Summary
I denne protokollen brukes en musehjertetransplantasjonsmodell for å undersøke mekanismen for avstøtning av hjerteallotransplantat. I denne heterotopiske hjertetransplantasjonsmodellen forbedres operasjonseffektiviteten, og overlevelsen av hjertetransplantater sikres ved en cervikal ende-til-ende-anastomose av hjerteimplantasjon ved hjelp av en modifisert Cuff-teknikk.
Abstract
Avstøtning av hjerteallograft begrenser langtidsoverlevelsen til pasienter etter hjertetransplantasjon. En musehjertetransplantasjonsmodell er ideell for å undersøke mekanismen for avstøtning av hjerteallograft i prekliniske studier på grunn av deres høye homologi med humane gener. Denne forståelsen vil bidra til å utvikle unike tilnærminger for å forbedre pasientenes langsiktige overlevelse behandlet med hjerteallotransplantater. I en musemodell utføres vanligvis hjerteimplantasjon fra abdominal donor med en ende-til-ende-anastomose til mottakerens aorta og dårligere vena cava ved bruk av masker. I denne modellen implanteres donorens hjerte ved ende-til-ende-anastomose til mottakerens halspulsåre og halsvene ved hjelp av modifisert mansjettteknikk. Transplantasjonsoperasjonen utføres uten søm og kan dermed øke mottakerens overlevelse siden det ikke er noen forstyrrelse av blodtilførselen og venøs refluks i underkroppen. Denne musemodellen vil bidra til å undersøke mekanismene bak immunologisk og patologisk (akutt/kronisk) avstøtning av hjerteallotransplantater.
Introduction
Hjertetransplantasjon har blitt standard behandling for terminal hjertesvikt. Mer enn 5,500 hjertetransplantasjoner per år utføres i organisasjonene registrert under International Society for Heart and Lung Transplantation. Blant de allogene hjertetransplanterte er 1-års avstøtningsraten fortsatt >10 %, mens 3-års avstøtningsraten økte til 36 %1,2. Effektiv profylaktisk behandling for pasienter med hjerteallotransplantatavstøtning mangler. Dyremodellstudier er derfor berettiget til å belyse de fysiologiske mekanismene som ligger til grunn for immunologisk og patologisk avstøtning av allotransplantater fra hjertet. Slike studier vil bidra til undersøkelsen av nye mål som kreves for å utvikle effektive legemidler, noe som vil bidra til å forhindre avstøtning av hjerteallotransplantat og forbedre overlevelsesraten i disse pasientpopulasjonene.
Noen potensielle immunologiske og patofysiologiske mekanismer for hjerteallotransplantatavstøtning har nylig blitt foreslått i musemodellstudier av heterotopisk hjertetransplantasjon 3,4,5. Følgelig ble heterotopisk hjertetransplantasjon en ideell preklinisk modell for å undersøke mekanismene for immunavstøtning og patologisk skade som forekommer i hjerteallotransplantater etter hjertetransplantasjon på grunn av deres høye homologi med humane gener. Det utbredte konseptet er å utføre heterotopisk transplantasjon i en musemodell ved en abdominal ende-til-ende-anastomose i mottakeraorta og vena cava inferior ved bruk av masker, tilsvarende normal human anatomi. Denne prosedyren kan imidlertid forstyrre mottakerens blodtilførsel og venøs refluks i underkroppen6. Derfor foreslås en modifisert heterotopisk hjertetransplantasjonsprosedyre i en musemodell her.
Donorens hjerte implanteres med mottakerens halspulsåre og vena jugularis ved hjelp av en ende-til-ende cervikal anastomose ved hjelp av en modifisert Cuff-teknikk. Denne modifiserte prosedyren lettet den operative gjennomførbarheten og sikret overlevelse av hjertetransplantatet uten å forstyrre blodtilførselen og venøs refluks i underkroppen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøk ble utført i samsvar med Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Eight Edition, National Research Council (US) 2011. Prosedyrer som involverer dyreforsøkspersoner er godkjent av Animal Care and Use Committee ved Chongqing University Cancer Hospital, Chongqing, Kina. Mannlige BALB/c og C57BL/6 mus som veide 20-30 g, hentet fra kommersielle kilder (se materialtabell), ble brukt til allogen hjertetransplantasjonsstudie. C57BL/6-musene ble brukt som donorer og syngene mottakere, mens BALB/c-musene fungerte som allogene mottakere. Et skjema over protokollen er vist i figur 1.
