Summary
このプロトコルは、低電圧交流による連続刺激によって誘発されるラット心臓における長期心室細動のモデルを提示します。このモデルは成功率が高く、安定していて信頼性が高く、再現性があり、心機能への影響が少なく、軽度の心筋損傷のみを引き起こします。
Abstract
心室細動(VF)は心臓病患者の発生率が高い致命的な不整脈ですが、灌流下でのVF停止は心臓手術の分野では術中停止の無視された方法です。心臓外科の最近の進歩に伴い、灌流下での長期VF研究の需要が高まっています。しかし、この分野には、慢性心室細動の単純で信頼性が高く、再現可能な動物モデルがありません。このプロトコルは、心外膜の交流(AC)電気刺激を介して長期VFを誘発します。VFを誘導するために、長期VFを誘発するための低電圧または高電圧での連続刺激、および自発的な長期VFを誘発するための低電圧または高電圧での5分間の刺激など、さまざまな条件が使用されました。異なる状態の成功率、ならびに心筋損傷および心機能の回復率を比較した。その結果,低電圧連続刺激は長期VFを誘導し,5分間の低電圧刺激は軽度の心筋損傷を伴う自発的長期VFを誘導し,心機能の回復率が高いことが示された。ただし、低電圧で継続的に刺激される長期VFモデルは、成功率が高かった。高電圧刺激はVF誘導率が高いが、除細動成功率が低く、心機能の回復不良、重度の心筋損傷を示した。これらの結果に基づいて、その高い成功率、安定性、信頼性、再現性、心機能への影響の低さ、および軽度の心筋損傷のために、継続的な低電圧心外膜AC刺激が推奨されます。
Introduction
心臓手術は通常、開胸術 によって 行われ、大動脈を塞ぎ、心臓を止めさせるための心臓麻痺溶液で灌流します。心臓手術の繰り返しは、最初の手術よりも困難な場合があり、合併症と死亡率が高くなります1、2、3。さらに、従来の胸骨正中切開術アプローチは、胸骨の後ろのブリッジ血管、上行大動脈、右心室、およびその他の重要な構造に損傷を与える可能性があります。結合組織の分離による広範囲の出血、胸骨創傷感染、および胸骨切開による胸骨骨髄炎はすべて、考えられる合併症です。広範囲の解剖は、重要な心臓構造の病変や出血のリスクを高めます。
低侵襲心臓手術の発展に伴い、切開は小さくなり、心停止を達成するのが難しい場合があります。心室細動(VF)4,5の下で心臓手術を繰り返すことは安全で実行可能であり、より優れた心筋保護を提供する可能性があります。したがって、このプロトコルは、低侵襲の体外循環を伴う手術におけるVF心停止の方法を導入します。心臓はVF中に効果的な収縮を失い、したがって、手術中に上行大動脈を縫合して塞ぐ必要がなく、手順が簡単になります。ただし、心臓が継続的に灌流された場合でも、長期のVFは心臓に害を及ぼす可能性があります。
この方法がより広く使用されるようになるにつれて、VF中に心臓を保護する方法の問題はますます重要になります。これには、長期VFの動物モデルを使用した広範かつ詳細な研究が必要になります。過去には、この分野の研究は主に大型動物を使用していました6,7、外科医、麻酔科医、灌流医、および他の研究者間の協力が必要でした。これらの研究は時間がかかりすぎ、サンプルサイズはしばしば小さく、研究は一般的に心機能に焦点を当てており、機構的および分子的評価にはあまり焦点を当てていませんでした。今日まで、長期VFモデルを確立するための詳細なプロトコルを報告した研究はありません。
このプロトコルは、したがって、ランゲンドルフ装置を用いて長期VFラットモデルを開発するために必要な詳細を提供する。プロトコルはシンプルで、経済的で、再現性があり、安定しています。
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Protocol
この調査で使用されたすべての実験手順とプロトコルは、PLA総合病院の動物管理および使用委員会によってレビューおよび承認されました。
1. ランゲンドルフ装置の準備
- クレブス・ヘンゼライト (K-H) バッファーを準備します。K-Hバッファーを調製するには、蒸留水に118.0 mM NaCl、4.7 mM KCl、1.2 mM MgSO 4、1.2 mM NaH 2 PO4、1.8 mM CaCl 2、25.0 mM NaHCO3、11.1 mM グルコース、および0.5 mM EDTAを加えます。
- 改良したランゲンドルフ灌流システムを準備します。
- K−H緩衝液を含むフラスコを約80mmHgの圧力で95%O2 +5%CO2 で連続的にガス化する。灌流チューブの一方の端をK-Hバッファーに入れ、灌流チューブの中央を水浴に通し、灌流チューブのもう一方の端に鈍い20G針を取り付けます。
- 針をワイヤースタンドに吊り下げます。灌流系の端からのK-Hバッファーの温度が37.0°C±1.0°Cになるようにウォーターバスの温度を調整します。
2.ハードウェアとソフトウェアの準備
- ハードウェア
- 生理学的信号レコーダーを使用して、すべてのアナログ信号をデジタル化して記録します。2つのステンレス鋼針電極を使用して双極心電図(ECG)を記録し、電気刺激に2つのステンレス鋼針電極を使用します。
