췌장의 생체 내 고해상도 이미징은 췌장 내 생체 내 이미징 창으로 촉진되었다.
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췌장의 생체 내 고해상도 이미징은 췌장 내 생체 내 이미징 창으로 촉진되었다.
살아있는 작은 동물 모형에 있는 췌장의 생체 내 세포 분해능 화상 진찰은 기술적으로 도전적이고 있습니다. 복부 화상 진찰 창이 있는 최근 인트라바이탈 화상 진찰 연구 결과는 생체내 복부 기관에 있는 세포 역학의 시각화를 가능하게 했습니다. 그러나, 생리적 운동(예를 들어, 연동성 및 호흡)에 의해 쉽게 영향을 받을 수 있는 마우스 췌장의 연약한 시트 와 같은 아키텍처로 인해, 마우스 췌장에 있는 섬 또는 암세포를 식별, 추적 및 정량화하기 위해 세포 수준에서 몇 주 동안 생체 내 이미징에서 안정화된 세로를 수행하기가 어려웠다. 본명, 췌장 미세구조의 경도 경과 내인스탈 이미징을 위해 췌장을 창자로부터 공간적으로 분리할 수 있는 새로운 지지기반, 통합췌장 내 인트라바탈 이미징 창을 이식하는 방법을 설명한다. 이미징 창을 가진 생체 내 생체 내 이미징은 안정적인 시각화를 가능하게 하여 3주 동안 의 섬 추적과 미세 구조의 고해상도 3차원 이미징을 허용하며, 여기서 입증된 바와 같이 치열토성 췌장암 모델에서 입증된다. 우리의 방법을 사용하여, 추가 인트라바이탈 이미징 연구는 세포 수준에서 췌장을 포함하는 각종 질병의 병생리학을 해명할 수 있습니다.
췌장은 소화관에 있는 외분 염 기능 및 혈 류로 호르몬을 분비의 내 분 비 기능을 가진 복 기관. 췌장의 고해상도 세포 화상 진찰은 췌장염, 췌장암 및 당뇨병 mellitus1을포함하여 췌장을 관련시키는 각종 질병의 병리생리학을 드러낼 수 있었습니다. 컴퓨터 단층 촬영, 자기 분해영상 및 초음파와 같은 기존의 진단 영상 도구는 임상 분야1,2에서널리 이용된다. 그러나, 이러한 이미징 양식은 구조적 또는 해부학적 변화만을 시각화하는 것으로 제한되며, 세포 또는 분자 수준에서의 변화는 결정될 수 없다. 인간내 당뇨병 또는 췌장암의 분자 변화가 진단3,4전에 10년 이상 시작할 수 있다는 점을 감안할 때, 잠기 기간 동안 분자 전환에서 췌장질환의 검출은 조기 진단과 적시개입을 제공할 가능성이 있다. 따라서, 해상도의 한계를 극복하고 기능에 대한 귀중한 통찰력을 제공하는 이미징은 당뇨병의 진행 중에 췌장암의 조기 진단 또는 섬 변경의 고급 식별을 제공함으로써 현저하게 주의를 얻을 것이다5.
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이 논문에 설명된 모든 절차는 실험실 동물 관리 및 사용 가이드 8제1판(2011)26에 따라 진행되었으며, 한국과학기술원(KAIST)과 서울대학교 분당병원(SNUBH)의 기관동물관리 및 이용위원회의 승인을 받았습니다.
1. 창 및 기타 재료의 준비
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서포트베이스 통합 췌장 인내 영상 창과 결합된 인트라바이탈 현미경 검사는 마우스에 있는 췌장의 세로 세포 수준 이미징을 가능하게 합니다. 췌장 내 인트라바이탈 이미징 창을 가진 이 프로토콜은 고해상도 이미징을 획득하여 최대 3주 동안 개별 섬을 추적할 수 있는 장기 조직 안정성을 제공합니다. 그 결과, 확장된 시야를 위한 모자이크 이미징, z-스택 이미징의 3차원(3D) 재구성, 동일한 위치의 세로 추적을 달성할 수 있다. 또한, 당사의 중요 내 현미경 검사는 4개의 채널(405, 488, 561 및 647 nm)의 획득을 제공하여 상호 작용과 동시에 다중 세포 시각화를 가능하게 합니다.
