동물 세럼 - 무료 인간 줄기 세포 배양을위한 효율적인 보충으로 풀링 인간 혈소판 Lysate (pHPL)의 준비
Summary
인간의 혈소판 lysate 성장 요인 풍부한 소스와 세포 배양에서 강력한 보충이다. 이 프로토콜은, 혈소판 풍부 혈장부터 몇 동결 – 해동 사이클을 수행하고 혈소판 조각을 파괴하여 인간의 혈소판 lysate의 큰 수영장을 준비하는 과정을 보여줍니다.
Abstract
혈소판 유래 성장 요소가 효율적으로 세포 증식을 자극하는 표시되었습니다<em> 생체내에</em<sup> 1,2</sup>과<em> 체외에서</em>. 이 효과는 트롬빈에 의해 활성화된 혈소판과 mesenchymal stromal 세포 (MSCS), 섬유아 세포 및 내피 식민지 – 형성 세포에 대한보고되었습니다<sup> 3-5</sup> 또는 동결 / 해동주기에 의해 lysed<sup> 6-14</sup> 전에 혈소판 releasate은 세포 배양 매체에 추가됩니다. 혈소판 파생된 성장 요인의 영양 효과는 이미 조직 공학 및 재생 치료를위한 여러 가지 실험으로 테스트되었습니다.<sup> 1,15-17</sup> 다양한 효율로 인해 성장 요인 개별적으로 분기하는 농도 적어도 일부로 간주됩니다<sup> 18,19</sup>와 혈소판 준비 표준 프로토콜의 현재 부족하다.<sup> 15,16</sup>이 프로토콜은 40-50 단일 혈액 기부금의 일상적 생산 혈소판 풍부 혈장 (PRP)에서 파생된 인간의 혈소판 lysate (pHPL)의 수영장을 생성하기 위해 사용할 수있는 절차를 제공합니다. 여러 동결 / 해동주기에 의해 혈소판 세포막이 손상되고 성장 요소가 효율적으로 플라즈마에 발표됩니다. 마지막으로, 혈소판 조각은 광범위한 골재 형성을 방지하고 잠재적인 항원을 고갈하기 위해 원심 분리에 의해 제거됩니다. 표준 문화 프로토콜에 pHPL의 구현은 단백질이없는 시스템의 동물의 증식 세포 치료제의 발전을위한 유망한 도구를 나타냅니다.
Protocol
1. 시작 물질 cytapheresis으로 준비하거나 버피 외투에서 유래 혈소판 풍부 혈장 (PRP) 단위로 시작합니다. 2. 불임 검사 불임에 대한 연결된 작은 가방 (박스터)에 볼륨을 전송하여 각 PRP 단위 20 ML의 샘플을 확인하십시오. 용접이 가방의 연결을 끊습니다. 3. PRP 단위 동결 즉시 준비 후 ° C 원본 저?…
Discussion
일부 지역에서는 혈소판 풍부 혈장 (PRP)는 버피 – 코팅이 달리 혈액 검사 기부 (그림 1)에서 포장 적혈구 세포 생산의 낭비되는 제품에서 구할 수 있습니다. 성장 요인의 가용성을 집중 오래된 혈소판에서와 같이 최적 PRP는 pHPL의 더 준비를 위해 즉시 사용되는 혈소판 저장 병변 및 저하 20 인해 줄어들 수 있습니다. 그것은 더 ABH 항원과 isoagglutinins 가능한 영향을 피하기 위해 혈액 AB 그룹의 …
Acknowledgements
이 작품은 오스트리아 연구 재단 (FWF, DS 부여 N211 – 할머니)과 오스트리아 연구 진흥 공사 (FFG, DS 부여 N200)에 의해 지원되었습니다. 저자는 언어 편집을위한 우수한 기술 지원과 모니카 패럴에 대한 클로디아 URL을 주셔서 감사합니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
| 50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
| Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
| Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
| Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
| Water bath | ||||
| Sterile scissors | ||||
| Clamps | ||||
| Centrifuge |
References
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Tags
Pooled Human Platelet LysatePHPLAnimal Serum-freeStem Cell CulturesPlatelet Derived Growth FactorsCell ProliferationMesenchymal Stromal CellsFibroblastsEndothelial Colony-forming CellsThrombin ActivationFreeze/thaw CyclesPlatelet ReleasateTrophic EffectRegenerative TherapyGrowth Factor ConcentrationsStandardized ProtocolsPlatelet PreparationHuman Platelet LysatePlatelet Rich PlasmaFreeze/thaw CyclesCentrifugationAggregate FormationPotential AntigensCulture ProtocolsCell Therapeutics
Cite This Article
Schallmoser, K., Strunk, D. Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures. J. Vis. Exp. (32), e1523, doi:10.3791/1523 (2009).