Summary
Denne protokol beskriver proceduren for fjernelse af leverens ventral lap hos voksne zebrafisk for at gøre det muligt at studere leverregenerering.
Abstract
Leversvigt er en af de førende dødsårsager på verdensplan, og dødeligheden fra kronisk leversygdom stiger kraftigt i USA. Sunde lever er i stand til at regenerere fra giftige skader, men i fremskreden leversygdom er leverens naturlige evne til at regenerere nedsat. Zebrafisk er opstået som et stærkt eksperimentelt system til at studere regenerering. De er en ideel model til at studere leverregenerering fra delvis hepatektomi, en procedure med direkte klinisk relevans, hvor en del af leveren fjernes kirurgisk, hvilket efterlader resten intakt. Der er ingen standardprotokol for delvis hepatektomi. tidligere undersøgelser ved hjælp af denne model har brugt lidt forskellige protokoller og rapporteret forskellige resultater. Beskrevet her er en effektiv, reproducerbar protokol til udførelse af en delvis hepatektomi hos voksne zebrafisk. Vi bruger denne teknik til at demonstrere, at zebrafisk er i stand til epimorf regenerering af den resected lap. Denne protokol kan bruges til yderligere at afhøre de mekanismer, der kræves for leverregenerering i zebrafisk.
Introduction
Blandt de faste organer hos mennesker er leveren det eneste organ, der er i stand til regenerering1. Dette er kritisk, da leveren er et vigtigt organ, der er ansvarlig for vigtige metaboliske funktioner, energilagring, blod afgiftning, sekretion af plasmaproteiner og galdeproduktion2. Hepatocytter tabt på grund af giftige eller inflammatoriske skader erstattes primært via opdeling af de resterende hepatocytter1. En klassisk eksperimentel model til undersøgelse af leverregenerering er delvis hepatektomi, hvor individuelle lobes af leveren fjernes, hvilket efterlader de resterende lobesintakte 3. Denne procedure blev oprindeligt udviklet hos rotter, hvor ca. to tredjedele af levermassen fjernes. Efter delvis hepatektomi hos pattedyr forekommer kompenserende regenerering i de resterende lobes, indtil leveren genvinder sin oprindelige masse. Især erstatter pattedyrsleveren ikke de manglende lobes.
Zebrafisk (Danio rerio) repræsenterer en tractable model for at studere voksen organ regenerering4. Zebrafiskleveren, mens den er strukturelt forskellig fra pattedyrsleveren, består af de samme celletyper og tjener den samme funktion som hos pattedyr2. Det er sammensat af tre lapper, med to dorsale lobes og en enkelt ventral lap, der er fladt langs tarmen. Delvis hepatektomi er tidligere blevet udført i zebrafisk, med modstridende beretninger om den præcise form for regenerering. Typisk udføres en tredjedel delvis hepatektomi ved fjernelse af hele ventral lap. Indledende rapporter viste, at efter fjernelse af ventral lapen var den fuldt regenereret inden for en uge5,6,7, hvilket tyder på, at zebrafiskleveren i modsætning til pattedyrsleveren er i stand til epimorf regenerering. Efterfølgende undersøgelser viste , at fjernelse af ventral lap resulterede i kompenserende regenerering i dorsale lobes, snarere end regenerering af den manglende ventral lap, og i sidste ende inddrivelse af levermasse inden for en uge8,9. Transskriptionsprofilering af dorsale lobes efter resektion af ventral lap afslørede betydelige ændringer forbundet med kompenserende regenerering10. I betragtning af at tilstanden af leverregenerering kan variere med omfanget af skaden8, spekulerede vi på, at forskellene i resultaterne kan skyldes teknisk variation i den delvise hepatektomiprotokol mellem forskningsgrupper.
Denne protokol beskriver en procedure for udførelse af en tredjedel delvis hepatektomi på voksne zebrafisk ved at fjerne ventral lap. Denne teknik vil være værdifuld til vurdering af mekanismer til leverregenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Zebrafisk blev opdrættet og opdrættet efter standardprocedurer. Eksperimenter blev godkendt af Brigham and Women's Hospital's Institutional Animal Care and Use Committee (2016N000405). Voksne zebrafisk blev fastet i 24 timer før starten af protokollen. Systemvand refererer til vandet i zebrafiskhustanke i vandfaciliteten.
