Summary
संचारित, ध्रुवीकृत और क्षतिपूर्ति प्रकाश माइक्रोस्कोपी के तहत श्लेष द्रव विश्लेषण का उपयोग सरल चरणों के माध्यम से नमूने की भड़काऊ या गैर-भड़काऊ प्रकृति का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है। यह कैल्शियम क्रिस्टल का पता लगाने और पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस के अधिक गंभीर उप-समूह की पहचान करने के लिए पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस में विशेष रूप से उपयोगी है।
Abstract
पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस (ओए) के निदान में श्लेष द्रव (एसएफ) विश्लेषण महत्वपूर्ण है। मैक्रोस्कोपिक और सूक्ष्म विशेषताएं, कुल और अंतर सफेद रक्त कोशिका (डब्ल्यूबीसी) गिनती सहित, एसएफ की गैर-भड़काऊ प्रकृति को परिभाषित करने में मदद करती हैं, जो ओए की एक पहचान है। ओए वाले रोगियों में, एसएफ नमूनों में डब्ल्यूबीसी आमतौर पर प्रति माइक्रोलीटर 2000 कोशिकाओं से अधिक नहीं होता है, और भड़काऊ कोशिकाओं का प्रतिशत, जैसे न्यूट्रोफिल, बहुत कम या अनुपस्थित होता है। ओए रोगियों से एकत्र किए गए एसएफ में कैल्शियम क्रिस्टल अक्सर होते हैं। हालांकि ओए के रोगजनन में उनकी भूमिका स्पष्ट नहीं है, वे एक हल्के भड़काऊ प्रक्रिया और अधिक गंभीर रोग की प्रगति से जुड़े हुए हैं। हाल ही में, कैल्शियम क्रिस्टल को ओए के शुरुआती और बाद के चरणों दोनों में वर्णित किया गया है, यह दर्शाता है कि वे ओए और औषधीय उपचार के विभिन्न नैदानिक उप-समूहों के निदान में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं। ओए में एसएफ विश्लेषण का समग्र लक्ष्य दो गुना है: एसएफ की गैर-भड़काऊ डिग्री का पता लगाने और कैल्शियम क्रिस्टल की उपस्थिति को उजागर करने के लिए।
Introduction
ऑस्टियोआर्थराइटिस (ओए) एक जटिल और बहुक्रियाशील पुरानी संयुक्त बीमारी है, जिसमें 15 वर्ष और उससे अधिक आयु के विषयों में 16% और 40 और1 वर्ष से अधिक आयु के विषयों में 23% का अनुमानित वैश्विक प्रसार है। उम्र बढ़ने की आबादी और जोखिम कारकों में वृद्धि के कारण ओए की घटनाओं में वृद्धि होने की उम्मीद है, जैसे कि मोटापा और चयापचयसिंड्रोम 2।
ओए से जुड़े प्रमुख मुद्दों में अपने शुरुआती चरणों में बीमारी का निदान करने में कठिनाई है और वर्तमान में दर्द प्रबंधन और रोगसूचक धीमी गति से काम करने वाली दवाओं (SYSADOA) जैसे ग्लाइकोसामिनोग्लाइकेन्स तक सीमित उपचार उपलब्ध हैं। ओए का निदान नैदानिक लक्षणों और इमेजिंग निष्कर्षों पर आधारित है। हालांकि, दो आकलनों के बीच सहसंबंध की कमी ओए निदान और उपचार दीक्षामें वर्षों की देरी का कारण बन सकती है। ओए को अपक्षयी प्रक्रियाओं और निम्न-श्रेणी की सूजन की विशेषता है, जिसे श्लेष द्रव (एसएफ) विश्लेषण के माध्यम से आसानी से जांच की जा सकती है। एसएफ एक चिपचिपा प्लास्मोटिक डायलीसेट है जो हाइलूरोनिक एसिड में समृद्ध है, जो संयुक्त स्थान को चिकनाई देता है, उपास्थि को पोषक तत्व और ऑक्सीजन प्रदान करता है, और चयापचय अपशिष्ट को हटा देता है। एसएफ एक सदमे अवशोषक के रूप में भी कार्य करता है, इस प्रकार तनाव और तनाव3 के दौरान जोड़ों की रक्षा करता है।
एसएफ विश्लेषण एक सरल और विश्वसनीय तरीका है जिसे हमेशा मस्कुलोस्केलेटल लक्षणों और संयुक्त बहाववाले रोगियों के प्रारंभिक मूल्यांकन के दौरान किया जाना चाहिए। अमेरिकन कॉलेज ऑफ रुमेटोलॉजी, ब्रिटिश सोसाइटी फॉर रुमेटोलॉजी, और अन्य की सिफारिशों में आमवाती रोगों के लिए नैदानिक परीक्षण के बीच एसएफ विश्लेषण शामिल है जो मुख्य रूप से तीव्र मोनोआर्थराइटिस 4,5 के मूल्यांकन में किया जाना चाहिए। एसएफ विश्लेषण से प्राप्त कुल और अंतर ल्यूकोसाइट गिनती संयुक्त में होने वाली रोग प्रक्रिया का एक स्नैपशॉट प्रदान करती है, इस प्रकार सूजन की डिग्री को वर्गीकृत करती है। ध्रुवीकृत प्रकाश के तहत मोनोसोडियम यूरेट (एमएसयू) और कैल्शियम पाइरोफॉस्फेट (सीपीपी) क्रिस्टल जैसे रोगजनक क्रिस्टल की पहचान, क्रिस्टल गठिया (जैसे, गठिया और स्यूडोगाउट) के निदान और उपचार में महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति सेप्टिक गठिया के निदान का सुझाव देती है।
