Bilayers מישורי נתמכות עבור תצורת לימוד של סינפסות החיסונית Kinapse

סיכום

Bilayers מישוריים נתמכים הם כלים רבי עוצמה שיכולים לשמש מודל אינטראקציות מולקולריות בסינפסה האימונולוגית. כאן, אנו מציגים שיטות לעיגון הידבקות התא חלבונים ידועים לווסת היווצרות הסינפסה לעלון העליון של bilyer השומנים ולדמיין היווצרות הסינפסה באמצעות מיקרוסקופ TIRF.

תקציר

Bilayers מישוריים נתמכים הם כלים רבי עוצמה שיכולים לשמש מודל אינטראקציות מולקולריות בסינפסה האימונולוגית. כדי לחקות את האינטראקציות בין לימפוציטים ותאים המציגים אנטיגן, אנו משתמשים Ni2 +-chelating שומנים לעגן את הידבקות התא רקומביננטי וחלבונים MHC לעלון העליון של bilayer עם מרובה היסטידין התגים. Bilayers מישורי מופקים על ידי הכנת שומנים בדם, לטיפול משטחי זכוכית שבו bilayer יהיה טופס, ולאחר מכן להרכיב את bilayer בתא מיוחד המכיל תזרים תאים לימפוציטים שבו יתווספו. ואז, bilayers מואשמים Ni וחלבונים שלו מתויג רקומביננטי מתווספים. לבסוף, לימפוציטים מוזרקים לתוך התא זרימה מיקרוסקופית TIRF יכול לשמש ליצירת תמונה סינפסה ואת המנגנונים השולטים תנועה תא T, אתרי מיון של הקולטן, ואתרים של השפלה הקולטן.

פרוטוקול

1. הכנת שומנים

1. על מנת לקשר חלבונים עלון העליון של bilayer, אנו משתמשים Ni ^{2 +} שומנים chelating, אשר עוגן חלבונים רקומביננטי עם מרובה היסטידין התגים. סוגי תאים מסוימים עשויים לדבוק הלא ספציפית Ni ^{2 +} מצופים bilayers, אבל מתאי T בדרך כלל לא, מה שהופך את השיטה האופטימלית ללימוד הפעלת תא T.
2. הפתרון bilayer השומנים נעשית על ידי הכנת פתרון של Ni ^{2 +} 20% שומנים ו 80 chelating phosphatidylcholine% בסכומים המתאימים שפופרת זכוכית עם 1-2 מ"ל של מתאנול, כלורופורם.