تصف هذه المخطوطة طريقة متسقة لإجراء عمليات استئصال خصية القوارض واستئصال المبيض بسرعة للبقاء على قيد الحياة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استئصال الخصية واستئصال المبيض لتقليل إنتاج هرمون الجنس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تلعب إشارات هرمون الجنس دورا مهما في أنظمة الأعضاء المتعددة وكذلك في تطور الأمراض المختلفة ، بما في ذلك الأمراض التنكسية العصبية. يسمح التلاعب بمستويات هرمون الجنس في نظام نموذج الفئران بدراسة تأثيرها على الأعضاء / الأنسجة وضمن تطور المرض. يوفر استئصال الخصية - الاستئصال الجراحي للخصيتين - واستئصال المبيض - الاستئصال الجراحي للمبيض - طريقة لاستنفاد الهرمونات الجنسية الداخلية بحيث يمكن توفير مستويات هرمون دقيقة من خلال الأدوية أو طرق التوصيل الأخرى. هنا ، نقدم طرقا سريعة وطفيفة التوغل لكل من استئصال الخصية واستئصال المبيض في نظام نموذج الفئران لتقليل الهرمونات الجنسية. يفصل هذا البروتوكول التحضير الجراحي واستئصال الخصيتين من خلال كيس الصفن ، واستئصال المبيضين عن طريق شقين في الظهر الجانبي الأيمن والأيسر.
المقدمة
الخصيتان والمبيضان هما الجهازان الأساسيان المسؤولان عن إنتاج الهرمونات الجنسية. سلسلة الاتصالات الهرمونية التي تؤدي إلى إنتاج هرمون التستوستيرون والإستروجين هي عملية مميزة بشكل جيد تبدأ في منطقة ما تحت المهاد مع إطلاق هرمون إفراز الغدد التناسلية (GnRH)1. يؤدي إطلاق GnRH إلى إفراز الهرمون اللوتيني (LH) والهرمون المنبه للجريب (FSH) من الغدة النخامية. عندما تدخل هذه الهرمونات إلى مجرى الدم ، فإنها تؤثر بعد ذلك على الأنسجة الأخرى في الجسم. الهدف الأساسي ل LH هو الخصيتين (عند الذكور) والمبيضين (عند الإناث)2. استجابة ل LH ، تنتج الخصيتان وتطلق هرمون التستوستيرون3. وبالمثل ، تنتج المبايض هرمون الاستروجين4. في حين أن الآثار المقصودة لهذه الهرمونات هي إعداد الخلايا والجسم للإخصاب وضمان عمل الجهاز التناسلي ، يمكن أن تتأثر العديد من أجهزة الجسم الأخرى.
تم ربط الهرمونات الجنسية بالعديد من الوظائف الفسيولوجية. على سبيل المثال، يساعد الإستروجين في الحفاظ على الاتزان الداخلي للعظام عن طريق منع ارتشاف العظام بواسطة الخلايا الآكلة للعظم. لهذا السبب ، يمكن استخدام نماذج الفئران المبيضة لدراسة فسيولوجيا أمراض العظام مثل هشاشة العظام5،6،7. التستوستيرون والإستروجين هي أيضا أهداف بحثية للعديد من أمراض القلب والأوعية الدموية والأمراض التنكسية العصبية. في الآونة الأخيرة ، تم ربط إنتاج هرمون التستوستيرون المرتفع إلى جانب النظام الغذائي عالي الدهون بالإجهاد التأكسدي الوعائي8. في الدماغ ، تسببت التغيرات في LH بعد استئصال المبيض في حدوث تغييرات في الذاكرة المكانية9. أصبح الحد من هرمون الاستروجين بعد استئصال المبيض أيضا نظاما نموذجيا لدراسة موت الخلايا في الحصين ، حيث يمكن أن يؤدي ذلك إلى موت الخلايا المبرمج ، مما يؤدي إلى عجز في الذاكرة10. أظهر التستوستيرون أيضا دورا في نمو الكلى في كل من نماذج الفئران والبشر بعد زرع الكلى11.