ओए6 के रोगियों से एकत्र किए गए नमूनों में कैल्शियम क्रिस्टल अक्सर होते हैं। ओए6 वाले रोगियों से क्रमशः एसएफ नमूनों के लगभग 22% और 23% में बुनियादी कैल्शियम फॉस्फेट (बीसीपी) क्रिस्टल और सीपीपी की सूचना दी गई है। हालांकि उनकी भूमिका स्पष्ट नहीं है, ये क्रिस्टल ओए7 के अधिक गंभीर रूपों से जुड़े हुए हैं और इन्हें पैथोलॉजिकल प्रक्रिया का एक एपिफेनोमिना माना जाता है। घुटने के प्रतिस्थापन से गुजरने वाले ओए रोगियों के 100% ऊतक नमूनों में कैल्शियम क्रिस्टल का पता चलाहै। इसके अलावा, यह अनुमान लगाया गया है कि कैल्शियम क्रिस्टल अपने भड़काऊ प्रभावों के कारण ओए के रोगजनन में शामिल हो सकते हैं, जोकई अध्ययनों द्वारा प्रदर्शित किए गए हैं और कम से कम आंशिक रूप से, एनएलआरपी 3 इंफ्लेमेसोम10 द्वारा मध्यस्थता की गई है।
हाल ही में, कैल्शियम क्रिस्टल को ओए के शुरुआती और बाद के चरण6 दोनों में वर्णित किया गया है, यह दर्शाता है कि वे ओए और औषधीय उपचार के विभिन्न नैदानिक उप-समूहों के निदान में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं।
एसएफ विश्लेषण का समग्र लक्ष्य दो गुना है: एसएफ की भड़काऊ डिग्री निर्धारित करने और विशिष्ट क्रिस्टल या सूक्ष्मजीवों की पहचान करके क्रिस्टल या सेप्टिक गठिया का निदान करने के लिए। यह ओए के निदान में एक विशेष रूप से उपयोगी, सरल और विश्वसनीय उपकरण है, जो बहुत कम प्रतिशत या न्यूट्रोफिल की अनुपस्थिति के साथ विशिष्ट गैर-भड़काऊ पैटर्न के कारण है।
वैकल्पिक तकनीकों पर लाभ
एसएफ विश्लेषण में सरल प्रक्रियाएं शामिल हैं जिनमें कुल और अंतर ल्यूकोसाइट गिनती और क्रिस्टल खोज शामिल हैं। विशेषज्ञ प्रयोगशाला तकनीशियनों 3,11 द्वारा किए गए मैनुअल सेल गिनती श्लेष और अन्य शरीर के तरल पदार्थों के साइटोलॉजिकल विश्लेषण के लिए स्वर्ण मानक बनी हुई है। हालांकि, समय लेने वाली सीमा और इस विधि की अंतर-और अंतर-पर्यवेक्षक परिवर्तनशीलता के कारण, स्वचालित सेल काउंटरों ने धीरे-धीरे बड़ी नियमित नैदानिक प्रयोगशालाओं में मैनुअल गिनती को बदल दिया है जहां रक्त और मूत्र विश्लेषक को एसएफ विश्लेषण11,12 को सक्षम करने के लिए अनुकूलित किया गया है। फिर भी, मैन्युअल गिनती विशिष्ट सेटिंग्स में कुछ फायदे प्रस्तुत करती है: (1) एम्बुलेटरी में, समय पर कुल और अंतर डब्ल्यूबीसी मूल्य प्राप्त करने के लिए; (2) साइटोफैगोसाइटिक मोनोन्यूक्लियर (रीटर) कोशिकाओं या गैर-हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं जैसे सिनोवियोसाइट्स जैसे सेल प्रकारों की पहचान करना, जिन्हें स्वचालित काउंटर पहचान नहीं सकते हैं; (3) जब नमूना उपकरण द्वारा नियंत्रित करने के लिए बहुत छोटा है; (4) स्थानीय प्रयोगशाला रजिस्ट्रियां बनाने के लिए जो अनुसंधान उद्देश्यों के लिए आसानी से सुलभ हैं। मैनुअल गिनती का एक और लाभ यह देखा जाता है कि सुप्रावाइटल धुंधलापन है, एक विधि जो ग्लास स्लाइड तैयारी के तुरंत बाद कोशिकाओं के भेदभाव की अनुमति देती है। इसके विपरीत, राइट और मे-ग्रुनवाल्ड-गिम्सा प्रक्रियाओं जैसे पारंपरिक धुंधलापनको हवा में सूखने वाले एसएफ स्मीयर और कोशिकाओं को दागने के लिए समय की आवश्यकता होती है। हालांकि समय-संवेदनशील नियमित विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं है, ये धुंधला तरीके नमूने में अधिक विस्तृत सेल आबादी को प्रकट करते हैं, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स, बेसोफिल, ईोसिनोफिल, पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर ल्यूकोसाइट्स, लिम्फोसाइट्स और प्लेटलेट्स शामिल हैं।
