהו ציון דרך מרכזי, שכן המישור חסר הדם האבריולוגי הוא מיד גב לזה.
ישנן שתי מלכודות אנטומיות פוטנציאליות נוספות במודל המתואר כאן. המעי הגס עשוי להיות דבק בהיבט הקאודלי של גוף הלבלב. כישלון לגייס מבנה זה משם יכול להוביל לפגיעה המעי הגס בשוגג בזמן חלוקת הלבלב או קשירה. כלי העיכול הם קטנים ועלולים בקלות לדמם אם avulsed או צרבה כראוי. יתר על כן, לאחר avulsed, נקודת הדימום לעתים קרובות נסוג עמוק לתוך הבטן מאחורי עקומה גדולה יותר של הבטן, מה שהופך את השליטה הבאה של דימום מאתגר יותר. לכן, נסיגה זהירה של הטחול והצריבה של כלי העיכול נדרשים. גישה אחת עבור hemostasis מוצלחת היא לצרוב כלי אלה על ההיבט הילאר של הטחול אשר ממזער את הסיכון של פגיעה תרמית בשוגג הקרביים החלולים שמסביב.
מצאנו כי באמצעות קליפ קשירה טיטניום, בשימוש נרחב בניתוח אנושי עבור קשירה של כלי, היא דרך מהירה ויעילה של שליטה על הגדם הלבלב, עם ירידה וכתוצאה מכך ירידה בזמן הניתוח הכולל לעומת השימוש קשירות. זה היה בשימוש גם על ידי גירי ואח'28.
מגבלות הטכניקה
ישנן מגבלות למודל כריתה זה של הלבלב. מגבלה אחת מתייחסת לזמן המותר להפקת מופע חוזר/גרורות. מצד אחד, צריך למקסם את התפתחות המחלה גרורתית, אבל מצד שני, צריך לנתח את הגידול לפני שהוא הפך מתקדם מקומי. לכן, ייתכן שיהיה צורך להתאים את התקופה שבין ההשתלה לכריתה עבור התרחיש הקליני המסוים שברצונכם לשכפל. מגבלה נוספת מתייחסת לשפיכה בשוגג וגרורות הצפק הבאות של תאים סרטניים אשר נדון לעיל.
אתגר מרכזי של מודלים לטיפול אדג'ובנטי הוא ניתוח אפקט הטיפול האדג'ובנטי מאפקט הטיפול הכירורגי. ברור, מחקר מעוצב היטב אשר אקראי, עם קבוצת ביקורת עובר ניתוח כריתה נדרש. כדי לשפר עוד יותר את ההערכה של ההשפעות הטיפוליות היחסיות, אנו מציעים להעריך את נטל הגידול ב vivo (למשל, באמצעות תאים סרטניים מתויגים לוציפראז וביצוע הדמיה bioluminescence vivo). למרות האופי הכמותי למחצה של הערכה זו במודלים אורתוטופיים (שכן אות הביולומינציה מוחלש על ידי מעבר דרך הרקמות המשכללות), גישה זו מאפשרת הערכה אורך של נטל הגידול, כולל הערכה של המחלה השיורית שלאחר הניתוח.
שינויים ויישומים עתידיים
קו התא המושתל ו/או מספרי התאים עם או בלי תאי כוכבי הלבלב ניתן לשנות כדי לשקף את התרחיש הקליני היעד12. משך הזמן בין השתלה לכריתה יכול גם להיות שונה כדי לשנות את הסיכון להיווצרות גרורות. וריאציות אחרות יכולות לכלול השתלה של קסנוגרפטים או אורגנואידים שמקורם בחולה או בעכברים33.
טיפול Neoadjuvant יכול להיבדק גם בתוך התכונות הבסיסיות של המודל המתואר כאן. זה פשוט ידרוש התחלה של טיפול תרופתי לפני כריתהכירורגית 34. באופן דומה, ניתן ללמוד הן טיפול ניאו-ג'ובנטי והן טיפול אדג'ובנטי באותם עכברים.