1. Forberedelse og anæstesiisering
- Forbered 0,016% Tricaine løsning i systemvand.
ADVARSEL: Tricain er irriterende, hvis det kommer i kontakt med øjne, hud eller luftveje. - Forbered en svamp til at holde bedøvet zebrafisk under dissektionsprotokollen. Skær en fuld svamp i kvarte. Ved hjælp af et barberblad skal du fjerne en tynd kile svamp, der løber parallelt med svampekvartets lange akse.
- Slidsen skal være lang nok til at rumme en voksen fisk (dette vil variere mellem forskellige størrelser fisk). For eksempel skal længden af slidsen for en voksen fisk 35 mm være 20 mm. Hovedet og kroppen holdes tæt i svampen, men halen løber forbi svampens kant (Figur 1B).
- Svampen suges i 0,016% Tricaine opløsning.
- Placer voksne zebrafisk (enten han- eller hundyr) i 625 ml af 0,016% Tricaine opløsning.
- Inkuber i 6 minutter, eller indtil fisken ikke reagerer på berøring.
- Ved hjælp af pincet skal du forsigtigt fjerne fisken fra Tricaine-tanken og placere fiskens ventrale side op i svampens rille (Figur 1A - B).
- Placer svampen under et dissekerende mikroskop med top-down belysning.
2. Kirurgi
- Brug fine pincet, klemme huden og skalaer mediale, bare posterior til hjertet(Figur 1B).
- Brug fjederbelastet saks, lav et snit under tangen for at skabe et hul i kropshulen(Figur 1C - D). Pas på ikke at skade hjertet eller et større blodkar, da dette vil resultere i øget dødelighed.
- Brug fjederbelastet saks, lav et 3-4 mm snit langs maven, der behandler posteriorly, indtil snittet ankommer til bækkenfinnerne(Figur 1D - E). På dette tidspunkt kan leverens ventral lap være synlig gennem snittet.
- Klem siderne af svampen med den ene hånd for at tvinge de viscerale organer ud af kroppens hulrum. Leverens ventral lap vil være synlig oven på tarmen (Figur 1F, 2A-B). Leveren vises som en lyserød eller orange struktur spredt ud over den gyldenbrune tarm. Dyr, der er udpeget som falske kontroller, genvindes på dette tidspunkt.
- Klem de fine pincet, så de to tænder rører. Mens du holder trykket på svampen, skub tænderne af de fine pincet i mellem leveren og tarmen (Figur 1G). Pas på ikke at punktere tarmen, da dette vil resultere i øget dødelighed.
- Slap langsomt af påtrykket på tangen, så tænderne bevæger sig væk fra hinanden (Figur 1H). Denne glidende handling afskærer de mange portal vene vedhæftede filer mellem ventral lap og tarmen (Figur 2B), og er nødvendig for rent at fjerne ventral lap. Gentag denne proces, indtil alle portalforbindelserne mellem leveren og tarmen er blevet afbrudt.
- Skræl ventral lapen tilbage fra tarmen med fine pincet og skær ventral lap fri fra resten af leveren (Figur 1I).
- Denne procedure resulterer i en tredjedel delvis hepatektomi (figur 1J).
3. Inddrivelse
- Fjern forsigtigt fisken fra svampen og læg den i en tank systemvand.
- Pipettesystem vand over gællerne i et par minutter, indtil fisken svømmer alene(Figur 1K).
- Overvåg fisk i 2-4 timer, før de placeres tilbage på systemet. Foder ikke fisken i hele 24 timer efter operationen.
- Overvåg fisk dagligt i eksperimentets varighed.
- Med tiden vil snittet i kropsvæggen hele naturligt uden behov for suturer(Figur 1L,2C).