MERK: Alt utstyr som brukes under operasjonen, inkludert kirurgiske instrumenter og løsninger, er sterile. Den kirurgiske prosedyren overholder prinsippet om aseptisk operasjonsteknikk.
1. Prosedyre for mottaker
- Indusere generell anestesi via inhalasjon av 5 % isofluran gjennom et 15 x 10 x 10 cm induksjonskammer forbundet med en hette (se Materialfortegnelse).
- Fest mottakermusen på operasjonsbordet med en varmepute. Oppretthold anestesi med kontinuerlig inhalasjon av 2 % isofluran gjennom ansiktsmaske over nese og munn.
MERK: Langsom respirasjonsfrekvens og rytme, bortfall av hornhinnerefleks og fravær av pedalrefleks i tærne indikerer effektiviteten av anestesi. - Etter barbering av håret, desinfiser operasjonsområdet med tre vekslende runder med povidon-jodskrubb etterfulgt av alkohol. Deretter snitter du huden 1,5-2 cm parallelt med den cervikale midtlinjen fra høyre mandibulær vinkel til halenden.
- Dissekere ~1 cm av høyre ytre vena jugularis ved hjelp av en elektrokoagulator og mikrotang. Klipp venen i den proksimale enden med en atraumatisk mikrovaskulær klemme og liger den i den distale enden.
- Før den distale enden av venen gjennom en 22 G piggmansjett av polyuretan (se materialfortegnelse) med en skrående ende og overfladiske spor. Fest venen med håndtaket på mansjetten ved hjelp av en mikrovaskulær klemme.
- Fjern 8-0 ligeringssutur i den distale enden, snu lumen over mansjetten hektet av den overfladiske barben innvendig ut og fiks med en 10-0 kirurgisk sutur i sporene på overflaten.
- Resekter høyre sublingualkjertel for å danne en fossa for implantering av hjertetransplantatet, og reserver høyre flik av submaxillærkjertelen og høyre sternokleidomastoid.
- Dissekere høyre arteria carotis communis i ~1 cm ved hjelp av mikrotang, og klipp arterien med en atraumatisk mikrovaskulær klemme i den proksimale enden. Ved den distale enden, ligate og kutt av arterien.
- Før den distale enden av arterien gjennom en 26 G polyuretan piggmansjett (se materialfortegnelse) med en skrående ende og spor på overflaten. Fest arterien med mansjettens håndtak ved hjelp av en mikrovaskulær klemme.
- Fjern ligeringssuturen i den distale enden, vri lumen innvendig ut over mansjetten, og fest med en overfladisk pigg og spor med en 10-0 kirurgisk sutur.
- Etter å ha forberedt mottakerens fartøy, slipp 100 IE / ml heparinsaltoppløsning på karene for å forhindre trombose. Dekk cervikal snitt med sterilt vått saltvannsgassbind for etterfølgende implantasjon.
2. Donor prosedyre
- Bruk samme anestesiprosedyre (trinn 1.1) for donormusen.
- Barber magehåret med en elektrisk barberhøvel, og desinfiser operasjonsområdet med tre vekslende runder med povidon-jodskrubb etterfulgt av alkohol.
- Snitt abdomen (2-3 cm) med en saks langs midtlinjen fra symfysepubis til subxiphoid, og utvid det snittede området med en retractor.
- Dissekere 1 cm av abdominal aorta og dårligere vena cava ved hjelp av en elektrokoagulator og en mikrotang, og utfør heparinisering ved å injisere 1 ml fysiologisk saltvann supplert med 250 IE / ml heparin gjennom den dårligere vena cava. Etter dette, excise abdominal aorta og dårligere vena cava.
