トランスジェニック蚊を取得するA.ネッタイシマカの胚のマイクロインジェクション

Summary

このビデオでは、Nijole Jasinskieneは、デング熱のためのベクトルであるトランスジェニックネッタイシマカ蚊を生成するために採用の方法論を、示しています。正しく、マイクロインジェクションの針を準備する胚をdessicating、およびマイクロインジェクションを行うための手法が実証されています。

Abstract

このビデオでは、Nijole Jasinskieneは、デング熱のためのベクトルであるトランスジェニックネッタイシマカ蚊を生成するために採用の方法論を、示しています。正しく、マイクロインジェクションの針を準備する胚をdessicating、およびマイクロインジェクションを行うための手法が実証されています。

Protocol

マイクロインジェクションの事前準備血液の供給蚊：月曜日から前の木曜日に、金曜日のフィード女性の注射用。 プログラム3または2を使用して、ガラス針を準備する（資料を参照）。 胚のために管を敷設するショウジョウバエの培養バイアルです。それを覆うフィルター紙のウェットディスクと底に湿った脱脂綿、。 一方の端に両面テープを貼り付けることに?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
1x Injection solution	Buffer			5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, ph 6. 8
Construct plasmid	DNA			0.5 mg/ml.
Helper plasmid	DNA			0.3 mg/ml
EndoFree Plasmid kit	Kit	Qiagen
Millex-GV column			SLGV RO4 NL	To clean DNA.
Glass puller	Instrument	Sutter Instrument Co	Model P-87	Heat-815, Pull-10, Vel-10, Time-100. Heat-700, Pull-30, Vel-36, Time-50
Quartz puller	Instrument	Sutter Instrument Co	Model P-2000	Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
Injection glass needles				Prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 um micropipette puller. When the needle is new, the tip is sealed and usually breaks in the first or second injection or the glass needle tip can be beveled using a Brown type micro-pipette beveller (Sutter Instrument).
Aedes aegypti	Animal			Male and female mosquitos, to obtain embryos.
Drosophila culture vial				For mosquito egg-laying.
Halocarbon oil	Reagent			Oil for desiccation: Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1)
Forceps No5	Tool
Fine paintbrush		Sable	No. 0000
Whatman paper	Tool
Microloader	Tool	Eppendorf	5242 956.003
Transjector	Tool	Eppendorf
Microscope		Leica		With moving stage and micromanipulator.
3MM Whatman paper
double sided tape