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हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ फ्रुक्टस फिलैंथी के तंत्र का नेटवर्क फार्माकोलॉजी भविष्यवाणी और मेटाबोलॉमिक्स सत्यापन

Published: April 7, 2023 doi: 10.3791/65071
Automatic Translation
*1,2,3, *1,2,3, *1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 2,3
1School of Health Preservation and Rehabilitation, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2State Administration of Traditional Chinese Medicine Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine, Regimen and Health, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Regimen and Health of Sichuan Province
* These authors contributed equally

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल नेटवर्क फार्माकोलॉजी भविष्यवाणी और मेटाबोलॉमिक्स सत्यापन के आधार पर हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ फ्रक्टस फिलैंथी के प्रमुख लक्ष्यों और तंत्रों की खोज के लिए एक एकीकृत रणनीति का वर्णन करता है।

Abstract

हाइपरलिपिडिमिया दुनिया भर में कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों और यकृत की चोट के लिए एक प्रमुख जोखिम कारक बन गया है। Fructus Phyllanthi (FP) पारंपरिक चीनी चिकित्सा (TCM) और भारतीय चिकित्सा सिद्धांतों में हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एक प्रभावी दवा है, हालांकि संभावित तंत्र को आगे की खोज की आवश्यकता है। वर्तमान शोध का उद्देश्य मेटाबोलॉमिक्स सत्यापन के साथ नेटवर्क फार्माकोलॉजी भविष्यवाणी के संयोजन के आधार पर हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के तंत्र को प्रकट करना है। कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी), ट्राइग्लिसराइड (टीजी), कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन कोलेस्ट्रॉल (एलडीएल-सी), और उच्च घनत्व वाले लिपोप्रोटीन कोलेस्ट्रॉल (एचडीएल-सी) सहित प्लाज्मा लिपिड स्तरों का मूल्यांकन करके एक उच्च वसा वाले आहार (एचएफडी) प्रेरित चूहों का मॉडल स्थापित किया गया था। नेटवर्क फार्माकोलॉजी को एफपी के सक्रिय अवयवों और हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ संभावित लक्ष्यों का पता लगाने के लिए लागू किया गया था। प्लाज्मा और यकृत के मेटाबोलॉमिक्स को सामान्य समूह, मॉडल समूह और हस्तक्षेप समूह के बीच अंतर मेटाबोलाइट्स और उनके संबंधित मार्गों की पहचान करने के लिए किया गया था। हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी की प्रक्रिया का व्यापक दृष्टिकोण प्राप्त करने के लिए नेटवर्क फार्माकोलॉजी और मेटाबोलॉमिक्स के बीच संबंध का निर्माण किया गया था। प्राप्त प्रमुख लक्ष्य प्रोटीन को आणविक डॉकिंग द्वारा सत्यापित किया गया था। इन परिणामों ने प्रतिबिंबित किया कि एफपी ने एचएफडी द्वारा प्रेरित हाइपरलिपिडिमिया के प्लाज्मा लिपिड स्तर और यकृत की चोट में सुधार किया। एफपी में गैलिक एसिड, क्वेरसेटिन और बीटा-सिटोस्टेरॉल को प्रमुख सक्रिय यौगिकों के रूप में प्रदर्शित किया गया था। प्लाज्मा और यकृत में क्रमशः कुल 16 और छह संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स को मेटाबोलॉमिक्स द्वारा हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के चिकित्सीय प्रभावों में शामिल पाया गया। इसके अलावा, एकीकरण विश्लेषण ने संकेत दिया कि हस्तक्षेप प्रभाव सीवाईपी 1 ए 1, एसीएचई और एमजीएएम के साथ-साथ एल-किनुरेनिन, कॉर्टिकोस्टेरोन, एसिटाइलकोलाइन और रैफिनोज के समायोजन से जुड़े थे, जिसमें मुख्य रूप से ट्रिप्टोफैन चयापचय मार्ग शामिल था। आणविक डॉकिंग ने सुनिश्चित किया कि हाइपरलिपिडिमिया से संबंधित प्रोटीन लक्ष्यों पर कार्य करने वाले उपरोक्त अवयवों ने लिपिड को कम करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई। सारांश में, इस शोध ने हाइपरलिपिडिमिया को रोकने और इलाज के लिए एक नई संभावना प्रदान की।

Introduction

हाइपरलिपिडिमिया मानव स्वास्थ्य पर गंभीर प्रभाव के साथ एक आम चयापचय रोग है, औरहृदय रोगों के लिए प्राथमिक जोखिम कारक भी है। हाल ही में, इस बीमारी के लिए उम्र से संबंधित प्रवृत्ति रही है, और युवा लोग लंबे समय तक अनियमित जीवन शैली और अस्वास्थ्यकर खाने की आदतों के कारण अधिक संवेदनशील होगए हैं। क्लिनिक में, हाइपरलिपिडिमिया के इलाज के लिए विभिन्न दवाओं का उपयोग किया गया है। उदाहरण के लिए, हाइपरलिपिडिमिया और संबंधित एथेरोस्क्लेरोटिक विकारों वाले रोगियों के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली दवाओं में से एक स्टैटिन है। हालांकि, स्टैटिन के दीर्घकालिक उपयोग के दुष्प्रभाव होते हैं जिन्हें अनदेखा नहीं किया जा सकता है, जिससे असहिष्णुता, उपचार प्रतिरोध औरप्रतिकूल घटनाओं जैसे खराब रोग का निदान होता है। ये कमियां हाइपरलिपिडिमिया रोगियों के लिए अतिरिक्त दर्द बन गई हैं। इसलिए, स्थिर लिपिड-कम प्रभावकारिता और कम दुष्प्रभावों के लिए नए उपचार प्रस्तावित किए जाने चाहिए।

पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) का व्यापक रूप से इसकी अच्छी प्रभावकारिता और कुछ दुष्प्रभावों के कारण बीमारियों के इलाज के लिए उपयोग किया जाताहै। - फ्रुक्टस फिलैंथी (एफपी), फाइलेंथस एम्बलिका लिन का सूखा फल। (लोकप्रिय रूप से आंवला बेरी या भारतीय आंवले के रूप में जाना जाता है), पारंपरिक चीनी औरभारतीय दवाओं 6,7 की एक प्रसिद्ध दवा और खाद्य समरूप सामग्री है। टीसीएम सिद्धांतों8 के अनुसार, इस दवा का उपयोग गर्मी को साफ करने, रक्त को ठंडा करने और पाचन को बढ़ावा देने के लिए किया गया है। आधुनिक औषधीय अध्ययनों से पता चला है कि एफपी गैलिक एसिड, एलेजिक एसिड और क्वेरसेटिन9 जैसे बायोएक्टिव यौगिकों में समृद्ध है, जो एंटीऑक्सिडेंट, एक विरोधी भड़काऊ, यकृत संरक्षण, एक एंटी-हाइपोलिपिडेमिक औरइतने पर कार्य करके बहुआयामी जैविक गुणों की एक श्रृंखला के लिए जिम्मेदार हैं। हाल के शोध से यह भी पता चला है कि एफपी हाइपरलिपिडिमिया वाले रोगियों के रक्त लिपिड को प्रभावी ढंग से नियंत्रित कर सकता है। उदाहरण के लिए, वरिया एट अल .11 ने प्रदर्शित किया है कि एफपी फलों का रस और गैलिक एसिड का इसका मुख्य रासायनिक घटक प्लाज्मा कोलेस्ट्रॉल को कम कर सकता है और यकृत और महाधमनी में तेल घुसपैठ को कम कर सकता है। चिकित्सीय प्रभावकारिता पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़ेरेटर-सक्रिय रिसेप्टर-अल्फा की अभिव्यक्ति को बढ़ाने और यकृत लिपोजेनिक गतिविधि को कम करने में एफपी के विनियमन से संबंधित थी। हालांकि, हाइपरलिपिडिमिया में सुधार में एफपी के अंतर्निहित तंत्र की आगे जांच की जानी चाहिए, क्योंकि इसके बायोएक्टिव तत्व काफी व्यापक हैं। हमने एफपी की चिकित्सीय प्रभावकारिता के संभावित तंत्र का पता लगाने की मांग की, जो इस दवा के आगे के विकास और उपयोग के लिए फायदेमंद हो सकता है।

वर्तमान में, नेटवर्क फार्माकोलॉजी को टीसीएम के चिकित्सीय तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक समग्र और कुशल तकनीक माना जाता है। एकल रोग पैदा करने वाले जीन और केवल एक व्यक्तिगत लक्ष्य का इलाज करने वाली दवाओं की तलाश करने के बजाय, उनके व्यापक उपचार के बारे में बहु-घटक दवा के बहु-लक्ष्य तंत्र को खोजनेके लिए एक पूर्ण दवा-सामग्री-जीन-रोग नेटवर्क का निर्माण किया जाता है। यह तकनीक टीसीएम के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है, क्योंकि उनकी रासायनिक रचनाएं बड़े पैमाने पर हैं। दुर्भाग्य से, नेटवर्क फार्माकोलॉजी का उपयोग केवल सिद्धांत रूप में रासायनिक अवयवों से प्रभावित लक्ष्यों का पूर्वानुमान करने के लिए किया जा सकता है। रोग मॉडल में अंतर्जात मेटाबोलाइट्स को नेटवर्क फार्माकोलॉजी की प्रभावशीलता को मान्य करने के लिए देखा जाना चाहिए। मेटाबोलॉमिक्स विधि, जो सिस्टम जीव विज्ञान के विकास के साथ उभरती है, अंतर्जात मेटाबोलाइट्स13 में परिवर्तन की निगरानी के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है। मेटाबोलाइट्स में परिवर्तन मेजबान के स्थिर राज्य परिवर्तनों को दर्शाते हैं, जो आंतरिक तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण संकेतक भी है। कुछ शोधकर्ताओं ने दवाओं और बीमारियोंके बीच बातचीत तंत्र का पता लगाने के लिए नेटवर्क फार्माकोलॉजी और मेटाबोलॉमिक्स को सफलतापूर्वक एकीकृत किया है।

यह लेख नेटवर्क फार्माकोलॉजी और मेटाबोलॉमिक्स तकनीकों को एकीकृत करके हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के यांत्रिक आधार की पड़ताल करता है। नेटवर्क फार्माकोलॉजी को एफपी में मुख्य सक्रिय अवयवों और हाइपरलिपिडिमिया के लिए आणविक लक्ष्यों के बीच संबंधों का विश्लेषण करने के लिए लागू किया गया था। इसके बाद, पशु मॉडल में अंतर्जात मेटाबोलाइट्स के परिवर्तन का निरीक्षण करने के लिए मेटाबोलॉमिक्स किया गया था, जो चयापचय स्तर पर दवा क्रियाओं की व्याख्या कर सकता है। अकेले नेटवर्क फार्माकोलॉजी या मेटाबोनोमिक्स के आवेदन की तुलना में, इस एकीकृत विश्लेषण ने एक अधिक विशिष्ट और व्यापक अनुसंधान तंत्र प्रदान किया। इसके अतिरिक्त, आणविक डॉकिंग रणनीति का उपयोग सक्रिय अवयवों और प्रमुख प्रोटीन के बीच बातचीत का विश्लेषण करने के लिए किया गया था। सामान्य तौर पर, यह एकीकृत दृष्टिकोण नेटवर्क फार्माकोलॉजी के लिए प्रयोगात्मक साक्ष्य की कमी और मेटाबोलॉमिक्स विधि के लिए एक अंतर्जात तंत्र की कमी की भरपाई कर सकता है, और इसका उपयोग प्राकृतिक चिकित्सा के चिकित्सीय तंत्र विश्लेषण के लिए किया जा सकता है। प्रोटोकॉल का मुख्य योजनाबद्ध फ़्लोचार्ट चित्र 1 में दिखाया गया है।

