Name: Microfluidic 흐름 전지를 사용하여 흐름에서 혈소판 접착 및 집계 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-27T07:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 학습하세요 생리학적 전단 응력 조건에서 혈소판 접착 및 집거를 평가하는 마이크로유체 흐름 전지 기법을 활용한 혈관생물학 연구 방법입니다. 이 고효율 분석법은 약물 효능 테스트와 혈전 형성 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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1 부 : BioFlux 판의 microfluidic 채널의 준비. <ol><li> 흐름 세포 실험을 실행하기 전에, 하나는 관심의 단백질 코팅 microfluidic 채널을 준비해야합니다. 이 경우에는 콜라겐은 내가이 사용됩니다. 각 채널은 잘 입구와 콘센트가 있습니다. 이 접시는 입구가 잘 잘 채널과 우물이 오른쪽에있는 콘센트를주고 왼쪽입니다. </li><li> 0.02M 초산에 200μg/ml 농도 콜라겐 I (5mg/ml 주식) 코팅을 희석. 하나는 사용되는 각 채널에 대해 20μl가 필요합니다. micropipette 팁과 부드러운 triteration하여 섞는다. </li><li> 사용되는 각 해당 채널에 코팅 20 μl를 추가합니다. 하나는 잘 micropipette를 사용하여 관심있는 microfluidic 채널을 먹이 콘센트의 내부 펀치로 액체를 분배합니다. 거품을 도입하지 마십시오, 피펫의 공기를 밀어하지 않습니다. 콜라겐 컨트롤을위한 콜라겐없이 하나의 채널을 (접착 및 집합에 대한 부정적인 컨트롤)을 포함시키십시오. </li><li> 4 개의 나사 그리고 그들이 모두 설정되면 완전히 조이 토크 드라이버를 사용 강화 첫 번째 손가락으로 접시에 인터페이스를 연결합니다. 그것이 최대 죄어져 있음에 도달하면 토크 드라이버를 클릭합니다. </li><li> BioFlux 소프트웨어에서 수동 모드를 사용하여 콘센트에 잘 2dyn/cm -에서 2 관심의 채널에 재관류를 적용할 수 있습니다. 여기 하나는 액체로 가득하는 반대 안쪽 펀치에 대한 감시해야합니다. 이것은 몇 분 정도 소요됩니다. 하나는 하나 이것은 현미경의 낮은 전력을 사용하는 목적 (4X)과 잘하거나 접시를 들고 아래에서 유입 우물을 조사하여 입구를 찾는가 발생할 볼 수 있습니다. 하나는 먼저 천천히 안쪽 펀치를 채우고 액체의 작은 구슬이 나타납니다. 입구 안쪽 펀치가 가득되면, 소프트웨어의 중지를 추진하여 한번에 재관류를 중지합니다. </li><li> 한 시간 만이라도 실온에서 접시를 품어. </li><li> 인터페이스를 제거하고 잘 콘센트에 PBS (플러스 칼슘 2 + / MG 2 +) 1 ML를 추가합니다. 2dyn/cm 2 잘 콘센트에서 재관류를 시작합니다. 10 분 동안 재관류를 계속합니다. 재관류를 중지하고 인터페이스를 제거합니다. </li><li> 입구와 출구의 우물 모두에서 초과 PBS를 제거 - 내부 펀치를 채우고 액체를 제거하지 마십시오. 차단 솔루션 (0.5 % PBS의 V / V BSA (플러스 칼슘 2 + / MG 2 이상)을)를 사용하여 채널을 차단합니다. 사용할 수 있도록 잘 각 콘센트에 차단 솔루션 1 ML을 추가하고 2dyn/cm 2 잘 콘센트에서 perfuse. 10 분 동안 재관류를 계속합니다. 재관류를 중지하고 인터페이스를 제거합니다. 이 단계까지 준비 채널이 하루 동안 사용할 수 있습니다. </li><li> 혈액을 추가하기 전에, 안쪽 펀치를 제외하고 채널의 양쪽에있는 액체를 제거합니다. </li></ol> 2 부. GPIIb / IIIa 억제 항체와 함께 혈액을 준비. <ol><li> 콜라겐이 채널에 잠복기이지만, 하나는 전체 혈액을 준비합니다. 하나는 인간의 혈액을 다룰 때 그 / 그녀의 연구소에 의해 결정 biosafety 규정을 따라야합니다. </li><li> 나트륨 구연 산염의 항응고제로 그려 신선한 인간의 피를 (금식 개인에서) 컬렉션 3 시간 이내에 사용해야합니다. </li><li> AM 4μM calcein을 추가하여 혈액을 준비합니다. DMSO의 AM calcein의 4mm짜리 주식을 준비하고 1천분의 1 V /의 희석에 혈액에 추가 V. 