अंत में, क्रिस्टल के लिए नियमित एसएफ विश्लेषण ध्रुवीकृत प्रकाश माइक्रोस्कोपी पर आधारित एक सरल तकनीक का उपयोग करके किया जाता है, जो तेजीसे परिणाम प्रदान करता है। स्कैनिंग और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी जैसे वैकल्पिक तरीके, अधिक सटीक और संवेदनशील परिणाम देते हैं, लेकिन उच्च लागत और समय लेने वाली नमूना तैयारी और विश्लेषण के कारण रोजमर्रा के नैदानिक अभ्यास में उनका उपयोग संभव नहीं है।
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Protocol
वर्तमान प्रोटोकॉल पडोवा विश्वविद्यालय अस्पताल की आचार समिति के दिशानिर्देशों का अनुपालन करता है। एसएफ को क्लिनिक में उनकी प्रारंभिक प्रस्तुति में या गठिया भड़कने के जवाब में संयुक्त बहाव के लिए चिकित्सीय आर्थ्रोसेंटेसिस प्राप्त करने वाले रोगियों के घुटने के जोड़ों से रोगी की सहमति के साथ एकत्र किया गया था। प्रक्रिया के लिए मतभेद थे: कोगुलोपैथी, एंटीकोआगुलेंट दवाएं, त्वचा के घाव, जिल्द की सूजन, या संयुक्त रूप से सेल्युलाइटिस। सभी एसएफ नमूनों की पहचान नहीं की गई थी।
1. श्लेष द्रव तैयारी
- सूजन वाले जोड़ों के आर्थ्रोसेंटेसिस के दौरान एकत्र किए गए एसएफ नमूनों को थक्कारोधी (अधिमानतः ईडीटीए; सामग्री की तालिका देखें) और बिना किसी योजक वाली दूसरी ट्यूब में स्थानांतरित करें (चित्रा 1)।
- संक्रमण के संदिग्ध मामलों में, सूक्ष्मजीवविज्ञानी परीक्षण के लिए एसएफ नमूने (~ 1 एमएल) के एक हिस्से को कल्चर बोतलों में स्थानांतरित करें।
नोट: संक्रमण को नैदानिक विशेषताओं (गंभीर ट्यूमर, डोलर, कैलोरी, फ़ैक्टियो लेसा, और कभी-कभी बुखार) और एसएफ (टर्बिडिटी, रंग) की मैक्रोस्कोपिक उपस्थिति दोनों के परिणामस्वरूप संदेह किया जा सकता है। इस मामले में, चिकित्सक एक सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण निर्धारित करता है, जो एक सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशाला द्वारा किया जाता है। - नमूना एकत्र होते ही एसएफ विश्लेषण (चरण 2-5) करें।
2. मैक्रोस्कोपिक परीक्षा
नोट: एसएफ नमूनों के मैक्रोस्कोपिक मूल्यांकन में व्यक्तिपरक, गुणात्मक और अर्ध-मात्रात्मक आकलन शामिल हैं। कोई संदर्भ मानक तराजू नहीं हैं, और कोई नियंत्रण नमूने का उपयोग नहीं किया जाता है।
- मिलीलीटर में व्यक्त एसएफ वॉल्यूम को एनोटेट करें। नमूने का रंग परिभाषित करें, जो हल्के से गहरे पीले रंग तक हो सकता है। रक्त की उपस्थिति को रिकॉर्ड करें।
- बैकलाइट में नमूने को देखकर और द्रव ट्यूब (चित्रा 2 ए) के माध्यम से मुद्रित पृष्ठ को पढ़ने में आसानी का निर्धारण करके स्पष्टता की डिग्री को परिभाषित करें।
- एक डिस्पोजेबल पिपेट से नमूना टपकाकर चिपचिपाहट का आकलन करें। एक लंबी स्ट्रिंग या ड्रॉप गठन क्रमशः अच्छी या खराब चिपचिपाहट को इंगित करता है (चित्रा 2 बी)।
- ट्यूब के माध्यम से और बैकलाइट में नमूने का अवलोकन करके ऊतक के टुकड़े या फाइब्रिन सहित कण सामग्री की उपस्थिति का आकलन करें।
3. माइक्रोस्कोपिक परीक्षण
नोट: एसएफ माइक्रोस्कोपिक विश्लेषण में साइटोलॉजिकल परीक्षा शामिल है, जिसमें कुल और अंतर सफेद रक्त कोशिका (डब्ल्यूबीसी) की गिनती और क्रिस्टल की खोज शामिल है।
- नीचे दिए गए चरणों का पालन करके कुल सेल गणना निर्धारित करें।
- हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके ईडीटीए ट्यूब में एकत्र एसएफ में ल्यूकोसाइट्स की कुल संख्या निर्धारित करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
- मालासेज़-पोटैन पिपेट (मार्क 0.5; सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करके ईडीटीए ट्यूब से एसएफ का 0.5 μL खींचें (पूरक चित्र 1)। उसी पिपेट के साथ, 0.1% मेथिलीन ब्लू समाधान (मार्क 11) का 9.5 μL खींचें। अंतिम कमजोर पड़ने की दर 20 गुना है।
- पिपेट को कोमल व्युत्क्रम द्वारा मिलाएं, पहली बूंदों को छोड़ दें, और श्लेष द्रव + मेथिलीन नीले घोल को गिनती कक्ष में डालें।
- नौ में से दो क्रमागत वर्गों में कोशिकाओं की गणना करें, और प्राप्त संख्या को 100 से गुणा करें (सरलीकृत सूत्र; पूरक चित्र 2)। डब्ल्यूबीसी को प्रति घन मिलीमीटर ल्यूकोसाइट्स की संख्या के रूप में व्यक्त करें।
नोट: सरलीकृत सूत्र: ल्यूकोसाइट्स (एन / मिमी3) = दो लगातार वर्गों x 100 में गिनी गई कोशिकाओं की संख्या। - पहले प्रकाशित रिपोर्ट16,17 (तालिका 1) के बाद डब्ल्यूबीसी की कुल संख्या के अनुसार एसएफ को वर्गीकृत करें।
- विभेदक सेल गणना करें।
- सुप्रावाइटल या पारंपरिक धुंधला13,18 का उपयोग करके पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर (पीएमएन) कोशिकाओं, मोनोसाइट्स और लिम्फोसाइटों का प्रतिशत निर्धारित करें।
- सुप्रावाइटल धुंधलापन के लिए, एसएफ की एक छोटी बूंद को क्रेसिल वायलेट और मेथिलीन ब्लू के साथ पूर्व-लेपित एक तैयार-से-उपयोग स्लाइड के केंद्र में रखें (पूरक चित्र 3; सामग्री की तालिका देखें)।
- एक कवरस्लिप के साथ कवर करें, और माइक्रोस्कोप विसर्जन तेल की एक बूंद रखें।
- पारंपरिक धुंधलापन (नियमित विश्लेषण के लिए कम उपयुक्त) के लिए एक हवा में सूखा एसएफ स्मीयर तैयार करें। एक साफ स्लाइड के अंत में एसएफ की एक छोटी बूंद डालें। दूसरी स्लाइड या कवरस्लिप का उपयोग करके, इसे आगे की गति के साथ स्लाइड के साथ फैलाएं। स्मीयर को हवा में सूखने दें।
- एक मानक मई-ग्रुनवाल्ड-गिम्सा प्रक्रिया18 के अनुसार नमूने को दाग दें।
- तेल विसर्जन उद्देश्य (1,000x) के तहत स्लाइड की जाँच करें।
- लगातार 100 कोशिकाओं की गणना करें और पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर कोशिकाओं, मोनोसाइट्स और लिम्फोसाइटों के बीच अंतर करें (चित्रा 3, पूरक चित्रा 4)।
- प्रत्येक श्रेणी में कुल संख्या को प्रतिशत के रूप में व्यक्त करें।
नोट: सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए, साइटोलॉजिकल परीक्षाएं एसएफ एकत्र होते ही या आर्थ्रोसेंटेसिस के 24-48 घंटे के भीतर की जानी चाहिए जब ठीक से संग्रहीत किया जाता है (4 डिग्री सेल्सियस)।
4. क्रिस्टल का पता लगाना
- एक अतिरिक्त ध्रुवीकरण फिल्टर और एक लाल प्रतिपूरक19 से लैस एक ध्रुवीकृत प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग करके पैथोलॉजिकल क्रिस्टल की उपस्थिति निर्धारित करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
- क्रिस्टल का पता लगाने के लिए स्लाइड तैयारी करें।
- इथेनॉल के साथ ऑप्टिकल पेपर या सॉफ्ट पेपर के साथ ग्लास स्लाइड को सावधानीपूर्वक साफ करें। ग्लास स्लाइड पर एसएफ की एक छोटी बूंद लागू करें।
- एक कवरस्लिप के साथ कवर करें और स्लाइड को माइक्रोस्कोप के नीचे रखें।
- क्रिस्टल की पहचान करें।
- कम शक्ति आवर्धन उद्देश्य का उपयोग करके माइक्रोस्कोप के नीचे स्लाइड पर ध्यान केंद्रित करें। 40x उद्देश्य के साथ एक उज्ज्वल क्षेत्र के तहत स्लाइड की सावधानीपूर्वक जांच करें। कोशिकाओं के अंदर और बाहर देखो।
- क्रिस्टल को उनके आकार और आकार के अनुसार पहचानें (उदाहरण के लिए, रोम्बोइडल, सुई के आकार का, रॉड के आकार का)।
- प्रकाश स्रोत और नमूने के बीच ध्रुवीकरण फ़िल्टर डालें। एक अंधेरे पृष्ठभूमि बनाने के लिए ध्रुवीकरण को तब तक घुमाएं जब तक कि इसकी ऑप्टिकल धुरी विश्लेषक (उद्देश्यों के ऊपर रखी गई) के लंबवत न हो।