يسمح إنشاء نموذج الفئران المحرومة من الهرمونات بدراسة الهرمونات الجنسية وشلالات هرموناتها على الأمراض أو الأنسجة المختلفة. يمكن تحقيق ذلك عن طريق الاستئصال الجراحي للخصيتين (استئصال الخصية) أو المبايض (استئصال المبيض). يمكن إجراء هذا الإجراء في الفئران من أي سلالة عندما تكون صغيرة مثل سن الفطام (واحد وعشرون يوما) أو أي عمر بالغ. يتم إجراء استئصال المبيض في إناث الفئران ، بينما يتم إجراء استئصال الخصية في ذكور الفئران. عن طريق إزالة هذه الأعضاء ، يمكن تخفيض مستويات هرمون الاستروجين والتستوستيرون ، والعديد من مشتقاتها ، مثل البروجسترون ، بشكل كبير12,13. يمكن أن تكون عملية إجراء استئصال الخصية أو استئصال المبيض في الفئران سريعة وطفيفة التوغل باستخدام التقنية المناسبة. يمكن أن يسمح الاستئصال السريع لهذه الأعضاء بطريقة آمنة وفعالة بالمعالجة الجراحية السريعة مع الحفاظ على الحد الأدنى من أعداد الفئران من خلال الحصول على معدل بقاء بنسبة 100٪ عند إجرائها بشكل صحيح. هنا ، نقوم بتفصيل بروتوكول للاستئصال السريع للخصيتين والمبيضين ونوضح المراقبة المناسبة بعد الجراحة لتمكين الباحثين من إجراء هذه الجراحة بسرعة وأمان. نقوم أيضا بتضمين أمثلة مرئية للأعضاء التناسلية والأنسجة المحيطة بها لتزويد الجراح بمعالم تشريحية عند إجراء هذا الإجراء.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات في UTSW (APN # 2019-102840).
1. استئصال الخصية الفئران
- قم بإعداد حقل عمل معقم وتأكد من تعقيم الأدوات الجراحية اللازمة وتوافرها بسهولة. اتبع الممارسات المعقمة لجراحة بقاء القوارض.
- تسجيل وزن الفأر الذكر وإدارة طريقة التخدير المفضلة وفقا للإرشادات المؤسسية. في هذا البروتوكول ، تم توصيل 2٪ إيزوفلوران عبر مبخر دقيق للحفاظ على التخدير. قبل الإجراء ، قم بإعطاء دواء الألم وفقا للإرشادات المؤسسية. في هذا البروتوكول ، تم إعطاء 1.0 ملغم / كغم من البوبرينورفين SR و 5 ملغ / كغ من ميلوكسيكام تحت الجلد.
- بمجرد أن يكون الفأر تحت التخدير ، قم بتغطية عيون الحيوان بجل العين المزلق لتجنب تكوين إصابة العين أو جفاف القرنية أو القرحة.
- قبل المتابعة ، تأكد من مستوى التخدير المناسب عن طريق إجراء اختبار استجابة قرصة إصبع القدم.
- قم بإعداد المنطقة الجراحية للحيوان قبل وضعها على المجال الجراحي المعقم المغطى بالفراء.
- بعد ذلك ، احلق المناطق الأربية وكيس الصفن في الماوس باستخدام زوج من كليبرز .
ملاحظة: حلق أسفل البطن أعلى من القضيب سيسمح برؤية أفضل أثناء الجراحة. - باستخدام قضيب مسجل بالقطن ، ضع طبقة رقيقة من كريم مزيل الشعر (انظر جدول المواد) على جلد الحيوان ، مع تغطية كيس الصفن والمنطقة المحيطة به التي تم حلقها للتو. انتظر لمدة 30 ثانية وقم بإزالة الكريم بقطعة من الشاش النظيف.
- استخدم 70٪ من إسفنجات الشاش المبللة بالإيثانول لمسح أي كريم وشعر متبقي من المنطقة.
ملاحظة: 70٪ إيثانول في هذه الخطوة هو للمساعدة في الإزالة الكاملة لكريم مزيل الشعر. يتم التحضير المطهر لموقع الجراحة في الخطوة 1.8.
- بعد ذلك ، احلق المناطق الأربية وكيس الصفن في الماوس باستخدام زوج من كليبرز .
- نقل الفأر إلى منطقة الجراحة والتأكد من توفر مصدر حرارة للحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان أثناء العملية. ضع الحيوان في وضع ضعيف على ستارة جراحية واستخدم شريطا لاصقا ناعما للصق أقدام الفأر بالحصيرة الجراحية.
- إذا صعدت الخصيتان إلى البطن، فجس البطن بحذر حتى تنزل الخصيتان. استخدم يدك التي ترتدي قفازا لتطبيق ضغط التدحرج اللطيف لأسفل على البطن.