- 4つの電極の一方の端を生理学的信号レコーダーに接続し、もう一方の端を装置に取り付けた後に心臓が配置される領域の近くに接続します。
- ソフトウェア
- ラップトップソフトウェアを使用して、バイポーラECGおよび血行動態パラメータを自動的に認識、調整、および記録します。パラメータには、左心室圧差(LVPD)、左心室発達圧(LVDP)と左心室拡張末期圧(LVEDP)の差、および心拍数(HR)が含まれます。
- 電気刺激装置のパラメータを30 Hz ACに設定し、低電圧グループには2 V、高電圧グループには6 Vを付与します。
3.孤立した心を準備する
- 動物を準備します。
- 0.05 mg / kgのブプレノルフィンと1,000 IU / kgのヘパリンナトリウムの腹腔内注射後、Sprague-Dawley(SD)ラットを2%イソフルランで麻酔します。.ラットがつま先のつまみに反応しなくなったことを確認してください。
- ラットを小動物の手術プラットフォームに移し、ラットを仰臥位にし、75%エタノールで胸部を滅菌します。
- 心臓を切除します。
- 子宮頸部郭清および気管挿管後にラットを人工呼吸器に接続し、歯付き鉗子で剣状突起から皮膚を持ち上げ、組織ハサミで皮膚を3cm横切開する。皮膚と肋骨の切開を両側の腋窩までV字型に伸ばします。
- 胸骨を組織鉗子で頭蓋状に反射して、心臓と肺を完全に露出させます。
- 2つの湾曲した鉗子を使用して胸腺を分離し、鈍く解剖します。胸腺組織をクランプし、両側で横方向に偏向させて大動脈とその枝を露出させます。
- 湾曲した鉗子を使用して大動脈と肺動脈を鈍く分離し、後で眼科用ハサミを使用して心臓を取り除き、心臓が除去されたら心臓を吊り下げることを容易にします。
注: この手順を初めて使用する場合は、手順 3.2.4 を省略できます。 - 鈍的解剖を使用して、腕頭体幹を周囲の組織から分離します。次に、腕頭体幹を湾曲した鉗子で固定して、心臓の除去を容易にします。腕頭体幹と左総頸動脈の間の大動脈を急速に切断します。ラットは心臓が取り除かれるとすぐに死にます。
- 余分な組織を切り取り、すぐに心臓を0〜4°CのK-Hバッファーを含むペトリ皿に浸して、残りの血液を洗い流して送り出します。
注:腕頭体幹と左総頸動脈の間の大動脈の切断は、体幹を保存することで大動脈の識別とカニューレの深さの推定が可能になるため、推奨されます。
- 心臓を吊るします。
- 心臓を2番目のペトリ皿に移します。大動脈を特定します。2つの眼科用鉗子を使用して大動脈を持ち上げ、鈍い針をランゲンドルフ装置に挿入します。
- 大動脈の深さを適切な位置に調整します。アシスタントに0縫合糸で結び目を結んでもらいます。次に、灌流流量調整器をオンにします。
注意: 手順全体を通して、気泡が心臓に入らないように注意してください。さらに、大動脈を切断してから最初の灌流までの時間は2分を超えてはならないことに注意してください。 - 圧力トランスデューサーに接続された小さな修正ラテックスバルーンを左心房に挿入し、バルーンを僧帽弁を通して左心室に押し込みます。バルーンを蒸留水で満たして、5〜10 mmHgの拡張末期圧力を達成します。
- ECGと電気刺激電極を心臓に接続します。次に、心臓をジャケット付きガラスチャンバーに入れて、内部温度を37.0°C±1.0°Cに維持します。
注意: 次の除外基準を使用してください:心拍数<250ビート/分;冠動脈流量(mL/分)<10mL/分または>25mL/分。ECGと電気刺激電極の接続位置を図 1Aに、ジャケット付きガラスチャンバーを 図1Bに示します。
4.心臓を灌流して電気的に刺激します(図2)
- 平衡段階(0-30分)
- 灌流を開始し、心臓が自発的に鼓動するまで約37°Cの温度を維持します。次に、心臓を20分間平衡化させます。
- ジャケット付きガラスチャンバー内の温度を約30°Cに維持するようにウォーターバス温度を調整します。
注意: 冷却プロセス全体は約10分続くはずです。
- 電気刺激ステージ(30〜120分)
- 温度が希望のレベルに達したら、ラップトップソフトウェアの電気刺激スイッチをアクティブにします。
注:電気刺激の開始時の双極ECGと左心室圧(LVP)を 図3Aに示します。 - 動物が継続的に刺激される長期VFグループの一部である場合は、90分間の電気刺激を許可します。動物が誘発された自発的長期VFグループにある場合は、 図3Bに示すように、5分間の電気刺激を許可してから電気刺激をオフにし、90分間の自発的長期VFを許可します。
注:電気刺激後90分以内に自発的VFを発症しない自発的長期VF群の心臓の場合、選択基準を満たさないため、電気刺激はオフになります。
- 温度が希望のレベルに達したら、ラップトップソフトウェアの電気刺激スイッチをアクティブにします。
- 再加温、除細動、および叩きの段階(120〜180分)
- VFの90分後、 図3Cに示すように、電極を使用して0.1Jの直流除細動を行います。
- 同時にウォーターバスの温度を調整して、ジャケット付きガラスチャンバー内の温度を約37°Cまでゆっくりと上昇させます。 加温プロセスを約10分間続けます。
- 除細動後、心臓を60分間鼓動させた後、約37°Cで10%KClでゆっくりと灌流して拍動を停止します。 さらなる分析のために心臓を取り除きます。