부드러운 역전로 섞는다. </li><li> 1.5mL microtubes - 1 calcein의 ML 10에 혈액 라벨 AM 하는걸. 원하는 희석 (IgG의 분자량은 150kDa ~입니다)에서 각 GPIIb / IIIa 억제제 항체를 추가합니다. 예제 희석 시리즈 1200nM에서 9nM하는 것입니다 그리고 항체 컨트롤도 및 관련없는 항체 컨트롤을 포함하지 않습니다. 억제를위한 훌륭한 긍정적인 제어 20ug/ml의 농도에서 (압식시맙, 엘리 릴리) ReoPro 것입니다. 온화한 역전의 혼합. </li><li> 1 시간 동안 실온에서 알을 품다. 부드러운 역전로 10 분마다 섞는다. </li></ol> 파트 3 : BF1000 워크 스테이션에서 유동 세포 실험을 실행. <ol><li> 첫째, 하나는 BioFlux 제어 모듈에 자동 프로토콜을 설정해야합니다. 콜라겐을 위해서라면, 하나는 잘 콘센트에서 10 분 동안 10dyn/cm 2 실행하는 프로토콜을 설정해야합니다. 이 시점에서 하나도 BF1000 워크 스테이션을 사용하여 데이터 수집 매개 변수를 설정해야합니다, 채널 위치를 포함하여, FITC 파장 및 시간 - 저속 정보를 캡처합니다. 그것은 총 10 분 기간 동안 채널당 10X 목표 30 초마다를 사용하여 볼 3 분야를 캡처하는 것이 좋습니다. </li><li> 별도의 준비 채널로 각 조건의 준비 피가 500ul 빠르게 작업, 장소. 콜라겐 그리고 차단 하나 코팅하는 채널로 아무 항체 제어 혈액 플레이스 없습니다. </li><li> 접시에 인터페이스를 배치합니다. </li><li> BF1000 워크 스테이션 현미경에서 접시를 놓습니다. 인터페이스에 클램프. </li><li> 플레이트 부하 조정을 수행합니다. 또한, 하나 잘 들어있는 혈액으로 무대를 이동합니다. 설정 FTIC 이미지 캡쳐 매개 변수 (노출 시간, 이득 등 ...). </li><li> BioFlux 몬티지 소프트웨어에서 동시에 유동 및 수집을 시작하는 인수를 시작합니다. </li><li> BF1000 워크 스테이션에서 접시를 제거, 기관 지침에 따라 접시의 처분. </li></ol> 4 부 : 대표 결과. 여기 microfluidic 채널 혈소판 점착 및 집계를위한 프로토콜이 제시되었다. 혈소판 응집 억제제 치료는 anti-GPIIb/IIIa 또한 프로토콜에 포함되었다. BioFlux 시스템의 콜라겐 코팅 microfluidic 채널을 사용하여, 하나는 치료 제어 혈액 샘플과 uncoated 채널없이 혈전 형성과 함께 시간이 지남에 따라 적극적인 혈전 형성을 볼 것으로 예상한다. 한 최근 수행한 실험에서, 제어 조건 집계의 평균 크기는 2000μm이되었습니다. 그림 1. <img src="/files/ftp_upload/1644/1644fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 활성 GPIIb / IIIa는 혈소판 - 상호 작용과 혈소판 집합 안정화 1 강력한 중보자입니다. 콜라겐에 부착이 응답 2 이끌어내는 수있는 GPIIb / IIIa 복잡한을 활성화한다. 전단 노출 이전에 1 시간 anti-GPIIb/IIIa과 부화 후, 하나는 thrombi의 크기의 감소뿐만 아니라 혈전 형성의 빈도 감소를 관찰할 것으로 기대한다. 선량에 의존 반응은 일반적으로 10dyn/cm 2 볼 수 있습니다. 그림 2. <img src="/files/ftp_upload/1644/1644fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 이 특정 억제제에 대한 IC 50 값은 10 dyn / cm 2 17nM되었습니다. 노 항체 컨트롤에 비해 최대 억제 (이 기증자에 대한) 10 dyn / cm 2 11%되었다. 여기에 방법이 특정 세포외 기질 단백질과 혈소판 집합의 특정 억제제를 사용하여 제시하는 동안, 프로토콜은 다른 코팅 다른 세포 종류와 세포 유착 assays 다른 억제제로 확장됩니다. 이러한 실험의 성공의 핵심 요소는 모든 시약에 대한 microfluidic 채널, 올바른 diluents의 모든 시약의 정확한 희석하고, 적절한 배양 조건에서 거품의 소지를 없애기 있습니다.