ملاحظة: من الأسهل إجراء هذه الجراحة تحت نطاق تشريح أو باستخدام زوج من العدسات لتحسين التكبير. في حالة إجراء ذلك تحت نطاق تشريح ، خذ لحظة لوضع كيس الصفن للماوس تحت المجال البصري للنطاق. يمكن استخدام شريط ناعم للصق أرجل الفأر أو بطنه بالمجال الجراحي لضمان بقائه في الموضع الصحيح. - افرك الجلد باستخدام مقشر بيتادين الجراحي (أو مقشر مطهر مماثل للبشرة) ، متبوعا بفرك الكحول بنسبة 70٪ ثلاث مرات على الأقل لضمان تطهير الجلد بشكل صحيح. لكل فرك ، افرك بحركة شعاعية للخارج ، بحيث يتم تنظيف منتصف موقع الشق أولا وينتهي بتنظيف الحد الخارجي للمنطقة الجراحية المحلوقة أخيرا.
- في هذا الوقت ، ارتد قفازات جراحية معقمة. للخطوات التالية من الإجراء ، استخدم تقنيات التعقيم. قم بتغطية الفأر بستارة جراحية معقمة بشق صغير (مقطوع إلى حوالي 0.5-1 بوصة مربعة لتناسب موقع الجراحة) فوق الحيوان لتغطية الجسم في مادة الستارة.
- قم بإنشاء شق خط الوسط البطني في كيس الصفن بطول 1 سم -1.5 سم تقريبا باستخدام شفرة مشرط جراحي أو أدوات مماثلة وفقا لإرشادات رعاية الحيوان المؤسسية المعتمدة.
- أمسك بالحدود المقطوعة للجلد ، استخدم أداة حادة مائلة لفصل الجلد عن الأنسجة السفلية. خذ بعض الوقت للقيام بذلك على الحدود الجانبية والعلوية والسفلية للشق.
- اعزل الخصية باستخدام الملعقة والملقط لتحريك الشق في الجلد ليتم توسيطه فوق إحدى الخصيتين. إذا كان ذلك صعبا ، فارجع إلى 1.11 وافصل الجلد عن الطبقات السفلية.
- خذ زوجا من الملقط المنحني وضعه على جانبي الخصية. ضع ضغطا هبوطيا لطيفا لإضفاء الطابع الخارجي على الخصية. أمسك بالطبقة الرقيقة والشفافة من العضلات الموجودة أعلى الخصية باستخدام الملقط. هذه هي عضلة المشرقة. يتم التحقق من طبقة العضلات الصحيحة من خلال مراقبة هذه الطبقة ودورانها ، وتتحرك بشكل مستقل عن الخصية تحتها.
ملاحظة: يتم تأكيد تحديد الأنسجة الصحيحة من خلال شفافيتها وقدرتها على التحرك بشكل مستقل عن الأنسجة الكامنة.- تعامل مع الأنسجة العضلية باستخدام الملقط حتى يتم الإمساك بقمة العضلات. يجب أن يكون هذا هو الجزء الأدنى ، مع وجود الخصيتين والبربخ الذيلي تحتها.
- أمسك عضلة المشمرة بالملقط وتحرك برفق بعيدا عن الخصيتين والبربخ. قم بعمل شق 0.5 سم من خلال عضلة المشمرة في الخصية الأولى عند قمتها باستخدام زوج صغير من مقص زنبرك فاناس.
- ضع مشبك قفل على الحافة الخلفية لعضلة المشمرة المقطوعة. استخدم زوجا ضيقا من مرقئ الرؤوس أو زوجا من حوامل الإبر الدقيقة المقفلة. بمجرد تثبيت الأنسجة ، ضع الأداة برفق على الجانب الجانبي للماوس للحفاظ على الأنسجة مثبتة أثناء الخطوات الإجرائية التالية.
- استخدم الملقط للاستيلاء على الحد العلوي للشق الذي تم إجراؤه في الخطوة 1.14. أثناء سحب طرفي عضلة المشمرة ، استخدم زوجا آخر من الملقط للوصول إلى داخل التجويف وإمساك الخصية برفق.
- اسحبه للخارج من خلال الفتحة الموجودة في العضلات. احرص على مراقبة أي علامات على الأوعية الدموية والدم في المجال الجراحي.