- एक बार जब एक द्विध्रुवीय क्रिस्टल की पहचान हो जाती है, तो ध्रुवीकरण और नमूने के बीच प्रतिपूरक डालें और इसे क्रिस्टल के ऑप्टिकल अक्ष के समानांतर या लंबवत ले जाएं।
- क्रिस्टल द्वारा प्रकट रंग का निरीक्षण करें (तालिका 2)।
नोट: एमएसयू क्रिस्टल अंधेरे क्षेत्र में सुई के आकार के, चमकीले रूप से द्विध्रुवीय दिखाई देते हैं, और एक पीला / नारंगी रंग प्रदर्शित करते हैं जब उनकी धुरी प्रतिपूरक के समानांतर होती है। इसके विपरीत, लंबवत (नकारात्मक संकेत) स्थित होने पर वे नीले होते हैं (तालिका 2; चित्रा 4)। सीपीपी क्रिस्टल रॉड- या रोडमोइड जैसे क्रिस्टल होते हैं, जो ध्रुवीकृत प्रकाश के तहत कमजोर रूप से विभाजित होते हैं, और क्रमशः प्रतिपूरक (सकारात्मक संकेत) की धुरी के समानांतर या लंबवत संरेखित होने पर नीले या पीले रंग को प्रदर्शित करते हैं (तालिका 2; चित्रा 5)।
5. अलिज़रीन लाल धुंधलापन
- Alizarin लाल S (pH 4.1-4.3) का 2% समाधान तैयार करें, घोल को 0.22 μm फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करें, और इसे प्रकाश से दूर संग्रहीत करें।
- स्लाइड तैयार करने के लिए, एक साफ स्लाइड पर एलिजारिन लाल घोल (1: 1) की समान मात्रा के साथ एसएफ की एक बूंद मिलाएं। एक कवरस्लिप के साथ कवर करें और 400x आवर्धन पर जांच करें।
- माइक्रोस्कोप के तहत क्रिस्टल की पहचान करें।
नोट: परीक्षण सकारात्मक है जब चमकीले, गहरे लाल अवक्षेप संचारित प्रकाश के नीचे दिखाई देते हैं, एक गोल आकार और संकेंद्रित परतों के साथ। ध्रुवीकृत प्रकाश के तहत, वे दृढ़ता से20 (चित्रा 6) दिखाई देते हैं।
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Representative Results
ओए से प्रभावित बड़े जोड़ अक्सर सूज जाते हैं और एसएफ की महत्वपूर्ण मात्रा का उत्पादन करते हैं, जो आर्थ्रोसेंटेसिस15 के माध्यम से सूखा जाता है। आर्थ्रोसेंटेसिस के तुरंत बाद मूल्यांकन किए गए एसएफ की मैक्रोस्कोपिक विशेषताओं में अनिवार्य रूप से मात्रा, रंग, स्पष्टता और चिपचिपाहटशामिल है। उनकी कम विशिष्टता के बावजूद, वे सूजन की डिग्री पर प्रारंभिक डेटा प्रदान करते हैं। रंग एसएफ सेलुलरिटी और बाह्य मैट्रिक्स मैक्रोमोलेक्यूल्स के विखंडन की डिग्री पर निर्भर करता है। ओए वाले रोगियों से एकत्र किया गया एसएफ हल्का पीला होता है, एक छाया जो आमतौर पर गैर-भड़काऊ नमूनों से जुड़ी होती है, जबकि गहरा पीला सूजन बहाव से जुड़ा होता है (चित्रा 2)। नमूने में रक्त की छोटी मात्रा की उपस्थिति, उदाहरण के लिए, केशिका टूटने के कारण, थोड़ा नारंगी रंग में परिणत होता है। खूनी बहाव पर सावधानीपूर्वक विचार किया जाना चाहिए क्योंकि वे संभावित हेमथ्रोसिस का संकेत दे सकते हैं। स्पष्टता ओए वाले रोगियों से एकत्र किए गए एसएफ की एक पहचान है। वास्तव में, गैर-भड़काऊ एसएफ कोशिकाओं, मलबे, हाइलूरोनिक एसिड और फाइब्रिन टुकड़ों में खराब है, भड़काऊ एसएफ (चित्रा 2) की टर्बिड उपस्थिति के विपरीत।
चिपचिपाहट एक अच्छे भड़काऊ सूचकांक का प्रतिनिधित्व करती है क्योंकि यह मैट्रिक्स मैक्रोमोलेक्यूल्स की अखंडता से जुड़ी होती है, मुख्य रूप से हाइलूरोनिक एसिड (चित्रा 2)। ये अणु सूजन के दौरान डिपोलीमराइज्ड होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप कम चिपचिपा एसएफ होता है। रोग के चरण और गंभीरता के आधार पर, चिपचिपाहट को ओए में संरक्षित या थोड़ा कम किया जा सकता है।