<ol><li>Jackson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+growing+complexity+of+platelet+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The growing complexity of platelet aggregation.</a> Blood. 109, 5087-5095 (2007).</li>
<li>Nakamura, T., Kambayashi, J., Okuma, M., Tandon, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+GP+IIb-IIIa+complex+induced+by+platelet+adhesion+to+collagen+is+mediated+by+both+alpha2beta1+integrin+and+GP%5BTitle%5D)+AND+%22VI.+J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Activation of the GP IIb-IIIa complex induced by platelet adhesion to collagen is mediated by both alpha2beta1 integrin and GP.</a> VI. J Biol Chem. 274, 11897-11903 (1999).</li>
</ol>

기여 저자 Fluxion Biosciences의 직원입니다.

여기에 방법이 특정 세포외 기질 단백질과 혈소판 집합의 특정 억제제를 사용하여 제시하는 동안, 프로토콜은 다른 코팅 다른 세포 종류와 세포 유착 assays 다른 억제제로 확장됩니다. 이러한 실험의 성공의 핵심 요소는 모든 시약에 대한 microfluidic 채널, 올바른 diluents의 모든 시약의 정확한 희석하고, 적절한 배양 조건에서 거품의 소지를 없애기 있습니다.

<table><tbody><tr><td>콜라겐 I, 소 유래</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>A1064401</td><td>다른 콜라겐 I 공급원을 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Ca/Mg 포함 PBS</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>14040-117</td><td></td></tr><tr><td>소혈청알부민 (BSA)</td><td>시약</td><td>EMD Millipore</td><td>EM-2930 양식 하단</td><td>VWR 제공</td></tr><tr><td>calcein AM</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>C1430</td><td>BD사의 Calcein AM을 사용할 수도 있습니다.</td></tr><tr><td>BioFlux 1000 시스템</td><td>시약</td><td>Fluxion Biosciences</td><td>회사 문의하기</td><td></td></tr><tr><td>BioFlux 플레이트</td><td>시약</td><td>Fluxion Biosciences</td><td>900013</td><td></td></tr><tr><td>항GPIIb/IIIa</td><td>시약</td><td>Abcam</td><td>ab33407</td><td>대체 제품 번호는 ab15021입니다.</td></tr><tr><td>ReoPro</td><td>시약</td><td>Eli Lilly</td><td></td><td>전문의 처방 필요</td></tr></tbody></table>

microfluidic 흐름 전지를 사용하여 흐름에서 혈소판 접착 및 집계

Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells

혈소판 응집은 내피 아래의 세포외 기질이 노출되었습니다 혈관 손상에 대한 응답으로 발생합니다. 혈소판 유착 계단식는 전단 흐름의 존재에서 일어나는, 요인은 종래의 (정적) 잘 철판 assays에서 차지하는 없습니다. 이 문서의 생리 전단 흐름 조건을 에뮬레이트하는 microfluidic 잘 플레이트 형식을 이용한 혈소판 - 집계 분석에 대한 보고서. 세포외 단백질, 콜라겐 I 또는 폰 Willebrand 인자는 공기 펌프와 적극적인 재관류를 사용하여 microfluidic 채널 내에 입금됩니다. 매트릭스 단백질은 다음 버퍼로 세탁 및 혈소판 상호 작용에 대한 microfluidic 채널을 준비하는 차단됩니다. 형광 염료로 분류 전체 혈액은 혈소판 활성화 및 집계를 달성하기 위해 다양한 유량에서 채널을 통해 perfused입니다. 혈소판 응집 억제제는 IC50의 선량 응답 데이터를 생성하는 흐름 세포 실험 이전에 추가할 수 있습니다.