4. Ventral lap til tarmen længde analyse
- Aflive alle dyr bestemt til analyse i isvand i 10 minutter, indtil alle operkulære bevægelser ophører.
- Fjern fisken fra isvandet og læg den ventral side op i rillen af en svamp.
- Brug fjederbelastet saks, lav et snit i ventral kropsvæggen på hjertets forreste bageste position. Lav derefter yderligere to snit, der løber langs den forreste bageste akse fra det første snit helt til bækkenfinnerne. (Figur 2A).
- Skræl huden og musklen tilbage for at afsløre de viscerale organer (Figur 2A).
- Anskaf lysfelts- og fluorescerende billeder af de viscerale organer ved hjælp af et epifluorescensmikroskop. Dette synsfelt vil omfatte det område, hvor ventral lap blev genvalgt. Da dyr aflives inden analyse, udelukker denne form for analyse langtidsbilleder af de samme fisk.
5. Analyse af forholdet mellem lever og kropsvægt
- Aflive alle dyr bestemt til analyse i isvand i 10 minutter, indtil alle operkulære bevægelser ophører.
- Placer fisk i et 50 mL konisk rør.
- Der tilsættes 25 mL paraformaldehyd på 4% i 1x PBS og 0,3% tween til røret.
ADVARSEL: Formaldehyd er giftigt, og opløsninger, der indeholder formaldehyd, bør altid behandles i en kemisk emhætte. - Nutate i 48 timer ved 4 °C.
- Udfør fire 10 min vasker i 1x PBS og 0,3% Tween.
- Hent fisk med pincet, og skamplet tør på et køkkenrulle.
- Registrer vægten af hele fisken.
- Brug fjederbelastet saks, lav et snit i ventral kropsvæggen på hjertets forreste bageste position. Derefter laves yderligere to snit, der løber langs den forreste bageste akse fra det første snit hele vejen til bækkenfinnerne. (Figur 2A).
- Skræl huden og musklen tilbage for at afsløre de viscerale organer (Figur 2A).
- Erhverve lyse-felt billeder af leveren ved hjælp af en epifluorescens mikroskop.
- Dissekere ud leveren, placere stykker af leveren på en vejebåd.
- Registrer leverens vægt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For at undersøge det regenerative potentiale i den voksne zebrafisklever udførte vi delvis hepatektomi (PHX) hos voksne zebrafisk. Generelt blev store voksne (30-40 mm i længden) udvalgt, lige fra 1,5-2,5 år gamle. Inden for individuelle forsøg blev dyrene udvalgt fra samme tank og var alders- og størrelsesmatchede. Som en passende kontrol brugte vi falske operationer, hvor dyret både blev bedøvet og modtog et stort snit i ventral kropsvæggen, men blev genvundet uden at fjerne noget væv. Overlevelsesraten for falske kontroller varierede fra 90%-100% for både mandlige og kvindelige zebrafisk. Overlevelsesraten for PHX-dyr varierede fra 60%-75% for mandlige zebrafisk og 60%-90% for kvindelige zebrafisk, med alle dødsfald, der forekommer i de første 24 timer efter operationen.
Guldstandarden for kvantificering af genopretningen af leveren efter PHX er forholdet mellem lever og kropsvægt eller LBR. Denne analyse er blevet anvendt til både måling af levermassegenvinding i både pattedyr11 og zebrafisk modeller8. For pålideligt at kvantificere leverens vægt foretog vi vægtmålinger på faste dyr, som tidligere beskrevet8. Vi udførte LBR målinger på vilde type, uskadt zebrafisk, og fandt, at som tidligere rapporteret8, kvindelige zebrafisk havde næsten dobbelt så LBR i forhold til mandlige zebrafisk (3,3% for kvindelige zebrafisk og 1,8% for mandlige zebrafisk)(Figur 3A). Vi udførte både sham og PHX på voksne zebrafisk af begge køn og analyserede LBR ved 0 og 7 dage efter skade (dpi)(Figur 3B). Ved 0 dpi havde sham dyr en tydeligt synlig ventral lap, mens ventral lap i PHX-dyr var helt fraværende (Figur 3C). Dette resulterede især i en betydelig reduktion af LBR (30 % reduktion i antallet af hanfisk, 20 % reduktion af hunfisk)(figur 3D). I kohorten af fisk analyseret ved 7 dpi fandt vi, at ventral lap ikke var regenereret (Figur 3E), og alligevel var LBR af PHX og sham kontrol sammenlignelige (Figur 3F). Disse målinger viser, at leveren med 7 dpi har genvundet masse i forhold til falske kontroller, formentlig ved kompenserende regenerering i dorsale lobes, efter aftale med tidligere rapporter8,9.