- Skjær thoraxen langs den fremre aksillære linjen på begge sider ved hjelp av en kirurgisk saks for å skille brystveggen. Ligate den overlegne vena cava med en 8-0 kirurgisk sutur.
- Sett inn en hodebunnsnål ved den suprahepatiske vena cava inferior. Deretter injiserer iskaldt fysiologisk saltvann supplert med 100 IE / ml heparin gjennom hodebunnsnålen fra suprahepatisk dårligere vena cava for å perfusere donorhjertet til blodfargen blekner.
- Re-perfuser donorhjertet med 2-3 ml iskald histidin-tryptofan-ketoglutarat (HTK) løsning (se materialtabell) ved hjelp av en hodebunnsnål fra aortabuen for å beskytte donormyokardiet. Gjennomsnittlig tid for varm iskemi er 5 min.
- Ligate den overlegne og dårligere vena cava og lungevenen med en 5-0 kirurgisk sutur. Dissekere og kutte av donor, aorta og lungearterien før forgreningen. Deretter deler du den overlegne og dårligere vena cava og lungevenen for å fjerne donorens hjerte.
3. Implantasjon
- Implanter donorhjertet i livmorhalslommen til mottakermusen i en omvendt stilling.
- Trekk mansjetten med en everted mottaker jugularis vene inn i lumen av donor lungearterien for å utføre ende-til-ende anastomose av donor lungearterien til mottakeren ekstern jugularvene. Liger mansjetten ved hjelp av sporene på overflaten gjennom en 10-0 kirurgisk sutur for å fikse anastomosen.
- Bruk en lignende prosedyre for ende-til-ende anastomose av donor aorta til mottakeren carotisarterien.
- Frigjør den atraumatiske mikrovaskulære klemmen i halsvenen etterfulgt av halspulsåren for å perfusere donorens hjerte. Gjennomsnittlig kald iskemitid er 15 min.
- Fest hjertetransplantatet og syv det ordentlig for å forhindre vridning av transplantatet.
- Lukk cervikal snitt med kontinuerlige suturer ved hjelp av en 5-0 polyamid monofilament sutur (se tabell over materialer).
MERK: Fjern suturen etter at såret er helt helbredet. - Hold mottakermusen inne i et varmt, tørt og rent bur til det kommer seg etter anestesi.
MERK: Det tar 5-10 min å komme seg. - Injiser buprenorfin (0,05 mg/kg) subkutant inn i mottakermusen hver 6. time i 48 timer ved postoperativ analgesi.
MERK: Analgesidoseringen ble optimalisert for denne studien. Analgesiregimet kan imidlertid forlenges/modifiseres dersom det er tegn til smerte i henhold til institusjonelle retningslinjer for bruk av dyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I denne cervikale heterotopiske hjertetransplantasjonsmodellen var overlevelsesraten for mottakermus ca. 95,2 % (20 av 21 mus overlevde). Den primære dødsårsaken var postoperativ blødning. Den raske hjerterytmen med en vanlig rytme tjener som en indikator på overlevelsen av det implanterte donorhjertet.
C57BL/6 og BALB/c mus var MHC (H-2b) og MHC (H-2d) typer i denne modellen, henholdsvis 7,8. Disse to stammene er forskjellige ved H-2, noe som forårsaker akutt T-cellemediert avvisning9. Av alle hjerteallotransplantatene forsvant 62,5 % innen 7 dager etter transplantasjonen, vurdert ved palpering av hjerteslag. Alle hjerteallotransplantater gikk tapt innen 8 dager etter transplantasjonen. Derimot overlevde alle de isogene hjertetransplantasjonene utover 4 uker (figur 2). Mus som overlevde utover 4 uker ble avlivet ved CO2 -inhalasjon.