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Protocol

जानवरों की हैंडलिंग से जुड़ी सभी प्रक्रियाओं को प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए चेंगदू यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन गाइड के अनुसार आयोजित किया गया था और चेंगदू यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन (प्रोटोकॉल नंबर 2020-36) की संस्थागत नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। वर्तमान अध्ययन के लिए नर C57BL/6 चूहों (20 ± 2 ग्राम) का उपयोग किया गया था। चूहों को एक वाणिज्यिक स्रोत से प्राप्त किया गया था ( सामग्री की तालिका देखें)।

1. नेटवर्क फार्माकोलॉजी-आधारित भविष्यवाणी

नोट: नेटवर्क फार्माकोलॉजी का उपयोग हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के सक्रिय अवयवों और उनके प्रमुख लक्ष्यों की भविष्यवाणी करने के लिए किया जाता है।

  1. सक्रिय अवयवों और प्रमुख लक्ष्यों का चयन
    1. उम्मीदवार सक्रिय अवयवों और एफपी के लक्ष्यों की सूची प्राप्त करने के लिए पारंपरिक चीनी चिकित्सा प्रणाली के फार्माकोलॉजी डेटाबेस (टीसीएमएसपी; http://tcmspw.com/tcmsp.php) पर कीवर्ड "फिलांथी फ्रुक्टस" खोजें।
      नोट: आम तौर पर, डेटाबेस में केवल मौखिक जैव उपलब्धता (ओबी) ≥30% और दवा जैसे (डीएल) मान ≥0.18 वाले अवयवों को सक्रिय सामग्री के रूप में शामिल किया जाता है।
    2. हाइपरलिपिडिमिया के संबंधित उम्मीदवार लक्ष्यों को प्राप्त करने के लिए जीनकार्ड डेटाबेस (https://www.genecards.org/), ऑनलाइन मेंडेलियन इनहेरिटेंस इन मैन डेटाबेस (ओआईएम; https://omim.org/), और चिकित्सीय लक्ष्य डेटाबेस (टीटीडी; http://db.idrblab.net/ttd/) में कीवर्ड "हाइपरलिपिडिमिया" खोजें। रोग लक्ष्यों की स्प्रेडशीट डाउनलोड करें। हाइपरलिपिडिमिया लक्ष्य सूची प्राप्त करने के लिए दोहराए गए लक्ष्यों को हटाएँ।
    3. चरण 1.1.1 और 1.1.2 से इन सूचियों की प्रतिलिपि किसी नई स्प्रेडशीट में बनाएँ. इंटरसेक्शन लक्ष्य प्राप्त करने के लिए टूलबार में "डेटा - डुप्लिकेट की पहचान करें" फ़ंक्शन का उपयोग करें। जीन और प्रोटीन नामों को मानकीकृत करने के लिए इंटरसेक्शन लक्ष्य सूची को UniProtKB (http://www.uniprot.org/) में आयात करें।
      नोट: ये लक्ष्य एफपी और हाइपरलिपिडिमिया दोनों से संबंधित हैं। इसलिए, हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के लक्ष्य के रूप में इन चौराहे लक्ष्यों की भविष्यवाणी करें।
  2. एक प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन नेटवर्क का निर्माण
    1. स्ट्रिंग डेटाबेस (https://string-db.org/) 11.5 खोलें। हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी की प्रतिच्छेदन लक्ष्य सूची "नामों की सूची" संवाद बॉक्स में चिपकाएँ। "जीव" में होमो सेपियन्स का चयन करें और खोज > पर क्लिक करें जारी रखें।
      नोट: मनुष्यों और चूहों में अत्यधिक समान जीन होते हैं। इसलिए, चूहों के साथ आगे प्रयोगात्मक सत्यापन किया जाता है।
    2. जब परिणाम उपलब्ध हों, तो "उन्नत सेटिंग्स" में नेटवर्क में डिस्कनेक्ट किए गए नोड्स को छुपाएं । "न्यूनतम आवश्यक इंटरैक्शन स्कोर " में उच्चतम आत्मविश्वास (0.900) सेट करें, फिर अपडेट बटन पर क्लिक करें।
    3. शीर्षक बार में निर्यात पर क्लिक करें, और पीएनजी और टीएसवी प्रारूप में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन (पीपीआई) नेटवर्क का लघु सारणीबद्ध पाठ डाउनलोड करें।
  3. दवा-घटक-रोग-लक्ष्य नेटवर्क का निर्माण
    1. ओपन साइटोस्केप 3.9.1 ( सामग्री की तालिका देखें)। चरण 1.2.3 की TSV स्वरूप फ़ाइल आयात करें। नियंत्रण कक्ष में शैली पट्टी के माध्यम से नेटवर्क नोड्स के रंग, फ़ॉन्ट और पक्ष को ऑप्टिमाइज़ करें.
    2. नेटवर्क टोपोलॉजी विश्लेषण के लिए "नेटवर्क का विश्लेषण करें" फ़ंक्शन का उपयोग करें। साइटोस्केप में साइटोहब्बा द्वारा हब जीन प्राप्त करें। दवा-घटक-लक्ष्य-रोग नेटवर्क स्थापित करें।
  4. जीओ और केईजीजी संवर्धन विश्लेषण
    1. डेविड जैव सूचना विज्ञान संसाधन (https://david.ncifcrf.gov/home.jsp) खोलें। विश्लेषण प्रारंभ करें पर क्लिक करें और लक्ष्य सूची बाएँ संवाद बॉक्स में चिपकाएँ. "पहचानकर्ता का चयन करें" में आधिकारिक जीन प्रतीक का चयन करें। "प्रजातियों का चयन करें" में होमो सेपियन्स का चयन करें। "सूची प्रकार" में जीन सूची पर टिक करें। सबमिट लिस्ट पर क्लिक करें।
    2. जब परिणाम उपलब्ध हों, तो डेविड टूल में से एक के साथ उपरोक्त जीन सूची का विश्लेषण करें पर क्लिक करें। जीओ फ़ंक्शन संवर्धन विश्लेषण के लिए "जीन ऑन्कोलॉजी" में GOTERM_BP_DIRECT, GOTERM_CC_DIRECT, GOTERM_MF_DIRECT टिक करें। केईजीजी मार्ग संवर्धन विश्लेषण के लिए "पाथवे" में KEGG_Pathway पर टिक करें।
    3. परिणाम प्रदर्शित करने के लिए कार्यात्मक एनोटेशन चार्ट पर क्लिक करें।
      नोट: पी < 0.05 पर संवर्धन विश्लेषण की सांख्यिकीय महत्व सीमा निर्धारित करें।