Vi besluttede at undersøge, om leverens ventrallap var i stand til at regenerere, da tiden var nok. Voksne Tg(fabp10a:CFP-NTR) fisk blev udvalgt til forsøg, da disse fisk udtrykker den fælles fiskeripolitik i hepatocytter, hvilket giver mulighed for visualisering af leveren ved hjælp af fluorescensmikroskopi. En kohorte af dyr blev udsat for den fulde en tredjedel delvis hepatektomi protokol. Dyr blev analyseret ved 1 eller 36 dpi (Figur 4A). For hvert dyr blev forholdet mellem ventral laplængde og tarmen målt (Figur 4B).
Dyr udsat for falske operationer havde en fremtrædende ventral lap, der besatte 50%-100% af tarmens længde, mens dyr udsat for en tredjedel delvis hepatektomi havde en stærkt reduceret ventral lap. Påfaldende nok havde mange delvise hepatektomidyr ved 36 dpi et øget ventral lap til tarmforhold sammenlignet med delvise hepatektomidyr ved 1 dpi (Figur 4C). Der var ingen stigning i størrelsen af ventral lap i fingeret kontrol; der blev dog observeret en statistisk signifikant stigning i ventral lapens størrelse efter genopretning efter delvis hepatektomi (figur 4D). Vi bemærkede, at der var en stor variation i reaktionen på operationen, hvor nogle dyr ikke viste nogen regenerering, og andre klart regenererede en veldefineret ventralflippe (Figur 4E). Disse resultater viser, at ventral lap er i stand til at regenerere fra kirurgisk lever resektion hos voksne zebrafisk. Samlet set indikerer vores arbejde, at zebrafiskeleveren er i stand til både epimorfe og kompenserende regenerering.
Figur 1: Den delvise hepatektomiprotokol. (B) Efter bedøvelse er et dyr indlejret i en svamp (vist med blåt), så det er ventralt side op. Fine pincet bruges til at klemme huden bare posterior til hjertet. Svampen er ikke vist i de efterfølgende paneler for klarhed. (C) Saks bruges til at bryde huden lige posterior til hjertet. (D-E) Saksen bruges ved det nu åbne sår til at lave et 3-4 mm snit, der løber fra forreste til bageste, der slutter lige før bækkenfinnerne. (F) Klemme siderne af svampen får visceral organer til at poppe ud af de større sår. (G) Fine pincet med begge tænder rørende er gledet mellem ventral lap af leveren og tarmen. (H) Tangen er afslappet, hvilket får dem til at bryde portalen vene vedhæftede filer mellem leveren og tarmen. Denne proces gentages langs længden af ventral lap. (I-J) Den ventral lap er trukket op fra sin bageste ende, mens saksen bruges til at afskære ventral lap fra resten af leveren. (K) Dyret anbringes i et genvindingskammer med systemvand, hvor det genvinder bevidstheden og rettighederne selv. (L) Med tiden trækkes indvoldene tilbage i kropshulen, og såret heler. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Zebrafisks anatomi og genopretning efter delvis hepatektomi. For det første udføres et snit på den forreste-bageste position af hjertet (rød linje). Derefter genereres to snit, der løber langs den forreste bageste akse til bækkenfinnerne (blå linje). Derefter skrælles huden og musklerne tilbage og afslører de viscerale organer. Mærket er tarmen, ventral lap af leveren, og den centrale vene i denne lap. (B) Levende billede af en ventral opfattelse af en zebrafisk, der er forberedt til analyse af de viscerale organer. Leverens ventral lap er skitseret med en prikket hvid linje. Gul boks i 2x-billedet angiver placeringen af 8x-billedet. Hvide pilespidser indikerer portal veneforbindelser mellem tarmen og leveren. (C) Ventralt syn på såret, der frembringes ved proceduren for delvis hepatektomi på de angivne tidspunkter. Over tid heler snittet fuldstændigt. Skalastænger, 500 μm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Kompenserende regenerering efter delvis hepatektomi. Kvindelige zebrafisk har næsten dobbelt så meget LBR sammenlignet med han zebrafisk. Hundyr blev sammenlignet med handyr ved hjælp af en