Incrustación de cabezas de drosophila adultas en parafina: Preparación de tejido para histología

Abstract

Fuente: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Histología masiva para cuantificar la neurodegeneración en Drosophila . J. Vis. (2016).

Este video describe cómo incrustar cabezas de Drosophila en parafina usando el método de collar, una técnica que prepara cabezas de mosca para la seccionamiento en serie. Las secciones de parafina se utilizan para los exámenes histológicos de la anatomía del cerebro y para la evaluación de la neurodegeneración. El protocolo destacado muestra cómo se pueden procesar varias moscas en una sola preparación, aumentando así la eficiencia del tiempo y minimizando los artefactos experimentales.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Sunderhaus y Kretzschmar, Histología de Masas para Cuantificar la Neurodegeneración en Drosophila, J. Vis.  (2016). 1. Fijación de la cabeza en collares e incrustación en parafina NOTA: Todos los pasos en el proceso de fijación deben hacerse en una campana de humo. El metilbenzoato, aunque no representa un riesgo para la salud, tiene un olor muy…

Representative Results

Figura 1: Secciones serie de parafina. A) Usando el método del collar, las moscas experimentales y de control se pueden procesar como una muestra enhebrando en un collar. Las moscas sinusoidales sin ojo se insertan para orientación (flechas). B) Esquema que muestra la orientación de los cabezales de mosca en el cuello. C) En esta imagen, secciones de diferente…

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath