In vivo Ca 2 + - Imagem de Neurônios Corpo Mushroom durante o aprendizado olfativo no Honey Bee
Summary
Abelhas pode ser condicionado em um paradigma de aprendizado apetitivo olfativo (PER-condicionado). Usando odores como estímulos, estabelecemos um método em que o comportamento é gravado simultaneamente imagens de cálcio é usado para medir a atividade do odor evocado nos neurônios do corpo de cogumelo<em> In vivo</em>.
Abstract
A in vivo e semi-vivo, em preparação para a imagem latente de cálcio tem sido desenvolvido em nosso laboratório por Joerges, Küttner Galizia e mais de dez anos atrás, para medir a atividade odor evocado no lobo antenal 1. A partir de então, ele tem sido constantemente refinados e aplicados a neuropiles diferentes no cérebro das abelhas. Aqui, descrevemos a preparação atualmente usado em laboratório para medir a atividade nos neurônios do corpo usando um cogumelo acoplado dextran cálcio sensíveis corante (Fura-2). Nós retrogradamente mancha neurônios corpo de cogumelos pela injeção de corante em seus axônios ou região soma. Nós nos concentramos em reduzir a invasão, para conseguir uma preparação em que ainda é possível treinar a abelha usando PER condicionado. Somos capazes de monitorar e quantificar a resposta comportamental gravando electro-myograms do músculo que controla o PER (M17) 2.
Após a experiência fisiológica das estruturas imaged são investigados em maior detalhe por microscopia confocal para tratar a identidade dos neurônios.
Protocol
Discussion
Nesta apresentação nós já passamos por todas as etapas para investigar sinais de cálcio vivo na abelha. Nós aplicamos essa técnica para os neurônios do corpo de cogumelo, mas de imagens pode ser feito em todos os neurônios para que uma técnica de coloração pode ser estabelecida. Temos nos concentrado em neurônios na via olfativa da abelha melífera. Os experimentos são realizados em uma câmara escura. A configuração é iluminado com uma luz de onda longa que se encontra fora da faixa d…
Acknowledgements
Este trabalho é financiado pela DFG.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| low melting point hard wax Deiberit 502 | Dr. Böhme & Schöps Dental GmbH | |||
| FURA-2 dextran potassium salt, 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | F-3029 | Protect from light. | |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | D-3312 | Protect from light. | |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | ||
| Kwik Sil Adhesive | WPI | KWIK SIL | ||
| Imaging Set-up | TILL Photonics | |||
| CCD camera | Imago | |||
| CED | Texas Instruments |
References
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee’s proboscis reflex by electromyiographic recordings. J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).
- Galizia, C. G., Vetter, R. S., Christensen, T. A. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 345-388 (2004).
- Mauelshagen, J. Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain. J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ. Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera. Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).