לבסוף, בעוד שתיארנו את השימוש בעכברי עירום אתמי Balb /c המייצג מודל immunodeficient, מודל immunocompetent חלופי עשוי לערב תאים סרטניים KPC מושתל לתוך עכברי C57B628. זו עשויה להיות חלופה שימושית לבדיקה של טיפולים חיסוניים אדג'ובנט / neoadjuvant.
לסיכום, אנו מתארים טכניקה חזקה הניתנת לשחזור עבור מודל כריתה כירורגית של סרטן הלבלב בעכברים המחקה את התרחיש הקליני ואינו דורש ציוד מיוחד. מודל זה עשוי להיות שימושי עבור בדיקות של טיפולים אדג'ובנטיים ו neoadjuvant.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין מה לחשוף ביחס לפרויקט זה.
Acknowledgments
המחברים קיבלו תמיכה מהקרן לסרטן הלבלב אבנר.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure | |||
| AsPC-1 human pancreatic cancer cell line, luciferase tagged (luc+ gene from Promega PGL3 Basic plasmid) | American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA | supplied by Professor Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan | |
| Autoclip wound clips, 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia | 500346 | |
| Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | ||
| Cancer associated human pancreatic stellate cells | Pancreatic Research Group cell bank | In house cell bank | |
| Cryogenic tubes, 1.0 mL | Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia | 366656 | |
| Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
| Foetal bovine serum (FBS) | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 16000044 | |
| Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
| Homozygous athymic nude mice: Strain BALB/c-Fox1nu/Ausb, female | Australian Bioresources, Moss Vale, NSW, Australia | ||
| Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM) with 4mM L-glutamine and no phenol red | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 21056023 | |
| Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Penicillin 10,000 U/mL, streptomycin 10,000 μg/mL | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 15140122 | |
| Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
| Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
| Reflex clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 with phenol red and 300 mg/L Lglutamine | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 11875085 | |
| Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Trypsin 0.05%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25300054 | For pancreatic stellate cells |
| Trypsin 0.25%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25200056 | For ASPC-1 cells |
| U-100 insulin syringes, 0.5 mL with 29 G (0.33 mm) × 13 mm needle | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA | ||
| Equipment for Resection Procedure | |||
| Alm self-retaining retractor | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Autoclip wound clips 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW | 500346 | |
| Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | 08-559NP | |
| Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
| Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Hand-held high temperature fine tip cautery | Bovie Medical Corporation, Melville, NY, USA | AA01 | |
| Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
| IVIS Lumina II Bioluminescent Imaging Device | Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA | ||
| Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
| Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
| Reflex wound clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
| Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
| Titanium “Weck style” Ligaclip, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
| Titanium Ligaclip applier for open surgery, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
| Volatile anaesthetic machine, including vapouriser and induction chamber | Generic | Generic vapouriser and induction chamber | |
| Drugs for Procedures | |||
| 70% w/w ethanol solution | Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia | Applied topically as surgical skin preparation | |
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 0.05 mg/kg s.c. | |
| D-Luciferin (1 U/g) | PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA | 122799 | diluted in PBS to 15 mg/mL. Dose: 150 mg/kg i.p |
| Enrofloxacin 50 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 5 mg/kg s.c. | |
| Flunixin 50 mg/mL | Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia | Dose: 2.5 mg/kg s.c. | |
| Isoflurane | Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia | Dose (vapourised with oxygen): 4% induction, 3% maintenance | |
| Ketamine 100 mg/mL | Maylab, Slacks Creek, QLD, Australia | Dose: 80 mg/kg i.p. | |
| Povidone-Iodine 10% w/v solution | Perrigo Australia, Balcatta, WA, Australia | RIO00802F | Applied topically to the anterior abdomen as surgical skin preparation |
| Refresh eye ointment (liquid paraffin 42.5% w/w, soft white paraffin 57.3% w/w) | Allergan Australia Pty Ltd, Gordon, NSW, Australia | Applied to both eyes | |
| Sodium chloride 0.9% w/v | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | 9481P | Dose: 900 μL s.c. |
| Water for injections BP | Pfizer Australia, Sydney, NSW, Australia | For dilution of drugs | |
| Xylazine 20 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 10 mg/kg i.p. |
References
- Noone, A. M., et al. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2015, National Cancer Institute. , Available from: https://seer.cancer.gov/csr/1975_2015/ (2018).