2. प्रायोगिक डिजाइन

  1. एफपी जलीय अर्क तैयार करना।
    नोट: एफपी को टीसीएम8 के चेंगदू विश्वविद्यालय में प्रोफेसर लीना ज़िया की प्रयोगशाला में संसाधित किया जाता है।
    1. एफपी (90 ग्राम) के सूखे पाउडर को 1 लीटर शुद्ध पानी में एक साफ 2 एल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में भिगो दें। 30 मिनट के लिए घुलने में मदद करने के लिए अल्ट्रासोनिक उपचार (4 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में, शक्ति: 250 डब्ल्यू, आवृत्ति: 35 किलोहर्ट्ज) का उपयोग करें। एक डबल-परत, 1 मिमी x 1 मिमी बाँझ चिकित्सा धुंध के साथ अर्क प्राप्त करने के लिए समाधान को फ़िल्टर करें। एफपी के पूर्ण विघटन को सुनिश्चित करने के लिए उपरोक्त ऑपरेशन को तीन बार दोहराएं।
    2. आगे एकाग्रता के लिए रोटरी वाष्पीकरण विधि का उपयोग करें। 4 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस के तापमान के साथ रोटेशन गति को 50 आरपीएम पर सेट करें। जलीय अर्क को 100 एमएल तक केंद्रित करें।
    3. एफपी (0.9 ग्राम / एमएल) के कच्चे अर्क को समान रूप से दो भागों (50 एमएल) में विभाजित करें। एक भाग का उपयोग उच्च खुराक एफपी तरल (0.9 ग्राम / एमएल) के रूप में किया जाता है। दूसरे भाग में 50 मिलीलीटर शुद्ध पानी जोड़ें, और इसे कम खुराक वाले एफपी तरल (0.45 ग्राम / एमएल) के रूप में मानें। प्रशासन के लिए उच्च और कम खुराक वाले एफपी जलीय समाधानों का उपयोग करें। उपयोग तक तरल को -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  2. पशु तैयारी
    1. घर 50 नर सी 57बीएल / 6 चूहों (20 ± 2 ग्राम) कमरे के तापमान पर एक अच्छी तरह से हवादार कमरे में, 12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र और भोजन और शुद्ध पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ।
    2. यादृच्छिक रूप से चूहों को दो समूहों में असाइन करें: हाइपरलिपिडिमिया को प्रेरित करने के लिए 10 चूहों को सामान्य आहार के साथ और 40 चूहों को उच्च वसा वाले आहार ( सामग्री की तालिका देखें) के साथ खिलाएं।
      नोट: 8 सप्ताह तक खिलाने के बाद, चूहों को आगे की दवा के हस्तक्षेप के लिए जांच की गई थी।
    3. 8 वें सप्ताह में, प्रत्येक माउस कक्षा से लगभग 200 μL रक्त निकालें। प्लाज्मा नमूने प्राप्त करने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 5,733 x g पर 10 मिनट के लिए रक्त को सेंट्रीफ्यूज करें। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध परख किट के साथ टीसी और टीजी स्तरों का निर्धारण करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
    4. नो-ट्रीटमेंट कंट्रोल (एनसी) समूह के रूप में सबसे सामान्य लिपिड स्तर वाले छह चूहों का चयन करें। उच्च वसा वाले आहार समूह के रूप में काफी अधिक लिपिड स्तर वाले 24 चूहों का चयन करें, और यादृच्छिक रूप से उन्हें चार समूहों में विभाजित करें: उच्च वसा वाले आहार (एचएफडी) समूह, कम खुराक वाले एफपी (FP_L) समूह, उच्च खुराक एफपी (FP_H) समूह, और सकारात्मक नियंत्रण (पीसी) समूह।
    5. एफपी की दो खुराक (कम खुराक, 4.5 ग्राम / किलोग्राम और उच्च खुराक, 9 ग्राम / किग्रा) के साथ FP_L और FP_H समूहों को गैस्ट्रिक सिंचाई का प्रशासन करें; सिमवास्टेटिन गोलियों के साथ पीसी समूह को गैस्ट्रिक सिंचाई (5 मिलीग्राम / किग्रा; सामग्री की तालिका देखें); और 4 सप्ताह के लिए दिन में एक बार शारीरिक लवण की समान मात्रा के साथ एनसी और एचएफडी समूहों को गैस्ट्रिक सिंचाई।
      नोट: वर्तमान अध्ययन ने उपचार के लिए एफपी और सिमवास्टेटिन के जलीय घोल का उपयोग किया।
    6. 12 वें सप्ताह में, 1% पेंटोबार्बिटल सोडियम (30 मिलीग्राम / किग्रा) द्वारा संज्ञाहरण के बाद, सभी समूहों के चूहों का बलिदान करें। प्रत्येक माउस की कक्षीय नस से ~ 400 μL रक्त के नमूने एकत्र करें।
      नोट: चिमटी के साथ चूहों के पैर की उंगलियों और तलवों को उत्तेजित करें। यदि कोई प्रतिक्रिया नहीं है, तो यह पर्याप्त संज्ञाहरण साबित होता है।
    7. प्लाज्मा नमूने प्राप्त करने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 5,733 x g पर 10 मिनट के लिए रक्त को सेंट्रीफ्यूज करें, और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध परख किट के साथ टीसी, टीजी, एलडीएल-सी और एचडीएल-सी स्तर निर्धारित करें ( सामग्री की तालिका देखें)। यकृत ऊतक के नमूने16 प्राप्त करें और उन्हें हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण के अधीन करें। मेटाबोलॉमिक्स विश्लेषण (चरण 3) के लिए शेष प्लाज्मा और यकृत के नमूनों का उपयोग करें।
      नोट: सभी नमूने उपयोग तक -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किए जाते हैं।
  3. यकृत हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा
    1. 24 घंटे से अधिक समय तक 4% पैराफॉर्मलडिहाइड समाधान के साथ ताजा यकृत ऊतकों को ठीक करें। फिक्सेटिव से ऊतक को बाहर निकालें और एक स्केलपेल के साथ लक्ष्य ऊतकों को चिकना करें। ऊतक और संबंधित लेबल को डिहाइड्रेटर में रखें।
    2. इथेनॉल ढाल में निर्जलीकरण: 4 घंटे के लिए 75% अल्कोहल, 2 घंटे के लिए 85% अल्कोहल, 2 घंटे के लिए 90% अल्कोहल, 1 घंटे के लिए 95% अल्कोहल, 1 घंटे के लिए पूर्ण इथेनॉल, 30 मिनट के लिए जाइलिन। ऊतक कैसेट को पैराफिन मोम में एक ऊतक मोल्ड में तीन वॉश के लिए रखें, प्रत्येक16 मिनट के लिए।
    3. मोम से लथपथ ऊतकों को ऊतक एम्बेडर में रखें ( सामग्री की तालिका देखें)। मोम जमने से पहले, डिहाइड्रेटर से ऊतकों को हटा दें, उन्हें एम्बेडेड बॉक्स में डालें, और संबंधित लेबल संलग्न करें।
    4. मोम ब्लॉक को -20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजिंग टेबल में ठंडा करें, उन्हें एम्बेडेड फ्रेम से हटा दें, और मोम ब्लॉक को ट्रिम करें।
    5. एक माइक्रोटोम का उपयोग करके छंटनी किए गए मोम ब्लॉकों को 3 μm मोटे वर्गों में काटें ( सामग्री की तालिका देखें)। अनुभागों को 40 डिग्री सेल्सियस पानी में तैरें, उन्हें स्लाइड से हटा दें, और 60 डिग्री सेल्सियस ओवन में बेक करें। पानी और सूखे मोम के साथ बेक करने के बाद, इसे बाहर निकालें और इसे कमरे के तापमान पर रखें।
    6. क्रमिक रूप से खंडों को 10 मिनट के लिए जाइलीन I में, 10 मिनट के लिए जाइलीन II, 10 मिनट के लिए जाइलीन III, 5 मिनट के लिए पूर्ण इथेनॉल I, 5 मिनट के लिए पूर्ण इथेनॉल II, 5 मिनट के लिए 75% अल्कोहल और16 मिनट के लिए पानी में धो लें।
    7. 4 मिनट के लिए हेमटोक्सीलिन धुंधला घोल के साथ वर्गों को दाग दें, भेदभाव के लिए 1% हाइड्रोक्लोरिक एसिड अल्कोहल समाधान (75% अल्कोहल), 1% अमोनिया पानी के घोल को वापस नीला करें, और उन्हें पानी से धो लें।
    8. 2 मिनट के लिए इओसिन स्टेनिंग घोल के साथ अनुभागों को दागें और उन्हें पानी से धो लें।
    9. 200x और 400x के आवर्धन के साथ ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके अनुभागों का निरीक्षण करें।
  4. तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस) विश्लेषण
    1. एफपी के घटक की पहचान
      नोट: विश्लेषण हाइब्रिड क्वाड्रोपोल-ऑर्बिटरैप उच्च-रिज़ॉल्यूशन मास स्पेक्ट्रोमेट्री (यूपीएलसी-क्यू-ऑर्बिरैप एचआरएमएस, एलसी-एमएस; सामग्री की तालिका देखें) के साथ युग्मित अल्ट्रा-उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करके किया जाता है।
      1. एफपी के सूखे पाउडर के 1 ग्राम को सटीक रूप से मापें और इसे एक साफ 50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डालें।
      2. वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 70% मेथनॉल के 25 एमएल जोड़ें और सटीक रूप से वजन करें। विघटन में मदद करने के लिए 30 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक उपचार (4 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में, शक्ति: 250 डब्ल्यू, आवृत्ति: 35 किलोहर्ट्ज) का उपयोग करें। विघटन के बाद नुकसान को ठीक से निर्धारित करने के लिए फिर से सटीक रूप से वजन करें, और नुकसान को पूरा करने के लिए 70% मेथनॉल का उपयोग करें।
        नोट: मात्रा को न मापें, क्योंकि वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क का पैमाना सटीक नहीं है, खासकर 4 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान के बाद।
      3. पूरी तरह से मिश्रण करने के लिए हिलाएं। फ़िल्टर करने के लिए 0.22 μm माइक्रोपोरस झिल्ली का उपयोग करें।
    2. प्लाज्मा नमूना तैयार करना
      1. 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में एसिटोनिट्राइल के डबल वॉल्यूम (200 μL) में प्लाज्मा के 100 μL (चरण 2.2.7) को सटीक रूप से जोड़ें, और इसे कम से कम 30 सेकंड के लिए एक भंवर वाइब्रेटर के साथ भंवर करें। सभी नमूने के लिए इस प्रक्रिया का पालन करें।
      2. 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 17,200 x g पर सभी नमूने सेंट्रीफ्यूज करें। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद सुपरनैटेंट को एक नए 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। नाइट्रोजन के नीचे सुपरनैटेंट को सुखाएं। निष्कर्षण विलायक के 200 μL के साथ पुनर्गठित करें (एसिटोनिट्राइल: पानी = 4: 1 [v / v])।
      3. भंवर कम से कम 30 सेकंड के लिए पुनर्गठित समाधान और 10 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक उपचार का उपयोग करें (4 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में, शक्ति: 250 डब्ल्यू, आवृत्ति: 35 किलोहर्ट्ज)। 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 17,200 x g पर सेंट्रीफ्यूज।
      4. सतह पर तैरने वालों को 0.22 μm फ़िल्टर झिल्ली के साथ फ़िल्टर करें और विश्लेषण के लिए उन्हें 4 °C पर रखें।
    3. जिगर का नमूना तैयार करना
      1. बर्फ-ठंडे मेथनॉल-पानी (1: 1, वी / वी, 1 एमएल) में 1 मिनट के लिए 90 मिलीग्राम यकृत ऊतक (चरण 2.2.7) को समरूप करें और उन्हें 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 21,500 x g पर सेंट्रीफ्यूज करें। सतह पर तैरनेवाला को 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में स्थानांतरित करें। सभी नमूने के लिए इस प्रक्रिया का पालन करें।
      2. उसी प्रक्रिया का पालन करते हुए अवक्षेप को फिर से निकालें, और सुपरनैटेंट को नए 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में एक साथ पूल करें। नाइट्रोजन के नीचे सुपरनैटेंट को सुखाएं। निष्कर्षण विलायक के 300 μL के साथ पुनर्गठित करें (मेथनॉल: पानी = 4: 1 [v / v])।
      3. भंवर कम से कम 30 सेकंड के लिए पुनर्गठित समाधान और 10 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक उपचार का उपयोग करें (4 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में, शक्ति: 250 डब्ल्यू, आवृत्ति: 35 किलोहर्ट्ज)। 4 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 17,200 x g पर सेंट्रीफ्यूज।
      4. सतह पर तैरने वालों को 0.22 μm फ़िल्टर झिल्ली के साथ फ़िल्टर करें और विश्लेषण के लिए उन्हें 4 °C पर रखें।
        नोट: पूल गुणवत्ता नियंत्रण (क्यूसी) नमूने प्रत्येक प्लाज्मा और यकृत नमूने (प्रति छह नमूने में एक) से 10 μL एलिकोट मिलाकर तैयार किए गए थे।
    4. एलसी-एमएस के विश्लेषण पैरामीटर
      नोट: मोबाइल चरण में 0.1% फॉर्मिक एसिड (विलायक ए) और एसिटोनिट्राइल (विलायक बी) होते हैं। इन सॉल्वैंट्स को एक साफ कांच की बोतल में स्थानांतरित करें और उन्हें एलसी-एमएस सिस्टम से कनेक्ट करें।
      1. एलसी-एमएस सिस्टम की "इनलेट फ़ाइल" में प्लाज्मा नमूनों के ढाल कार्यक्रमों को निम्नानुसार सेट करें: 1% बी (0-1.5 मिनट), 1% -60% बी (1.5-13.0 मिनट), 60% -99% बी (13.0-20.0 मिनट), 99% बी (20.0-25.0 मिनट), 99% -1% बी (25.0-25.1 मिनट) पर बनाए रखें।
      2. एलसी-एमएस सिस्टम के "इनलेट फ़ाइल" में प्लाज्मा नमूनों की ऑटोसैंपलर स्थितियों को निम्नानुसार सेट करें: इंजेक्शन की मात्रा, 2 μL; और प्रत्येक विश्लेषण के लिए प्रवाह दर, 0.3 एमएल /
      3. एलसी-एमएस सिस्टम की "इनलेट फ़ाइल" में यकृत के नमूनों के ढाल कार्यक्रम को निम्नानुसार सेट करें: 1% बी (0-1 मिनट), 1% -53% बी (1-15 मिनट), 53% -70% बी (15-30 मिनट), 70% -90% बी (30-32 मिनट), 90% -95% बी (32-40 मिनट), 95% -1% बी (40-42 मिनट) तक बनाए रखें।
      4. एलसी-एमएस सिस्टम के "इनलेट फ़ाइल" में यकृत के नमूनों की ऑटोसैंपलर स्थितियों को निम्नानुसार सेट करें: इंजेक्शन की मात्रा, 5 μL; और प्रत्येक विश्लेषण के लिए प्रवाह दर, 0.3 एमएल /
      5. एलसी-एमएस सिस्टम के "एमएस ट्यून फ़ाइल" में प्लाज्मा और यकृत दोनों नमूनों की एमएस पहचान स्थितियों को सेट करें। सकारात्मक और नकारात्मक आयनीकरण मोड दोनों का उपयोग करके एमएस अधिग्रहण करें।
        नोट: गर्म इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण पैरामीटर निम्नानुसार हैं: स्प्रे वोल्टेज: सकारात्मक आयनीकरण के लिए 3.5 केवी और नकारात्मक आयनीकरण के लिए 3.8 केवी; शीथ गैस प्रवाह: 55 एआरबी; सहायक गैस प्रवाह: 15 एआरबी; जांच हीटर तापमान: 300 डिग्री सेल्सियस; और केशिका तापमान: 350 डिग्री सेल्सियस।
      6. एकत्रित कच्चे डेटा को कंपाउंड डिस्कवर सॉफ़्टवेयर में आयात करें, और निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए विधि टेम्पलेट सेट करें ( सामग्री की तालिका देखें)।

3. मेटाबोलिक सत्यापन

नोट: प्लाज्मा और यकृत मेटाबोलाइट्स के मेटाबोलिक प्रोफाइलिंग डेटा को एक आणविक सुविधा निष्कर्षण एल्गोरिथ्म को अपनाकर चयापचय सुविधा निष्कर्षण करने के लिए कंपाउंड डिस्कवर सॉफ्टवेयर में आयात किया जाता है। पैरामीटर निम्नानुसार सेट करें: द्रव्यमान विचलन, 5 x 10-6; द्रव्यमान सीमा, 100-1,500; सिग्नल टू शोर अनुपात (एसएनआर) सीमा, 3; और अवधारण समय विचलन, 0.05। क्यूसी पीक क्षेत्रों के सापेक्ष मानक विचलन (आरएसडी) द्वारा मेटाबोलॉमिक्स की स्थिरता और पुनरावृत्ति का मूल्यांकन करें।

