Name: Functionele en fysiologische methoden voor de evaluatie van mediane zenuwregeneratie in de rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-04-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 9 s
Description: Leer functionele en fysiologische methoden om mediane zenuwregeneratie te evalueren bij ratten. Dit protocol omvat chirurgische letsels, gedragstests en fysiotherapie voor herstelonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Diogo Casal ontving een subsidie van The Program for Advanced Medical Education, dat wordt gesponsord door Fundação Calouste Gulbenkian, Fundação Champalimaud, Ministério da Saúde e Fundação para a Ciência e Tecnologia, Portugal. De auteurs zijn de heer Filipe Franco zeer dankbaar voor de illustratieve tekening in figuur 1. De auteurs willen de technische hulp van de heer Alberto Severino bedanken bij het filmen en bewerken van de video. Tot slot willen de auteurs mevrouw Sara Marques bedanken voor haar hulp bij alle logistieke aspecten van de aankoop en het onderhoud van dieren.

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit document presenteert een protocol om verschillende soorten MN laesies te creëren en reparatie in de rat. Bovendien illustreert het hoe het functionele herstel van deze zenuw te evalueren met behulp van verschillende niet-invasieve gedragstests en fysiologische metingen.
Met name zijn een aantal van de functionele tests beschreven in dit document, namelijk de Ladder Running Test en de Rope Test, aanzienlijk afhankelijk van de bereidheid van de rat om de taak uit te voeren met de verwachting van het verkrijgen van de voedselbeloning51,52,53. Er zij op gewezen dat bepaalde rattenstammen beter vatbaar zijn voor opleiding en het uitvoeren van reproduceerbare tests in dit soort tests51,52,53. Bijvoorbeeld, Lewis ratten presteren slecht in deze tests, zowel in de trainingsfase en vervolgens51,52,53.
De huisvesting van ratten zou voldoende vrijheid van verkeer in overeenstemming met hun natuurlijk verkennend gedrag moeten toestaan, naast het toestaan van experimentele dieren om vertrouwd te raken met enkele van de elementen die aanwezig zijn in de functionele tests19. Daarom worden verschillende vormen van huisvesting getoond die een hogere bewegingsvrijheid mogelijk maken. De grote kooien zijn gepersonaliseerd met verrijkingselementen die later in de functionele tests worden gebruikt (bijvoorbeeld touwen en ladders).
Ongetwijfeld bieden deze verrijkende elementen evenals de kooien met ingebouwde loopwielen en de individuele trainingssferen een vorm van postoperatieve fysiotherapie die vergelijkbaar is met die welke wordt aangeboden aan menselijke patiënten die op het perifere zenuwstelsel werkten10.
Aanzienlijk, hoewel sommige auteurs pleiten ontleden van de onderhuidse weefsels en spierfasciae botweg of door schoon snijden met een nummer 15 scalpel, het gebruik van thermocautery bij het ontleden van deze structuren wordt aanbevolen om het risico van postoperatieve hematoom te minimaliseren.
Er zij op gewezen dat er talrijke tests zijn ontwikkeld om verschillende aspecten van perifere zenuwherstel bij de rat te testen, namelijk axonale regeneratie, doelreinnervation en functioneel herstel, waarvan sommige buiten het bereik van deze studie vallen29,54,55,56. Kinematische analyse29,36,55 en histomorfometrische beoordeling29,36,57 worden bijvoorbeeld op grote schaal gebruikt door meerdere auteurs. Daarnaast omvatten verschillende van deze tests variaties om de efficiëntie en/of reproduceerbaarheid te maximaliseren54. Mechanische algisemetrie (d.w.z. evaluatie van reacties op mechanische pijnlijke stimuli) kan bijvoorbeeld kwalitatief worden beoordeeld met behulp van een bepaalde von Frey-gloeidraad, zoals beschreven in het huidige document, of semikwantitatief met behulp van achtereenvolgens sterkere von Frey-filamenten, of zelfs kwantitatief gebruik van elektronische apparaten die toenemende druk uitoefenen totdat een ontwenningsreactie wordt waargenomen30,54.
Evenzo, hoewel verschillende auteurs gebruik maken van walking track analyse om de voorpoot zenuwreparatie te evalueren in de rat, andere auteurs beweren dat enkele MN laesies vaak niet om reproduceerbare veranderingen in pawprints10produceren ,58,59. Bovendien hebben sommigen verklaard dat deze veranderingen niet evenredig kunnen zijn met spierherstel10,60. Met dit in het achterhoofd, hebben sommige onderzoekers gepleit voor het gebruik van walking track analyse in de voorpoot vooral bij de beoordeling van herstel na verpletterende neve laesies in plaats van na segmentale zenuwreconstructie10,50,61.
De Grasping Test wordt veel gebruikt om motorisch herstel van de spieren gecontroleerd door de MN16,27te evalueren. Om de uniformiteit en reproduceerbaarheid van de met deze test verkregen gegevens te waarborgen, wordt aanbevolen de graspingtest toe te passen volgens de beproefde methode die door Bertelli et al.16 wordt voorgesteld. Het huidige protocol verschilt echter in die zin dat het de contralaterale poot niet routinematig immobiliseert om onnodige stress te voorkomen11,27. Ook moet worden opgemerkt dat andere auteurs, na het immobiliseren van de niet-gewonde poot, de Grijptest kwantitatief beoordelen met behulp van een dynamometer of een schaal27,56. Deze kwantitatieve evaluatie kan echter worden beïnvloed door de sterkte die de onderzoeker toepast op de staart van de rat26. Bovendien is het moeilijk om onderscheid te maken tussen de kracht gegenereerd door de digitale flexor spieren (uitsluitend innervated door de MN in de rat en het object van de Grasping Test9) van de kracht geproduceerd door de pols flexoren, waaronder de flexor carpi ulnaris dat zijn innervatie ontvangt van de ulnar zenuw9,10,27. Om te proberen om deze potentiële vooroordelen te omzeilen, dit protocol maakt gebruik van een ordinale schaal vergelijkbaar met de Medical Research Council Schaal vaak gebruikt om spierkracht bij de mensrang 10,11,62. Als alternatief hebben andere auteurs gedetailleerde beoordeling van het grijpen met behulp van video-analyse en een video-gebaseerde score systeem11,63beschreven .
Een potentieel nadeel van het gebruik van de MN in vergelijking met de heupzenuw is dat een grotere hoeveelheid informatie beschikbaar is met betrekking tot de laatste zenuw. Dit kan op zijn beurt de vergelijking van de verkregen gegevens met het MN met die van eerdere experimentele werken moeilijker maken46,48,64. Bovendien maakt de kleinere omvang van het MN in vergelijking met de heupzenuw chirurgische manipulatie uitdagender8,12,27,56,65.
In tegenstelling tot de in dit document beschreven methodologie kan de evaluatie van de elektroneneuromyografie worden uitgevoerd met behulp van transcutane monopolaire elektroden die in de arm en thenargebieden51worden geplaatst. Ondanks het feit dat minder invasief, deze methode draagt het risico van mogelijke verwarring als gevolg van de mogelijkheid van costimulatie van de ulnar zenuw in het arm gebied9,51.
De meeste auteurs het erover eens dat niet alle tests die worden gebruikt in de rat bieden concordante resultaten, als perifere zenuw reparatie is afhankelijk van een complexe reeks van factoren, bestaande uit neuron overleving, axonale verlenging en snoeien, synaptogenese, succesvolle herovering van de gedenervateerde sensorische organen en motoreenheden, en de hersenen plasticiteit7,10,50,66,67.
Ten slotte moet worden opgemerkt dat een belangrijk voorbehoud van knaagdiermodellen is dat perifere zenuwen van ratten veel dichter bij hun eindorganen liggen en veel kleinere dwarsdoorsnedegebieden hebben dan de homologe menselijke structuren. Dit verschil in grootte garandeert echter snellere experimentele gegevens bij knaagdieren en betere algemene resultaten bij ratten in vergelijking met mensen zijn te verwachten68. Verschillende auteurs waarschuwen namelijk dat de zorg moet worden gebruikt wanneer zij proberen experimentele gegevens te extrapoleren die zijn verkregen in perifere zenuwreparatie met behulp van knaagdieren aan de mens7,69. Primatenmodellen worden beschouwd als meer vergelijkbaar70. Niettemin wordt het gebruik ervan geassocieerd met vervelende ethische, logistieke en budgettaire beperkingen71.
Hoewel de heupzenuw is de meest gebruikte zenuw in perifere zenuwonderzoek, de rat MN presenteert meerdere voordelen. MN-laesies worden bijvoorbeeld geassocieerd met een kleinere incidentie van gezamenlijke contractuuren en automutilatie van de aangetaste poot11,12,16,56. Aanzienlijk, autotomie na heupzenuw transsectie treft 11-70% van de ratten. Dit kan huidige evaluaties zoals de sciatische index onmogelijk maken14. Dit maakt op zijn beurt de schatting van het aantal dieren dat nodig is om een bepaald statistisch vermogen te verkrijgen omslachtig15.
Bovendien, aangezien het MN korter is dan de heupzenuw, wordt zenuwherstel eerder waargenomen58,72,73,74,75,76. Bovendien is de MN niet bedekt door spiermassas, waardoor de dissectie technisch gemakkelijker is dan die van de heupzenuw16. Bovendien heeft de MN een parallel pad naar de ulnar zenuw in de arm. Vandaar, kan de ulnarzenuw gemakkelijk als zenuwtransplantaat voor het herstellen van verwondingen MN worden gebruikt. Ten slotte komen bij mensen de meeste perifere zenuwlaesies voor in de bovenste ledemaat, die het gebruik van deze zenuw in de rat77,78verder ondersteunt.
Ongetwijfeld, knaagdieren zijn de proefdieren meest gebruikt in het rijk van perifere zenuw reparatie48,79. Zoals getoond, de rat MN is een handig model van perifere zenuwletsel en reparatie. In feite zijn er meerdere gestandaardiseerde strategieën beschikbaar om motorisch en zintuiglijk herstel te beoordelen, waardoor een gemakkelijkere vergelijking van de resultaten36,46,60,80,81,82. Veel van deze methoden zijn niet-invasief, waardoor dagelijkse beoordeling mogelijk is.
Bovendien maakt fysiotherapie deel uit van de standaard van zorg voor patiënten die herstellen van perifere zenuwletsels. Zoals aangetoond in dit document, zijn er meerdere strategieën om een postoperatieve fysiotherapie-achtige omgeving te bieden aan ratten die aan MN verwondingen4,5. Dit model is dan ook bijzonder geschikt om het klinische scenario te repliceren, waardoor de extrapolatie van de resultaten aan de menselijke soort12,27,48,56,58,83wordt vergemakkelijkt .
Zoals blijkt uit dit document, meerdere gestandaardiseerde strategieën zijn beschikbaar om motorisch en sensorisch herstel te beoordelen in het MN-model van de rat. De meeste daarvan zijn niet-invasieve procedures, waardoor frequente beoordeling mogelijk is. Bovendien, als de meeste perifere zenuwlaesies bij de menselijke soort optreden in de bovenste ledemaat, de genoemde experimentele fysiotherapie instellingen kunnen meer aptly herstel na te bootsen in de klinische context. Ongetwijfeld kan dit extrapolatie van de resultaten aan de menselijke soort vergemakkelijken, waardoor het gebruik van deze zenuw in de rat verder wordt geëerpoliseerd.