- ستظهر الخصية والبربخ والحبل المنوي المتصل والأوعية الدموية عندما يتم إخراج الأنسجة بشكل صحيح.
- بالقرب من النهاية الذيلية الظهرية للبربخ والخصية ، هناك نقطة ليفية من ربط الخصية إلى عضلة المشمرة. لف الأنسجة الخارجية بشكل جانبي لتحديد نقطة الإدخال هذه. اقطع هذا لتجنب تلف العضلات والسماح بمزيد من العزلة والتصور للأنسجة. استخدم زوجين من الملقط لأداء تقنية المشبك والتمزق.
- ابحث عن الأنسجة الدهنية حول الخصية من وسادة الدهون الأربية. استخدم زوجا من الملقط للإمساك بوسادة الدهون واسحبها برفق لإضفاء الطابع الخارجي عليها.
- لا تمسك بالأوعية الدموية التي تنتقل على طول وسادة الدهون ، لأن سحب هذا يمكن أن يؤدي إلى نزيف.
- حدد موقع الحبل المنوي والأوعية الدموية ووسادة الدهون المتبقية القريبة من الأنسجة الخارجية واستخدم زوجا من مرقئ لتثبيتها. أثناء الاحتفاظ بتوتر طفيف على الخصية البعيدة ، قم بكي الحبل المنوي والأوعية الدموية البعيدة عن مشبك المرقئ.
- بمجرد الانتهاء ، حرر ببطء المشبك القريب من الطرف المكوي وتحقق من علامات النزيف. إذا كان موجودا ، كرر هذه الخطوة. من المفيد استخدام زوج من الملقط لتثبيت التوتر اللطيف على الطرف البعيد للنسيج الذي يتم كيه.
- اسمح للجذع المقطوع للحبل المنوي بالتراجع مرة أخرى إلى الجسم. أمسك طرفي العضلة المشرقة واجمعهما معا. تقييم حجم القطع في الأنسجة ، وإغلاق الأنسجة باستخدام 4-0 أو 5-0 خيوط قابلة للامتصاص. اعتمادا على حجم شق ، ستكون هناك حاجة إلى 1 أو 2 الغرز. تقليم أطراف خياطة إلى 0.5 سم باستخدام مقص خياطة.
- كرر الخطوات 1.13-1.20 على الجانب الآخر من كيس الصفن لإزالة الخصية الثانية.
- استعد لإغلاق شق الجلد.
- ضمان الارقاء الجيد لكل من جذوع الأنسجة. سيؤدي ضعف الإرقاء إلى نزيف متبقي في المجال الجراحي. إذا حدث هذا ، حدد موقع النزيف والكي. يتم تجنب ذلك عن طريق التلاعب البطيء والدقيق للأنسجة بأدوات حادة.
- إذا شوهد الدم في المجال الجراحي ، فاستخدم أداة تطبيق معقمة ذات رأس قطني لتجفيف المنطقة للحصول على تصور أفضل. استخدم حقنة لتقطير محلول ملحي على المنطقة لري أي دم أو سائل بعيدا عن المجال الجراحي.
- اسحب جانبي شق الجلد معا لإعداده للإغلاق. تأكد من أن الأطراف المخيطة لشقوق المشمرة لا تبرز في شق الجلد. إذا لزم الأمر ، قم بقص نهايات الخيط.
- أغلق الجلد.
- في حالة استخدام مشابك الجرح ، استخدم الملقط لتحريك الجلد وسحبه بعيدا عن الأنسجة الكامنة. ضع مشبك جرح واحد في المنتصف فوق الشق. تأكد من أن الجلد مقطوع جيدا. إذا كان الشق كبيرا جدا بحيث لا يمكن لمقطع جرح واحد إغلاقه بشكل كاف ، فيمكن تطبيق غراء الجلد الجراحي على الأجزاء العلوية والسفلية من الشق.
- في حالة استخدام الغرز ، ضع العدد المطلوب من الغرز عبر الجلد ، دون الإمساك بالأنسجة الكامنة. سيتطلب هذا النوع من الشق 2-3 خيوط متقطعة مفردة باستخدام 4-0 مادة خياطة غير قابلة للامتصاص.
- نظف الجلد حول موقع الجراحة بلطف باستخدام محلول ملحي وأداة تطبيق معقمة ذات رأس قطني لإزالة أي دم جاف أو فرك مطهر متبقي.