  1. एलसी-एमएस निष्कर्षों से प्राप्त अभिन्न मूल्यों के बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए एसआईएमसीए-पी सॉफ्टवेयर ( सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करें। माध्य-केंद्रित डेटा और नमूना वर्गों के मॉडलिंग के लिए ऑर्थोगोनल आंशिक कम से कम वर्ग भेदभाव विश्लेषण (ओपीएलएस-डीए) का उपयोग करें।
  2. ओपीएलएस-डीए परीक्षण के बाद, मेटाबोलाइट्स पर विचार करें, जिसमें संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स के रूप में >1 के प्रक्षेपण (वीआईपी) मूल्यों में परिवर्तनीय महत्व और छात्र के टी-टेस्ट से <0.05 का पी-वैल्यू शामिल है।
  3. खुले डेटाबेस स्रोतों द्वारा परेशान मेटाबोलाइट्स और चयापचय मार्गों की पहचान करें, जिसमें मानव चयापचय (एचएमडीबी; http://www.hmdb.ca/), क्योटो एनसाइक्लोपीडिया ऑफ जीन एंड जीनोम (केईजी; https://www.kegg.jp/), और मेटाबोएनालिस्ट 5.0 (https://www.metaboanalyst.ca/) शामिल हैं।
  4. मेटाबोएनालिस्ट 5.0 और 'वू कोंग' प्लेटफॉर्म (https://www.omicsolution.com/wkomics/main/) द्वारा परिणाम दृश्यों को विज़ुअलाइज़ करें।

4. आणविक डॉकिंग

  1. क्रमशः टीसीएमएसपी डेटाबेस से चयनित एफपी सामग्री की 3 डी संरचना डाउनलोड करें। 'रासायनिक नाम' खोज बॉक्स में घटक नाम खोजें और एमओएल 2 प्रारूप में संबंधित 3 डी संरचना फ़ाइलों को डाउनलोड करें।
  2. अल्फाफोल्ड प्रोटीन संरचना डेटाबेस (अल्फाफोल्ड डीबी;, https://alphafold.ebi.ac.uk/) से प्रमुख लक्ष्यों की क्रिस्टल संरचनाओं को डाउनलोड करें। खोज बॉक्स में लक्ष्य नाम खोजें और PDB स्वरूप में संबंधित क्रिस्टल संरचना फ़ाइलों को डाउनलोड करें।
  3. सामग्री और लक्ष्य संरचनाएँ फ़ाइल को AutoDockTools सॉफ़्टवेयर में आयात करें. पानी के अणुओं को हटाने के लिए पानी संपादित करें > हटाएं पर क्लिक करें। हाइड्रोजन जोड़ने के लिए > हाइड्रोजेन > जोड़ें पर क्लिक करें। सामग्री को 'लिगैंड' के रूप में सेट करें और 'रिसेप्टर' 17 के रूप में पूरे लक्ष्य का चयन करके अंधा डॉकिंग करें।
  4. नव-विकसित स्थान को समायोजित करने के लिए "केंद्र" और "आकार" के पीछे बॉक्स में एक मान दर्ज करें, जिससे लिगैंड और रिसेप्टर को पूरी तरह से शामिल करना संभव हो जाता है। लिगैंड और रिसेप्टर फ़ाइलों को पीडीबीक्यूटी प्रारूप में सहेजें।
  5. आणविक डॉकिंग करने के लिए ऑटोडॉक विना का उपयोग करें। "रिसेप्टर" बार को 'रिसेप्टर.pdbqt' के नाम पर सेट करें, और "लिगैंड" बार को 'लिगैंड.pdbqt' के नाम पर सेट करें। रिसेप्टर को लिगैंड बाइंडिंग के लिए इष्टतम स्थान प्राप्त करें। इष्टतम स्थिति पर बाध्यकारी ऊर्जा मान रिकॉर्ड करें।
    नोट: डॉकिंग प्रक्रिया की गणना जेनेटिक एल्गोरिदम14 द्वारा की गई थी। सभी डॉकिंग रन विकल्प डिफ़ॉल्ट मान थे। डॉकिंग फ्रेम स्वचालित रूप से उच्चतम से सबसे कम बाध्यकारी ऊर्जा तक रैंक किए जाएंगे।
  6. दृश्य प्रणाली मॉडल प्राप्त करने के लिए डॉकिंग फ़ाइलों को पीआईएलपी (प्रोटीन-लिगैंड इंटरैक्शन प्रोफाइलर' https://plip-tool.biotec.tu-dresden.de/plip-web/plip/index) में आयात करें। पीएसई प्रारूप में मॉडल फ़ाइलों को डाउनलोड करें, और आगे विज़ुअलाइज़ेशन बनाने के लिए उन्हें PyMOL सॉफ़्टवेयर (सामग्री की तालिका देखें) में आयात करें।

5. सांख्यिकीय विश्लेषण

नोट: डेटा विश्लेषण के लिए एसपीएसएस सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर ( सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करें। पी < 0.05 के मान को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मानें।

  1. मानों को मानक विचलन (एसडी) ± साधन के रूप में व्यक्त करें।
  2. समूहों के बीच सांख्यिकीय महत्व का परीक्षण करने के लिए एक-तरफ़ा एनोवा का प्रदर्शन करें, जिसके बाद पोस्ट-हॉक कम से कम महत्वपूर्ण अंतर (एलएसडी), डनेट (समान विचरण के मामले में), या डंनेट के टी 3 (असमान विचरण के मामले में) हो।

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Representative Results

नेटवर्क फार्माकोलॉजी
एफपी में कुल 18 संभावित अवयवों को डेटाबेस और एलसी-एमएस विश्लेषण से उनके फार्माकोकाइनेटिक और फार्माकोडायनामिक गुणों के अनुसार जांच की गई थी (कुल आयन क्रोमैटोग्राम पूरक चित्रा 1 में दिखाए गए हैं)। प्रासंगिक साहित्य के माध्यम से, गैलिक एसिड की सामग्री अन्य अवयवों की तुलना में बहुत अधिक है और लिपिड 9,11 को कम करने में प्रभावी है। इसलिए, इस घटक को एक संभावित घटक भी माना जाता था। कुल मिलाकर, एफपी के 19 अवयवों और 134 घटक-संबंधित लक्ष्यों की स्थापना की गई है। सभी 19 अवयवों को तालिका 1 में दिखाया गया है। आगे के विश्लेषण के लिए सबसे अधिक प्रतिनिधि सामग्री का चयन करने के लिए, इन सामग्रियों को पारंपरिक चीनी चिकित्सा डेटाबेस (बैटमैन-टीसीएम; http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/) के आणविक मेकेनिज़्म के लिए जैव सूचना विज्ञान विश्लेषण उपकरण में आयात किया गया था। घटक-लक्ष्य-मार्ग-रोग नेटवर्क के अनुसार, कुछ बायोएक्टिव तत्व, जैसे गैलिक एसिड, क्वेरसेटिन, और बीटा-सिटोस्टेरॉल, को हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिया और कोरोनरी एथेरोस्क्लेरोसिस (पूरक चित्रा 2) से संबंधित एफपी के सबसे महत्वपूर्ण अवयवों के रूप में पहचाना गया था। इनमें से, गैलिक एसिड सबसे व्यापक रूप से अध्ययन किए गए फेनोलिक एसिड में से एक है; यह एफपी18 में प्रस्तुत मुख्य बायोएक्टिव घटक है। इस बीच, गैलिक एसिड एफपी में उच्चतम सामग्री घटक भी है; इसकी एकाग्रता आमतौर पर 1% से 3% होती है। एल-हुसैनी एट अल .19 ने खुलासा किया है कि गैलिक एसिड हृदय की चोट को सीमित कर सकता है, लिपिड प्रोफाइल में सुधार कर सकता है, और कार्डियक भड़काऊ मार्करों को कम कर सकता है। क्वेरसेटिन और बीटा-सिटोस्टेरॉल की सामग्री कम है, लेकिन कुछ अध्ययनों ने लिपिड को कम करने पर अपना प्रभाव साबित किया है। क्वेरसेटिन, एक महत्वपूर्ण फ्लेवोनॉइड के रूप में जो पौधों में व्यापक रूप से मौजूद है, इसमें विभिन्न गुण हैं, जैसे एंटीऑक्सिडेंट, विरोधी भड़काऊ और कार्डियोवैस्कुलर सुरक्षा प्रभाव20। लू एट अल .21 ने अध्ययन किया है कि क्वेरसेटिन-समृद्ध रस हल्के हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिया वाले स्वस्थ व्यक्तियों में टीसी, एलडीएल-सी और एचडीएल-सी के स्तर को कम कर सकता है। बीटा-सिटोस्टेरॉल के लिए, नैदानिक अध्ययनों से पता चला है कि प्लांट स्टेरोल हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिया और कार्डियोवैस्कुलर बीमारी22,23 को काफी रोक सकता है। अल्थवाब एट अल .24ने साबित किया कि बीटा-सिटोस्टेरॉल एचएफडी चूहों में लिपिड प्रोफाइल और एथेरोजेनिक इंडेक्स में सुधार कर सकता है। यह देखा जा सकता है कि एफपी का लिपिड-कम करने वाला प्रभाव इन तीन अवयवों से संबंधित हो सकता है।

इसके अतिरिक्त, जीनकार्ड, ओआईएम और टीटीडी डेटाबेस से हाइपरलिपिडिमिया से संबंधित 1,552 लक्ष्य एकत्र किए गए थे। हाइपरलिपिडिमिया से संबंधित लक्ष्यों के साथ 134 एफपी-संबंधित लक्ष्यों का मिलान करने के बाद, 62 लक्ष्यों को हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के लिए संभावित लक्ष्यों के रूप में पहचाना गया (चित्रा 2 ए)। यूनिप्रोट डेटाबेस के अनुसार, सभी प्रतिच्छेदित लक्ष्यों को उनके आधिकारिक प्रतीकों में सामान्यीकृत किया गया था। इसके बाद, पीपीआई नेटवर्क का निर्माण स्ट्रिंग (चित्रा 2 बी) और साइटोस्केप (चित्रा 2 सी) द्वारा किया गया था। कम्प्यूटेशनल विधियों के स्कोर को मिलाकर, शीर्ष 10 लक्ष्य ईएसआर 1, आरईएलए, एफओएस, ईजीएफआर, एचआईएफ 1 ए, एआर, सीसीएनडी 1, आईएल 6, एमएपी 8 और एमवाईसी थे। ब्यौरा अनुपूरक चित्र 3 में प्रस्तुत किया गया है। ये सभी 62 लक्ष्य आगे के विश्लेषण का आधार हैं, जो मेटाबोनोमिक्स के परिणामों के साथ एकीकृत है।

संवर्धन विश्लेषण द्वारा जीओ और केईजीजी मार्ग किए गए थे। लक्ष्यों की संख्या के अनुसार, शीर्ष 15 मार्गों को पी-वैल्यू के अनुसार विश्लेषण के लिए चुना गया था। जीओ संवर्धन परिणामों ने सुझाव दिया कि जैविक प्रक्रियाएं और हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के आणविक कार्य मुख्य रूप से जीन अभिव्यक्ति और प्रोटीन बाइंडिंग (चित्रा 2 डी) से संबंधित थे। केईजीजी संवर्धन ने साबित कर दिया कि एफपी लिपिड चयापचय और एथेरोस्क्लेरोसिस (चित्रा 2 ई) की प्रक्रिया में हस्तक्षेप कर सकता है, जिसका अर्थ है कि एफपी लिपिड चयापचय को प्रभावित करने के माध्यम से हाइपरलिपिडिमिया से राहत देता है।

प्लाज्मा लिपिड स्तर और यकृत सूचकांक पर एफपी का प्रभाव
हाइपरलिपिडिमिया पर एफपी के बेहतर प्रभाव का परीक्षण करने के लिए, टीसी, टीजी, एलडीएल-सी, एचडीएल-सी और यकृत सूचकांक (शरीर के वजन के लिए यकृत के वजन का अनुपात) में परिवर्तन को पहले मापा गया था। एनसी समूह की तुलना में, एचएफडी समूह में चूहों ने टीसी (पी < 0.001), एलडीएल-सी (पी < 0.001) और टीजी (पी < 0.05) के प्लाज्मा स्तर में उल्लेखनीय वृद्धि दिखाई, यह दर्शाता है कि दीर्घकालिक एचएफडी हस्तक्षेप लिपिड स्तर को बढ़ा सकता है और हाइपरलिपिडिमिया को प्रेरित कर सकता है (चित्रा 3)।