注:除細動後に鼓動しない心臓は、選択基準を満たしていません。さらに、冷却前(20分)、除細動後(120分)、および実験終了時(180分)に冠状動脈滲出液を収集することが重要です。
5.クレアチンキナーゼ-MB(CK-MB)アッセイおよび組織学的分析の実行
- CK-MBアッセイ
- 自動生化学分析装置および市販のCK-MBアッセイキットを使用して、採取した冠動脈滲出液中のCK−MBのレベルを測定します8。
- 組織学的解析
- 心臓を緩衝した10%ホルマリンで固定し、心臓を脱水してパラフィンに埋め込みます。
- ミクロトームを使用して、パラフィン包埋組織を5μmの切片に切断します。次に、切片をスライドガラスに取り付け、ヘマトキシリンとエオシン9で染色します。
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Representative Results
合計57匹のラットが実験に使用され、そのうち30匹が選択基準を満たしました。対象動物を5群に分け、対照群(C群)、低電圧連続刺激長期VF群(LC群)、高電圧連続刺激長期VF群(HC群)、低電圧誘起自発長期VF群(LI群)、高電圧誘起自発長期VF群(HI群)の6群に分けた。各グループの実験プロセスを 図2に示します。
VFモデルの成功率
VF率、除細動成功率、VFモデルの成功率を 表1に示す。LC群とHC群は継続的な電気刺激を受けたため、VFは100%の成功率で発生しましたが、HC群は除細動の成功率が低くなりました。5分後に電気刺激をオフにしたLI群とHI群はVF率が異なっていたが,VF率はLC群,HC群に比べて両群で低かった。電圧が高いグループはVFの発生率が高かったが、除細動の成功率は低かった。LC群とLI群は除細動成功率が高かったが,全体としてLC群が最もモデル成功率が高く,LI群はモデル成功率が低かった。
血行動態の変化
5つの実験群のHR、冠動脈流(CF)、およびLVPD回収率を図4A-Cに示す。回収率は、実験終了時の関連値のパーセンテージを実験開始時の値で割った値を示します。各群の血行動態データを対照群(C群)のデータと比較した。グループCの血行動態は実験中安定しており、HR、CF、およびLVPDのわずかな減少を示しました。低電圧誘起VFを有する2つのグループは、同様の性能および良好な回復率を有した。HRとLVPDはC群と比較して有意差はなかったが、CFの回収率はC群よりも有意に良好であった。
対照的に、高電圧誘発長期VF群の血行動態回復率は悪く、高電圧連続刺激長期VF群は最悪の回復率を示した。
CK-MBアッセイおよび組織学的解析結果
冠状動脈滲出液中のCK-MBレベルは心筋損傷を反映しています。図4Dに示すように、実験終了時に採取した冠動脈滲出液の分析では、CK-MBレベルが両方の高電圧グループで高いことが示されました。2つの低電圧群とC群の間に差は見られず、ヘマトキシリンとエオジン染色はHC群に電極燃焼領域を示した(図5)。
| 単離灌流心臓の総数 | VFの数 | VFレート | 除細動後の叩動回数 | 除細動後の鼓動率 | VFモデルの成功率 | |
| グループC | 6 | - | - | - | - | - |
| グループLC | 7 | 7 | 100% | 6 | 85.71% | 85.71% |
| グループHC | 14 | 14 | 100% | 6 | 42.86% | 42.86% |
| グループ李 | 16 | 7 | 43.75% | 6 | 85.71% | 37.50% |
| グループHI | 14 | 10 | 71.43% | 6 | 60.00% | 42.86% |
表 1: VF モデルの成功率。 略語:VF =心室細動;グループC =対照群;グループLC =低電圧連続刺激VFグループ;グループHC =高電圧連続刺激VFグループ;グループLI =低電圧誘起自発VFグループ;グループHI =高電圧誘起自発VFグループ。
図1:電極とジャケット付きガラスチャンバーの設定 。 (A)孤立したラット心臓上の電気刺激電極と双極心電図(ECG)電極の位置。白い矢印は電気刺激電極を指しています。黒い矢印はバイポーラECG電極を指しています。(B)実験中は、水浴とジャケット付きガラスチャンバーによる温度制御。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:心臓灌流および電気刺激手順。 略語:a =冷却を開始します。b =刺激を開始します。c =刺激を停止します。d =再ウォーミングを開始します。e =除細動。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:双極心電図(ECG)と左心室圧差(LVPD)。 (A)交流(AC)刺激を開始した後に心室細動(VF)が発生した。(B)自発的なVFは、AC刺激の停止後に発生しました。(C)除細動後に心臓が鼓動に戻った。略語:a =刺激を開始します。b =刺激を停止します。c =除細動。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:実験終了時に採取した冠状動脈滲出液中の血行力学的回復率とクレアチンキナーゼMB(CK-MB)値。 (A)各グループの心拍数(HR)回復率。(B)各群の冠動脈流量(CF)回復率。(C)各グループの左心室圧差(LVPD)回復率。(D)各群のクレアチンキナーゼMB(CK-MB)値。略称:VF =心室細動。(A-D)棒グラフは平均±標準偏差(SD)を示します。GraphPad Prismを使用して一元配置分散分析を実行し、続いてTukeyの多重比較検定を行いました。n = 1群あたり6匹のラット。*:グループCと比較。#:グループLCと比較。0.05未満のP値は統計的に有意であると見なされた。*/#: P < 0.05;**/##: P < 0.01;/###: P < 0.001;/####: P < 0.0001.この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図5:頂点における心筋組織のヘマトキシリンおよびエオジン染色。 緑色の四角形はHC群の電気刺激電極焼け領域である。略称:グループHC =高電圧連続刺激長期心室細動グループ。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
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Discussion
このプロトコルは、以前に報告されていない単離されたラット心臓における長期VFの動物モデルを確立する。さらに、この研究では、さまざまな電気刺激条件が比較されました。この研究は、心臓手術中の心室細動停止に関連する研究のモデルを提供します。
モデルの成功率は、人件費、時間費、および経済的コストに関連する非常に重要な指標です。VFモデルでは、成功率には、VFが心臓に誘導できるかどうか、および除細動後に心臓が通常の鼓動に戻ることができるかどうかが含まれます。さらに、心機能回復率と心筋損傷を考慮する必要があります。心臓手術の要件に適したモデルであるためには、心臓のVF時間は低温で1〜2時間に達する必要があるため、このプロトコルではVF時間は90分です。
低電圧を使用しても、心機能や心筋損傷にはほとんど影響しないことが示唆されています。したがって、この研究では、低電圧と高電圧を使用した場合の成功率、およびラットの心臓にVFを誘導するための連続または5分間の電気刺激の成功率を比較しました。各グループに対して6つの適格なVFモデルが作成されました。合計16匹のラットがグループLIでテストされ、モデルの成功率は37.50%でしたが、グループLCでは7匹のラットのみがテストされ、成功率は85.71%でした。さらに、この研究では、グループLCとグループLIの間でHR、LVPD回収率、またはCK-MBレベルに有意差はありませんでした。
心周期の脆弱な期間中の十分な強度の電気刺激はVF10を生成する。この研究では、グループHCとグループHIは他のグループよりもVFの発生率が高かった。しかし、CK-MB分析とヘマトキシリンおよびエオジン染色の結果は、高電圧刺激が重大な心筋損傷を引き起こし、除細動率を低下させる可能性があることを示唆しました。さらに、VF後の心臓の除細動率は、高電圧群で低電圧群よりも有意に低かった。
これらのデータは、低電圧連続刺激長期VFが、モデル成功率が最も高く、除細動後の心機能回復率が良好で、心筋損傷が少ない最良のモデルであることを示しています。
CF回復率は、2つの低電圧グループでグループCよりも優れており、同様の研究の報告と一致しています。以前の研究では、心肺バイパス(CPB)下の犬の心臓は、拡張した冠状動脈11を介した流量の有意な増加を示し、心外膜流量の3倍の心内膜下流量を増加させました。この増加した冠状動脈の流れは、増加した代謝需要を満たすのに十分な酸素を提供する可能性があります。.したがって、イヌモデルでは、正常な心室は、自発VFの30〜60分後に代謝的または機能的障害または組織学的変化を示さない。別のCPB犬の心臓研究12では、CFは、通常の空の拍動心臓よりも自発的におよび継続的に刺激されたVFの両方で高かった。
心臓手術中の温度をシミュレートするために、この研究では、VF中にK-Hバッファーの温度と周囲温度を約30°Cに制御しました。左心室伸展性は、拍動心臓の低体温で減少しましたが、VF心臓では低体温で増加しました。以前の研究では、VF心臓の心筋酸素消費量は、37°Cで通常の空の拍動心臓よりも高く、28°Cで空の拍動心臓よりも低かった13。したがって、温度を下げることは、灌流されたVF心臓においてより多くの利益をもたらす。
電極の位置はVFの発生に影響を与える可能性があります。このプロトコルでは、針電極を右心室の基部と頂点に固定して、心臓全体に電気刺激を与え、生化学的分析用の冠状動脈滲出液を取得します。先行研究では、右心室の心内膜に電極を固定し、もう一方の極をK-H緩衝液に入れ、心臓をK-H緩衝液14に浸した。さらに、右心室心内膜15への八極電気生理学カテーテル留置、心外膜多部位光刺激16、および心外膜多電極アレイ(MEA)17による心外膜電気刺激が報告されています。