Perifere zenuwletsels komen regelmatig voor als gevolg van trauma, infectie, vasculitis, auto-immuniteit, maligniteit en/of radiotherapie1,2. Helaas, perifere zenuwreparatie blijft klinisch onvoorspelbaar en vaak teleurstellende resultatenaanwezig 3,4. Men is het er algemeen over eens dat er nog steeds veel fundamenteel en translationeel onderzoek nodig is om het vooruitzicht van de betrokkenen te verbeteren4,5,6,7.
De rat MN vertoont grote gelijkenissen met die van mensen8,9 ( Figuur1). Afkomstig uit de brachial plexus in het okselgebied, daalt deze zenuw af in het mediale aspect van de arm, het bereiken van de elleboog, en vertakking af naar de meerderheid van de spieren in het ventrale compartiment van de onderarm. MN bereikt de hand, waar het de thenarspieren en de eerste twee lumbricalspieren evenals aan een deel van de handhuid 9 van de ratbinnenvates (Figuur 1).
Met behulp van de rat MN, is het mogelijk om voldoende te repliceren perifere zenuwlaesies bij de mens10,11,12. Deze zenuw heeft verschillende potentiële onderzoeksvoordelen ten opzichte van de gewoonlijk gebruikte heupzenuw. Omdat de MN zich in de voorpoot van ratten bevindt (verwant aan de menselijke bovenste ledematen), kan het experimenteel worden beschadigd met een veel kleinere impact op het welzijn van de rat, in vergelijking met de heupzenuw, die een aanzienlijk deel van de bekkenledemaatbinnenbrengt 13. Bovendien komen bij mensen de meeste klinische laesies voor in de bovenste ledemaat, wat overeenkomt met de voorpoot van de rat10,11,12,14,15,16.
Dit document laat zien hoe verschillende soorten MN laesies in de rat te produceren. Bovendien worden verschillende manieren gepresenteerd om postoperatieve fysiotherapie te simuleren. Ten slotte worden tests beschreven om het functionele herstel van het MN te evalueren. Er zijn meerdere gestandaardiseerde strategieën beschikbaar om motorisch en zintuiglijk herstel te beoordelen met behulp van een MN-model van perifere zenuwlaesie en reparatie, waardoor een eenvoudige vergelijking van de resultaten mogelijk is. Het MN-model is bijzonder geschikt om het klinische scenario te repliceren, waardoor extrapolatie van resultaten naar de menselijke soort wordt vergemakkelijkt.