एफपी जलीय अर्क को प्रशासित करने के बाद, FP_L और FP_H समूहों में टीसी का स्तर क्रमशः 18.8% और 12.4% (पी < 0.05) कम हो गया (चित्रा 3 ए)। FP_L और FP_H समूहों में एलडीएल-सी का स्तर क्रमशः 13.7% और 21.8% (चित्रा 3 बी) < काफी कम हो गया था। एचडीएल-सी स्तर के संबंध में, एचएफडी समूह (चित्रा 3 सी) की तुलना में FP_H समूह काफी (पी < 0.01) 1.81 ± 0.08 mmol / L से बढ़कर 2.65 ± 0.16 mmol / L हो गया। हालांकि एफपी हस्तक्षेप के बाद टीजी स्तर महत्वहीन रहा, लेकिन एचएफडी समूह (चित्रा 3 डी) की तुलना में यह कम हो गया था। हाल के अध्ययनों ने संकेत दिया है कि एलडीएल-सी / एचडीएल-सी अनुपात का सूचकांक कार्डियोवैस्कुलर बीमारी25,26 की भविष्यवाणी करने में अकेले एलडीएल-सी या एचडीएल-सी की तुलना में बेहतर सूचकांक है। एचएफडी समूह की तुलना में, एलडीएल-सी / एचडीएल-सी अनुपात FP_H समूह (चित्रा 3 ई) में 46.3% की काफी (पी < 0.01) कम हो गया था, जिसका अर्थ है कि एफपी हस्तक्षेप ने खराब कोलेस्ट्रॉल को कम कर दिया और अच्छे कोलेस्ट्रॉल के स्तर में वृद्धि की। मुख्य वसा चयापचय अंग के रूप में, यकृत का वजन चूहों में वसा भंडारण को एक निश्चित सीमा तक दर्शाताहै। 12 सप्ताह के बाद, FP_L समूह और FP_H समूह में यकृत सूचकांक एचएफडी समूह (चित्रा 3 एफ) की तुलना में काफी कम हो गए (पी < 0.01)। पीसी समूह ने उपरोक्त इन संकेतकों में कमी की विभिन्न डिग्री भी दिखाई, यह दर्शाते हुए कि एफपी का स्टैटिन के समान प्रभाव था, और सुरक्षात्मक प्रभाव ने खुराक-प्रतिक्रिया संबंध दिखाया।

विभिन्न नैदानिक अध्ययनों से पता चला है कि, थोड़ी देर के लिए या तो अर्क या पूरे एफपी लेने के बाद, टीसी और एलडीएल-सी के स्तर में काफी कमी आई थी। इस बीच, एफपी28,29 के दीर्घकालिक प्रशासन पर एचडीएल-सी स्तर उल्लेखनीय रूप से बढ़ाया गया था। नांबियार और शेट्टी30 ने पाया कि एफपी रस ऑक्सीकृत कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन को कम कर सकता है, इसलिए एथेरोस्क्लेरोसिस के जोखिम को बहुत कम कर सकता है। गोपा एट अल .31 ने हाइपरलिपिडिमिया वाले रोगियों में एफपी के हाइपोलिपिडेमिक प्रभाव का मूल्यांकन किया और इसकी तुलना सिमवास्टेटिन के साथ की। एफपी के साथ उपचार के परिणामस्वरूप टीसी, एलडीएल-सी और टीजी में काफी कमी आई, और एचडीएल-सी के स्तर में उल्लेखनीय वृद्धि हुई, जो सिमवास्टेटिन के समान थी। इस शोध में, एफपी और सिमवास्टेटिन के समान चिकित्सीय प्रभाव भी थे, और एलडीएल-सी-कम करने वाला प्रभाव और एफपी की यकृत मरम्मत कार्रवाई सिमवास्टेटिन से बेहतर थी।

यकृत हिस्टोपैथोलॉजिकल अवलोकन।
एचएफडी चूहों में हेपेटिक स्टीटोसिस पर एफपी का प्रभाव चित्रा 4 में दिखाया गया है। एनसी समूह में यकृत रोग संबंधी वर्गों ने नियमित हेपेटोसाइट आकृति विज्ञान, स्पष्ट रूप से परिभाषित कोशिका सीमाओं और कोई स्पष्ट वसा रिक्तिका (चित्रा 4 ए, बी) व्यक्त नहीं की। तुलनात्मक रूप से, एचएफडी समूह में रक्त वाहिकाओं के चारों ओर विभिन्न आकारों के वसा रिक्तिकाएं थीं और स्पष्ट यकृत क्षति दिखाई दी, जैसा कि सेल सूजन, फैटी अपघटन, सेलुलर सीमाओं के नुकसान, सेलुलर संकुचन और हेपेटोसाइट नेक्रोसिस (चित्रा 4 सी, डी) की विशेषता है। जैसा कि चित्रा 4 ई, एफ में दिखाया गया है, एफपी हस्तक्षेप यकृत स्टीटोसिस में सुधार कर सकता है, खासकर FP_L समूह में। एचएफडी समूह की तुलना में, FP_H (चित्रा 4 जी, एच) और पीसी समूह (चित्रा 4 आई, जे) में यकृत कोशिका संरचना, वसा अध: पतन और वसा रिक्तिका में कमी की वसूली की एक निश्चित डिग्री थी। इसका मतलब यह है कि एफपी हस्तक्षेप एचएफडी-प्रेरित यकृत चोट से यकृत ऊतक की रक्षा कर सकता है।

मेटाबोलॉमिक्स प्रोफाइलिंग
प्लाज्मा लिपिड स्तर और यकृत हिस्टोपैथोलॉजिकल अवलोकन के अनुसार, उच्च खुराक एफपी का कम खुराक वाले एफपी की तुलना में हाइपरलिपिडिमिया पर बेहतर प्रभाव पड़ा। इसलिए, एनसी, एचएफडी और FP_H समूहों को चयापचय स्तर में उनके परिवर्तन का विश्लेषण करने के लिए चुना गया था। क्यूसी नमूनों के कुल आयन क्रोमैटोग्राम पूरक चित्र 4 में दिखाए गए थे। डेटा की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए, आरएसडी मान >30% वाली सुविधाओं को सभी क्यूसी नमूनों से हटा दिया गया था। पीसीए और आयन क्रोमैटोग्राम ने प्रतिबिंबित किया कि प्रक्रिया के दौरान क्यूसी नमूने स्थिर थे (पूरक चित्रा 5)। डेटा प्रीप्रोसेसिंग के बाद प्लाज्मा और यकृत में कुल 626 और 562 विशेषताएं निर्धारित की गईं। उनमें से, प्लाज्मा और यकृत में क्रमशः 120 और 124 मेटाबोलाइट्स की पहचान केईजीजी डेटाबेस के आधार पर की गई थी। ओपीएलएस-डीए विश्लेषण का उपयोग एनसी, एचएफडी और FP_H समूहों के बीच अलगाव का पता लगाने के लिए किया गया था। ओपीएलएस-डीए ने दिखाया कि एक ही समूह के नमूने एक साथ समूहित होते हैं और विभिन्न समूह के नमूने अच्छी तरह से अलग होते हैं (चित्रा 5 ए, बी)। इन परिणामों ने संकेत दिया कि एचएफडी और एफपी हस्तक्षेप ने स्पष्ट चयापचय भिन्नताओं का कारण बना।

चयापचय भेद में योगदान देने वाले संभावित अंतर मेटाबोलाइट्स की पहचान करने के लिए, एनसी बनाम एचएफडी और एचएफडी बनाम FP_H के आगे ओपीएलएस-डीए और टी-टेस्ट विश्लेषण क्रमशः किए गए थे। ओपीएलएस-डीए के परिणामों ने अच्छी तरह से प्रतिष्ठित किया, और मॉडल14 (पूरक चित्रा 6) के विभिन्न समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर दिखाया। वीआईपी (प्रक्षेपण में महत्वपूर्ण चर) >1 और पी < 0.05 के आधार पर, प्लाज्मा में 32 मेटाबोलाइट्स ने एनसी और एचएफडी समूह के बीच भेदभाव दिखाया, और 72 मेटाबोलाइट्स ने एचएफडी और FP_H समूह के बीच भेदभाव दिखाया। यकृत में, 38 मेटाबोलाइट्स ने एनसी और एचएफडी समूह के बीच भेदभाव दिखाया, और 17 मेटाबोलाइट्स ने एचएफडी और FP_H समूह के बीच भेदभाव दिखाया। अंत में, कुल 16 और 6 मेटाबोलाइट्स को क्रमशः प्लाज्मा और यकृत में एफपी-प्रभावित एचएफडी चूहों में अंतर मेटाबोलाइट्स के रूप में पहचाना गया (पूरक चित्रा 7)। इन मेटाबोलाइट्स पर जानकारी तालिका 2 में दिखाई गई है।

तीन समूहों के बीच मेटाबोलाइट्स में भिन्नता की कल्पना करने के लिए, मेटाबोएनालिस्ट 5.0 द्वारा हीट मैप्स प्लॉट किए गए थे। प्लाज्मा और यकृत में सभी अंतर मेटाबोलाइट्स एचएफडी समूह में बदल गए थे और उनमें से अधिकांश को एफपी समूह में उलट दिया गया था, यह दर्शाता है कि एफपी हस्तक्षेप चयापचय विकार (चित्रा 5 सी, डी) में सुधार कर सकता है। इसके अलावा, एचएफडी चूहों में एफपी के चयापचय मार्गों का पता लगाने के लिए मेटाबोएनालिस्ट 5.0 में अंतर मेटाबोलाइट्स आयात किए गए थे। पी < 0.05 और एक मार्ग प्रभाव >0.10 के आधार पर, प्लाज्मा में ट्रिप्टोफैन चयापचय काफी प्रभावित हुआ था, और इस मार्ग से संबंधित मेटाबोलाइट्स डी-ट्रिप्टोफैन और एल-किनुरेनिन थे (चित्रा 5 ई)। जंग एट अल .32 ने अध्ययन किया कि लंबे समय तक हाइपरलिपिडिमिया किनुरेनिन के सीरम स्तर को कम कर सकता है। टॉरिन और हाइपोटॉरिन चयापचय यकृत में काफी प्रभावित हुआ था, और संबंधित मेटाबोलाइट संबंधित टॉरिन था (चित्रा 5 एफ)। टॉरिन पशु शरीर में एक महत्वपूर्ण और आवश्यक अमीनो एसिड है; डोंग एट अल .33 ने अध्ययन किया कि टॉरिन रक्त लिपिड के नुकसान को हल्के से कम कर सकता है और एचएफडी के कारण एथेरोस्क्लेरोसिस जोखिम को कम कर सकता है। इस शोध में, एफपी हस्तक्षेप ने एल-किनुरेनिन और टॉरिन की सामग्री में वृद्धि की, जो लिपिड स्तर में कमी से सकारात्मक रूप से संबंधित है, जो हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी की प्रभावशीलता का समर्थन करता है।