- Sugiura, T., et al. Margin status, recurrence pattern, and prognosis after resection of pancreatic cancer. Surgery. 154 (5), 1078-1086 (2013).
- Hishinuma, S., et al. Patterns of recurrence after curative resection of pancreatic cancer, based on autopsy findings. Journal of Gastrointestinal Surgery. 10 (4), 511-518 (2006).
- NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology - Pancreatic Adenocarcinoma (Version 3.2019). National Comprehensive Cancer Network. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/pancreatic.pdf (2019).
- Breslin, T. M., et al. Neoadjuvant chemoradiotherapy for adenocarcinoma of the pancreas: treatment variables and survival duration. Annals of Surgical Oncology. 8 (2), 123-132 (2001).
- Mokdad, A. A., et al. Neoadjuvant Therapy Followed by Resection Versus Upfront Resection for Resectable Pancreatic Cancer: A Propensity Score Matched Analysis. Journal of Clinical Oncology. 35 (5), 515-522 (2017).
- Tachezy, M., et al. Sequential neoadjuvant chemoradiotherapy (CRT) followed by curative surgery vs. primary surgery alone for resectable, non-metastasized pancreatic adenocarcinoma: NEOPA- a randomized multicenter phase III study (NCT01900327, DRKS00003893, ISRCTN82191749). BMC Cancer. 14, 411 (2014).
- Barbour, A. P., et al. The AGITG GAP Study: A Phase II Study of Perioperative Gemcitabine and Nab-Paclitaxel for Resectable Pancreas Cancer. Annals of Surgical Oncology. , (2020).
- Fu, X., Guadagni, F., Hoffman, R. M. A metastatic nude-mouse model of human pancreatic cancer constructed orthotopically with histologically intact patient specimens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 89 (12), 5645-5649 (1992).
- Marincola, F., Taylor-Edwards, C., Drucker, B., Holder, W. D. Orthotopic and heterotopic xenotransplantation of human pancreatic cancer in nude mice. Current Surgery. 44 (4), 294-297 (1987).
- Vonlaufen, A., et al. Pancreatic stellate cells: partners in crime with pancreatic cancer cells. Cancer Research. 68 (7), 2085-2093 (2008).
- Xu, Z., et al. Role of pancreatic stellate cells in pancreatic cancer metastasis. American Journal of Pathology. 177 (5), 2585-2596 (2010).
- Tepel, J., et al. Adjuvant treatment of pancreatic carcinoma in a clinically adapted mouse resection model. Pancreatology. 6 (3), 240-247 (2006).
- Torgenson, M. J., et al. Natural history of pancreatic cancer recurrence following "curative" resection in athymic mice. Journal Surgical Research. 149 (1), 57-61 (2008).
- Metildi, C. A., et al. Fluorescence-guided surgery allows for more complete resection of pancreatic cancer, resulting in longer disease-free survival compared with standard surgery in orthotopic mouse models. Journal of the American College of Surgeons. 215 (1), 126-135 (2012).
- Ni, X., Yang, J., Li, M. Imaging-guided curative surgical resection of pancreatic cancer in a xenograft mouse model. Cancer Letters. 324 (2), 179-185 (2012).
- Hiroshima, Y., et al. Hand-held high-resolution fluorescence imaging system for fluorescence-guided surgery of patient and cell-line pancreatic tumors growing orthotopically in nude mice. Journal of Surgical Research. 187 (2), 510-517 (2014).