<table><tbody><tr><td>Acetaminophen</td><td>Amazon</td><td></td><td>https://www.amazon.com/Childrens-Tylenol-grape-flavor-ages/dp/B0051VVVZG</td></tr><tr><td>Acland clamps</td><td>Fine Science Tools</td><td>00398 V</td><td>http://www.merciansurgical.com/aclandclamps.pdf</td></tr><tr><td>Acland Single Clamps B-1V (Pair)</td><td>Fine Science Tools</td><td>396</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Biogel Surgical Gloves</td><td>Medex Supply</td><td>30465</td><td>https://www.medexsupply.com</td></tr><tr><td>BSL Analysis</td><td>BIOPAC Systems</td><td></td><td>https://www.biopac.com/</td></tr><tr><td>Castroviejo needle holders</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td>http://s-and-t.ne</td></tr><tr><td>Clamp applicator</td><td>Fine Science Tools</td><td>CAF-4</td><td>http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf</td></tr><tr><td>Constante voltage stimulator</td><td>BIOPAC Systems</td><td>STM200</td><td>https://www.biopac.com/product/constant-voltage-stimulator-unipolar-pulse/</td></tr><tr><td>Cutasept skin disinfectant</td><td>Bode Chemie</td><td></td><td>http://www.productcatalogue.bode-chemie.com/products/skin/cutasept_f.php</td></tr><tr><td>Dafilon 10-0</td><td></td><td>G1118099</td><td>http://www.bbraun.com/cps/rde/xchg/bbraun-com/hs.xsl/products.html?prid=PRID00000816</td></tr><tr><td>Derf Needle Holders 12 cm TC</td><td>Fine Science Tools</td><td>703DE12</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Dry heat sterilizer</td><td>Quirumed</td><td>2432</td><td>http://www.quirumed.com/pt/material-de-esterilizac-o/esterilizadores</td></tr><tr><td>Dynamometer</td><td>SAUTER</td><td>FH5</td><td>https://www.sauter.eu/shop/en/measuring-instruments/force-measurement/FH-S/</td></tr><tr><td>Electroneuromiography setup</td><td>BIOPAC Systems</td><td>MP36</td><td>https://www.biopac.com/product/biopac-student-lab-basic-systems/</td></tr><tr><td>Ethilon 5-0</td><td></td><td>W1618</td><td>http://www.farlamedical.co.uk/</td></tr><tr><td>FLIR Software</td><td>FLIR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graeffe forceps 0.8 mm tips curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td>http://www.finescience.de</td></tr><tr><td>Graph paper</td><td>Ambar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat Lamp HL-1</td><td>Harvard Apparatus</td><td>727562</td><td>https://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/haisku3_10001_11051_39108_-1_HAI_ProductDetail_N_37610_37611_37613</td></tr><tr><td>Heparin Sodium Solution (Heparin LEO 10000IU/ml)</td><td>Universal Drugstore</td><td></td><td>http://www.universaldrugstore.com/medications/Heparin+LEO/10000IU%2Fml</td></tr><tr><td>High-Temperature Cautery</td><td>Fine Science Tools</td><td>AA03</td><td>http://www.boviemedical.com/products_aaroncauteries_high.asp</td></tr><tr><td>Homeothermic Blanket System with Flexible Probe</td><td>Harvard Apparatus</td><td>507220F</td><td>https://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/haisku3_10001_11051_39108_-1_HAI_ProductDetail_N_37610_37611_37613</td></tr><tr><td>Infrared camera</td><td>FLIR</td><td>E6</td><td>http://www.flir.eu/instruments/e6-wifi/</td></tr><tr><td>Instrapac - Adson Toothed Forceps (Extra Fine)</td><td>Fine Science Tools</td><td>7973</td><td>http://www.millermedicalsupplies.com</td></tr><tr><td>Iris Scissors 11.5 cm Curves EASY-CUT</td><td>Fine Science Tools</td><td>EA7613-11</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride/xylazine hydrochloride solution</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>K113</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/k113?lang=pt&amp;region=PT</td></tr><tr><td>Lacri-lube Eye Ointment 5g</td><td>Express Chemist</td><td>LAC101F</td><td>http://www.expresschemist.co.uk/lacri-lube-eye-ointment-5g.html</td></tr><tr><td>Mayo Scissors 14 cm Straight Chamfered Blades EASY-CUT</td><td>Fine Science Tools</td><td>EA7652-14</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Recropharma</td><td>Mobic</td><td>https://www.recropharma.com/product-pipeline/meloxicam</td></tr><tr><td>Methylene Blue solution</td><td>Sigma- Aldrich</td><td></td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product</td></tr><tr><td>Micro Jewellers Forceps 11 cm straight 00108</td><td>Fine Science Tools</td><td>JF-5</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Micro Jewellers Forceps 11cm angulated 00109</td><td>Fine Science Tools</td><td>JFA-5b</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Micro retractor</td><td>Fine Science Tools</td><td>RS-6540</td><td>http://www.finescience.de</td></tr><tr><td>Micro Scissors Round Handles 15 cm Straight</td><td>Fine Science Tools</td><td>67</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Micro-vessel dilators 11 cm 0.3 mm tips 00124</td><td>Fine Science Tools</td><td>D-5a.2</td><td>http://www.merciansurgical.com</td></tr><tr><td>Monosyn 5-0</td><td></td><td>15423BR</td><td>http://www.mcfarlanemedical.com.au/15423BR/SUTURE-MONOSYN-5_or_0-16MM-70CM-(C0023423)-BOX_or_36/pd.php</td></tr><tr><td>Normal saline for irrigation</td><td>Hospira, Inc.</td><td>0409-6138-22</td><td>http://www.hospira.com/en/search?q=sodium+chloride+irrigation%2C+usp&amp;fq=contentType%3AProducts</td></tr><tr><td>Operating microscope</td><td>Leica Surgical Microsystems</td><td></td><td>http://www.leica-microsystems.com/products/surgical-microscopes/</td></tr><tr><td>Skin Skribe Surgical Skin Marker</td><td>Moore Medical</td><td>31456</td><td>https://www.mooremedical.com/index.cfm?/Skin-Skribe-Surgical-Skin-Marker/&amp;PG=CTL&amp;CS=HOM&amp;FN=ProductDetail&amp;PID=1740&amp;spx=1</td></tr><tr><td>Snacks</td><td>Versele-Laga</td><td>Complete Crock-Berry</td><td>http://www.versele-laga.com/en/complete/products/complete-crock-berry</td></tr><tr><td>Straight mosquito forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>91308-12</td><td>http://www.finescience.de</td></tr><tr><td>Surgical drapes</td><td>Barrier</td><td>800430</td><td>http://www.molnlycke.com/surgical-drapes/</td></tr><tr><td>Veet Sensitive Skin Hair Removal Cream Aloe Vera and Vitamin E 100 ml</td><td>Veet</td><td></td><td>http://www.veet.co.uk/products/creams/creams/veet-hair-removal-cream-sensitive-skin/</td></tr></tbody></table>