Figur 1 Skjematisk fremstilling av cervikal heterotopisk hjertetransplantasjonsmodell fra mus. (A) Protokoll for klargjøring av mottakeren: Etter klipping av arteria carotis communis og vena jugularis eksterna i den proksimale enden, blir karets vaskulære lumen evert og festet etter å ha passert gjennom piggmansjetten med en skrående ende og spor på overflaten. Den stiplede firkanten viser strukturen og bruken av mansjetten. (B) Donorhjertereseksjon: Etter donorhjertets perfusjon med heparin og HTK-løsning fra vena cava og aorta inferior, ligeres vena cava superior og lungevena med suturer. Donorens hjerte resekteres deretter ved å snitte karkarene. (C) Implantasjon av donorens hjerte. Donor lungearterie og aorta anastomoseres til mottakerens vena jugularis externa og a. carotis via mansjetten med mottakerens vaskulatur vendt innvendig ut i et ende-til-ende-mønster. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2 Overlevelseskurve for hjertetransplantater. Overlevelseskurven for hjertetransplantater viser at allogen hjertetransplantasjon forsvant innen 8 dager etter transplantasjonen, som ble vurdert ved palpasjon av hjerteslagene. Totalt 10 mottakermus gjennomgikk modifisert cervikal heterotopisk hjertetransplantasjon i hver gruppe. Alle de isogene hjertetransplantasjonene overlevde mer enn 4 uker. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Rupert Oberhuber et al.10 | Xin Mao et al (nåværende arbeid) | |||
| Anestesi | xylazin og ketamin | isofluran (sikker, kontinuerlig og stabil) | ||
| Høyre lobe av submandibulær kjertel | fjerning | bevaring (Reduser snurring av transplantater) | ||
| Høyre sternocleidomastoid | fjerning | bevaring (Reduser snurring av transplantater) | ||
| Hjerteperfusjon | Retrograd perfusjon med 4 °C HTK-oppløsning fra aortabuen | 1. Anterograd perfusjon med iskaldt fysiologisk saltvann supplert med 100 IE/ml heparinoppløsning fra suprahepatisk vena cava. 2. Retrograd reperfusjon med iskald HTK-løsning fra aortabuen. (Reduser koagulasjon og øk myokardbeskyttelsen) | ||
| Mansjett | butt ende, med håndtak | skråenden, med håndtak, pigg og spor på overflaten (Forenkle eversjon og fiksering) | ||
Tabell 1: Sammenligning av hjertetransplantasjonsteknikker. Den nåværende cervikale heterotopiske hjertetransplantasjonsteknikken er modifisert fra Oberhuber, R. et al.10 og har ytterligere fordeler for overlevelse av hjertetransplantat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Musehjertetransplantasjonsmodellen bidrar til undersøkelse av avstøtningsmekanismer etter hjertetransplantasjon, og bidrar til utvikling av unike tilnærminger for å forbedre langtidsoverlevelsen til hjerteallograftmottakere. Imidlertid er hjertetransplantasjon hos mus en kompleks og utfordrende oppgave, som krever et høyt nivå av mikrokirurgiske teknikker, spesielt i vaskulær anastomose11,12,13. Musens abdominale heterotopiske hjertetransplantasjonsmodell utføres med sting ved anastomose av donoraorta og lungearterie til mottaker aorta og vena cava inferior. Mottakerens aorta og dårligere vena cava må blokkeres i denne operasjonen. Derfor kan iskemi i underkroppen og trombose av vena cava inferior øke funksjonshemming og død hos mottakermus. For å redusere vanskelighetene med vaskulær anastomose under transplantasjon, introduserte Matsuura et al. først en livmorhalshjertetransplantasjonsmodell hos mus ved hjelp av mansjettteknikken i 199114. I denne modellen økte den overermetlignende everted anastomosen av kar ved ligering med mansjett anastomoseeffektiviteten. I motsetning til anastomosen til kar med suturer i en musemodell for abdominalt hjertetransplantasjon, reduserte den blødningssannsynligheten etter inngrepet. Forbedringen av anastomoseeffektiviteten reduserte derfor iskemitiden for hjertemuskelen og økte overlevelsen av hjertetransplantater. I tillegg avbryter cervikal implantasjon av donorens hjerte ikke sirkulasjonen av mottakerens aorta og dårligere vena cava sammenlignet med abdominal implantasjon15; Derfor øker overlevelsen til mottakermus.