혈소판 유착 계단식는 전단 흐름의 존재에서 일어나는, 요인은 종래의 (정적) 잘 철판 assays에서 차지하는 없습니다. 이 문서의 생리 전단 흐름 조건을 에뮬레이트하는 microfluidic 잘 플레이트 형식을 이용한 혈소판 - 집계 분석에 대한 보고서.

Microfluidic 흐름 전지를 사용하여 흐름에서 혈소판 접착 및 집계

혈소판 응집은 내피세포 아래의 세포외 기질이 노출되는 혈관 손상에 반응하여 발생합니다. 혈소판 부착은...

bio flux 시스템은 제어된 전단 흐름 하에서 살아있는 세포 분석을 수행하기 위한 자동화 기기 및 미세유체 장치입니다. 이 시스템은 웰 플레이트 미세유체 기술을 사용하여 마이크론 규모의 유동 세포 장치를 SBS 표준 웰 플레이트에 통합합니다. BioFlex는 적은 혈액량으로 고효율의 혈소판 부착 및 응집 연구를 수행하는 데 사용할 수 있습니다.형광 염료로 표지된 전혈을 웰에 첨가한 후 채널을 통해 흐르게 합니다. 제어된 전단 흐름 하에서 고해상도 현미경 데이터가 생성되며, 이를 통해 약물 화합물 및 기타 다양한 변수가 있을 때의 혈소판 부착 및 응집을 정량화합니다. 안녕하세요, 저는 Flexion Biosciences RD 실험실의 Mike Schwartz입니다.오늘은 혈소판 부착 분석에 미세유체 유동 셀을 사용하는 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 이 프로토콜을 다양한 혈관 생물학 분석에 활용하고 있습니다. 그럼 시작하겠습니다.플로우 셀 실험을 수행하기 전, BioFlux 플레이트의 미세유체 채널을 관심 있는 단백질로 코팅하여 준비해야 하며, 본 실험에서는 collagen one을 사용합니다. BioFlux 플레이트의 24개 실험 채널은 각각 입구 웰과 출구 웰에 연결되어 있습니다. 입구 웰은 채널에 용액을 공급하는 왼쪽 웰이며, 출구 웰은 오른쪽에 위치합니다. collagen one 스톡 용액을 200 µg/mL 농도로 희석하십시오.0.02 M 아세트산의 경우, 사용되는 채널당 20 µL가 필요합니다. 본 실험에서는 11개의 채널이 필요하므로, 콜라겐 코팅액 200 µL를 제조하십시오. 코팅되지 않은 하나의 채널은 마이크로 피펫 팁으로 부드럽게 반복 섞어 줍니다.마이크로 피펫을 사용하여 각 해당 채널의 웰 내부 펀치에 액체를 분주함으로써 20 µL의 코팅액을 첨가합니다. 여기에 표시된 것과 같이 노란색 염료로 관심 있는 미세유체 채널에 주입하며, 혈소판 부착 및 응집의 음성 대조군으로서 콜라겐이 없는 채널을 하나 포함합니다. 모든 해당 채널에 콜라겐 코팅을 완료한 후, 인터페이스를 플레이트에 부착합니다.BioFlux 1000 인터페이스를 사용하는 경우, 두 래치를 모두 스테이지에 고정할 수 있습니다. BioFlux 200 인터페이스를 사용하는 경우에는 먼저 네 개의 나사를 조이십시오. 그 후 모든 설정이 완료되면 토크 드라이버를 사용하여 완전히 조여 줍니다.토크 드라이버가 최대치에 도달하면 클릭 소리가 납니다. bio flux 소프트웨어의 수동 모드를 사용하여, 유출구로부터 cm²당 2D의 속도로 관심 채널에 관류를 적용합니다. 현미경의 저배율 대물렌즈를 사용하여 유입 웰을 찾고, 반대편 내부 펀치가 액체로 채워지는 것을 관찰합니다.먼저 소량의 액체가 몇 분에 걸쳐 내부 펀치를 천천히 채우는 것을 확인해야 하며, 입구 내부 펀치가 가득 차면 소프트웨어에서 정지 버튼을 눌러 모든 채널의 주입을 중단하십시오. 플레이트를 상온에서 1시간 동안 배양합니다. 이 배양 기간 동안, 1시간의 배양이 끝날 때쯤 전혈 준비를 시작할 수 있습니다.혈액 준비가 완료되면 인터페이스를 제거하고, 출구 웰에 칼슘 및 마그네슘 이온이 포함된 PBS 1 mL를 추가합니다. 출구 웰에서 2 dyn/cm²의 속도로 관류를 시작하고 10분 동안 관류를 계속합니다. 10분 후 관류를 중단합니다. 인터페이스를 제거한 후, 입구와 출구 웰 모두에서 과잉의 PBS를 제거합니다.내부 펀치를 채우고 있는 액체를 절대 제거하지 마십시오. 채널을 차단하려면 각 배출구에 1 mL의 블로킹 용액을 추가하십시오. 사용할 웰을 배출구 웰에서 2 dL/cm²로 관류하고 10분 동안 관류를 계속하십시오.10분 후 관류를 중단하고 인터페이스를 제거하십시오. 이제 채널이 준비되었으며, 플레이트에 콜라겐 코팅이 진행되는 동안 하루 종일 사용할 수 있습니다. 1시간의 배양 기간 동안, 영상 촬영 및 플레이트 주입을 위해 공복 상태인 피험자로부터 신선한 인간 혈액을 준비해야 합니다.