functionele en fysiologische methoden voor de evaluatie van mediane zenuwregeneratie in de rat

Functional and Physiological Methods of Evaluating Median Nerve Regeneration in the Rat

Het belangrijkste doel van dit onderzoek is om te laten zien hoe verschillende soorten mediane zenuwlaesies (MN) in de rat te creëren en te herstellen. Bovendien worden verschillende methoden gepresenteerd om postoperatieve fysiotherapie te simuleren. Meerdere gestandaardiseerde strategieën worden gebruikt om motorisch en zintuiglijk herstel te beoordelen met behulp van een MN-model van perifere zenuwlaesie en reparatie, waardoor een eenvoudige vergelijking van de resultaten mogelijk is. Verschillende opties zijn opgenomen voor het verstrekken van een postoperatieve fysiotherapie-achtige omgeving aan ratten die hebben ondergaan MN verwondingen. Ten slotte biedt het papier een methode om het herstel van het MN te evalueren met behulp van verschillende niet-invasieve tests (d.w.z. grijptest, pinpriktest, laddersportlooptest, touwklimtest en loopspooranalyse) en fysiologische metingen (infraroodthermografie, electroneuromyografie, flexiesterkte-evaluatie en flexor carpi radialis spiergewichtbepaling). Daarom lijkt dit model bijzonder geschikt om een klinisch scenario te repliceren, waardoor extrapolatie van resultaten aan de menselijke soort wordt vergemakkelijkt.
Hoewel de heupzenuw is de meest bestudeerde zenuw in perifere zenuwonderzoek, analyse van de rat MN presenteert verschillende voordelen. Er is bijvoorbeeld een verminderde incidentie van gezamenlijke contractuuren en automutilatie van de aangetaste ledemaat in MN laesiestudies. Bovendien is het MN niet bedekt door spiermassas, waardoor de dissectie gemakkelijker is dan die van de heupzenuw. Bovendien wordt MN-herstel eerder waargenomen, omdat het MN korter is dan de heupzenuw. Ook heeft de MN een parallel pad naar de ulnar zenuw in de arm. Vandaar, kan de ulnarzenuw gemakkelijk als zenuwtransplantaat voor het herstellen van verwondingen MN worden gebruikt. Ten slotte bevindt het MN zich bij ratten in de voorpoot, verwant aan de menselijke bovenste ledemaat; bij mensen is de bovenste ledemaat de plaats van de meeste perifere zenuwletsels.