以前の報告では、研究者らは、単離されたラット心臓を37°Cで0.05 mA 30 Hz ACで3分間の電気刺激を行い、灌流なしで20分間のVFを得ました14。10〜30HzのACは、単離された非虚血性フェレット心臓においてVFを誘導するためにも使用されている18。さらに、犬の心肺バイパス実験では、1.5〜4.5 V AC12、7.5 V AC13、および無制限電圧AC19 が使用されています。特に、誘導されたVFの電圧または電流の閾値は、単離された心臓と in vivo の心臓の間で異なり、孤立した心臓では刺激強度が小さくなります20。VFがACで誘導されたさまざまな研究では、結果に影響を与える主な要因は、電気刺激の頻度ではなく強度でした。電気刺激の頻度はこれらの研究のいずれにおいても同じではなかったが、30Hzは10HzよりもVFの発生率が高いことも注目されている21。直流(DC)は電気刺激VFの研究にも使用されていますが、DCがVFを誘導するしきい値はAC22の3倍であるため、DCは短期VFでより一般的に使用されます。さらに、DCは、高エネルギーでの長時間の刺激下で心筋損傷を悪化させる可能性があります。電気的除細動も心筋損傷を引き起こす可能性がありますが、研究は、このプロトコルで使用されているよりもはるかに高い除細動エネルギーでのみ重大な損傷を示しています23。
このプロトコルを成功させるには、いくつかのステップに注意を払うことが不可欠です。人工呼吸器は、実験結果を混乱させる可能性のある呼吸停止によって引き起こされる虚血を避けるために、ラットを麻酔した後に接続する必要があります。心臓を摘出した後、心臓、特に大動脈根を0〜4°CのK-Hバッファーに浸し、空気が心臓に入るのを防ぐために、心臓が収縮する前に心臓を急速に吊り下げる必要があります。針は冠状動脈灌流を減らすことができるので、大動脈に深く入りすぎてはいけません。心臓を吊り下げるとき、大動脈根の絹結紮は腕頭体幹を含むべきである。さもなければ、冠状動脈灌流はシャントされます。冠状動脈流の異常な増加は、この問題を特定するのに役立ちます。電極の深さは約1mmでなければなりません。深すぎる電極は心室壁を貫通し、浅すぎる電極は外れる可能性があります。
特定の研究では、研究者は長期の自発的VFの状態をシミュレートすることを望むかもしれないが、小型哺乳類の心臓は高い率の自発的除細動を特徴とする24,25。長い不応期、急速な伝導、および小さな質量はVFの維持を助長せず、心臓は短時間で正常なリズムに戻ります。同様の研究は、VFの条件が異なる小動物で以前に行われています。ただし、これらの研究はすべて短期間のVFを評価していました。自発的なVFは冷却だけでは発生せず、異なる条件下での電気刺激によって誘発されなければならず、これがこの研究の限界です。
要するに、低電圧連続心外膜AC刺激は、特に心機能への影響が少なく、心筋損傷が少ないという特徴があるため、高い成功率、安定性、信頼性、再現性を示し、長期VFのスケーラブルなモデルとなっています。
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Disclosures
著者は開示するものは何もありません。
Acknowledgments
この作業は、中国人民解放軍総合病院の第一医療センター心臓血管外科と中国人民解放軍総合病院の実験動物センターの支援を受けて実施されました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0 Non-absorbable suture | Ethicon, Inc. | Preparation of the isolated heart | |
| 95% O2 + 5% CO2 | Beijing BeiYang United Gas Co., Ltd. | K-H buffer | |
| AcqKnowledge software | BIOPAC Systems Inc. | Version 4.2.1 | Software |
| Automatic biochemistry analyzer | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | Chemray 800 | CK-MB assay |
| BIOPAC research systems | BIOPAC Systems Inc. | MP150 | Hardware |
| Blunt needle (20 G, TWLB) | Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd. | H-113AP-S | Modified Langendorff perfusion system |
| Calcium chloride | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10005861 | K-H buffer |
| CK-MB assay kits | Changchun Huili Biotech Co., Ltd. | C060 | CK-MB assay |
| Curved forcep | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| EDTA | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10009717 | K-H buffer |