En unik eksperimentell heterotopisk hjertetransplantasjonsmodell fra mus er beskrevet her, etablert av Rupert Oberhuber et al.10. Prosedyren innebærer en ende-til-ende cervikal anastomose av donor aorta og lungearterie til mottaker carotis arterie og vena jugularis etter en modifisert Cuff teknikk. I denne modellen forstyrrer den systemiske sirkulasjonen av mottakermusene ikke10, og donorens hjerte ble perfusert fra den dårligere vena cava og aorta med heparin- og HTK-løsninger for bedre myokardbeskyttelse. Den kritiske komponenten i denne modellen var imidlertid forskjellig fra Oberhuber et al.10, som benyttet den modifiserte piggmansjetten med en skrående ende og spor som ligner på Finsterer et al.16. Skråenden letter en overermet-lignende evert av det vaskulære lumen. Sporene på overflaten gjør det lettere å feste opp karveggene med en mansjett ved hjelp av suturer, og piggen utenfor mansjetten reduserer glidningen av anastomoserte karvegger fra mansjetten (figur 1). Disse modifikasjonene forkorter den kirurgiske tiden med 20% og forbedrer hjertetransplantatets implantasjonseffektivitet og overlevelse. Videre produseres den modifiserte piggmansjetten fra det vanligste polyuretankateteret som brukes til hodebunnsakupunktur, og reduserer dermed kostnadene ved prosedyren betydelig. En sammenligning av dagens teknikk med Oberhuber et al.10 er vist i tabell 1.
De unike egenskapene til denne modellen må noteres. For det første er lengden og kaliberet på mansjetten avgjørende for vellykket anastomose. Mansjettens passende lengde var ~3 mm med håndtak (1 mm) (figur 1). Mansjettens passende kaliber er 26 G og 22 G for henholdsvis arterie og vener. Mansjettens uegnede lengde og kaliber vil føre til vridning eller overdreven spenning av de anastomoserte karene. For det andre er de passende lengdene på mottakerens fartøy 1,5 til 2 ganger av mansjetten. For det tredje er donorens hjerte ikke perfusert med overdreven trykk, noe som potensielt kan skade transplantatet. For det fjerde er hjertetransplantatet fiksert, og mansjetten anastomoseres i en passende posisjon ved suturering etter implantasjon for å unngå bevegelse eller vridning av anastomoserte kar eller transplantater. For det femte bidrar bevaring av submaxillærkjertelen og sternocleidomastoid til å redusere snurring eller vridning av de anastomoserte karene eller transplantatet ved reseksjon av høyre sublingualkjertel for å produsere en fossa for hjertetransplantat. For det sjette, for å lette den oversleeve-lignende evert av vaskulær lumen og redusere trombose etter operasjonen, kan heparinoppløsning (100 IE / ml) tilføres de anastomoserte karene mens du utfører anastomose.
Denne mansjettteknikken letter anastomosen av donor- og mottakerkar under implantasjon; Imidlertid kan mansjettens hardhet i sin tur øke risikoen for å vri de anastomoserte karene, noe som resulterer i en økning i trombose etter transplantasjon. Optimalisering av mansjettmaterialet er berettiget for å redusere komplikasjoner, øke transplantatoverlevelse og øke utnyttelsesgraden av modellene i påfølgende eksperimenter. Videre kan det fibrøse arret på kuttet begrense plassen for hjertetransplantatet og påvirke dets langsiktige overlevelse. I tillegg kan utstøting av hjertetransplantatet forstyrre mottakermusens normale hemodynamiske blodstrøm. Endelig er denne modellen ikke-funksjonell og kan ikke brukes til å evaluere hjertefunksjonen til transplantater. Likevel gir denne studien kunnskap om hjertetransplantasjonens immunologiske og patologiske funksjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (81870304) til Jun Li.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-0 Polyamide Monofilament suture | B.Braun Medical Inc. | C3090954 | |
| 8-0 Polyamide Monofilament suture | B.Braun Medical Inc. | C2090880 | |
| 10-0 Polyamide Monofilament suture | B.Braun Medical Inc. | G0090781 | |
| 22 G polyurethane cuff | B.Braun Medical Inc. | 4251628-02 | |
| 26 G polyurethane cuff | Suzhou Linhua Medical Instrument Co., LTD | REF383713 | |