2. استئصال المبيض الفئران
- قم بإعداد حقل عمل معقم وتأكد من تعقيم الأدوات الجراحية اللازمة وتوافرها بسهولة. اتبع الممارسات المعقمة لجراحة بقاء القوارض.
- سجل وزن أنثى الفأر وقم بإدارة طريقة التخدير المفضلة وفقا لإرشاداتك المؤسسية. في هذا البروتوكول ، تم توصيل 2٪ إيزوفلوران عبر مبخر دقيق للحفاظ على التخدير. قبل الإجراء ، قم بإعطاء دواء الألم وفقا للإرشادات المؤسسية الخاصة بك. في هذا البروتوكول ، تم إعطاء 1.0 ملغم / كغم من البوبرينورفين SR و 5 ملغ / كغ من ميلوكسيكام تحت الجلد.
- تطبيق جل العين المزلق على عيون الحيوان لتجنب تكوين إصابة العين أو جفاف القرنية أو القرحة. تأكد من توفر مصدر حرارة للحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان أثناء العملية. تأكد من مستوى التخدير المناسب عن طريق التحقق من استجابة قرصة إصبع القدم.
- تحضير المنطقة الجراحية للحيوان قبل وضعها في المجال الجراحي.
- حلق الشعر بلطف على المنطقة الظهرية الجانبية من ظهر الحيوان باستخدام زوج من كليبرز . قم بإزالة الشعر من المنطقة فوق الحدود العلوية للوركين وأسفل الحد السفلي للقفص الصدري ، وكذلك المناطق الواقعة بين هذه المعالم.
- باستخدام قضيب ذو رأس قطني ، ضع طبقة من كريم مزيل الشعر على جلد الحيوان ، تغطي المنطقة التي تم حلقها للتو. انتظر لمدة 30 ثانية وأزل الكريم بقطعة من الشاش ، وأزل الشعر الناعم المتبقي.
- استخدم إسفنجة شاش مبللة بالإيثانول بنسبة 70٪ لمسح أي كريم وشعر متبقيين من منطقة الجراحة.
ملاحظة: 70٪ إيثانول في هذه الخطوة هو المساعدة في إزالة كريم مزيل الشعر تماما. يتم إجراء التحضير المطهر لموقع الجراحة في الخطوة 2.5.
- ضع الحيوان في الوضع الجانبي (للشق لإزالة مبيض واحد في كل مرة) في المجال الجراحي وتأكد من توفر مصدر للحرارة. افرك منطقة الجراحة باستخدام مقشر بيتادين الجراحي (أو مقشر مطهر مماثل للجلد) ، متبوعا بنسبة 70٪ كحول ثلاث مرات على الأقل لضمان تطهير الجلد بشكل صحيح. لكل فرك ، فرك في حركة شعاعية للخارج ، بحيث يتم فرك منتصف الشق أولا ويتم تنظيف الحد الخارجي للمنطقة الجراحية المحلوقة أخيرا.
- في هذا الوقت ، ارتد قفازات جراحية معقمة. للخطوات التالية من الإجراء ، استخدم تقنيات التعقيم. ضع ستارة جراحية بها شق صغير (قطع ما يقرب من 0.5-1 بوصة مربعة في الستارة لتناسب موقع الجراحة) فوق الحيوان بحيث يتم تغطية الجسم بمادة الستارة.
- حدد الموقع المثالي للشق الجراحي من خلال إيجاد نقطة المنتصف بين الوركين وأضلاع الفأر (انظر الشكل 2). أمسك الجلد بالملقط وقم بعمل شق 1.0 سم في الجلد في هذا الموقع.
- استخدم أداة ذات رأس غير حاد (مسبار أو ملعقة جراحية أو مرقئ غير حاد) لفصل الجلد عن الأنسجة العضلية السفلية. خذ بعض الوقت للقيام بذلك على الحدود الجانبية والعلوية والسفلية للشق.
- حدد موقع جدار العضلات الظهرية الجانبية للبطن. إذا لزم الأمر ، قم بإزالة الأنسجة الدهنية التي تقع بين الجلد وطبقات العضلات. في الفئران الناضجة ، يكون هذا النسيج الدهني أكثر بروزا. حرك هذا النسيج الدهني نحو الطرف الذيلي للفأر ، وكشف جدار العضلات.
- يتم تمييز الأنسجة الدهنية عن جدار البطن حسب اللون: تظهر الأنسجة الدهنية بيضاء شاحبة وتكمن أكثر سطحية ، بينما يظهر جدار البطن ورديا وأعمق من الأنسجة الدهنية.
