人类胰岛的分离：第二部分：人类胰岛的分离纯化及文化
Summary
实现高品质和适当数量的人类胰岛是胰岛移植成功的突出的先决条件之一。在这个视频中，我们描述一步一步人类胰岛隔离（第二部分：人类胰岛的纯化和文化）的程序，采用改良的自动方法。
Abstract
1型糖尿病的管理负担，既要对个人和社会，每年耗资超过100亿美元。尽管血糖监测和新的胰岛素制剂的广泛使用，许多人仍然发展毁灭性的继发性并发症。胰岛移植可以恢复接近正常的糖尿病患者血糖控制<sup> 1</sup>胰岛素强化治疗相关的严重的低血糖发作的危险，没有。胰岛移植成功的，重要的是提供足够的胰岛质量。但是，捐助者的特征，器官获取和保存的影响隔离的结果<sup> 2</sup>。在美国伊利诺伊大学芝加哥分校（UIC），我们开发了一种改进的净化梯度成功分离协议<sup> 3</sup>。该计划开始于2004年1月和2008年11月超过300隔离。 “胰腺被送往在冷保存液（UW液，威斯康星州或HTK的大学，组氨酸，色氨酸酮戊二酸）<sup> 4-7</sup>在UIC的细胞分离胰岛隔离的实验室。使用UIC的方法，这是最初所Ricordi描述的方法修改后的版本中分离出胰岛<em>等</em><sup> 8</sup>。正如在第一部分所述：消化和胰腺组织收集，人体胰腺被修剪，空心，灌注，消化。组织收集和UW液中孵育至少30分钟后，被装在细胞分离机（COBE 2991，COBE，翠湖，二氧化碳）净化<sup> 3</sup>。经过净化，胰岛产量（表现为胰岛等值，IEQ），组织的体积，和纯度测定按标准方法<sup> 9</sup>。隔离胰岛培养媒体CMRL - 1066（Mediatech，赫恩登，VA），辅以1.5％的人血白蛋白，0.1％的胰岛素转硒（简称ITS），1毫升，5毫升1M HEPES环丙沙星，和14.5毫升7.5％，在T175烧瓶钠碳酸氢盐在37 ° C过夜培养胰岛移植前或用于研究。
Protocol
Discussion
尽管在人胰岛分离技术方面取得了长足的进步，胰岛产量仍充满变数和不可预知的。净化消化胰腺组织移植成功的酶消化后的恢复足够岛大规模的关键。 UIC的净化方法的建议，因为优越的高纯度的人类胰岛复苏，通过使用这种方法来证明。此外，可装载高达50毫升的消化组织进行净化处理运行一个单一的COBE，从而最大限度地减少缺血相关的人类胰岛的损伤，单独使用的总时间缩短。
Acknowledgements
胰岛细胞资源中心美国国立卫生研究院授予（05-003 RFA – RR），克里斯托弗基金会，Efroymson基金会，和泰乐基金会成立在芝加哥伊利诺伊大学以及支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | equipment | Gambro. BCT | 2556 | islet purification |
| MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
| Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
| Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
| COBE bag | disposable equipment | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 culture flask | disposable equipment | Sarstedt | 83.1812.500 | |
| University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagent | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
| Final wash/Culture Medium | reagent | Mediatech Inc | 99-785-CV | |
| Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |
References
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