| Anesthesia induction chamber | RWD Life Science Co., LTD | V100 | |
| Atraumatic microvascular clamp | Beyotime | FS500 | |
| BALB/c and C57BL/6 mice (20–30 g) | Centre of Experimental Animals (Army Medical University, Chongqing, China) | ||
| Buprenorphine | US Biological life Sciences | 352004 | |
| Electrocoagulator | Guangzhou Runman Medical Instrument Co., LTD | ZJ1099 | |
| Gauze | Henan piaoan group Co., LTD | 10210402 | |
| Heating pad | Guangzhou Dewei Biological Technology Co., LTD | DK0032 | |
| Heparin | North China Pharmaceutical Co., LTD | 2101131-2 | |
| HTK solution | Shenzhen Changyi Pharmaceutical Co., LTD | YZB/Min8263-2013 | |
| Injection syringe (10 mL) | Shandong weigao group medical polymer Co., LTD | 20211001 | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co., LTD | 21070201 | |
| Physiological saline | Southwest pharmaceutical Co., LTD | H50021610 | |
| Scalp needle | Hongyu Medical Group | 20183150210 | |
| Shaver | Beyotime | FS600 | |
| Small animal anesthesia machine | RWD Life Science Co., LTD | R500 | |
| Surgical operation microscope | Tiannuoxiang Scientific Instrument Co. , Ltd, Beijing, China | SZX-6745 | |
| Swab | Yubei Medical Materials Co., LTD | 21080274 |
References
- Khush, K. K., et al. The International thoracic organ transplant registry of the international society for heart and lung transplantation: Thirty-sixth adult heart transplantation report - 2019; focus theme: Donor and recipient size match. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 38 (10), 1056-1066 (2019).
- Stehlik, J., et al. The registry of the international society for heart and lung transplantation: 29th official adult heart transplant report--2012. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 31 (10), 1052-1064 (2012).
- Huang, H., et al. Combined intrathymic and intravenous injection of mesenchymal stem cells can prolong the survival of rat cardiac allograft associated with decrease in miR-155 expression. Journal of Surgical Research. 185 (2), 896-903 (2013).
- Eggenhofer, E., et al. Features of synergism between mesenchymal stem cells and immunosuppressive drugs in a murine heart transplantation model. Transplant Immunology. 25 (2-3), 141-147 (2011).
- Sula Karreci, E., et al. Brief treatment with a highly selective immunoproteasome inhibitor promotes long-term cardiac allograft acceptance in mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (52), 8425-8432 (2016).
- Liu, F., Kang, S. M.
- Lin, C. M., Gill, R. G., Mehrad, B. The natural killer cell activating receptor, NKG2D, is critical to antibody-dependent chronic rejection in heart transplantation. American Journal of Transplantation. 21 (11), 3550-3560 (2021).
- Ito, H., Hamano, K., Fukumoto, T., Wood, K. J., Esato, K. Bidirectional blockade of CD4 and major histocompatibility complex class II molecules: An effective immunosuppressive treatment in the mouse heart transplantation model. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 17 (5), 460-469 (1998).
- Zhou, Y. X., et al. Acute rejection correlates with expression of major histocompatibility complex class I antigens on peripheral blood CD3(+)CD8(+) T-lymphocytes following skin transplantation in mice. Journal of International Medical Research. 39 (2), 480-487 (2011).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
- Cui, D., Tan, C., Liu, Z. An alternative technique of arterial anastomosis in mouse heart transplantation. Clinical Transplantation. 32 (6), 13264 (2018).
- Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse. Journal of Investigative Surgery. 26 (4), 223-228 (2013).
- Fang, J., et al. A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice. American Journal of Translational Research. 5 (5), 521-529 (2013).
- Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).
- Fensterer, T. F., Miller, C. J., Perez-Abadia, G., Maldonado, C. Novel cuff design to facilitate anastomosis of small vessels during cervical heterotopic heart transplantation in rats. Comparative Medicine. 64 (4), 293-299 (2014).
