Summary
Burada yönettiği, moleküler evrim yoluyla Tre recombinase nesil raporu. Tre recombinase enfekte insan hücreleri provirus eksizyon ve eradikasyon, HIV-1 provirus LTR dizileri içinde önceden tanımlanmış bir hedef sırası tanır. Hala emekleme döneminde olsa da, yönlendirilmiş moleküler evrim moleküler cerrahi ve moleküler tıp araçları olarak hizmet verecek özel enzimlerin yaratılmasına izin verecek.
Abstract
Burada yönettiği, moleküler evrim yoluyla Tre recombinase nesil raporu. Tre recombinase enfekte insan hücreleri provirus eksizyon ve eradikasyon, HIV-1 provirus LTR dizileri içinde önceden tanımlanmış bir hedef sırası tanır.
Biz Cre loxP olarak bilinen 34 bp çift iplikli DNA dizisi tanıyan bir 38-kDa recombinase ile başladı. Cre etkili genomik dizileri ortadan kaldırmak, çünkü biz terzi dizisi arasında entegre bir HIV-1 provirus 5'-LTR ve 3'-LTR kaldırmak bir recombinase yola. Bir ilk adım olarak biz loxP için benzer ve rekombinasyon aktivite için test LTR siteleri içinde dizileri belirledi. Başlangıçta Cre ve mutagenized Cre kütüphaneler, HIV-1 provirus seçilen loxLTR siteleri rekombinasyona başarısız oldu. Herhangi bir yönlendirilmiş moleküler evrim sürecinin başlamasından en az rezidüel aktivitesi gerektirdiği gibi, orijinal asimetrik loxLTR dizileri alt kümelerini içine bölünmüş ve rekombinasyon aktivite için tekrar test edildi. Ara ürün olarak hareket ederek, rekombinasyon faaliyet alt grupları ile gösterilmiştir. Sonra, recombinase kütüphaneler reiterative evrim döngüleri ile zenginleştirildi. Daha sonra, zenginleştirilmiş kütüphaneler karıştırılır ve recombined edildi. Farklı mutasyonlar kombinasyonu sinerjik kanıtladı ve recombinases loxLTR1 ve loxLTR2 rekombinasyona başardık oluşturuldu. Bu ara yoluyla evrimsel bir strateji başarılı olabilir dair kanıt oldu. Toplam 126 tekamül döngüsünde sonra bireysel recombinases, işlevsel ve yapısal analiz edildi. En aktif recombinase - Tre - Cre ile karşılaştırıldığında 19 amino asit değişiklikleri vardı. Tre recombinase tüketim genom HIV-1 ile enfekte HeLa hücreleri (bkz. "Evolved Recombinase kullanarak HIV-1 Proviral DNA eksizyonu" Hauber J. Deneysel Viroloji ve İmmünoloji Heinrich-Pette Enstitüsü, HIV-1 provirus başardı Hamburg, Almanya). Hala emekleme döneminde olsa da, yönlendirilmiş moleküler evrim "moleküler cerrahi" ve moleküler tıp araçları olarak hizmet verecek özel enzimlerin yaratılmasına izin verecek.
