Não-invasiva por imagem do Homing leucócitos e Migração In vivo</em
Summary
Aqui, descrevemos um método não invasivo de dois fótons abordagem microscopia (2P) para estudo de leucócitos homing na pata do rato. Discutimos os aspectos técnicos de nossa preparação tissular e andar o leitor através de um experimento típico de configuração inicial para coleta de execução e de dados.
Abstract
Dois fótons de microscopia (2P) é uma técnica de imagem de alta resolução que tem sido amplamente adaptado por biólogos. O valor da microscopia 2P é que ela fornece informações sobre comportamentos espaço-temporal rica de células dentro dos tecidos intactos e em camundongos vivos. O recrutamento de leucócitos desempenha um papel importante na defesa do hospedeiro contra a infecção e, quando for devidamente controlado, pode contribuir para doenças inflamatórias e autoimunes. Estudar o recrutamento de leucócitos in vivo é tecnicamente desafiador vez que as células estão se movendo rapidamente dentro dos vasos localizados no interior dos tecidos de espalhamento de luz. Até o momento, estudos de imagem mais intravital requerem uma preparação cirúrgica para expor os vasos sanguíneos e tecidos. Para evitar o dano tecidual e inflamação induzida por cirurgia em si, aqui, descrevemos uma abordagem não-invasiva por imagem de uma única célula que pode ser usado para estudar o tráfico de leucócitos na pata de rato e falanges. Discutimos os aspectos técnicos de nossa preparação imagem 2P e andar o leitor através de um experimento típico de configuração inicial para coleta de execução e de dados.
Protocol
Discussion
Neste protocolo de vídeo demonstramos os procedimentos para não-invasivos de imagem 2P de recrutamento de leucócitos em resposta à inflamação.
A pata é um site clássico fisiológicos para o estudo de inflamação, tais como infecções, alergias e doença auto-imune 4-7. 2P imagem fornece um quadro detalhado de etapas distintas, em vias de tráfico de leucócitos, de rolamento e adesão nos vasos sanguíneos de quimiotaxia para sites de função efetora. Nós descobrimos q…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder R01-3155-53.502 e da Universidade de Washington Acordo-Pfizer de Investigação Biomédica.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
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