ल्यूकोसाइट्स की संख्या ओए में कभी भी 500-1,000 कोशिकाओं / मिमी3 से अधिक नहीं होती है, और वे ज्यादातर मोनोसाइट्स (पूरक चित्रा 5 ए) और अन्य मोनोन्यूक्लियर कोशिकाएं जैसे सिनोवियोसाइट्स (पूरक चित्रा 5 बी) हैं। ओए एसएफ में सबसे प्रासंगिक और लगातार निष्कर्षों में से एक सीपीपी और बीसीपी क्रिस्टल से संबंधित है। सीपीपी क्रिस्टल को आसानी से क्षतिपूर्ति ध्रुवीकृत प्रकाश माइक्रोस्कोपी (चित्रा 5) के तहत पता लगाया जाता है, जबकि बीसीपी क्रिस्टल की पहचान उनके उप-सूक्ष्म आकार (चित्रा 6) के कारण अधिक कठिन हो जाती है। वास्तव में, एक एकल बीसीपी क्रिस्टल की लंबाई 1 μm से कम होती है, और हालांकि ये क्रिस्टल समुच्चय बनाते हैं, क्लंप गैर-द्विध्रुवीय अनाकार दिखने वाले ग्लोब्यूल्स के रूप में दिखाई देते हैं। हालांकि निरर्थक, सकारात्मक एलिज़रीन लाल धुंधलापन आम तौर पर बीसीपी क्रिस्टल की उपस्थिति को प्रकट करता है।
स्यूडोगाउट के विपरीत, जिसमें सीपीपी क्रिस्टल कई हैं और उच्च ल्यूकोसाइट गिनती और भड़काऊ नैदानिक विशेषताओं से जुड़े हैं, ओए में, एसएफ में सीपीपी क्रिस्टल की संख्या बहुत कम है और किसी भी परिवर्तित ह्यूमोरल प्रतिक्रिया से जुड़ी नहीं है। फिर भी, सीपीपी या बीसीपी क्रिस्टल के साथ एसएफ नमूने क्रिस्टल21 के बिना ओए की तुलना में भड़काऊ साइटोकिन्स के उच्च स्तर प्रदर्शित करते हैं। डब्ल्यूबीसी गिनती के बावजूद, क्रिस्टल वाले एसएफ भी पीएमएन कोशिकाओंके बढ़े हुए प्रतिशत से जुड़े हैं। नैदानिक दृष्टिकोण से, कैल्शियम क्रिस्टल और सूजन के बीच संबंध अधिक गंभीर बीमारी के विकास के बढ़ते जोखिम पर रोगियों के एक विशेष उप-समूह को परिभाषित करने में मदद कर सकता है।
चित्र 1: एक सूजे हुए घुटने की संयुक्त आकांक्षा । (ए) आर्थ्रोसेंटेसिस बाँझ सामग्री के साथ त्वचा के सटीक कीटाणुशोधन के बाद किया जाता है। एसएफ को कुल सेल गिनती के लिए (बी) ईडीटीए ट्यूबों में एकत्र किया जाता है और (सी) अंतर सेल गिनती और क्रिस्टल खोज के लिए नो-एडिटिव ट्यूब। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: भड़काऊ (बाएं) और गैर-भड़काऊ (दाएं) एसएफ नमूने की विशेषताएं। (ए) भड़काऊ (बाएं) और गैर-भड़काऊ (दाएं) एसएफ नमूनों का रंग और स्पष्टता। (बी) "स्ट्रिंग" परीक्षण के माध्यम से मूल्यांकन किए गए गैर-भड़काऊ एसएफ की चिपचिपाहट। प्रयोगशालाकार सिरिंज या पिपेट से एसएफ की गिरती बूंद से बनने वाली "स्ट्रिंग" की लंबाई का मूल्यांकन करता है। चित्र में नमूना एक लंबी स्ट्रिंग का उत्पादन करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3: एसएफ कोशिकाओं को एक पूर्व-दाग वाली स्लाइड में देखा गया । (ए) बहुलोबित नाभिक और दो मोनोसाइट्स के साथ पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर (पीएमएन) कोशिकाओं का एक समूह जो छवि के निचले दाईं ओर उनके भारी नाभिक के साथ होता है। (बी) छवि के केंद्र में साइटोफैगोसाइटिक मोनोन्यूक्लियर (सीपीएम) सेल के साथ पीएमएन कोशिकाएं और मोनोसाइट्स (एम)। उज्ज्वल क्षेत्र; 1,000x आवर्धन. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: इंट्रासेल्युलर एमएसयू क्रिस्टल। क्रिस्टल एक विशिष्ट सुई आकार बनाता है जो (ए) संचारित, (बी) ध्रुवीकृत, और (सी) क्षतिपूर्ति ध्रुवीकृत प्रकाश (400x) के तहत दिखाया गया है। तीर 3 फिल्टर (प्रतिपूरक) के अभिविन्यास को इंगित करता है, जो क्रिस्टल की लंबी धुरी के समानांतर है। इस विन्यास में, क्रिस्टल पीला / नारंगी दिखाई देता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: इंट्रासेल्युलर सीपीपी क्रिस्टल। क्रिस्टल को (ए) संचारित, (बी) ध्रुवीकृत, और (सी) क्षतिपूर्ति प्रकाश (400x) के तहत दिखाया गया है। तीर 3 फिल्टर (प्रतिपूरक) के अभिविन्यास को इंगित करता है, जो क्रिस्टल की लंबी धुरी के समानांतर है। इस विन्यास में, क्रिस्टल नीला दिखाई देता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 6: ओए, 400एक्स से एसएफ के एलिजारिन लाल परीक्षण के लिए सकारात्मकता। लाल अवक्षेप संचारित प्रकाश (बाएं पैनल) और ध्रुवीकृत प्रकाश (दाएं पैनल), 400x आवर्धन के तहत दिखाई देते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