- أمسك جدار البطن بملقط أسنان الفئران وقم بعمل شق 0.5 سم فيه.
- أمسك حدا واحدا من هذا الشق بزوج واحد من الملقط ، واستخدم زوجا ثانيا للوصول إلى داخل تجويف الجسم ، وابحث عن المبيض وقرن الرحم ووسادة الدهون. اسحب هذا برفق من خلال شق في جدار العضلات لفصل العضلات عن الأنسجة الكامنة وإخراجها من الخارج. حدد الانتقال بين قرن الرحم والمبيض.
- قطع المبيض عن طريق إجراء تقنية السحق والتمزق.
- ضع مشبكا واحدا على الطرف البعيد من قرن الرحم وضع المشبك الثاني بعيدا عن الأول. أثناء الضغط بقوة مع كلا المشبكين ، حرك المشبك البعيد بعيدا عن الجسم ، وتمزيق الاتصال بينهما. لتقليل النزيف وتلف الأنسجة ، حافظ على المشبك القريب ثابتا أثناء هذه العملية واحرص على عدم سحبه بعيدا عن الجسم.
- بدلا من ذلك ، استخدم الكي. استخدم زوجا من الملقط أو مرقئ لتثبيت قرن الرحم بالقرب من نقطة الكي المطلوبة. استخدم أداة الكي لقطع الأنسجة.
- حرر المشبك القريب برفق وببطء وتحقق من علامات النزيف.
- اسمح لجذع الأنسجة بالتراجع إلى تجويف الجسم. أمسك جدار البطن واسحب برفق لأعلى. لا تجبر جذع الأنسجة على الداخل ، لأن هذا يزيد من احتمال حدوث نزيف.
- حدد حدود الشق في جدار العضلات واجمعهم معا للتحضير لخياطته.
- ضع 1-2 خيوط متقطعة مفردة في جدار عضلات البطن باستخدام 4-0 مادة خياطة قابلة للامتصاص. تقليم أطراف خياطة إلى 0.5 سم باستخدام مقص خياطة.
- أغلق الشق عن طريق السماح للجلد بالعودة إلى حالة الراحة الطبيعية ثم تحريكه لأعلى ، مع الحرص على عدم الإمساك بالأنسجة الكامنة أو نهايات مادة الخياطة. ضع 1-2 مشابك جرح على الجلد المقطوع. بناء على الإرشادات المؤسسية الخاصة بك ، يمكن أيضا إغلاق الجلد باستخدام 4-0 مادة خياطة غير قابلة للامتصاص.
- لإزالة المبيض الآخر ، قم بتبديل موضع الماوس بحيث يكون الجانب الجانبي الآخر متجها لأعلى. كن لطيفا عند تبديل موضع الماوس حتى لا تضغط كثيرا على الجلد المقطوع بالجرح من الخطوة 2.17.
- على هذا الجانب ، كرر الخطوات 2.5 - 2.17.
- نظف الجلد حول موقع الجراحة بلطف باستخدام محلول ملحي وأداة تطبيق معقمة ذات رأس قطني لإزالة أي دم جاف أو فرك مطهر متبقي.
3. رعاية ما بعد الجراحة
- وفقا للإرشادات المؤسسية الخاصة بك ، قم بإعطاء دواء الألم لمدة تصل إلى 72 ساعة بعد العملية. توثيق الإجراء الجراحي للحيوانات ، مع ملاحظة التاريخ والوقت والتخدير والمسكن المستخدم. هنا ، يتم إعطاء البوبرينورفين بطيء الإطلاق وميلوكسيكام قبل الجراحة.
- بعد الانتهاء من جراحة الحيوانات ، قم بنقلها إلى قفص نظيف مبطن بمنشفة ورقية جافة. ضع هذا القفص 2/3 على مصدر حرارة ، مع ترك 1/3 الآخر من القفص بعيدا عن النار. لا تضع الفئران معا في قفص حتى تتعافى من التخدير.
- اسمح للحيوان باستعادة القدرة على المشي بحرية حول القفص قبل وضعه مرة أخرى في قفص نظيف مع فراش عادي. في هذا الوقت ، يمكن إيواء الفئران معا إذا تعافت جميعها من التخدير.