Een totaal van 34 ratten werden willekeurig verdeeld in de volgende groepen: Sham (n = 17), Excision (n = 17), en Nerve Graft (n = 10) voor de operatie. Alle ratten overleefden de operatie en de postoperatieve periode zonder gebeurtenis. Een week na de operatie en voor de daaropvolgende 100 dagen, alle dieren onderging de functionele tests hierboven beschreven een keer per week. De representatieve resultaten van elk van deze tests worden hieronder beschreven.
Grijptest
Het percentage ratten met een positieve reactie in de Sham grijptest was het hoogst voor de Sham-groep. Deze waarde geleidelijk toegenomen na verloop van tijd bij ratten uit de Crush en Nerve Graft groepen ( Figuur3).
Pin Prik Test
Ratten uit de Sham groep hadden de beste scores in de cumulatieve speldenpriktest ten opzichte van ratten uit de Nerve Graft groep. Beiden hadden betere scores dan de ratten in de Excision groep (Figuur 4).
Ladder Running Test
De ratten snelheid in de ladder lopen test was het hoogst in de Sham groep dan in de ratten voorgelegd aan MN laesie. Onder deze laatste, de tijd om de ladder te lopen de neiging om te dalen in de tijd, parallel MN herstel (Figuur 5).
Touwtest
Net als in de ladder running test, de tijd dat de ratten nam om het touw te beklimmen was korter in de Sham groep in vergelijking met de groepen waarin de MN gewond raakte. De snelheid van de ratten in deze test nam toe toen het MN mocht herstellen (Figuur 6).
Walking Track Analyse
Analyse van wandelpaden had de neiging om veranderingen in de morfologie van pootafdrukken te laten zien (Figuur 7). Deze veranderingen waren vaak meer uitgesproken in verpletterende verwondingen dan in segmentale zenuwletsels50.
Infraroodthermografie
Thermografie was nuttig bij het onderzoeken van temperatuurverschillen tussen de voorpoten in de eerste 30 dagen na de operatie. Temperatuurverschillen waren meer merkbaar bij ratten met een ernstiger gewonde MN, zoals bij die van de Excision-groep (figuur 8 en figuur 9).
Electroneuromie
Tabel 1 vat het biologische belang van de elektroneneuromyografiemetingen samen en geeft representatieve resultaten voor de verschillende experimentele groepen. Verschillende patronen werden waargenomen met electroneuromyografie. Een normale CMAP was typerend voor een rat uit de Sham-groep, terwijl een polyfhasische CMAP werd geassocieerd met een variabele laesiegraad van het MN, zoals in de Crush en in de Nerve Graft-groepen (Figuur 10). Sham In de Excision-groep werden geen CMAP's waargenomen.
Pols Flexie Kracht
Gezien het feit dat polsflexie voornamelijk afhankelijk is van het MN, werd deze test gebruikt om het motorisch herstel in het grondgebied van deze zenuw te evalueren. Pols flexie sterkte was het dichtst bij normaal toen het herstel maximaal was (Figuur 11).
Spiergewicht en morfologie
Het gewicht en de morfologie van de flexor carpis radialis spier waren afhankelijk van MN herstel, omdat deze spier uitsluitend wordt opgenomen door de MN9,10. Zo werden het normale gewicht en Sham de morfologie waargenomen in de Sham-groep. Een verlies van gewicht en spiertrofhisme werd waargenomen in de Crush, Nerve Graft, en Excision groepen (Figuur 12).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig01.jpg"> Figuur 1: Schematische weergave van de anatomie van de mediane zenuw van de rat. (1) Oorsprong en beëindiging van de mediane zenuw in de rattenhersenen (groen gebied = primair motorisch gebied; blauw gebied = primair sensorisch gebied). (2) Dwarse sectie van het ruggenmerg op C7-segmentniveau; (3) Axillaire zenuw; (4) Spierzenuw; (5) Radiale zenuw; (6) Mediane zenuw; (7) Ulnar-zenuw; (8) Mediale cutane tak van de arm; (9) Mediale cutane tak van de onderarm; (10) Axillaire slagader; (11) Brachiale slagader; (12) Mediane slagader; (13) Oppervlakkige radiale slagader; (14) Ulnar-slagader; (15) Motortak van de mediane zenuw aan de pronator teres spier; (16) Motortak van de mediane zenuw aan de flexor carpis radialis spier; (17) Motortak van de mediane zenuw aan de flexor digitorum superficialis spier; (18) Motortak van de mediane zenuw aan de flexor digitorum profundus spier; (19) Sensorische tak van de mediane zenuw naar het thenargebied; (20) Gemeenschappelijke palmslagader van de eerste interosseeuze ruimte; (21) Radiale palmaire digitale slagader van het eerste cijfer; (22) Motortak van de mediane zenuw aan de thenarspieren; (23) Palmaire arteriële boog; (24) Radiale palmaire digitale zenuw van het eerste cijfer; (25) Ulnar palmar digitale zenuw van het eerste cijfer; (26) Gemeenschappelijke palmslagader van de derde interosseeuze ruimte; (27) Motortakken van de eindverdelingen van de middenzenuw tot de eerste drie lumbricale spieren; (28) Ulnar palmar digitale zenuwen van de tweede, derde en vierde cijfers; (29) Ulnar palmar digitale slagaders naar de vierde en vijfde cijfers; (30) Radiale palmaire digitale zenuwen van de tweede, derde en vierde cijfers; (31) Radiale palmaire digitale slagader van het vijfde cijfer; (32) Huidgebied van de mediane zenuw in de voorpoot (blauw-gearceerde regio). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig02.jpg"> Figuur 2: Foto van de rechter voorpoot van de rat met de chirurgische anatomie van de mediane zenuw in de arm- en okselgebieden. Cr, schedel; Me, medial <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig03.jpg"> Figuur 3: Percentage ratten met een positieve grijptest in de verschillende experimentele groep over een periode van 100 dagen na de operatie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig03large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig04.jpg"> Figuur 4: Nociception evaluatie met behulp van cumulatieve pin prik testresultaten in de geopereerde voorpoot genormaliseerd tot de contralaterale poot in de verschillende experimentele groepen. Verticale balken vertegenwoordigen 95% betrouwbaarheidsintervallen. Horizontale lijnen in het bovenste deel van het cijfer wijzen op statistisch significante verschillen tussen experimentele groepen, ***p<0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig04large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig05.jpg"> Figuur 5: Gemiddelde snelheid in de ladderlooptest in de verschillende experimentele groepen. Verticale balken vertegenwoordigen 95% betrouwbaarheidsintervallen. Sterretjes in het bovenste gedeelte van het cijfer wijzen op statistisch significante verschillen tussen groepen, *p<0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig05large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig06.jpg"> Figuur 6: Gemiddelde klimsnelheid in de touwtest in de Sham- en Excision-groepen. Verticale balken vertegenwoordigen 95% betrouwbaarheidsintervallen. Sterretjes in het bovenste gedeelte van het cijfer tonen statistisch significante verschillen tussen groepen, *p<0,05; **p<0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig06large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig07.jpg"> Figuur 7: Wandelbaanparameters in de verschillende experimentele groepen. Waarden op de geopereerde ledemaat worden uitgedrukt als percentages van de middelen genormaliseerd tot de contralaterale ledemaat. aA) houdingsfactor; bB) afdruklengte; c) vingerverspreidingsfactor; dD) intermediaire vingerverspreidingsfactor; eE) paslengte; (F) Steunbasis. Verticale balken vertegenwoordigen 95% betrouwbaarheidsintervallen. Horizontale lijnen in het bovenste gedeelte van het cijfer wijzen op statistisch significante verschillen tussen experimentele groepen. D30, D60, D90 = 30, 60 en 90 dagen na de operatie, *p<0,05; **p<0.01; p<0,001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig07large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig08.jpg"> Figuur 8: Gemiddelde temperatuurverschil geregistreerd door infraroodthermografie. De boxplots vertegenwoordigen het temperatuurverschil tussen het palmargebied van de mediane zenuw aan de geopereerde kant (rechterkant) en de contralaterale zijde (links) in de Sham (n = 17) en Excision (n = 17) groepen, *p<0.05; **p<0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig08large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig09.jpg"> Figuur 9: Typisch infrarood thermografiepatroon van een dier uit de excisiegroep gedurende de eerste 45 dagen na de operatie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig09large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig10.jpg"> Figuur 10: Typische patronen van Compound Muscle Action Potentials (CMAp's) van een dier uit de Sham en Nerve Graft groepen 90 dagen na de operatie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig10large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig11.jpg"> Figuur 11: Evaluatie van de flexiesterkte van de pols op beide voorpoten 90 dagen postoperatief in verschillende experimentele groepen. Pols flexie sterkte werd beoordeeld met behulp van het gebied onder de curve (AUC) over een periode van 30 s en met behulp van supratetanic stimulatie. Verticale lijnen geven 95% betrouwbaarheidsintervallen aan. Horizontale lijnen in het bovenste gedeelte van de figuur markeren statistisch significante verschillen tussen groepen, **p<0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig11large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<img alt="Figure 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59767/59767fig12.jpg"> Figuur 12: Flexor carpi radialis spiergewicht en macroscopische verschijning 100 dagen na de operatie. (A) Box plots beeltenis van de genormaliseerde flexor carpi radialis spiergewicht in verschillende experimentele groepen, ** p<0.01; p<0,001. (B) Foto's van de spieren aan de rechter- en linkerkant in de Sham en Excision experimentele groepen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59767/59767fig12large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Parameter</td>
			<td>Parameterbetekenis</td>
			<td>Sham groep</td>
			<td>De groep van de excisie</td>
			<td>NG-groep</td>
		</tr>
<tr>
<td>Neurologische stimulatiedrempel (%)</td>
			<td>Evaluatie van zenuwregeneratie, want er is een minimaal aantal zenuwvezels nodig om ofwel een CMAP of een zichtbare spiercontractie te produceren12
</td>
			<td>281,63 ± 271,65</td>
			<td>5359,98 ± 3466,52</td>
			<td>2108,12 ± 2115,13</td>
		</tr>
<tr>
<td>Drempel voor motorstimulatie (%)</td>
			<td>Evaluatie van zenuwregeneratie, want er is een minimaal aantal zenuwvezels nodig om ofwel een CMAP of een zichtbare spiercontractie te produceren12
</td>
			<td>462,52 ± 118,91</td>
			<td>1694,10 ± 503,24</td>
			<td>1249,50 ± 503,24</td>
		</tr>
<tr>
<td>Latentie (%)</td>
			<td>Beoordeling van de snelheid van de zenuwgeleiding in de snelste zenuwvezels, dat wil zeggen de grootste gemyelineerde vezels44
</td>
			<td>113,55 ± 25,04</td>
			<td>N/a</td>
			<td>132,80 ± 69,95</td>
		</tr>
<tr>
<td>Neuromusculaire transductiesnelheid (%)</td>
			<td>Beoordeling van de snelheid van de zenuwgeleiding in de snelste zenuwvezels, dat wil zeggen de grootste gemyelineerde vezels44
</td>
			<td>92,01 ± 20,88</td>
			<td>N/a</td>
			<td>91,30 ± 26,51</td>
		</tr>
<tr>
<td>CMAP's amplitude (%)</td>
			<td>Evaluatie van het aantal gereinnervated motoreenheden34
</td>
			<td>110,63 ±45,66</td>
			<td>N/a</td>
			<td>41,60 ± 24,84</td>
		</tr>
<tr>
<td>CmAP's duur (%)</td>
			<td>Beoordeling van synchronie van spierinnervatie, die afhankelijk is van de mate van spierreinnervatie en myelinatie van de innervating motorvezels44,45
</td>
			<td>101,12 ± 23,92</td>
			<td>N/a</td>
			<td>151,06 ± 54,52</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
NG, zenuwtransplantatie CMAP's,samengestelde spier actie potentieel. N/A, niet van toepassing Alle parameters worden uitgedrukt als percentages van de gemiddelde contralaterale waarden. Numerieke variabelen worden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Electroneuromyografische beoordeling aan het einde van het experiment.