예비 이미징의 경우, 창은 알렉사 647 플루오로호레와 결합된 항 CD31 항체를 정맥 주사한 C57BL/6N 마우스에 이식되었다. 췌장의 광역영상(도 3A)및 확대된 3D 이미징(도3B-D, 보충 비디오 1)은.......
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여기서 설명된 프로토콜은 복부 화상 진찰 창에서 변형된 새로운 지지 기지 통합췌장 내 화상 진찰 창을 사용하여 췌장의 인트라비티 이미징으로 이루어져 있습니다. 위에서 설명한 프로토콜 중, 첫 번째 중요한 단계는 마우스에 있는 중요한 췌장 화상 진찰 창의 이식입니다. 창에 접착제를 적용하기 위해, 창의 여백과 커버 유리 사이에 접착제를 적용하는 것이 중요하지만 췌장 조직에는 그렇지 않으며, 이는 중요한 이미징을 현저히 방해할 수 있기 때문에. 유리와 조직 사이의 접착제 자체뿐만 아니라 접착이 조직에 직접 적용되는 경우 내부 먼지 입자는 이미징 중에 빛이 산란을 유도할 수 있습니다. 또한 접착제의 적용은 췌장에 독성 및 비생리적 영향을 미칠 수 있다.
두 번째 단계는 금속 지지 기판에 배치된 췌장 조직의 양입니다. 췌장 조직은 시트와 같은 구조이기 때문에 플레이트의 췌장 조직의 양을 제어해야합니다. 너무 큰 부피가 접시에 놓이면 링의 여백에 적용된 접착제가 조직을 부착할 수 있으며 .......
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저자는 공개 할 것이 없습니다.
이 연구는 SNUBH 연구 기금에서 14-2020-002호를 지원하고 한국정부(MSIT)가 지원하는 한국연구재단(NRF) 보조금(NRF-2020R1F1A1058381, NRF-2020R1A2C305694)에 의해 지원되었다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 647 숙시니미딜 에스테르(NHS 에스테르) | Invitrogen | A20006 | 항체와 접합용 형광 프로브 |
| BALB/C 누드 | OrientBio | BALB/C 누드 | BALB/C 누드 |
| BD 인트라메딕 폴리에틸렌 튜빙 | BD Biosciences | 427401 | PE10 카테터, 바늘 연결용 |
| C57BL/6N | 오리엔트바이오 | C57BL/6N | C57BL/6N |
| 커버 안경 원형 | Marienfeld | 0111520 | 췌장 이미징 창용 커버 유리 |
| FITC Dextran 2MDa | Merck (Former Sigma Aldrich) | FD200S | 혈관 식별용 |
| IMARIS 8.1 | Bitplane | IMARIS | 이미지 처리 |
| 생체 내 현미경 | IVIM 기술 | IVM-C | 생체 내 현미경 IRIS |
| 가위 | JEUNGDO 바이오 & PLANT CO, LTD | S-1107-10 | 본 제품은 타사의 제품으로 교환 가능 |
| Loctite 401 | Henkel | 401 | N-butyl cyanoacrylate glue |
| Micro Needle holder | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | H-1126-10 | 본 제품은 타사 |
| Micro rectractor | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | 17004-03 | 본 제품은 타사 |
| Microforceps | JEUNGDO BIO & 제품의 제품으로 교체 가능합니다. PLANT CO, LTD | F-1034 | 이 제품은 타사 |
| MIP-GFP | The Jackson Laboratory | 006864 | . Cg-TG(Ins1-EGFP)1Hara/J |
| Nylon 4-0 | AILEE | NB434 | Non-Absorbable Suture |
| Omnican N 100 30G | B BRAUN | 혈관 카테터의 경우 바늘 부분만 사용 | |
| PANC-1 NucLightRed | 맞춤형 | 맞춤형 | Made in laboratory |
| 췌장 이미징 창 | 금토엔지니어링 | 맞춤형 주문 | 췌장 이미징 창 - 맞춤 주문 |
| Physiosuite | Kent Scientific | PS-02 | 동종 온도 컨트롤러 |
| 정제 NA/LE 쥐 안티 마우스 CD31 | BD Biosciences | 553708 | 생체 내 혈관 라벨링용 항체 |
| 링 집게 | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | F-1090-3 | 이 제품은 타사의 제품으로 교체 할 수 있습니다 |
| Rompun | Bayer | Rompun | 마취제 |
| TMR Dextran 65-85kDa | Merck (Former Sigma Aldrich) | T1162 | 용기 식별 |
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