- في الأيام القليلة الأولى بعد الجراحة ، تأكد من سهولة الوصول إلى الطعام والماء الرطب. ضع بعض الطعام المبلل في قاع القفص. تحقق بشكل متكرر من موقع جراحة الفأر وابحث عن أي علامات للعدوى أو النزيف.
- بعد الجراحة ، تأكد من إيواء الفئران بمفردها أو مع أخرى خضعت لنفس الإجراء في وقت واحد. يمكن للفأر الذي يتعافى من الجراحة الموجودة في نفس القفص مثل الفأر بدون جراحة أن يشكل خطرا ويجب تجنبه.
- بالنسبة للفئران التي خضعت لاستئصال المبيض ولديها مشابك جرح على الجانبين الظهري الجانبي للظهر ، قم بإزالة أي موائل كوخ الإسكيمو القوارض من القفص لتقليل فرصة وقوع مشبك جرح الفأر على كوخ الإسكيمو خلال الأسبوع الأول من الشفاء.
- استمر في مراقبة الحيوان بحثا عن علامات العدوى أو الألم أو المضاعفات الجراحية كل 12 ساعة خلال أول 72 ساعة من وقت الشفاء.
- قم بإزالة مشابك الجرح باستخدام أداة إزالة مشبك الجرح بعد 10-14 يوما من الجراحة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتم تنفيذ الإجراء المعروض هنا على الفئران التي تتراوح أعمارها بين شهر وثلاثة أشهر في خلفية C57BL / 6J. وزن الفئران الذكور 16-28 جم ، ووزن الفئران الإناث 14-24 جم في وقت الإجراء. تم تحسين هذا الإجراء ليكون قابلا للتطبيق على الفئران من العديد من الأعمار ، من الفطام حتى مرحلة البلوغ.
يتضمن استئصال الخصية الجراحي شقا جلديا واحدا في كيس الصفن البطني، كما هو موضح في الشكل 1 أ. تتم إزالة كلتا الخصيتين واحدة تلو الأخرى ويتم قطعهما من خلال الأسهر والأوعية الدموية المنوية ،...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يسمح الاستئصال الجراحي للخصيتين والمبيضين بدراسة فسيولوجيا الفئران تحت الحرمان الهرموني الخاضع للرقابة. هذه التقنية مهمة للعديد من مجالات العلوم ، بما في ذلك التنكس العصبي ، والتمثيل الغذائي المعدني ، والقلب والأوعية الدموية ، والصحة الإنجابية15،16،17،18،19،20،21. هنا ، نقوم بتفصيل بروتوكول ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لا يوجد تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نشكر مركز الموارد الحيوانية التابع للمركز الطبي الجنوبي الغربي بجامعة تكساس على مساعدتهم في التدريب الجراحي ومراجعة البروتوكول. نشكر فريق دعم Wert Lab على مساعدتهم التي لا تقدر بثمن. تم دعم هذا العمل بأموال من المعهد الوطني للصحة (NIH P30EY030413). تم استخدام Biorender.com لإنشاء مخططات الرسوم المتحركة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 مل حقنة | BD | 309659 | |
| 30G 1/2 "إبرة | BD | 305106 | |
| AutoClip System | أدوات العلوم الدقيقة | 12020-00 | |
| محلول البيتادين | فيشر العلمي | NC0158124 | |
| تطبيق القطن | فيشر Scientific | 10-000-692 | |
| صغيرة مزدوجة النهايات | أدوات العلوم الدقيقة | 10091-12 | |
| Galilean Ballpes | Fine Science | Tools 28050-30 | اختياري ، يمكن أن يوفر وضوحا أفضل أثناء الإجراء |
| إسفنج الشاش ، 4 "× 4" | فيشر Scientific | 13-761-52 | |
| Graefe ملقط | أدوات العلوم الدقيقة | 11150-10 | |
| طقم أدوات | العلوم | 18010-00 | باستخدام مرفق الطرف الناعم |
| حاملي الإبرة | أدوات العلوم الدقيقة | 12001-13 | |
| خياطة قابلة للامتصاص PGA: 4-0 / NFS-2 قطع عكسي 19 مم / 30 بوصة | Covetrus | 29242 | 4-0 أو 5-0 خيوط قابلة للامتصاص هي أفضل |
| وسادة تسخين | القوارض كينت Scientific | RT-0515 | |
| وسادات تحضير الكحول | المعقمة فيشر Scientific | 22-363-750 | |
| حاملات الإبرة الدقيقة ذات القفل المستقيم | أدوات العلوم الدقيقة | 12060-01 | |
| مقص جراحي | أدوات العلوم | الدقيقة 140-60-09 | |
| مقص زنبركي Vannas - 2.5 مم | أدوات العلوم الدقيقة | المتطورة 15000-08 | |
| كريم جل مزيل الشعر الحساس Veet | Amazon | N / A | |
| Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit ، أزرق & nbsp ؛ | أمازون | # 9861-900 |
المراجع
- Kaprara, A., Huhtaniemi, I. T. The hypothalamus-pituitary-gonad axis: Tales of mice and men. Metabolism. 86, 3-17 (2018).