तालिका 1: ल्यूकोसाइट्स की कुल संख्या के अनुसार एसएफ की सूजन की डिग्री। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।
तालिका 2: एमएसयू और सीपीपी क्रिस्टल द्वारा प्रदर्शित रंग क्षतिपूर्ति ध्रुवीकृत प्रकाश और विघटन के संकेतों के तहत। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।
पूरक चित्र 1: ल्यूकोसाइट्स के लिए मालासेज़-पोटैन के अनुसार रक्त पतला करने वाले पिपेट। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्र 2: डब्ल्यूबीसी गणना के लिए चैंबर ग्रिड का लेआउट। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्रा 3: त्वरित और आसान अंतर डब्ल्यूबीसी आकृति विज्ञान मूल्यांकन के लिए पूर्व-दाग, उपयोग के लिए तैयार स्लाइड। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्र 4: एसएफ स्मीयर का मई-ग्रुनवाल्ड-गिम्सा धुंधलापन। ईोसिनोफिलिक ग्रैन्यूल स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं (तीर), 1,000x आवर्धन। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक चित्रा 5: एसएफ नमूने से एकत्र किए गए मोनोसाइट और सिनोवियोसाइट्स। (ए) पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस (1,000x) वाले रोगी से एकत्र किए गए एसएफ नमूने से मोनोसाइट। (बी) पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस (1,000x) वाले रोगी से एकत्र किए गए एसएफ नमूने से सिनोवियोसाइट्स। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
ओए में, एसएफ विश्लेषण सरल चरणों के माध्यम से रोग विशेषताओं को परिभाषित करने में मदद करता है: कुल और अंतर ल्यूकोसाइट गिनती और सीपीपी और बीसीपी सहित क्रिस्टल की खोज। इसके अलावा, एमएसयू क्रिस्टल का पता लगाने से महत्वपूर्ण कोमोर्बिडिटी उजागर हो सकती है।
कम लागत और सरल निष्पादन के बावजूद, अनुभवहीन विश्लेषकों के कारण परीक्षणों की संवेदनशीलता और परिणामों की विश्वसनीयता प्रभावित हो सकती है- मुख्य रूप से क्योंकि यह क्रिस्टल पहचान से संबंधित है। विश्लेषक का प्रशिक्षण और अनुभव सीपीपी और एमएसयू क्रिस्टल के आकार और विभाजन को अलग करने और उनके आकार को उनके उल्लंघन की डिग्री से मिलान करने में महत्वपूर्ण हैं। कुछ अध्ययनों ने विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच क्रिस्टल पहचान में विसंगतियों की सूचना दी है; इस प्रकार, विश्वसनीय औरसुसंगत परिणाम प्राप्त करने के लिए प्रयोगशाला तकनीशियनों को प्रशिक्षण आवश्यक है। क्रिस्टल की पहचान भी द्विध्रुवीय कणों की गलत व्याख्या से प्रभावित होती है जो रोगजनक क्रिस्टल के लिए भ्रमित हो सकते हैं। ये बाहरी स्रोतों (यानी, धूल या फाइबर) से प्राप्त हो सकते हैं या संयुक्त गुहा (यानी, कॉर्टिकोस्टेरॉइड या लिपिड) के अंदर मौजूद हो सकते हैं। स्लाइड की पूरी तरह से सफाई पूर्व को हल कर सकती है, लेकिन बाद वाले को केवल प्रशिक्षण और अनुभव14 के माध्यम से दूर किया जा सकता है।
एसएफ विश्लेषण की एक और सीमा बीसीपी पहचान के लिए अलीजारिन लाल धुंधलापन के उपयोग से संबंधित है। जैसा कि पहले उल्लेख किया गया है, यह एक विशिष्ट परीक्षण नहीं है, और इस प्रकार परिणामों की व्याख्या करते समय सावधानी बरतनी चाहिए। विश्लेषक को एक अजीब आकृति विज्ञान (चित्रा 11) के साथ लाल अवक्षेप को पहचानने में सक्षम होना चाहिए। अधिक संवेदनशील तकनीकों, जैसे स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम), का उपयोग बीसीपी क्रिस्टल की पहचान करने के लिए किया जा सकता है, लेकिन रोजमर्रा के नैदानिक अभ्यास में एसएफ की नियमित परीक्षाओं में उनका उपयोग नहीं किया जाता है। महत्वपूर्ण रूप से, यह दिखाया गया है कि एलिज़रीन लाल धुंधलापन के साथ प्राप्त परिणाम एसईएम22 द्वारा प्राप्त लोगों के साथ एक अच्छा, यद्यपि इष्टतम नहीं, सामंजस्य दिखाते हैं, इस प्रकार पूर्व के मूल्य को बढ़ाते हैं।
