זה וידאו פרוטוקול להדגים כיצד השתל מכוסה זכוכית חלון גולגולתי במכרסמים. תכשירים אלה יכולים לשמש כרונית in vivo שני הפוטונים הדמיה של הניאוקורטקס על סולמות זמן של חודשים. זה יכול לשמש גם עבור סוגים אחרים של הדמיה, כולל הדמיה אופטית אות מהותי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
טכניקות ההדמיה נעשים יותר ויותר חשוב בתפקוד המוח במחקר. ביניהם, שני הפוטונים מיקרוסקופ סורק לייזר התפתחה שיטה שימושית מאוד, משום שהיא מאפשרת את המחקר של המוח שלמים לחיות. עם ההכנות המתאימות, טכניקה זו מאפשרת תצפית באזור קליפת המוח באותו כרוניים, מ דקות עד חודשים. בסרטון הזה, אנו מראים הכנה כרונית בתחום ההדמיה vivo של המוח באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ. טכניקה זו היה בתחילה חלוץ ידי דר 'קארל סוובודה, כיום הווארד יוז רפואי חוקר במכון Janelia משק חקלאי. תכשירים כמו זה המוצג כאן יכול לשמש הדמיה של המבנה neocortical (למשל, הדינמיקה הדנדריטים axonal), להקליט הפעילות העצבית באמצעות סידן רגיש צבעים, אל קליפת המוח תמונה הדינמיקה זרימת הדם, או מהותי לימודי הדמיה אופטית. הדמיה של דיפ הניאוקורטקס אפשרי עם אופטימלית ניתוחים חלון גולגולתי. הפעלה בתנאים סטריליים ביותר האפשרית כדי למנוע זיהומים, יחד עם שימוש זהירות רבה, כדי לא לגרום נזק מאטר הדורה במהלך הניתוח, תגרום מכוסה זכוכית החלונות מוצלחת וארוכת טווח גולגולתי.
פרוטוקול
- הרדימי עכברים עם isoflurane (4% לזירוז, 1.5-2% לניתוח) באמצעות נהלים שאושרו IACUC. חשוב זנב ו / או צובט את הבוהן משמשים על מנת להבטיח את החיה הוא מסומם לגמרי.
- שימוש גוזם מכרסם, לגלח את השיער מהחלק האחורי של הצוואר עד העיניים.
- מניחים את העכבר בתוך מסגרת stereotaxic, על שמיכה מים מחדש במחזור הניתוח. לאבטח היטב את הראש עם ברים האוזן.
- החל משחה העין, על מנת למנוע עין של החיה מהתייבשות.
- ניהול, תת עורי, dexamethaso....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כפי שהראינו את הוידאו וגם את הדמויות משלים, הכנת חלון גולגולתי, בשילוב עם שימוש במיקרוסקופ שני הפוטונים, הוא כלי רב עוצמה מאוד ללמוד in vivo את המבנה והתפקוד של הניאוקורטקס. הטכניקה דורשת הכשרה קפדני להכיר את האנטומיה הרלוונטית ואת ניתוחים בסדר ומיומנויות כי זה דורש הכנה. רק ניתוחים וטהור יכול לשמש הדמיה כרונית. אם הדורה היא מניפולציה מוגזמת או ניקב, ההכנה לא אמור לשמש עבור דימות.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
ברים הם טיטניום מחוייט
מקורות
- Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 85, 161-165 (1997).
- Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