नेटवर्क फार्माकोलॉजी और मेटाबोलॉमिक्स का एकीकृत विश्लेषण
मेटाबोलॉमिक्स के साथ संयुक्त नेटवर्क फार्माकोलॉजी की एक एकीकृत रणनीति रोग तंत्र और हस्तक्षेप रणनीतियों का अध्ययन करने में अधिक से अधिक अपरिहार्य हो गई है। सीमित साक्ष्य के साथ नेटवर्क फार्माकोलॉजी और मेटाबोलॉमिक्स के बीच प्रासंगिकता स्थापित की गई थी। हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के तंत्र का व्यापक दृष्टिकोण प्राप्त करने के लिए, नेटवर्क फार्माकोलॉजी और मेटाबोलॉमिक्स पर आधारित इंटरैक्शन नेटवर्क का निर्माण किया गया था। विभेदक मेटाबोलाइट्स को साइटोस्केप में मेटस्केप प्लगइन में आयात किया गया था और यौगिक-प्रतिक्रिया-एंजाइम-जीन नेटवर्क (चित्रा 6) को इकट्ठा करने के लिए नेटवर्क फार्माकोलॉजी में पहचाने गए हब जीन का मिलान किया गया था। जैसा कि तालिका 3 में दिखाया गया है, प्लाज्मा मेटाबोलाइट्स में, एल-किनुरेनिन और कॉर्टिकोस्टेरोन सीवाईपी 1 ए 1 से संबंधित थे, जो लिपिड पेरोक्सीडेशन को उत्प्रेरित कर सकते हैं और गैर-मादक फैटी यकृत रोग34,35 को प्रेरित कर सकते हैं; प्रभावित मार्ग क्रमशः ट्रिप्टोफैन चयापचय और स्टेरॉयड हार्मोन जैवसंश्लेषण थे। एसिटाइलकोलाइन एसीएचई से संबंधित था और ग्लिसरोफॉस्फोलिपिड चयापचय को प्रभावित करता था। यकृत मेटाबोलाइट्स में, एमजीएएम और रैफिनोज गैलेक्टोज चयापचय से संबंधित थे। कई अध्ययनों से पता चला है कि रैफिनोज परिवार ओलिगोसेकेराइड का सेवन एचएफडीचूहों में चयापचय संबंधी विकारों में सुधार कर सकता है।

इसके अलावा, सामग्री-लक्ष्य-मेटाबोलाइट्स-पाथवे नेटवर्क का निर्माण किया गया है (चित्रा 7)। सामग्री में, क्वेरसेटिन ने सबसे अधिक किनारों को जोड़ा, यह दर्शाता है कि एफपी का क्वेरसेटिन लिपिड को कम करने में सबसे महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। उपरोक्त-एकीकृत विश्लेषण ने हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के प्रमुख लक्ष्यों, मेटाबोलाइट्स और मार्गों का खुलासा किया, जो इस दवा के चिकित्सीय तंत्र और नैदानिक अनुप्रयोग के आगे के अध्ययन की नींव हो सकती है।

आणविक डॉकिंग।
चयनित अवयवों और प्रमुख लक्ष्यों के बीच बातचीत की संभावना की जांच करने के लिए, आणविक डॉकिंग का उपयोग उनके लिगैंड-सक्रिय साइट इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए किया गया था। ऑटोडॉक विना सॉफ्टवेयर (सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग आणविक डॉकिंग करने के लिए किया गया था, और स्कोरिंग फ़ंक्शन की रैंक के अनुसार पहली डॉकिंग पोज़ को आउटपुट किया गया था। डॉकिंग परिणाम चित्रा 8 में दिखाए गए हैं।

एकीकृत विश्लेषण में, CYP1A1, ACHE और MGAM अंतर मेटाबोलाइट्स से संबंधित थे; उन्होंने लक्ष्य और मेटाबोलाइट्स के बीच पुल ों का निर्माण किया। लक्ष्य और सामग्री के बीच संबंध को सत्यापित करने के लिए आगे आणविक डॉकिंग की गई। सीवाईपी 1 ए 1 के साथ घटक डॉकिंग के परिणाम निम्नानुसार थे: गैलिक एसिड ने अमीनो एसिड अवशेषों एएसएन -185, टायर -187, एएसएन -219 और हिस -500 के माध्यम से चार हाइड्रोजन बांड बनाए, और अमीनो एसिड अवशेष टायर -187 (चित्रा 8 ए) के माध्यम से π-π स्टैकिंग इंटरैक्शन का गठन किया; क्वेरसेटिन ने एएसएन -185, एएसएन -219, और हिस -500, हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन और टायर -187 के माध्यम से π-π स्टैकिंग इंटरैक्शन के माध्यम से तीन हाइड्रोजन बॉन्ड बनाए (चित्रा 8 बी); बीटा-सिटोस्टेरॉल ने Arg-362, Ser-363, Leu-365, और Arg-464 के माध्यम से चार हाइड्रोजन बांड बनाए, और ग्लू -369 और इले -439 के माध्यम से हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन (चित्रा 8 सी)। बाध्यकारी ऊर्जा क्रमशः 5.3, 7.0, और 7.3 किलो कैलोरी / एसीएचई के साथ बातचीत में, गैलिक एसिड को एआरजी -237, एआरजी -238 और एआरजी -480 (चित्रा 8 डी) के साथ हाइड्रोजन बांड द्वारा स्थिर किया गया था; क्वेरसेटिन को Arg-237 और Phe-474 के साथ हाइड्रोजन बांड द्वारा, PHE-157 के साथ हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन द्वारा, और टायर -478 के साथ π-π स्टैकिंग इंटरैक्शन द्वारा स्थिर किया गया था (चित्रा 8E); बीटा-सिटोस्टेरॉल को पीएचई -157, वैल -244, इले -248, पीएचई -474, अला 477 और टायर 478 (चित्रा 8 एफ) के साथ हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन द्वारा स्थिर किया गया था। बाध्यकारी ऊर्जा क्रमशः 5.0, 6.5, और 8.0 किलो कैलोरी / एमजीएएम के साथ बातचीत में, गैलिक एसिड को आईले -1716, ग्लाइ -1747 और टीआरपी -1749 के साथ हाइड्रोजन बांड द्वारा स्थिर किया गया था, और टायर -1715 और टीआरपी -1749 के साथ हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन द्वारा (चित्रा 8 जी); क्वेरसेटिन को Arg-1311, Thr-1726, Gln-1731 और Trp-1752 के साथ हाइड्रोजन बांड द्वारा, Arg-1730 के साथ हाइड्रोजन बांड द्वारा, और His-1727 के साथ π-π स्टैकिंग द्वारा स्थिर किया गया था (चित्रा 8H); बीटा-सिटोस्टेरॉल को प्रो -1159, टीआरपी -1355, पीएचई -1427 और पीएचई -1560 के साथ हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन द्वारा स्थिर किया गया था, बाध्यकारी ऊर्जा क्रमशः 5.9, 8.1 और 6.9 किलो कैलोरी / अंतःक्रियाओं और बाध्यकारी समानताओं पर विस्तृत जानकारी तालिका 4 में प्रदर्शित की गई है। कई बाध्यकारी साइटें और उच्च बाध्यकारी ऊर्जा सामग्री और प्रोटीन लक्ष्यों के बीच उच्च समानताओं की व्याख्या करती हैं, यह सत्यापित करते हुए कि ये तत्व हाइपरलिपिडिमिया से संबंधित लक्ष्यों पर कार्य करके लिपिड को कम करने की भूमिका निभाते हैं।

Figure 1
चित्रा 1: एकीकृत रणनीति का योजनाबद्ध फ्लोचार्ट। हब सामग्री और जीन नेटवर्क फार्माकोलॉजी (भाग 1) द्वारा निकाले गए थे। हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के विभेदक मेटाबोलाइट्स का विश्लेषण प्लाज्मा और यकृत मेटाबोलॉमिक्स (भाग 2) द्वारा किया गया था। भाग 1 और भाग 2 (भाग 3) के एकीकृत विश्लेषण के आधार पर प्रमुख लक्ष्यों, मेटाबोलाइट्स और मार्गों की पहचान की गई और उन्हें जोड़ा गया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के प्रभाव की लक्ष्य स्क्रीनिंग, नेटवर्क निर्माण और संवर्धन विश्लेषण। (ए) एफपी-हाइपरलिपिडिमिया लक्ष्यों का वेन आरेख। (बी) संभावित सक्रिय दवा-सामग्री-लक्ष्य-रोग नेटवर्क: यहां उल्लिखित विभिन्न रंग प्रतीक: रोग (लाल), दवा (नीला), सामग्री (हरा), और लक्ष्य (पीला)। (सी) स्ट्रिंग द्वारा पीपीआई नेटवर्क। (डी) जीओ मार्ग संवर्धन विश्लेषण। (ई) केईजीजी मार्ग संवर्धन विश्लेषण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: एचएफडी-प्रेरित हाइपरलिपिडिमिया (एन = 6) वाले चूहों में प्लाज्मा लिपिड स्तर और यकृत सूचकांक पर एफपी का प्रभाव। (ए) टीसी का स्तर। (बी) एलडीएल-सी के स्तर। (सी) एचडीएल-सी स्तर। (डी) टीजी स्तर। (ई) एलडीएल-सी/एचडीएल-सी अनुपात। (एफ) लिवर इंडेक्स.*पी < 0.05, **पी < 0.01, ***पी < 0.001। सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतरों का मूल्यांकन एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग करके किया गया था, जिसके बाद डुनेट के कई तुलना परीक्षण या पोस्ट-हॉक विश्लेषण किए गए थे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: एचएफडी-प्रेरित हाइपरलिपिडिमिया (एच एंड ई धुंधला) के साथ चूहों में यकृत ऊतक पर एफपी का प्रभाव। (ए, बी) एनसी समूह, (सी, डी) एचएफडी समूह, (ई, एफ) FP_L समूह, (जी, एच) FP_H समूह, (आई, जे) पीसी समूह (एन = 6)। स्केल बार: (ए, सी, ई = 200 μm; बी, डी, एफ = 50 μm)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: ओपीएलएस-डीए स्कोर प्लॉट, गर्मी मानचित्र, और अंतर मेटाबोलाइट्स के चयापचय मार्ग। ओपीएलएस-डीए स्कोर प्लाज्मा (ए) और यकृत (बी) में एचएफडी चूहों पर एफपी के प्लॉट। प्लाज्मा (सी) और यकृत (डी) में अंतर मेटाबोलाइट्स के गर्मी मानचित्र। प्लाज्मा (ई) और यकृत (एफ) में अंतर मेटाबोलाइट्स के चयापचय मार्ग। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्रा 6: प्रमुख मेटाबोलाइट्स और लक्ष्यों के यौगिक-प्रतिक्रिया-एंजाइम-जीन नेटवर्क। निम्न-डिग्री नोड्स हटा दिए गए हैं। लाल षट्भुज, नीले घेरे, गोल हरे आयताकार और भूरे हीरे क्रमशः सक्रिय यौगिकों, जीन, प्रोटीन और प्रतिक्रियाओं का प्रतिनिधित्व करते हैं। प्रमुख लक्ष्यों और मेटाबोलाइट्स को बढ़ाया गया था। सफेद पृष्ठभूमि वाले मार्ग प्लाज्मा में काफी विनियमित होते हैं। ग्रे पृष्ठभूमि वाला मार्ग यकृत में काफी विनियमित होता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 7
चित्रा 7: सामग्री-लक्ष्य-मेटाबोलाइट्स-मार्ग नेटवर्क। रंग जितना गहरा होता है, उतने ही जुड़े हुए किनारे, नोड को दर्शाते हुए इस नेटवर्क में अधिक महत्वपूर्ण होते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 8
चित्रा 8: एफपी सामग्री और प्रमुख लक्ष्यों के इंटरैक्शन आरेख । (ए) सीवाईपी 1 ए 1 पर काम करने वाला गैलिक एसिड। (बी) क्वेरसेटिन सीवाईपी 1 ए 1 पर कार्य करता है। (सी) बीटा-सिटोस्टेरॉल सीवाईपी 1 ए 1 पर कार्य करता है। (डी) एसीएचई पर काम करने वाला गैलिक एसिड। (ई) एसीएचई पर कार्य करने वाले क्वेरसेटिन। (एफ) एसीएचई पर बीटा-सिटोस्टेरोलिंग कार्य। (जी) एमजीएएम पर काम करने वाला गैलिक एसिड। (एच) एमजीएएम पर कार्य करने वाले क्वेरसेटिन। (I) एमजीएएम पर काम करने वाला बीटा-सिटोस्टेरॉल। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 9
चित्रा 9: हाइपरलिपिडिमिया परिणाम के खिलाफ एफपी का अवलोकन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