विचार करने के लिए एक और प्रमुख मुद्दा यह है कि आर्थ्रोसेंटेसिस क्या करना है जब आर्थ्रोसेंटेसिस बहुत कम मात्रा में एसएफ पैदा करता है और नमूने को कैसे स्टोर किया जाए। जब एसएफ की केवल कुछ बूंदें छोटे जोड़ों से एकत्र की जाती हैं, जैसे कि इंटर-और मेटाकार्पोफालांगल जोड़ों और कलाई, सामग्री को सिरिंज में रखने और इसे सीधे एक साफ ग्लास स्लाइड पर फैलाने की सिफारिश की जाती है। एक माइक्रोपिपेट और कुछ ट्रिक्स का उपयोग करके, एक से अधिक स्लाइड तैयार करना और एक पूर्ण विश्लेषण करना संभव है। विस्तार से, विश्लेषक क्रिस्टल खोज के लिए तैयार स्लाइड से गिनती पिपेट के साथ एसएफ खींचता है और हेमसाइटोमीटर कक्ष तैयार करता है, जबकि कुछ माइक्रोलीटर को सुपरवाइटल धुंधला करने के लिए एस्पिरेटेड किया जा सकता है।
जहां तक भंडारण का सवाल है, एसएफ नमूने समय के साथ खराब हो जाते हैं, और उनके विश्लेषण के लिए विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए नई तैयारी की आवश्यकता होती है। वैकल्पिक रूप से, एसएफ को 4 डिग्री सेल्सियस पर संरक्षित किया जा सकता है और साइटोलॉजिकल परीक्षा के लिए 24 घंटे के भीतर और 48 घंटे से अधिक बाद में उपयोग नहीं किया जा सकता है। सेल क्लंपिंग और एसएफ जमावट से बचने के लिए, कम से कम एक ईडीटीए ट्यूब में नमूना एकत्र करने पर ध्यान दिया जाना चाहिए। लंबे समय तक -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत जमे हुए एसएफ नमूने केवल क्रिस्टल खोज के लिए उपयोग किए जा सकते हैं।
एसएफ विश्लेषण रुमेटोलॉजी में एक अपरिवर्तनीय पैथोग्नोमोनिक परीक्षण है, इसकी उपयोगिता, निष्पादन की सादगी और सामर्थ्य के कारण। एसएफ विश्लेषण के भविष्य के अनुप्रयोगों के लिए मुख्य चुनौती आमवाती रोगों का अधिक सटीक निदान है। यह इस विधि को अधिक उन्नत और अभिनव प्रौद्योगिकियों23 के साथ एकीकृत करके संभव होगा, जिससे एसएफ संरचना को चिह्नित करना और सूजन की साइट पर विशिष्ट आणविक बायोमार्कर और प्रोटिओमिक्स की पहचान करना संभव हो जाएगा।
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Disclosures
सभी लेखक ों ने हितों के टकराव का खुलासा नहीं किया है।
Acknowledgments
लेखक श्लेष द्रव विश्लेषण के क्षेत्र में अपने बहुमूल्य परामर्श के लिए प्रोफेसर लियोनार्डो पुंज़ी और इसके समर्थन के लिए पडोवा विश्वविद्यालय अस्पताल को स्वीकार करना चाहते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alizarin red S | Merck | A5533 | For BCP crystal search |
| Burker chamber | Merck | BR718905 | For total white blood cell count |
| Cover glasses | Merck | C7931 | For microscopic examination |
| EDTA tubes | BD | 368861 | For SF collection |
| Glass slides | Merck | S8902 | For crystal search |
| Lambda filter (compensator) | Any | Refer to microscope company | For crystal identification |
| Malassez-Potain pipette | Artiglass | 54830000 | For dilution of synovial fluid |
| Methylene blue solution | Merck | 3978 | For total white blood cell count |
| Polarized microscope | Leica, Nikon, others | Depending on the model and company | For complete synovial fluid analysis |
| Polarizing lens | Any | Refer to microscope company | For crystal identification |
| Testsimplet | Waldeck | 14386 | Supravital staining for cell differentiation |
References
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