Gepresenteerd is een protocol om verschillende soorten mediane zenuw (MN) laesies te produceren en reparatie in de rat. Bovendien laat het protocol zien hoe het functionele herstel van de zenuw kan worden geëvalueerd met behulp van verschillende niet-invasieve gedragstests en fysiologische metingen.

Functionele en fysiologische methoden voor de evaluatie van mediane zenuwregeneratie in de rat

The main goal of this investigation is to show how to create and repair different types of median nerve (MN) lesions in the rat. Moreover, different ...

Met behulp van de mediane zenuw van de rat, is het mogelijk om adequaat te repliceren, perifere zenuwletsels bij de mens. Klinisch, de meeste van deze laesies optreden, in de bovenste extremiteit die ondersteuning biedt aan het gebruik van dit experimentele model. In dit document zullen we laten zien, hoe verschillende soorten mediane zenuwletsels in de rat te produceren.Daarnaast zullen we illustreren, hoe functioneel herstel van deze zenuw te evalueren met behulp van verschillende tests. De Mediane zenuw komt voort uit de dwarslaesie segmenten C6 tot T1. De mediane zenuw is gemarkeerd in het groen. In deze video worden chirurgische gordijnen niet gebruikt voor demonstratiedoeleinden.Gelieve een laken tijdens het uitvoeren van de operatie. De huid in het mediale aspect van de rechterarm en borststreek wordt ingesneden tot aan het diepe fasciasvlak. Bloedende bloedvaten worden zorgvuldig geligat.Vervolgens wordt de Brachial fascia zorgvuldig gesneden, waarbij ervoor wordt gezorgd dat de vasculaire en zenuwstructuren niet worden beschadigd, in het mediale aspect van de arm. Een schaar is botweg open onder, de terminale inbrengen van de pectoralis belangrijkste spier, om deze spier te plagen, weg van de onderliggende Axillaire slagader en ader, evenals van de terminale takken van de Brachial plexus. Het inbrengen van pectoralis grote spier, wordt vervolgens verdeeld met een elektrische cautery.De pectoralis kleine spier wordt vervolgens blootgesteld en gesneden. De mediale zenuw wordt dan botweg ontleed van de brachial vaten en van de zenuw Ulnar tot het ellebooggebied. Het is nu mogelijk om de verschillende terminale takken van de Brachial plexus te observeren, namelijk de Mediaan, de Ulnar, de Radiale, de Axillaire en de Musculocutaneuze zenuwen.Met de Mediane zenuw blootgesteld en geïsoleerd verschillende mechanische verwondingen kunnen worden veroorzaakt. Een Sham groep kan worden gemaakt, door alleen ontleden van de Mediane zenuw. In de crush groep wordt de Mediane zenuw gecomprimeerd, met behulp van microchirurgie tangen gedurende 15 seconden.De excisiegroep vloeit uit de verwijdering van voort, een 10 millimeter lang segment van de Mediane zenuw. De proximale stomp van de Mediane zenuw is met de 8-0 nylon hechting om axonale groei te voorkomen. Als alternatief is het mogelijk om het uitgesneden segment 180 graden te draaien en te gebruiken als een autologe zenuwtransplantatie.In dit geval worden de proximale en distale stompen van de sectie in de mediazenuw gehecht aan de zenuwtransplantatie met behulp van 10-0 nylon steken. Fysiotherapie maakt deel uit van de standaard van de zorg van patiënten die herstellen van perifere zenuwletsels. Er zijn meerdere strategieën om postoperatieve fysiotherapie te bieden aan ratten, die zijn voorgelegd aan mediane zenuwletsels.Het is belangrijk om jonge ratten te kiezen en hen in staat te stellen contact te hebben met de fysiotherapie-instrumenten voor de operatie. Deze zorgen voor een gemakkelijkere en snellere aanpassing aan de trainingsinstellingen. Bovendien moeten de fysiotherapie-instrumenten de ratten in staat stellen een zekere mate van vrijheid te hebben en hen idealiter in staat stellen fijne bewegingen uit te voeren met de voorpoten.Er zijn verschillende manieren om fysiotherapie uit te voeren. Er kunnen bijvoorbeeld afzonderlijke bollen worden gebruikt. Zet de rat in de bol en plaats hem in een kamer met weinig obstakels.Laat het de kamer een half uur verkennen. Doe dit één keer per dag. Ratten kunnen ook worden gehuisvest in individuele kooien.Met ingebouwde loopwielen. Op deze manier kunnen ratten oefenen, zoveel als ze willen en wanneer ze maar willen. Een andere mogelijkheid is meegaand, de ratten in groepen in grotere kooien.Personaliseer de kooien met leer, touwen, loopwielen en andere milieuverrijkingselementen. Hierdoor kunnen ze voldoende bewegingsvrijheid krijgen, in overeenstemming met hun natuurlijke verkennend gedrag en kunnen de ratten, met enkele van de aanwezige elementen, vertrouwd raken in de functionele tests. Voordat u de functionele tests uitvoert, maakt u de ratten vertrouwd met de voedselbehandelingen die u als positieve versterking hebt gebruikt.Voer de tests in de avond, wanneer de ratten van nature actiever zijn. Begin met een Grasping test. Plaats de rat op het rooster en til hem door zijn staart te laten grijpen het rooster.Wanneer de rat in staat is om het rooster te grijpen, met dezelfde sterkte met beide voorpoten. Het betekent dat de mediane zenuw functioneert en de Grasping test wordt beschouwd als positief. Als het niet kan grijpen het rooster met de gewonde poot, de Grijpen test wordt beschouwd als negatief.Voor de Pin Prick test, plaats de rat op het platform en wacht een paar minuten tot verkennende en grote grooming activiteiten verdwijnen. Begin wanneer de rat stilstaat en op de voorpoten staat. Met behulp van de spiegel, steek de Von Frey haar door het gaas om de palmaire aspect van de voorpoot porren.Herhaal dit vijf keer op elke voorpoot, als alternatief, wachten een paar seconden na elke evaluatie. Score de intrekking reactie als volgt, nul voor geen terugtrekking reactie, als de rat langzaam verwijdert de poot uit de gloeidraad en twee als de rat snel reageert op de stimulus en verwijdert de poot of likt de poot. Plaats de rat onderaan de ladder en raak voorzichtig de staart van de rat aan.Start de timer zodra de rat begint te lopen en stop het zodra zijn snuiten kruist de dozen ingang. Neem de tijd op en herhaal de test drie keer. Zet de rat aan de onderkant van het touw en overtuig hem om hem te beklimmen door zijn staart zachtjes aan te raken.Beschouw de test