Wilcoxon rang sum test, ****p < 0,0001. (B) Skematisk angivelse af, at der er anvendt zebrafisk af vild type til dette forsøg. Dyr blev udsat for fingeret eller delvis hepatektomi (PHX), og derefter enten fastsat til 0 eller 7 dage efter skade (dpi). Faste dyr blev afbildet og udsat for LBR-målinger. (C,E) Vist er repræsentative billeder af dyr, der udsættes for fingeret eller PHX ved 0 dpi (C) og 7 dpi (E). Bemærk det fuldstændige fravær af ventralflipperne i PHX-dyr. For alle billeder, vist er en ventral opfattelse af visceral organer. Billeder er billeder i et klart felt. Leverens ventral lap er skitseret i hvidt. Skalastænger, 500 μm. (D,F) Søjlediagrammer over forholdet mellem lever og kropsvægt for både mandlige og kvindelige zebrafisk efter sham- og PHX-operationer ved 0 dpi (D) og 7 dpi (F). Højden af baren er den gennemsnitlige værdi, og fejlen barer repræsenterer SEM. Mens der er en reduktion i LBR efter delvis hepatektomi ved 0 dpi, er der ingen signifikant forskel mellem PHX og fingeret dyr på 7 dpi, hvilket indikerer restaurering af LBR. Delvis hepatektomi prøver blev sammenlignet med fingeret kontrol ved hjælp af en Wilcoxon rang sum test, ns = ikke signifikant, * p < 0,05, ** p < 0,01. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Zebrafisk kan regenerere deres ventralapper efter delvis hepatektomi. Kirurgi og analyse ved billeddannelse blev udført på de angivne tidspunkter. (B) Et eksempel på et billede, der viser, hvordan dyr blev analyseret. Dyr blev kvantificeret ved at måle længden af ventral lap (i rødt), tarmens længde (i gult) og beregne den procentdel af tarmen, som ventralflappen indtager (i hvid). (C) Vist er et repræsentativt billede af dyr, der udsættes for fingeret eller delvis hepatektomi (PHX) 1 og 36 dage efter skaden (dpi). D) Violinplotter med forholdet mellem ventral lapens længde og tarmlængde for dyr, der udsættes for fingeret eller delvis hepatektomi ved 1 og 36 dpi. Hver prik repræsenterer værdien fra en enkelt fisk. Værdier for hanfisk er i blå, kvindelige fisk i rødt. Delvis hepatektomi prøver blev sammenlignet med fingeret kontrol ved hjælp af en Wilcoxon rang sum test, ns = ikke signifikant, * p < 0,05. (E) Vist er to eksempler på delvis hepatektomi dyr på 36 dpi, der ikke regenerere, og to eksempler, der gjorde regenerere. For alle billeder, vist er en ventral opfattelse af visceral organer. Billeder er en sammensmeltning af et fluorescensbillede af den fælles fiskeripolitik og et lysfeltsbillede. Den fælles fiskeripolitiks fluorescens er kun til stede i leveren. Leverens ventral lap er skitseret med rødt. Procentdelen af tarmen, som ventral lap indtager, er i hvid. Skalastænger, 500 μm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De anatomiske forskelle mellem zebrafisk og pattedyr modeller for lever regenerering udgør unikke udfordringer for lever resektion. Leveren i zebrafisk er tæt på hjertet og tarmen; utilsigtet skadelige begge organer resulterer i øget dødelighed. Zebrafiskleveren er ikke indkapslet, hvilket gør det vanskeligere at adskille fra tarmen. Leveren modtager næringsrige blod fra tarmen gennem portal vener. Hos pattedyr konvergerer vener, der forlader tarmen, på en primær portalåre, der derefter opdeles, når den kommer ind i leveren12. I modsætning hertil modtager zebrafiskleveren portalcirkulation fra en række små fartøjer, der bevæger sig direkte fra tarmen ind i leveren (Figur 2B). Således er hver lap af leveren, fladt ud over tarmen, sikkert fastgjort til tarmen af disse fartøjer. Forsøg på at fjerne ventral lap uden først at afskære portalen vener kan ofte resultere i ufuldstændig resektion (data ikke vist). Nogle af de indledende protokoller beskriver at trække ventral lapen ud gennem et relativt mindre snit, hvilket ikke giver mulighed for at afskære disse portaltilbehør5,6.