तालिका 1: एफपी जलीय अर्क की चयनित सामग्री। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 2: तीन समूहों के बीच अंतर मेटाबोलाइट्स। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 3: प्रमुख लक्ष्यों, चयापचयों और मार्गों पर जानकारी। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 4: एफपी सामग्री और लक्ष्य प्रोटीन के बीच बाध्यकारी साइटें और कार्रवाई बल। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

पूरक चित्र 1: एफपी जलीय अर्क के सकारात्मक और नकारात्मक आयन क्रोमैटोग्राम। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्र 2: बैटमैन-टीसीएम द्वारा एफपी घटक-लक्ष्य-मार्ग-रोग नेटवर्क। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा 3: नेटवर्क फार्माकोलॉजी में हब जीन का आवृत्ति विश्लेषण। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्र 4: प्लाज्मा और यकृत क्यूसी नमूनों के आयन क्रोमैटोग्राम। प्लाज्मा क्यूसी नमूनों के प्रतिनिधि सकारात्मक (ए) और नकारात्मक (बी) आयन क्रोमैटोग्राम। यकृत क्यूसी नमूनों के प्रतिनिधि सकारात्मक (सी) और नकारात्मक (डी) आयन क्रोमैटोग्राम। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा 5: प्लाज्मा (ए) और यकृत (बी) क्यूसी नमूनों के पीसीए स्कोर प्लॉट। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्र 6: प्लाज्मा (ए और बी) और यकृत (सी और डी) नमूनों के ओपीएलएस-डीए स्कोर प्लॉट। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्र 7: प्लाज्मा (ए) और यकृत (बी) नमूनों में अंतर मेटाबोलाइट्स के वेन आरेख। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

हाल के वर्षों में, हाइपरलिपिडिमिया की घटना दर बढ़ रही है, मुख्य रूप से दीर्घकालिक अस्वास्थ्यकर खाने की आदतों के कारण। टीसीएम और इसके रासायनिक अवयवों में विभिन्न औषधीय गतिविधियां हैं, जिनका हालके वर्षों में व्यापक रूप से अध्ययन किया गया है। एफपी एक प्रकार का फल संसाधन है, जिसका उपयोग दवा और भोजन दोनों के रूप में किया जाता है, और हाइपरलिपिडिमिया के इलाज के लिए एक महत्वपूर्ण क्षमता है। हालांकि, हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के संभावित चिकित्सीय तंत्र को आगे के अध्ययन की आवश्यकता है।

नेटवर्क फार्माकोलॉजी आणविक स्तर पर दवा पॉलीफार्माकोलॉजिकल प्रभावों का मूल्यांकन करता है, और प्रमुख तंत्र39 को निर्धारित करने के लिए प्राकृतिक उत्पादों और प्रोटीन की बातचीत की भविष्यवाणी करता है। पहला कदम दवा के सक्रिय अवयवों और प्रमुख लक्ष्यों का चयन करना है। इस शोध में नौ सक्रिय तत्व और 62 हब जीन पाए गए। हाइपरलिपिडिमिया पर एफपी के आणविक तंत्र को और समझने के लिए, नेटवर्क फार्माकोलॉजी विश्लेषण के आधार पर पीपीआई और घटक-लक्ष्य नेटवर्क स्थापित किए गए थे। प्रमुख अवयवों और लक्ष्यों के दायरे को संकीर्ण करने के लिए, बैटमैन-टीसीएम द्वारा हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिया और कोरोनरी एथेरोस्क्लेरोसिस से संबंधित तीन प्रमुख अवयवों (गैलिक एसिड, क्वेरसेटिन और बीटा-सिटोस्टेरॉल) की स्थापना की गई है। ये सभी तत्व एलडीएल-सी के स्तर को कम कर सकते हैं या एचडीएल-सी के स्तर को बढ़ा सकते हैं, हाइपरलिपिडिमिया पर एफपी के विशिष्ट प्रभावों को मान्य कर सकते हैं। इसके अलावा, केईजीजी संवर्धन विश्लेषण के अनुसार, हाइपरलिपिडिमिया पर एफपी का कार्य लिपिड और एथेरोस्क्लेरोसिस मार्ग की गतिविधि से संबंधित है। यद्यपि यह विधि डेटाबेस पर बहुत अधिक निर्भर करती है और प्रयोगात्मक सत्यापन का अभाव है, इसमें सैद्धांतिक मूल्य है और बाद में प्रयोगात्मक सत्यापन अनुसंधान के लिए विचार प्रदान करता है।

आगे प्रयोगात्मक सत्यापन के लिए, चूहों को हाइपरलिपिडिमिया को प्रेरित करने के लिए 8 सप्ताह के लिए वसा-पूरक आहार के साथ खिलाया गया था। परिणामों से पता चला कि प्लाज्मा टीसी, एलडीएल-सी और टीजी के स्तर में काफी वृद्धि हुई थी। हालांकि एचडीएल-सी के स्तर में काफी कमी आई है, लेकिन एलडीएल-सी से एचडीएल-सी का अनुपात काफी बढ़ गया है। हिस्टोपैथोलॉजिकल अवलोकनों से पता चला कि एचएफडी चूहों के यकृत ऊतक गंभीर रूप से क्षतिग्रस्त हो गए थे, लेकिन यकृत सूचकांक में कोई महत्वपूर्ण वृद्धि नहीं हुई थी; यह हो सकता है कि शरीर के वजन और आंत के वजन में परिवर्तन में अधिक समय लगता है। लिपिड और यकृत परिवर्तन ने हाइपरलिपिडिमिया पर एफपी के हस्तक्षेप प्रभाव को पर्याप्त रूप से दिखाया। हालांकि, हस्तक्षेप प्रभाव के आंतरिक तंत्र को अभी भी आगे की खोज की आवश्यकता है।

मेटाबोलॉमिक्स संभावित मेटाबोलाइट्स और संबंधित मार्गों की एक सूची प्रदान करता है, जिसका उद्देश्य चयापचय रोगों के तंत्र औरचिकित्सीय दवाओं की कार्रवाई का पता लगाना है। मेटाबोलॉमिक्स का परिणाम नमूने के प्रकार से प्रभावित हो सकता है। हाइपरलिपिडिमिया की रोगजनक विशेषताओं को ध्यान में रखते हुए, इस शोध में मेटाबोनोमिक विश्लेषण के लिए प्लाज्मा और यकृत के नमूने चुने गए थे। ओपीएलएस-डीए परिणामों के अनुसार, एनसी, एचएफडी और FP_H समूहों के मेटाबोलाइट्स के साथ अच्छी तरह से भेदभाव किया गया था। प्लाज्मा में कुल 16 अंतर मेटाबोलाइट्स पाए गए, और यकृत में 6 अंतर मेटाबोलाइट्स पाए गए। यकृत की तुलना में प्लाज्मा में अधिक प्रभावित मेटाबोलाइट्स थे, यह साबित करते हुए कि रक्त हाइपरलिपिडिमिया से प्रेरित चयापचय गड़बड़ी का मुख्य स्थान है। एफपी हस्तक्षेप एचएफडी के प्रभाव में इन मेटाबोलाइट्स के परिवर्तन को उलट सकता है। इसके अलावा, इन अंतर मेटाबोलाइट्स को केईजीजी डेटाबेस में आयात किया गया था। प्लाज्मा में अंतर मेटाबोलाइट्स के महत्वपूर्ण चयापचय मार्ग ट्रिप्टोफैन चयापचय थे, और यकृत में टॉरिन और हाइपोटॉरिन चयापचय थे। इस शोध में, एफपी हस्तक्षेप ने ट्रिप्टोफैन चयापचय के एल-किनुरेनिन की सामग्री और टॉरिन और हाइपोटॉरिन चयापचय की टॉरिन सामग्री में वृद्धि की, जिसका अर्थ है कि एफपी चयापचय संबंधी विकारों और हाइपरलिपिडिमिया को अनुकूल रूप से समायोजित करने में प्रभावी हो सकता है। मेटाबोलॉमिक्स विश्लेषण से पता चला कि कौन से मेटाबोलाइट्स हाइपरलिपिडिमिया या एफपी हस्तक्षेप से संबंधित थे, और एफपी प्रभाव के डाउनस्ट्रीम तंत्र को निर्धारित किया।

मेटाबोलॉमिक्स के साथ नेटवर्क फार्माकोलॉजी के परिणाम को जोड़कर, यौगिक-प्रतिक्रिया-एंजाइम-जीन नेटवर्क में तीन प्रमुख लक्ष्यों (सीवाईपी 1 ए 1, एसीएचई और एमजीएएम) की पहचान की गई थी। आणविक डॉकिंग विश्लेषण के अनुसार, इन लक्ष्यों ने एफपी सामग्री (गैलिक एसिड, क्वेरसेटिन और बीटा-सिटोस्टेरॉल) के साथ उच्च संबंध दिखाए। चार मेटाबोलाइट्स (एल-किनुरेनिन, कॉर्टिकोस्टेरोन, एसिटाइलकोलाइन और रैफिनोज) और चार संबंधित मार्गों (ट्रिप्टोफैन चयापचय, स्टेरॉयड हार्मोन बायोसिंथेसिस, ग्लिसरोफॉस्फोलिपिड चयापचय और गैलेक्टोज चयापचय) को प्रमुख मेटाबोलाइट्स और चयापचय मार्गों के रूप में पहचाना गया था। इनमें से, क्वेरसेटिन सबसे अधिक लक्ष्यों से जुड़ा था, और ट्रिप्टोफैन चयापचय मेटाबोनोमिक्स और एकीकृत परिणाम दोनों में दिखाई दिया। वे हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ एफपी के चिकित्सीय प्रभाव में सबसे आवश्यक भूमिका निभाते हैं। आणविक डॉकिंग परिणाम से पता चला है कि CYP1A1, ACHE और MGAM में सामग्री के साथ उच्च संबंध हैं। उपरोक्त परिणाम साबित करते हैं कि ये स्क्रीन किए गए लक्ष्य एफपी के चिकित्सीय प्रभाव से निकटता से संबंधित हैं।

वर्तमान शोध में, गैलिक एसिड, क्वेरसेटिन, और बीटा-सिटोस्टेरॉल को एंटी-हाइपरलिपिडिमिया की ओर एफपी सक्रिय अवयवों के रूप में पहचाना गया था, और ट्रिप्टोफैन चयापचय एचएफडी चूहों में एफपी थेरेपी का मुख्य चयापचय मार्ग है। परिणाम का अवलोकन चित्र 9 में दिखाया गया है। इस शोध ने तंत्र के आगे के अध्ययन के लिए डेटा और सैद्धांतिक समर्थन की पेशकश की और एफपी दवा के नैदानिक अनुप्रयोग के लिए एक नींव प्रदान की। यह भी साबित हुआ कि नैदानिक अभ्यास में महान संभावनाओं के साथ प्राकृतिक भोजन एक आशाजनक विकल्प हो सकता है। हालांकि, इस शोध में अभी भी कुछ कमियां हैं। हाइपरलिपिडिमिया पर अकेले सक्रिय घटक के चिकित्सीय प्रभाव को सत्यापित नहीं किया गया है। इसके अलावा, प्रमुख लक्ष्यों के मार्ग का अध्ययन नहीं किया गया है; सटीक तंत्र को सत्यापित करने के लिए इसे और व्यवस्थित आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों की भी आवश्यकता है।

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Disclosures

सभी लेखक घोषणा करते हैं कि उनके पास हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