geldig als het dier niet, aarzelen tijdens de taak of stopt met klimmen. Start de timer zodra het dier het klimmen initieert en stop het op het moment dat de rattensnuit de ingang van het platform oversteekt. Geef de rat een snack na het uitvoeren, de taken correct en laat het, enkele minuten rust alvorens het te herhalen.Plaats een stuk grafiekpapier op de gangenvloer. Pak vervolgens de rat bij zijn staart en laat hem de verfborstel vasthouden, geïmpregneerd in methyleenblauw. Plaats het bij de ingang van de gang om hem in de doos te laten lopen.Haal het grafiekpapier uit de gangenvloer en herhaal de tests totdat u een goede, representatieve indruk van beide voorpoten krijgt. Selecteer uit de verkregen afdrukken een met een goede afdruk van opeenvolgende voorpoten en meet de volgende parameters. Afdruklengte, finger spread, intermediate finger spread en stance factor.Meet ten slotte de afstand tussen de tweede vinger van twee opeenvolgende afdrukken, de Stride Length. Om de Thermografische Evaluatie uit te voeren, plaatst u een stuk dubbele zijlijm op de spons. Leg de rat erop en lijm de voorpoten zoals afgebeeld.Wacht even om de warmte-uitwisseling te verdrijven van het hanteren van de poten van de rat. Pak de camera onder een hoek van 90 graden en ongeveer 30 centimeter afstand van de ratten. Doe twee acquisities.Eerst, een full body thermogram, dan, ongeveer de camera aan het bovenlichaam van de rat, maken de tweede. Van het verkregen thermogram vinden we een bezienswaardigheid die overeenkomt met het palmaire gebied van de voorpoten. Meet de gemiddelde, minimum- en maximumtemperatuurwaarden van dat gebied op beide poten en bereken de temperatuurverschillen.Om de volgende evaluatie uit te voeren, bloot de mediane zenuw aan beide zijden zoals eerder uitgelegd. Begin met het plaatsen van de rat op zijn rug en zet de elektrode net weergegeven in de huid. De grondelektroden op de dij van de rat en de stimulatie en opname elektroden, op de linker bovenste ledemaat.Zet een opnameelektrode, op de Flexor digitorum sublimis spierbuik, en de Stimulatie elektroden, ongeveer in de Mediane zenuw. Start de overname met een Stimulus amplitude van 10 millivolt en geleidelijk verhogen, in 10 millivolt stappen tot het bereiken van twee volt. Tijdens de overname, registreer de Stimulus amplitude voor de eerste zichtbare vingers flexie.Dat is de motor stimulatiedrempel. De minimale Stimulus amplitude, die nodig is om een Compound Muscle Action Potential te verkrijgen, C.M.A.P.is een neurologische stimulatie drempel. Selecteer ten slotte een representatieve C.M.A.P, in reactie op een Supramaximale stimulus en meet de volgende parameters, Latency, Amplitude en Duur.Om de Flexion Strength Evaluation uit te voeren, voer eerst een vijf- of zes zijden hechtlus door het palmaire gebied van elke voorpoot en laat deze met vijf centimeter lengte achter. Plaats de rat op zijn rug. Begin met de linker voorpoot, haak de hechtlijn in de dynamometerhaak en lijn de voorpoot uit met de dynamometer, zonder al te veel druk op de haak te leggen.Houd de stimulerende elektroden, ongeveer in de mediane zenuw. Pas de stimulusamplitude aan op 1,5 volt en neem direct kracht op gedurende 30 seconden. Analyseer vanaf het verkregen plot de maximale, minimale en gemiddelde krachtwaarden en het gebied onder de curve.De Flexor carpi radialis, die innervated door de Mediane zenuw, wordt bilateraal verwijderd en gewogen in een precisie schaal. Ten aanzien van sommige representatieve resultaten, in de Grijptest, het percentage ratten met een positieve respons, is het hoogst in de Sham-groep en het geleidelijk toeneemt na verloop van tijd, bij ratten uit de Nerve Graft groep. Pin Prick testresultaten zijn hoger, in de Sham groep in vergelijking met die van ofwel de Graft of de Excision groepen.Rat's snelheid in de Ladder Running test, is het hoogst in de Sham groep, dan de rat is voorgelegd aan mediale lab laesie. Onder de lichtere, de tijd om de ladder uit te voeren, heeft de neiging om te verminderen na verloop van tijd paring Mediane zenuwherstel. Analoog aan wat wordt waargenomen in de Ladder Running test, de tijd ratten nemen om het touw te beklimmen, is inferieur in de Sham groep, in vergelijking met de groepen waarin de Mediane zenuw is gewond.De snelheid van de rat, in deze test, neemt toe bij de ratten, waarbij een mediane zenuw mag herstellen. Zoals blijkt uit deze staafgrafieken, analyse van wandelende ratten, heeft de neiging om veranderingen in de morfologie van pootafdrukken te tonen. Deze veranderingen zijn vaak meer uitgesproken, in verpletterende verwondingen dan in Segmentale zenuwletsels.Deze grafiek toont aan dat thermografie lijkt te zijn, een nuttig hulpmiddel om te zoeken naar temperatuurverschillen, tussen de voorpoten in de eerste 30 dagen na de operatie. Die temperatuurverschillen zijn meer merkbaar, bij ratten met de ernstiger gewonde mediane zenuw, zoals in die van de Excision groep. De buigkracht van de rat is direct gecorreleerd, met de mate van zenuwherstel.Het dichtst bij normaal wanneer herstel maximaal is, zoals te zien is in deze staafgrafieken die kracht vergelijken, in beide poten in Excision en de Zenuwtransplantatiegroepen. Wat electroneuromyografie betreft, kunnen verschillende patronen worden waargenomen. Een normaal C.M.A.P.potentieel, is typerend voor een rat uit de Sham groep.Terwijl de Polyphasic C.M.A.P.is geassocieerd, met een variabele mate van laesie van de mediane zenuw, zoals gebeurt in de crush en in de Nerve Graft groepen. In de excisiegroep is er geen C.M.A.P.De golf en morfologie van de Flexor carpi radialis zijn afhankelijk van het Mediane zenuwherstel. Deze twee beelden tonen deze spieren, in de Sham en Excision groepen.Zoals getoond in dit document, de rat Mediane zenuw is een handig model van perifere zenuwlaesie en reparatie. Er zijn meerdere gestandaardiseerde strategieën beschikbaar om motor- en sensorisch herstel te beoordelen. Veel van deze zijn niet-invasief, waardoor voor de dagelijkse beoordeling.Ten slotte kunnen experimentele fysiotherapie-instellingen herstel simuleren in de klinische context, waardoor de bepaling van de resultaten voor de menselijke soort wordt vergemakkelijkt.