Den protokol, der er beskrevet her, er designet til at løse disse udfordringer for at muliggøre konsekvent fjernelse af ventral lap. Bedøvet zebrafisk er placeret tæt i svampens rille for at holde deres gæller våde og deres kroppe immobile under proceduren. Klemme huden lige posterior til hjertet gør det muligt at placere et snit i huden uden at beskadige nogen af de indre organer. Åbning af et stort (3-4 mm) snit gør fjernelse af leveren og vurdering af graden af fjernelse ligetil (Figur 2C). Det er vigtigt, at zebrafisk kan komme sig efter og i sidste ende helbrede et sår af denne størrelse uden nogen primær sårlukning. Ved at klemme svampen og komprimere kropsvæggen bliver de viscerale organer mere tilgængelige, og det er muligt at skubbe tænderne på en pincet ind mellem leveren og tarmen. Tangen kan derefter bruges til at bryde portalforbindelserne mellem leveren og tarmen. Når dette er opnået, kan fine pincet bruges til at skrælle tilbage ventral lap, så det kan adskilles fra resten af leveren.
Vi målte forholdet mellem lever og kropsvægt (LBR) hos dyr, der blev udsat for falske og PHX-operationer. Vi konstaterede, at phx-dyrenes LBR med 7 dpi kunne sammenlignes med kontroller (figur 3F). I betragtning af at ventral lap ikke var regenereret på dette tidspunkt (Figur 3E), udledte vi, at regenereringen skete gennem kompensation i dorsale lobes. For at løse spørgsmålet om, hvorvidt ventral lap i sidste ende kan regenerere i zebrafisk, udførte vi PHX og undersøgte lever genvækst. I gennemsnit var forholdet mellem ventral lapens længde og tarmen højere ved 36 dpi end ved 1 dpi, hvilket indikerer regenerering af ventralflippen (Figur 4C-D). Der er stor variation i dyrenes reaktion på skaderne, idet nogle dyr oplever meget lidt vækst, og andre oplever en betydelig genopretning af ventralflappen (figur 4E). Vi konkluderer, at leveren kan regenerere med en blanding af epimorfe regenerering af ventral lap og kompenserende regenerering i dorsale lobes, omend på forskellige tidspunkter. Som tidligere undersøgelser har brugt delvis hepatectomies at analysere til rolle enkelte gener5,7,9 og signalering veje 6,8,10 efter resektion, forventer vi, at denne protokol vil fremme vores forståelse af de molekylære og cellulære mekanismer lever regenerering i en voksen hvirveldyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
I.M.O. understøttes af NIAAA (F32AA027135). W.G. understøttes af R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 og Claudia Adams Barr Program for Excellence in Cancer Research. W.G. er en Pew Scholar i biomedicinsk videnskab.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
References
- Michalopoulos, G. K. Principles of liver regeneration and growth homeostasis. Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).
- Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research. Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).
- Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).
- Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy. The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).
- Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy. PLoS One. 9, (2014).
- Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish. BMC Genomics. 16, 979 (2015).
- Michalopoulos, G. K.
- Grisham, J. W.