- Hiroshima, Y., et al. Metastatic recurrence in a pancreatic cancer patient derived orthotopic xenograft (PDOX) nude mouse model is inhibited by neoadjuvant chemotherapy in combination with fluorescence-guided surgery with an anti-CA 19-9-conjugated fluorophore. PLoS One. 9 (12), 114310 (2014).
- Hiroshima, Y., et al. Fluorescence-guided surgery in combination with UVC irradiation cures metastatic human pancreatic cancer in orthotopic mouse models. PLoS One. 9 (6), 99977 (2014).
- Metildi, C. A., et al. Ratiometric activatable cell-penetrating peptides label pancreatic cancer, enabling fluorescence-guided surgery, which reduces metastases and recurrence in orthotopic mouse models. Annals of Surgical Oncology. 22 (6), 2082-2087 (2015).
- Metildi, C. A., et al. Fluorescence-guided surgery with a fluorophore-conjugated antibody to carcinoembryonic antigen (CEA), that highlights the tumor, improves surgical resection and increases survival in orthotopic mouse models of human pancreatic cancer. Annals of Surgical Oncology. 21 (4), 1405-1411 (2014).
- NCCN Guidelines: Pancreatic Adenocarcinoma. National Comprehensive Cancer Network. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/pancreatic.pdf (2019).
- Maithel, S. K., Allen, P. J. Blumgart's Surgery of the Liver, Biliary Tract and Pancreas, 2-Volume Set (Sixth Edition). Jarnagin, W. R. , Content Repository Only 1007-1023 (2017).
- Egberts, J. H., et al. Dexamethasone reduces tumor recurrence and metastasis after pancreatic tumor resection in SCID mice. Cancer Biology & Therapy. 7 (7), 1044-1050 (2008).
- Xu, Z. H., et al. Targeting the HGF/c-MET pathway in advanced pancreatic cancer: a key element of treatment that limits primary tumor growth and eliminates metastasis. British Journal of Cancer. , (2020).
- Pothula, S. P., et al. Targeting the HGF/c-MET pathway: stromal remodelling in pancreatic cancer. Oncotarget. 8 (44), 76722-76739 (2017).
- Pothula, S. P., et al. Hepatocyte growth factor inhibition: a novel therapeutic approach in pancreatic cancer. British Journal of Cancer. 114 (3), 269-280 (2016).
- Giri, B., et al. An Immunocompetent Model of Pancreatic Cancer Resection and Recurrence. Journal of Gastrointestinal Surgery. , (2020).
- Allen, V. B., Gurusamy, K. S., Takwoingi, Y., Kalia, A., Davidson, B. R. Diagnostic accuracy of laparoscopy following computed tomography (CT) scanning for assessing the resectability with curative intent in pancreatic and periampullary cancer. Cochrane Database of Systematic Reviews. (11), 009323 (2013).
- Vaillant, F., Lindeman, G. J., Visvader, J. E. Jekyll or Hyde: does Matrigel provide a more or less physiological environment in mammary repopulating assays. Breast Cancer Research. 13 (3), 108 (2011).
- Jesnowski, R., et al. Immortalization of pancreatic stellate cells as an in vitro model of pancreatic fibrosis: deactivation is induced by matrigel and N-acetylcysteine. Laboratory Investigation. 85 (10), 1276-1291 (2005).
- Phillips, P. A., et al. Cell migration: a novel aspect of pancreatic stellate cell biology. Gut. 52 (5), 677-682 (2003).
- Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).
- Egberts, J. H., et al. Superiority of extended neoadjuvant chemotherapy with gemcitabine in pancreatic cancer: a comparative analysis in a clinically adapted orthotopic xenotransplantation model in SCID beige mice. Cancer Biology & Therapy. 6 (8), 1227-1232 (2007).