| Electrical stimulator | BIOPAC Systems Inc. | STEMISOC | Hardware |
| Filter | Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd. | H-113AP-S | |
| Glucose | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 63005518 | K-H buffer |
| Heparin sodium | Tianjin Biochem Pharmaceutical Co., Ltd. | H120200505 | Preparation of the isolated heart |
| Isoflurane | RWD Life Science Co.,LTD | 21082201 | Preparation of the isolated heart |
| Magnesium sulfate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 20025118 | K-H buffer |
| Needle electrodes | BIOPAC Systems Inc. | EL452 | Hardware |
| Ophthalmic clamp | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| Ophthalmic forceps | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| Ophthalmic scissors | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| Perfusion tube | Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd. | H-113AP-S | Modified Langendorff perfusion system |
| Potassium chloride | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10016318 | K-H buffer |
| Sodium bicarbonate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10018960 | K-H buffer |
| Sodium chloride | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10019318 | K-H buffer |
| Sodium dihydrogen phosphate dihydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 20040718 | K-H buffer |
| Sprague-Dawley (SD) rats | SPF (Beijing) biotechnology Co., Ltd. | Male, 300-350g | Preparation of the isolated heart |
| Thermometer | Jiangsu Jingchuang Electronics Co., Ltd. | GSP-6 | Modified Langendorff perfusion system |
| Tissueforceps | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| Tissue scissors | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| Toothed forceps | Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd. | Preparation of the isolated heart | |
| Ventilator | Chengdu Instrument Factory | DKX-150 | Preparation of the isolated heart |
| Water bath1 | Ningbo Scientz Biotechnology Co.,Ltd. | SC-15 | Modified Langendorff perfusion system |
| Water bath2 | Shanghai Yiheng Technology Instrument Co., Ltd. | DK-8D | Modified Langendorff perfusion system |
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