혈액은 항응고제인 시트르산 나트륨(sodium citrate) 튜브에 채혈하여 수집 후 3시간 이내에 사용해야 합니다. 먼저, DMSO에 녹인 4mM 칼슘 M 스톡 용액을 1:1000(v/v) 비율로 혈액에 첨가합니다. 4µM 칼슘 농도를 맞춘 후, 부드럽게 반전 혼합하여 섞어줍니다.다음으로, calcium am으로 표지된 혈액 1 mL를 1.5 mL 마이크로 튜브 10개에 각각 분주합니다. 원하는 희석 배율로 GP2B3 억제 항체를 각 튜브에 첨가합니다. 항체를 넣지 않은 음성 대조군과 무관한 항체를 넣은 양성 대조군을 반드시 포함하고, 부드럽게 반전시켜 혼합합니다.플로우 셀 실험을 수행하기 전, 튜브를 상온에서 1시간 동안 배양하며 10분마다 부드럽게 뒤집어 섞어줍니다. 콜라겐을 위한 자동 프로토콜을 바이오 플럭스 제어 모듈에 설정해야 합니다. 하나. 배출구로부터 10분 동안 10 9 cm²의 속도로 혈액이 흐르도록 프로토콜을 설정합니다.BioFlex 1000 워크스테이션을 사용하여 데이터 획득 매개변수를 설정해야 하며, 여기에는 원하는 스테이지 위치, 파장 및 타임랩스 설정에서의 획득이 포함됩니다. 본 프로토콜의 전형적인 이미지 획득 계획은 10배 대물렌즈를 사용하여 10분 동안 30초마다 채널당 하나의 시야를 캡처하는 것으로 구성됩니다. 추가적인 시야 설정 및 다른 타임랩스 설정 또한 가능합니다.자동 프로토콜과 데이터 획득 파라미터 설정이 완료되면, BioFlex 플레이트로 돌아가 내부 펀치를 제외한 채널 양측의 액체를 제거합니다. 신속하게 작업하며, 각 조건의 혈액 500 µL를 각 채널의 출력 웰(output well)에 넣습니다. 출력 웰을 사용하여 혈액을 주입하는 이유는 관찰 구역까지의 경로가 가장 짧아, 콜라겐 코팅에 대한 혈액의 반응을 더 즉각적으로 확인할 수 있기 때문입니다.또한, 항체가 없는 대조군 혈액을 콜라겐이 코팅된 채널과 블로킹만 처리된 채널에 각각 넣습니다. 플레이트를 BioFlex 1000 워크스테이션 현미경 위에 놓고 인터페이스에 고정합니다. 원점으로 정의된 첫 번째 보정 지점을 찾아 스테이지 리스트 보정을 수행합니다.그런 다음 두 번째 보정 지점을 찾아 표시합니다. 이 보정 값을 적절한 스테이지 목록에 적용하십시오. 이렇게 하면 플레이트 상의 모든 관찰 위치를 자동으로 찾을 수 있습니다.스테이지를 혈액이 포함된 채널 중 하나로 이동시킨 후, BioFlex montage 소프트웨어에서 노출 시간 및 게인과 같은 이미지 캡처 파라미터를 설정하십시오. 원하는 버튼을 클릭하여 적절한 워크플로우를 실행하십시오. 그러면 유체 프로토콜과 이미지 획득이 동시에 시작됩니다.실험이 끝나면 BIOFLU 1000 워크스테이션에서 플레이트를 제거하고 기관 지침에 따라 폐기하십시오. BioFlux 시스템의 콜라겐 코팅 미세유체 채널을 사용합니다. 처리되지 않은 대조군 혈액 샘플에서는 시간이 지남에 따라 급격한 혈전 형성이 관찰됩니다.반면, 코팅되지 않은 채널에서는 혈전 형성이 관찰되지 않습니다. 최근에 수행된 한 실험에서 대조군 조건하의 응집체 평균 크기는 2000 µm²였습니다. GP IIb/IIIa는 콜라겐 부착에 의해 활성화될 때 혈소판 간의 상호작용과 응집 안정화를 유도하는 강력한 매개체입니다. 여기서 보는 바와 같이, 전단 응력 노출 1시간 전에 anti-GP IIb/IIIa 항체로 배양한 후에는 혈전의 크기 감소뿐만 아니라 혈전 형성 빈도의 감소가 관찰됩니다.일반적으로 10 dyne cm⁻²에서 용량 의존적 반응을 관찰할 수 있으며, 이 특정 억제제의 IC₅₀ 값은 17 nM이었습니다. 항체 미처리 대조군과 비교하여 이 공여자의 최대 억제율은 10 dyne cm⁻²에서 11%였습니다. 전혈 실험을 위해 최대 200 dyne cm⁻² 또는 5,000 s⁻¹까지 가능한 48-웰 고전단 플레이트도 사용할 수 있습니다.지금까지 미세유체 흐름 채널을 사용하여 생리학적으로 유의미한 혈관 생물학 실험을 수행하는 방법을 살펴보았습니다. 본 프로토콜을 수행할 때 콜라겐을 적절한 완충액에 희석하는 것이 중요합니다. 공기 방울이 유입되지 않도록 항상 정확한 피펫팅 기술을 사용하고, 실험실의 생물 안전 규정을 항상 준수하십시오.이상입니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