- Stamatiades, G. A., Kaiser, U. B. Gonadotropin regulation by pulsatile GnRH: Signaling and gene expression. Molecular and Cellular Endocrinology. 463, 131-141 (2018).
- Plant, T. M., Marshall, G. R. The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates. Endocrine Reviews. 22 (6), 764-786 (2001).
- Fuentes, N., Silveyra, P. Estrogen receptor signaling mechanisms. Advances in Protein Chemistry and Structural Biology. 116, 135-170 (2019).
- Guo, X., Yu, X., Yao, Q., Qin, J. Early effects of ovariectomy on bone microstructure, bone turnover markers and mechanical properties in rats. BMC Musculoskeletal Disorder. 23 (1), 316(2022).
- Yu, H., et al. High-mobility group box chromosomal protein-1 deletion alleviates osteoporosis in OVX rat model via suppressing the osteoclastogenesis and inflammation. Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 232(2022).
- Sun, J., et al. Quercetin attenuates osteoporosis in orchiectomy mice by regulating glucose and lipid metabolism. Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 13, 849544(2022).
- Costa, R. M., et al. Testosterone contributes to vascular dysfunction in young mice fed a high fat diet by promoting nuclear factor E2-related factor 2 downregulation and oxidative stress. Frontiers in Physiology. 13, 837603(2022).
- Bohm-Levine, N., Goldberg, A. R., Mariani, M., Frankfurt, M., Thornton, J. Reducing luteinizing hormone levels after ovariectomy improves spatial memory: Possible role of brain-derived neurotrophic factor. Hormones and Behavior. 118, 104590(2020).
- Pandey, R., et al. Estrogen deficiency induces memory loss via altered hippocampal HB-EGF and autophagy. Journal of Endocrinology. 244 (1), 53-70 (2020).
- Laouari, D., et al. The sexual dimorphism of kidney growth in mice and humans. Kidney International. 102 (1), 78-95 (2022).
- Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17β-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration. Journal of Visualized Experiments. (64), e4013(2012).
- Valkenburg, K. C., Amend, S. R., Pienta, K. J. Murine prostate micro-dissection and surgical castration. Journal of Visualized Experiments. (111), e53984(2016).
- Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. Journal of Visualized Experiments. (47), e2586(2011).
- Haider, A., et al. Role of sex hormones in modulating myocardial perfusion and coronary flow reserve. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (7), 2209-2218 (2022).
- Joll, J. E., Bersi, M. R., Nyman, J. S., Merryman, W. D. Evaluation of early bilateral ovariectomy in mice as a model of left heart disease. American Journal of Physiology Heart-Circulartory Physiology. 322 (6), H1080-H1085 (2022).
- Lu, H., Ma, K., Jin, L., Zhu, H., Cao, R. 17β-estradiol rescues damages following traumatic brain injury from molecule to behavior in mice. Journal of Cell Physiology. 233 (2), 1712-1722 (2018).
- Meydan, S., et al. Effects of testosterone on orchiectomy-induced oxidative damage in the rat hippocampus. Journal of Chemical Neuroanatomy. 40 (4), 281-285 (2010).
- Ohlson, N., Bergh, A., Persson, M. L., Wikström, P. Castration rapidly decreases local insulin-like growth factor-1 levels and inhibits its effects in the ventral prostate in mice. Prostate. 66 (16), 1687-1697 (2006).
- Tehranipour, M., Moghimi, A. Neuroprotective effects of testosterone on regenerating spinal cord motoneurons in rats. Journal of Motor Behavior. 42 (3), 151-155 (2010).
- Yamada, K., et al. The impact of ovariectomy on olfactory neuron regeneration in mice. Chemical Senses. 45 (3), 203-209 (2020).
- Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research. Maturitas. 87, 5-17 (2016).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
