High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

Lukasz S. Borowski; Karolina Kasztelan; Jolanta Czerwinska-Kostrzewska; Roman J. Szczesny

doi:10.3791/65236

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

May 05, 2023

High-throughput bildebasert kvantifisering av mitokondriell DNA-syntese og distribusjon

01:31 min

•

Fremstilling av siRNA-blanding for mitokondriell DNA-syntese

00:45 min

•

Celletransfeksjon og 5-brom-2'-deoksyuridin (BrdU) inkorporering i HeLa-celler

01:19 min

•

5-brom-2'-deoksyuridin (BrdU) merking av mitokondrielt DNA i HeLa-celler

01:44 min

•

HeLa cellefiksering med Hoechst 33342 og blokkering

01:05 min

•

Tilsetning av primære og sekundære antistoffer mot de transfekterte HeLa-cellene for å overvåke mtDNA-fordelingen

02:04 min

•

Kvantitativ bildeanalyse for å måle mtDNA- og genuttrykksnivåene i de transfekterte HeLa-cellene

03:02 min

•

Lukasz S. Borowski², Karolina Kasztelan³, Jolanta Czerwinska-Kostrzewska², Roman J. Szczesny

¹Faculty of Biology, Institute of Genetics and Biotechnology,University of Warsaw, ²Institute of Biochemistry and Biophysics,Polish Academy of Sciences, ³International Institute of Molecular and Cell Biology in Warsaw

Summary

En prosedyre for å studere dynamikken i mitokondriell DNA (mtDNA) metabolisme i celler ved hjelp av et multi-brønn plateformat og automatisert immunfluorescensavbildning for å oppdage og kvantifisere mtDNA-syntese og distribusjon er beskrevet. Dette kan videre brukes til å undersøke effekten av ulike hemmere, cellulære påkjenninger og geninaktivering på mtDNA-metabolismen.