functional-physiological-methods-evaluating-median-nerve-regeneration

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In dit rapport beschrijven we een methode om de muis heupzenuw te verpletteren. Deze methode maakt gebruik van direct beschikbaar hemostatische tang en gemakkelijk en reproduceerbaar maakt complete heupzenuw crush. Daarnaast beschrijven we een methode om de spieren hele mounts geschikt voor analyse van de zenuw regeneratie na heupzenuw verliefd te bereiden.

Reproduceerbare Mouse heupzenuw Crush en de daaropvolgende beoordeling van Regeneratie door Whole Mount Muscle Analyse

We hebben een methode voor zenuwletsel ontwikkeld om op betrouwbare wijze spierreïnnervatie, en dus regeneratie van neuromusculaire juncties bij muizen, te onderzoeken. Deze techniek omvat het beschadigen van de gemeenschappelijke fibulazenuw via een eenvoudige en zeer reproduceerbare operatie. Spierreïnnervatie wordt vervolgens beoordeeld door het geheel op te monteren van de extensor digitorum longus-spier.

De fibular Nerve Injury Methode: Een betrouwbare Assay kunnen identificeren en Test factoren die Repair neuromusculaire verbindingen

Axonale prikkelbaarheid technieken bieden een krachtig hulpmiddel om te onderzoeken pathofysiologie en biofysische wijzigingen die voorafgaan aan de onomkeerbare degeneratieve gebeurtenissen. Dit manuscript demonstreert het gebruik van deze technieken op het telefoonbotje van narcose ratten.

In Vivo Elektrofysiologische meting van de Rat telefoonbotje met axonale prikkelbaarheid testen

Dit protocol beschrijft een reproduceerbare benadering van gezichtszenuwchirurgie in het rattenmodel, inclusief beschrijvingen van verschillende induceerbare patronen van letsel.

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

We introduceren een kinematische analysemethode die gebruik maakt van een driedimensionaal bewegingsopnameapparaat met vier camera's en gegevensverwerkingssoftware voor het uitvoeren van functionele evaluaties tijdens fundamenteel onderzoek met knaagdiermodellen.

3D Kinematic Analyse voor de functionele evaluatie in het Rattenmodel van Sciatische Zenuwbrekerletsel

Geautomatiseerde loopanalyse is een haalbaar hulpmiddel om functioneel herstel te evalueren in knaagdiermodellen van perifere zenuwletsel en dwarslaesie. Hoewel het slechts één opstelling vereist om de motorische functie in verschillende experimentele modellen te beoordelen, is nauwgezette hard- en soft-ware aanpassing en training van de dieren zeer belangrijk.

Geautomatiseerde ganganalyse om functioneel herstel bij knaagdieren met perifere zenuw- of ruggenmergkvochtletsel te beoordelen

Evaluatie van motorisch herstel blijft de benchmark uitkomstmaat in experimentele perifere zenuwstudies. De isometrische tetanische krachtmeting van de tibialis voorste spier in de rat is een onschatbaar hulpmiddel om functionele resultaten na reconstructie van ischiaszenuwdefecten te beoordelen. De methoden en nuances worden in dit artikel beschreven.

Maximale isometrische tetanische krachtmeting van de Tibialis-voorste spier in de rat

We bieden een protocol voor de beoordeling van motorisch gedrag via een gedragstestbatterij bij ratten na ischias zenuwverpletteringsletsel.

Multifactoriële beoordeling van motorisch gedrag bij ratten na unilaterale ischias zenuw crush letsel

De aangepaste chirurgie is een vereenvoudigde methode voor een model voor gespaard zenuwletsel bij muizen of ratten dat slechts één ligatie en één snede vereist om zowel de gemeenschappelijke peroneale als de surale zenuwen te verwonden.

Gemodificeerd model voor gespaard zenuwletselchirurgie van neuropathische pijn bij muizen

We presenteren een protocol voor het gebruik van Fu's subcutane needling in een chronisch vernauwingsletselmodel om heupzenuwpijn bij ratten te induceren.

Werkzaamheid van Fu's subcutane naald op heupzenuwpijn: gedrags- en elektrofysiologische veranderingen in een rattenmodel met chronische vernauwingsblessure

Leer functionele en fysiologische methoden om mediane zenuwregeneratie te evalueren bij ratten. Dit protocol omvat chirurgische letsels, gedragstests en fysiotherapie voor herstelonderzoek.

Functionele en fysiologische methoden voor de evaluatie van mediane zenuwregeneratie in de rat

Meer video's verkennen