platelet-adhesion-aggregation-under-flow-using-microfluidic-flow

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리는 살균 지속적인 흐름 회로에서 층류 유동 전단 응력에 따라 자기편 세포 수있는 방법을 설명하고 있습니다. 세포 '유착, 형태는 투명 챔버를 통해 신진 대사 분석 및 미래의 실험이나 문화에 대한 전단 노출 후 수확한 세포 회로에서 얻은 샘플을 공부하실 수 있습니다.

층류의 전단 응력에 따라 내피 전구 세포를 평가하기 위해 병렬 플레이트 흐름 회의소와 지속적인 흐름 회로

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method for studying host-pathogen interactions using a micro-parallel plate flow chamber seeded with human primary endothelial cells. Following endothelial cell activation by an ionophore and perfusion with fluorescently labeled bacteria, the cells release von Willebrand factor (VWF), which binds bacterial adhesins under shear...

Micro-Parallel Plate Flow Chamber Model for Studying Bacterial Adhesion to Human Endothelial Cells

이 비디오는 백혈구와 내피 세포와 같은 세포 파트너의 상호 작용을 특성화하기 위한 층류 기반 분석을 보여줍니다. 이 방법은 혈관 세포의 손상되지 않고 합류하는 층에 관류될 때 백혈구의 접착, 데데젼 및 전이에 대한 동적 통찰력을 제공합니다.