इस शोध को टीसीएम स्वास्थ्य संरक्षण और पुनर्वास (2022 सी 005) की उत्पाद विकास और नवाचार टीम और "स्वास्थ्य संरक्षण और पुनर्वास +" के नए व्यापार क्रॉस-बॉर्डर एकीकरण पर अनुसंधान द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
101-3B Oven Luyue Instrument and Equipment Factory \
80312/80302 Glass Slide Jiangsu Sitai Experimental Equipment Co., LTD \
80340-1630 Cover Slip Jiangsu Sitai Experimental Equipment Co., LTD \
AccucoreTM C18 (3 mm × 100 mm, 2. 6 μm) Thermo Fisher Scientific \
Acetonitrile Fisher Chemical A998 Version 1.5.6
ACQUITY UPLC HSS T3 Column (2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) Thermo Fisher Scientific \
Aethanol Fisher Chemical A995 Version 3.0
Ammonia Solution Chengdu Cologne Chemicals Co., LTD 1336-21-6 Version 3.9.1
AutoDockTools Scripps Institution of Oceanography \
BS-240VT Full-automatic Animal Biochemical Detection System Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd. \
Compound Discoverer Thermo Fisher Scientific \
Cytoscape Cytoscape Consortium \
DM500 Optical Microscope Leica \
DV215CD Electronic Balance Ohaus Corporation ., Ltd T15A63
Ethyl Alcohol Chengdu Cologne Chemicals Co., LTD 64-17-5
Formic Acid Fisher Chemical A118
HDL-C Assay Kit Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute A112-1-1
Hematoxylin Staining Solution Biosharp BL700B
High Fat Diet ENSIWEIER 202211091031
Hitachi CT15E/CT15RE Centrifuge Hitachi., Ltd. \
Homogenizer Oulaibo Technology Co., Ltd \
Hydrochloric Acid Chengdu Cologne Chemicals Co., LTD 7647-01-0
Image-forming System LIOO \
JB-L5 Freezer Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd \
JB-L5 Tissue Embedder Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd \
JK-5/6 Microtome Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd \
JT-12S Hydroextractor Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd \
KQ3200E Ultrasonic Cleaner Kun Shan Ultrasonic Instruments Co., Ltd \
LDL-C Assay Kit Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute A113-1-1
Male C57BL/6 Mice  SBF Biotechnology Co., Ltd. \ Version 2.3.2
Neutral Balsam Shanghai Yiyang Instrument Co., Ltd 10021190865934
Pure Water Guangzhou Watson's Food & Beverage Co., Ltd GB19298
PyMOL DeLano Scientific LLC \ Version 14.1
RE-3000 Rotary Evaporator Yarong Biochemical Instrument Factory ., Ltd \
RM2016 Pathological Microtome Shanghai Leica Instruments Co., Ltd \ Version 26.0
SIMCA-P Umetrics AB \
Simvastatin Merck Sharp & Dohme., Ltd 14202220051
SPSS International Business Machines Corporation \
TC Assay Kit Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute A111-1-1
TG Assay Kit Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute A110-1-1
UPLC-Q-Exactive Quadrupole Electrostatic Field Orbital Hydrazine High Resolution Mass Spectrometry Thermo Fisher Scientific \
Vortex Vibrator Beijing PowerStar Technology Co., Ltd. LC-Vortex-P1
Xylene Chengdu Cologne Chemicals Co., LTD 1330-20-7

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References

  1. Nelson, R. H. Hyperlipidemia as a risk factor for cardiovascular disease. Primary Care: Clinics in Office Practice. 40 (1), 195-211 (2013).
  2. Mach, F., et al. 2019 ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidaemias: lipid modification to reduce cardiovascular risk: the Task Force for the management of dyslipidaemias of the European Society of Cardiology (ESC) and European Atherosclerosis Society (EAS). European Heart Journal. 41 (1), 111-188 (2020).
  3. Oesterle, A., Laufs, U., Liao, J. K. Pleiotropic effects of statins on the cardiovascular system. Circulation Research. 120 (1), 229-243 (2017).
  4. Last, A. R., Ference, J. D., Menzel, E. R. Hyperlipidemia: drugs for cardiovascular risk reduction in adults. American Family Physician. 95 (2), 78-87 (2017).
  5. Wu, S., et al. Recent advances of tanshinone in regulating autophagy for medicinal research. Front Pharmacol. 13, 1059360 (2022).
  6. Mirunalini, S., Krishnaveni, M. Therapeutic potential of Phyllanthus emblica (amla): the ayurvedic wonder. Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology. 21 (1), 93-105 (2010).
  7. Zhao, H. J., et al. Fructus phyllanthi tannin fraction induces apoptosis and inhibits migration and invasion of human lung squamous carcinoma cells in vitro via MAPK/MMP pathways. Acta Pharmacologica Sinica. 36 (6), 758-768 (2015).
  8. Yan, X., et al. Current advances on the phytochemical composition, pharmacologic effects, toxicology, and product development of Phyllanthi Fructus. Frontiers in Pharmacology. 13, 1017628 (2022).
  9. Yang, F., et al. Chemical constituents from the fruits of Phyllanthus emblica L. Biochemical Systematics and Ecology. 92, 104122 (2020).
  10. Wu, L., et al. Phytochemical analysis using UPLC-MSn combined with network pharmacology approaches to explore the biomarkers for the quality control of the anticancer tannin fraction of Phyllanthus emblica L. habitat in Nepal. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021, 6623791 (2021).
  11. Variya, B. C., Bakrania, A. K., Chen, Y., Han, J., Patel, S. S. Suppression of abdominal fat and anti-hyperlipidemic potential of Emblica officinalis: Upregulation of PPARs and identification of active moiety. Biomedicine & Pharmacotherapy. 108, 1274-1281 (2018).
  12. Gertsch, J. Botanical drugs, synergy, and network pharmacology: forth and back to intelligent mixtures. Planta Medica. 77 (11), 1086-1098 (2011).
  13. Nicholson, J. K., Wilson, I. D. Understanding 'global' systems biology: metabonomics and the continuum of metabolism. Nature Reviews Drug Discovery. 2 (8), 668-676 (2003).
  14. Li, T., et al. Integrated metabolomics and network pharmacology to reveal the mechanisms of hydroxysafflor yellow A against acute traumatic brain injury. Computational and Structural Biotechnology Journal. 19, 1002-1013 (2021).
  15. Wang, F., et al. Network pharmacology combined with metabolomics to investigate the anti-hyperlipidemia mechanism of a novel combination. Journal of Functional Foods. 87, 104848 (2021).
  16. Adams, J. M., Jafar-Nejad, H. Determining bile duct density in the mouse liver. Journal of Visualized Experiments. (146), e59587 (2019).
  17. Wang, J. Y., et al. Use of viral entry assays and molecular docking analysis for the identification of antiviral candidates against coxsackievirus A16. Journal of Visualized Experiments. (149), e59920 (2019).
  18. Wu, L. F., Liang, W. Y., Zhang, L. Z. Determination of main components of Tibetan medicine Phyllanthus emblica L. World Science and Technology-Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 22 (8), 2857-2863 (2022).
  19. El-Hussainy, E. H. M., Hussein, A. M., Abdel-Aziz, A., El-Mehasseb, I. Effects of aluminum oxide (Al2O3) nanoparticles on ECG, myocardial inflammatory cytokines, redox state, and connexin 43 and lipid profile in rats: possible cardioprotective effect of gallic acid. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 94 (8), 868-878 (2016).
  20. Huang, W. Y., et al. Quercetin, hyper, and chlorogenic acid improve endothelial function by antioxidant, antiinflammatory, and ACE inhibitory effects. Journal of Food Science. 82 (5), 1239-1246 (2017).
  21. Lu, T. M., et al. Hypocholesterolemic efficacy of quercetin rich onion juice in healthy mild hypercholesterolemic adults: a pilot study. Plant Foods for Human Nutrition. 70 (4), 395-400 (2015).
  22. Witkowska, A. M., et al. Dietary plant sterols and phytosterol-enriched margarines and their relationship with cardiovascular disease among polish men and women: The WOBASZ II cross-sectional study. Nutrients. 14 (13), 2665 (2022).
  23. Turini, E., et al. Efficacy of plant sterol-enriched food for primary prevention and treatment of hypercholesterolemia: a systematic literature review. Foods. 11 (6), 839 (2022).
  24. Alamro, S. A., et al. Fermented camel milk enriched with plant sterols improves lipid profile and atherogenic index in rats fed high-fat and-cholesterol diets. Heliyon. , e10871 (2022).
  25. Gao, P., Wen, X., Ou, Q., Zhang, J. Which one of LDL-C/HDL-C ratio and non-HDL-C can better predict the severity of coronary artery disease in STEMI patients. BMC Cardiovascular Disorders. 22 (1), 318 (2022).
  26. Sun, T., et al. Predictive value of LDL/HDL ratio in coronary atherosclerotic heart disease. BMC Cardiovascular Disorders. 22 (1), 273 (2022).
  27. Maegawa, K., et al. Dietary raffinose ameliorates hepatic lipid accumulation induced by cholic acid via modulation of enterohepatic bile acid circulation in rats. British Journal of Nutrition. 127 (11), 1621-1630 (2022).
  28. Antony, B., Merina, B., Sheeba, V. AmlamaxTM in the management of dyslipidemia in humans. Indian Journal of Pharmaceutical Sciences. 70 (4), 504 (2008).
  29. Antony, B., Benny, M., Kaimal, T. N. B. A pilot clinical study to evaluate the effect of Emblica officinalis extract (Amlamax™) on markers of systemic inflammation and dyslipidemia. Indian Journal of Clinical Biochemistry. 23 (4), 378-381 (2008).
  30. Nambiar, S. S., Shetty, N. P. Phytochemical profiling and assessment of low-density lipoprotein oxidation, foam cell-preventing ability and antioxidant activity of commercial products of Emblica officinalis fruit. Journal of Food Biochemistry. 39 (3), 218-229 (2015).
  31. Gopa, B., Bhatt, J., Hemavathi, K. G. A comparative clinical study of hypolipidemic efficacy of Amla (Emblica officinalis) with 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme-A reductase inhibitor simvastatin. Indian Journal of Pharmacology. 44 (2), 238 (2012).
  32. Jung, T. W., et al. Administration of kynurenic acid reduces hyperlipidemia-induced inflammation and insulin resistance in skeletal muscle and adipocytes. Molecular and Cellular Endocrinology. , 518 (2020).
  33. Dong, Y., Li, X., Liu, Y., Gao, J., Tao, J. The molecular targets of taurine confer anti-hyperlipidemic effects. Life Sciences. 278, 119579 (2021).
  34. Huang, B., Bao, J., Cao, Y. R., Gao, H. F., Jin, Y. Cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) catalyzes lipid peroxidation of oleic acid-induced HepG2 cells. Biochemistry. 83 (5), 595-602 (2018).
  35. Xia, H., et al. Alpha-naphthoflavone attenuates non-alcoholic fatty liver disease in oleic acid-treated HepG2 hepatocytes and in high fat diet-fed mice. Biomedicine & Pharmacotherapy. 118, 109287 (2019).
  36. Dai, Z., et al. Protective effects of α-galacto-oligosaccharides against a high-fat/western-style diet-induced metabolic abnormalities in mice. Food & Function. 10 (6), 3660-3670 (2019).
  37. Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. J Ethnopharmacol. 293, 115278 (2022).
  38. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl(2)-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568 (2023).
  39. Noor, F., et al. Network pharmacology approach for medicinal plants: review and assessment. Pharmaceuticals. 15 (5), 572 (2022).
  40. Li, X., et al. Role of potential bioactive metabolites from traditional Chinese medicine for type 2 diabetes mellitus: An overview. Front Pharmacol. 13, 1023713 (2022).

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हाइपरलिपिडिमिया के खिलाफ फ्रुक्टस फिलैंथी के तंत्र का नेटवर्क फार्माकोलॉजी भविष्यवाणी और मेटाबोलॉमिक्स सत्यापन
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