백혈구와 내피 세포 간의 상호 작용을 연구하기 위한 층류 기반 분석

접착 실험에 사용되는 유동 챔버는 일반적으로 선형 유동 경로로 구성되며 전단 접착 맵을 생성하기 위해 서로 다른 유속으로 여러 실험이 필요합니다.  SynVivo-SMN을 사용하면 마이크로리터 부피를 활용하는 단일 실험을 통해 전단 접착 맵을 생성할 수 있으므로 시간과 소모품을 크게 절약할 수 있습니다.

SynVivo 합성 미세 혈관의 네트워크를 사용하여 전단 접착지도의 생성

호중구의 부착을 정량하는 방법이보고되어있다. 이 방법은 혈관에서 발생 된 것과 유사한 동적 흐름 환경을 생성한다. 그것은 허용 정제 부착 분자 (리간드) 또는 투명 스트레스 생체 환경 유사한 맥락에서 내피 세포 기질 (HUVEC) 중 하나에 호중구 부착 조사.

인간 호중구 유량 용기 접착 분석

혈소판 수혈 및 지혈은 혈액 은행 혈소판의 기능을 조사하기 위해 혈액 재구성 및 미세유체 유동 챔버를 사용하여 모델링되었습니다. 이 데이터는 혈소판 저장 병변이 지혈에 미치는 영향을 in vitro에서 보여줍니다.

미세 유체 흐름 챔버 지혈 및 혈소판 수혈을 모델링하기 위해 재구성 된 혈액을 사용하여<em&gt; 체외</em

이 논문은 동시에 혈소판 기능과 응고를 측정 지혈의 실험 모델을 설명합니다. 혈소판 및 피브린 형광을 실시간으로 측정하고, 혈소판의 부착 율, 응고 속도 및 응고의 개시가 결정된다. 모델은 수혈 농축 플로우하에 혈소판 응고 특성을 결정하는데 사용된다.

혈소판 수혈 및 지혈을위한 미세 유체 유량 용기 모델은 실시간으로 혈소판 증착 및 섬유소 형성을 측정합니다

이 연구는 혈소판의 부착, 퍼짐 및 유속 하의 분비를 연구하기위한 형광 현미경 기반의 방법을 설명합니다. 이 다목적 플랫폼은 혈전증과 지혈에 대한 기계 연구를 위해 혈소판 기능을 조사 할 수있게합니다.

흐름하에있는 혈소판 탈식 및 분비의 라이브 셀 이미징

혈관 벽 손상 후 또는 염증 동안 백혈구 avidly 혈관 세포와 혈소판 상호 작용합니다. 여기, 우리 간단 층 흐름 기반 분석 결과 기초 백혈구와 셀룰러 파트너 간의 상호 작용 분자 메커니즘의 특성을 설명 합니다.

교양된 혈관 세포에 부착 혈소판 백혈구 신규 모집 조사 하 층 플로우 기반 분석

조정 가능한 밀도를 가진 RGD 기능화된 avidin-biotin tethers를 사용하여 단일 이동 혈소판을 이미징하기 위한 자세한 프로토콜이 제공되어 혈소판이 avidin-biotin 결합을 파열하기에 충분한 힘을 생성한다는 것을 밝혔습니다.

RGD 기능성 Avidin-Biotin 테더를 사용한 혈소판 이동을 연구하기 위한 In vitro 분석

혈류 하의 혈소판 기능을 평가하고 시뮬레이션된 지혈 소생술을 외상 및 수혈 의학에 응용하는 미세유체 장치를 사용하여 모델링할 수 있습니다.

혈소판 기능 평가에서의 미세유체역학(Microfluidics in Assessing Platelet Function)

학습하세요 생리학적 전단 응력 조건에서 혈소판 접착 및 집거를 평가하는 마이크로유체 흐름 전지 기법을 활용한 혈관생물학 연구 방법입니다. 이 고효율 분석법은 약물 효능 테스트와 혈전 형성 메커니즘 연구에 활용됩니다.

Microfluidic 흐름 전지를 사용하여 흐름에서 혈소판 접착 및 집계

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